石斛组织培养与繁殖
铁皮石斛组织培养快繁技术
＋Ｂ Ａ２ ． ０ ｍｇ・Ｌ ＋ ＮＡＡ ０ ． １ ｍｇ・Ｌ － 。 ， 不 加 活
（ １ ） 继代培养基为 ： ① ＭＳ ＋Ｂ Ａ２ ． ０ ｍｇ・Ｌ
陈碧华 张 娟 范辉 华 李乾振
（ 福建省林业科学研 究院 福州 ３ ５ ０ ０ １ ２ ）
铁皮 石斛 Ｄ ｅ ｎ ｄ ｒ ｏ ｂ ｉ ｕ ｍｏ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｅ ， 又 叫黑 节草 、
（ ２ ）生 根 基 本 培 养 基 采 用 ： ＭＳ 、１ ／ ２ ＭＳ 、 １ ／ ４ ＭＳ ， 附力 ⅡＢ Ａ０ ． ２ ｍｇ・ Ｌ 一 、 ＮＡＡ１ ． ０ ｍｇ・ Ｌ 一 。
云南 铁皮 、 铁皮兰， 是 兰科 Ｏ ｒ ｃ ｈ ｉ ｄ ａ ｃ ｅ ａ ｅ多年 生 附 生 草本植物 ， 是 一种 珍贵 的野 生药 用 植物 。石 斛具 有 抗肿瘤 、 抗衰老、 增 强人 体 免 疫力 和扩 张 血 管 的作 用 。铁皮石斛 种子 自然 条件 下 繁殖 力低 ， 仅 靠分 株
１ ． １ 试 验材 料
将 无菌瓶 苗 生长正 常 的茎 芽 切下 ， 转 入继 代增 殖培养 基 ， 每次 培 养 ６ ０天 ， 重 复 ３次 ， 共培养 １ ８ ０
天， 观 察茎 芽增殖 生长状 况 ， 结果见 表 １ 。 表 １ 可 以看 出 ： 连续 采 用 ＭＳ为基 本 培 养 基 ， 导致 下部 叶片 轻 度 黄 化 ， 生长迟缓 ； 采 用 Ｎ６为 基
ｃ ｍ， 达 到组 培 工 厂 化 育 苗 水 平 。在 此 基 础 上 增 加 ０ ． ５ ｇ・ Ｌ 活性 炭 ， 茎 芽 增 殖倍 数 只 达 到 ２ ． ９ ， 但
石斛组织培养及快繁技术
石斛组织培养及快繁技术石斛兰是近几年在我国插花市场上流行的花卉，种类繁多，花形花姿优美，色彩艳丽，花期较长，具有较高的观赏价值。
由于其分株能力弱，繁殖系数低，繁殖速度慢，远远不能满足商品化生产的要求。
因此，组织培养和快繁技术是石斛商品化生产中重要的一个环节。
石斛属于兰科植物，通过不同的途径都可以形成完整的组培苗，以实现。
野生石斛的茎尖、茎段、叶片、种胚、鳞叶期原球茎、幼根以及根段等均可作为外植体，在适当条件和适当培养基中，就可诱导产生全能性的再生小植株。
但以嫩枝的茎尖、腋芽或茎节、花梗诱导成功的可能性较大，而正在生长的芽是最理想的外植体。
休眠芽也可用作外植体，但由于体积比较小，剥离较困难，生长也较慢。
一、无菌播种石斛兰的种子极为细小，胚胎发育不完全，所谓的胚实际上就是一团未分化的胚细胞，且无胚乳组织，在自然状态下发芽率极低，只有与兰菌共生才能少量发芽，成苗更难，因此不能像其他植物一样在大田或苗床上播种，只有在无菌的补充营养的人工培养基上，促进其萌发成苗。
1、种子的采收与播种应用于无菌播种的石斛兰的种子的果实以刚成熟但尚未开裂时效果较好，未成熟时能发芽，但发芽率略低，而如果果实成熟开裂，种子难以收集与消毒，且种子发芽力降低。
2、培养基的选择石斛兰的播种培养基多种多样，不同的品种的最适培养基不同，比较常用的基本培养基有MS、改良MS、Nistch、N6、RE等。
3、培养基的消毒由于培养基内有丰富营养物质，极适合细菌和真菌的繁殖，造成污染，影响组培的成功，因此培养基消毒是必不可少的一个环节。
消毒的方法一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。
二、组织培养1、外植体的采集与灭菌采用花梗为外植体时，由于花梗较光滑，消毒相对容易，污染率较低。
采用花芽作外植体时，在花梗再长出、花朵未长成时效果最好。
2、培养基的选择和培养以石斛的播种培养为基本培养基再加入适量激素进行茎尖、节、花梗的组织培养均有成功的报道。
3、试管苗的移植一般来说，当石斛兰试管苗长出3～4片叶，与3～4条根，高约5cm～10cm后，才可移植于温室，由于在移栽过程中，要适应从无菌状态进入有菌自然状态，从光、温、湿稳定环境中进入不稳定的自然环境，从异养过渡到自养的过程。
铁皮石斛的组织培养与快速繁殖研究
Final buds 765
Increase rate/ % 354. 74B**
Physical status* +++
B5
168
975
498. 90A
+++
MS
163
638
296. 02C
++
KC
136
388
181. 80D
+
* + ( 细弱) , + + ( 生长一般) , + + + ( 饱满, 健壮) , 下表同. * The physical status of buds were indicated as, + , tiny and thin; + + , or dinary; + + + , plump and vigorous. The same as below. ** 同一列不同字母者表示相互间比较差异达到极 显著水平, 下表同. ** The different capital letter in the same column indicated very significant difference. The same as below.
