细胞培养中霉菌污染问题讲解学习

细胞培养中霉菌污染问题

Julius：我的细胞被污染了，表现为培养液内有浑浊，可见很多白色粉末的东西悬浮，之前发现一瓶有，就丢了，剩下的及时换液，清洗，可在传代后的第二天就又见浑浊，仍有部分细胞是贴壁的，可以看到很多”细胞“首尾相连成一条条的线状，可细胞怎会是线状生长呢？（抱歉没有拍下照片）请问是霉菌还是细菌污染呢？如何区分细菌，霉菌及真菌的污染。现在如何处理呢？污染控制区大家所说的用甲醛熏蒸，碘伏擦拭，或75％酒精擦拭，是用那种呢？时间要多长呢？

因培养箱内还有别人的细胞，现在消毒处理时剩余的细胞该怎么办呀？还应注意什么呢？

liyq_1：应该是霉菌污染.其特点正是肉眼可见白色悬浮,形态呈线状.

qxlbljys：1.细菌污染液体混浊,霉菌污染可看见霉苔但液体不混,所以你的细菌和霉菌同时污染

处理:扔掉,以免污染其他细胞

2.你说的线状生长实际上细胞已经接近死亡

3.可以将培养箱用75%的酒精擦拭,并停止细胞培养,然后用紫外消毒房间

sunandsuny：由于细菌的生长分裂呈指数级的生长方式,所以细菌污染后,培养瓶很快就是浑浊的了,但一般不像霉菌污染,霉菌有菌丝,往往呈絮状漂浮,甚至有丝状突起.因此霉菌污染和细菌污染在肉眼上有时可以大体上区分,这只是一些常规的经验,如果要具体确定,还

要通过涂片染色,看看是球菌或杆菌或是弧菌．

叶知秋：原代培养的软骨细胞，贴壁良好，长势旺盛，可霉菌悄然而至，大有疯长之势。不想放弃，该如何处理，敬请指点。

ratman：配制以下5X抗生素培养液：AMP:100ug/ml, gentamycin 100ug/ml, 两性霉素B 2ug/ml, 制霉菌素1.5ug/ml, 脱氧胆酸钠10ug/ml，进行冲击，培养时间为8小时后换液，改用1X抗生素培养液进行培养，以上配方为1x配方。每天换液。

icesugar75：别救了。霉菌是抗拒不了地，别让这瓶细胞把其它的污染了最重要。

eming43：同意楼上的，如果细胞不是珍贵的没有了，最好是放弃。你在救细胞上花的功夫还不如重新养，霉菌真的不好处理，况且放在培养箱里还有可能污染其他的细胞，更可怕的是换液时把培养基也污染了，那你就等着更多的麻烦吧！

dongshiwu：照着二楼的方法有效,我曾经仅用二性霉素就将霉菌污染的293细胞救回来过.

linbmm：细胞培养过程中，通常有意想不到的状况发生。昨天观察我的细胞时，发现皿中有黄色斑点形成，斑点边缘不是很清楚，培养液未发生变化，细胞形态也没受影响。其实这就是霉菌污染的早期现象。今天再观察时，斑点已扩散，而且皿中斑点数量也增多了。大家遇到过这种情况吗？怎样消除霉菌污染现象？

juju：如果发现霉菌污染，尽早把细胞扔了，如果是细胞培养板一孔或几孔污染，小心吸除后加高浓度氢氧化钠封闭。避免污染扩大，害及其他孔或培养瓶中细胞。已经发现污染再加两性霉素是没有用的。供参考。

jzyxynwm：霉菌污染不要吝惜细胞,坚决丢弃,复苏冻存细胞,还要注意要把孵箱和整个培养间做彻底消毒,用甲醛熏蒸,孵箱用苯酚彻底搽净!!对于两性霉素等药物的挽救措施建议你不要采用,因为任何一种外来药物对细胞都会产生不良,甚至未知的影响,包者对实验严谨

的态度,一切从新开始!!!做细胞培养要抱着平和的心态去做,不可急功近利,这样往往事半功

倍!!!!

soso_fan：一般出现霉菌污染，如果不是非常珍贵的细胞一般都是扔掉，而且连相关的容器都要做严格的处理。两性霉素B可以起到抑制霉菌的作用，一般只是培养前把标本短时间的浸泡，培养液里一般不加，因为抗真菌药物的细胞毒性还是比较大的，一旦出现了污染还是早点扔掉为好，以免污染其他细胞造成更大的损失。即使用高浓度的抗真菌药物处理过，细胞估计也不会好到哪里了。

drhl：我的细胞最近也出现了霉菌污染，不知道怎么回事。以前是偶尔有一瓶污染，现在却是大批量的污染。我初步估计实验时吸管不干净，因为那批吸管没有泡酸就高压了。

maokai123：酶菌厉害得原因是霉菌会产生孢子，孢子空气传播，比一般接触传播的细菌厉害的多，楼上同学的吸管我想不是问题，霉菌一般是人带到细胞房的，到细胞房最好换衣服换鞋。污染发生了除了常规的处理以外，一定要彻底处理污染材料，焚烧，不要留在实验室，不然容易重复污染，空气要甲醛熏蒸消毒。孢子对紫外的抗性很强。人员的个人卫生也重要，试验服洗洗晒晒吧，不留长发，常洗澡

zhizuchangle：我们是采用在水盘里加硫酸铜来预防霉菌！

wangzhua：我们几乎所有细胞均有如图片中的污染存在,开始时只有较少小黑点粘附在部分细胞上,后来几乎所有细胞身上都长满了如此的小黑点,这个周期要三两个月的时间,

小黑点长得不是很快,好象开始时对细胞状态也没有太大影响,但传代时可见瓶底有很多细

胞碎片似的东西,这个东西多了以后,细胞长势缓慢.心疼啊,哪位高手有好的办法?

前两在清理培养箱,发现箱体上有霉菌斑,送检以后说是毛霉菌,如何解决?

有时候消化细胞的时候可见到这些小东西从细胞的残骸里跑出来,很恐怖，但活动不是很剧烈,只在原位振动,这也是它长得慢的原因吧。

所有照片在Nikon倒置相差显微镜40倍物镜下用数码相机拍摄,放大倍数约800倍

哈佩雕：你这下就惨了，长了霉菌细胞只能扔了，而且整个实验室和培养箱都要消毒啊。我们实验室液发生过类似事件，我把我们处理过程告诉你，希望对你有帮助：

首先消毒培养箱，如果你们有两个或以上培养箱就好办了，如果只有一个且还有很多其他细胞就麻烦点