pH 至 518. 在超净工作台上, 将铁皮石斛试管苗切成 1~ 2 cm 的茎段, 在以上培养基上接种进行芽诱导. 每 组各接种 25 瓶, 随机抽取其中 20 瓶进行生长性状观测. 培养时间均为 1 个月, 培养温度( 25 ? 1) e , 光照强 度1 500~ 2000 1x, 每天光照 12 h, 下同.
2 结果与分析
211 不同基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的影响 4 种基本培养基对铁皮石斛芽诱导效果, 相互之间的比较差异极显著( 表 1) , 其中以 B5 的增殖效果最
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛的组织培养[摘要]：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。
从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。
[关键词]：铁皮石斛；组织培养；试管苗铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。
《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。
现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。
由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。
为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。
一、种子萌发1. 胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。
叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。
2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 ％。
曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。
2.基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
霍山石斛组培快繁技术
霍山石斛组培快繁技术汇报人：日期:•引言•霍山石斛组培快繁技术流程•霍山石斛组培快繁技术关键环节目录•霍山石斛组培快繁技术应用前景•霍山石斛组培快繁技术挑战与对策01引言又称万丈须，是兰科石斛属草本植物，是中国国家二级保护植物。
霍山石斛主要分布于安徽、浙江、福建等地，其中安徽省霍山县是核心产区。
分布范围霍山石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效，常用于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热等病症。
药用价值霍山石斛简介组培快繁技术是指通过植物组织培养技术，快速繁殖优质种苗的一种方法。
定义特点应用领域具有繁殖速度快、不受自然环境限制、遗传性状稳定等优点。
广泛应用于药用植物、观赏植物、经济作物等领域。
030201组培快繁技术概述02霍山石斛组培快繁技术流程霍山石斛组培快繁技术首先需要选择合适的外植体作为起始材料，如种子、茎尖、根尖等。
合适来源外植体在经过清洗和切割后，需要进行表面消毒，以杀死表面的微生物和细菌。
表面消毒外植体内部可能存在微生物和病毒，需要进行内部消毒，以确保无菌环境。
内部消毒外植体选择与消毒培养基配制与接种培养基成分霍山石斛组培快繁技术的培养基需要包含适合植物生长的成分，如碳源、氮源、维生素、矿物质等。
培养基灭菌培养基在配制完成后需要进行灭菌处理，以杀死其中的微生物和细菌。
接种过程在无菌环境下，将外植体接种到培养基中，确保接种的质量和效率。
霍山石斛组培快繁技术的温度需要控制在适宜的范围内，以促进植物的生长和发育。
温度控制霍山石斛组培快繁技术的光周期需要控制在适宜的范围内，以促进植物的光合作用和生长。
光周期控制霍山石斛组培快繁技术的湿度需要控制在适宜的范围内，以防止干燥和湿度过大带来的问题。
湿度控制霍山石斛组培快繁技术的通气需要控制在适宜的范围内，以防止缺氧和过度通气带来的问题。
通气控制培养条件控制03霍山石斛组培快繁技术关键环节操作环境无菌操作需要在严格的无菌环境中进行，如无菌实验室或超净工作台。
铁皮石斛的组织培养
由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。
而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。
因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。
石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。
原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。
特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。
铁皮石斛的组织培养铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。
野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。
由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。
现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。
1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。
研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。
培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。
种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。
在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45天以下，萌发率极低，萌发时间长；60天胚龄的胚具34个细胞，萌发率为6％；90天胚龄的胚细胞为74个，萌发率为87％；120天胚龄的细胞数为90个，萌发率95％以上。
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石斛组织培养与繁殖
0. 引言
石斛( Dendrobium) 为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。
本实验选取铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序。
利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。
1.材料及方法
1.1实验材料
铁皮石斛为采自山区野生原种。
2009 年移栽至室内。
1.2试验方法
1.2.1外植体的选取及预处理
取2009 年的新生枝条作为外植体。
剪取新生枝条长约3 cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。
在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，
之后浸泡在0. 1% Hgcl 溶液消毒处理10 min ，取出后用无菌水冲洗干净备用。
1.2.2接种在培养基中
保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留 1 cm长。
并且每一小段必须保存有一茎节(芽) ，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。
其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS + 6BA
0. 5 〜1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L; (2)MS + 6BA 0. 5 〜1. 0 mg/L +2, 4 - D 0. 2 mg/L; ( 3)MS + 6BA 2 mg/L +NAA0.
4mg/L。
诱导生根培养基: 1 /2MS +NAA 0. 2 〜0. 5 mg/L 。
1.2.3组织培养室的条件
接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10 h ，光照强度为1200 LX温度20 ± 2 Co
1.2.4诱导生根
枝条经过继代培养，小苗长到约2 cm 高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝条经修剪后接种到1/2MS+NAA 0. 2〜0. 5mg/L 培养基中，生根苗28 d 左右即可移栽到混合基质( 珍珠岩、树皮、泥碳等) 中炼苗。
2.结果与分析
2.1不同基础培养基对铁皮石斛生长的影响对于试管移栽苗来说，苗长势的好坏、强壮与否，直接关系到移苗的存活率。
因此，设计了MS 1/2MS, KC 1 /2KC四种基
础培养基考查铁皮石斛壮苗生长的影响。
2.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响
设置不同处理诱导生根培养基，用MS加NAA2 mg/L，pH为5. 6。
将大小达3〜4 cm的无根苗切割成单苗，接种于5种不同处理生根培养基上，每种培养基接种20 株，培养28 do
后统计结果。
2.3不同激素浓度对外植体的诱导
外植体分别放在(1)(2) 两个激素浓度不同的培养基里面，培
养大约一个月，茎段切口地方仅稍微胀大，没有出现愈伤组织，当腋芽生长到1cm的时候，其茎杆柔嫩，叶子呈椭圆状，多生长在顶部。
当嫩芽长到1cm多时，将其切下，并依次在(1)、(2)、(3) 三个培养基里进行培养。
约一个月后，幼苗长至约3 cm 高，并在基部有约4 条长约1 cm 地不定根出现。
将基部产生的原球茎切下，在(2) 、(3) 培养基里继代培养至其长出10多个不定芽。
等到新芽可以区分株型以后，将其按4 个一丛移至(1) 培养基里壮苗培养。
2.4试管苗的生根诱导
铁皮石斛繁殖苗在培养过程中通常会生出不定根，约75%的
苗基部都有生长。
在转继生根时可把生根的完整植株直接移出瓶栽培，没有生根的修剪之后转继在生根培养基中进行诱导生根，约20 d 生根率就可完全，不定根约3cm 3〜5条，根尖为三角白色。
若延长培养生根的时间，小苗的基部以上的茎节也会生出不定根，一般根会向上生长，增加移栽的困难，试管苗基部仍会生发出一些小不定芽。
2.5试管苗移栽
当试管苗在生根培养基中生长到约3 cm高，有3〜5条不定根时，此时要移出培养室，在自然条件下开瓶炼苗4d，然后取出小苗洗净琼脂，阴干上面的水份，然后移栽到的基质盆内。
定植后要浇足水，避免阳光直射，早晚进行喷水，空气湿度保持在80%。
小苗在约10 d 后根尖开始露白伸长，叶片变成深绿色。
此时茎不会增粗只是质地变硬，茎尖伸长一些。
3.讨论
3.1幼苗用MS培养基比用KC培养基培养生长好，其结果见表
1 。
香蕉提取液能促进根系生长, 从而使苗的生长加快。
为促进幼苗生长，培养基中需添加较高浓度的香蕉提取液。
而以MS 的培养基为最好，A级比率占84%
表1 不同培养基对试管苗生长的影响
3.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响结果见表2，由表2 中可以看出：在壮苗生根培养基中，相对于对照(5) 中，既添加
2mg/L的NAA可以使25%无根苗长出根来；当添加了香蕉汁之后(1) 效果较为显著，生根率升高到95% ，并且每株苗平均生出4. 5 条根，苗比较健壮，根系旺盛，由此表明香蕉汁对铁皮石斛生根壮苗有明显的促进作用。
表2 不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响
3.3铁皮石斛组织培养繁殖苗在较高浓度的激素中可以直接
诱导分化产生出丛生芽，增殖系数可以达到4倍左右，最佳条件为MS + 6BA 1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L ，但是试管苗在生长
过程很容易生出不定根，继代时可以直接分株移栽试管苗来解决。
原球茎在相同的MS +6BA 1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L 条件下，其
诱导的增殖系数约为15倍，此时需要壮苗培养后进行生
根诱导，最佳条件是1/2MS +NAA 0. 5 mg/L
3.4当前，很多人倾向于芽的诱导、繁殖及生根的研究，再生后苗体所含的的药物成分极其数量等方面则基本无人问津，培养出的幼
苗移栽后的生长习性变化及适应能力等方面的认识也几乎是一片空白。
所以，研究人员有必要进行更加全面、深入的探索。
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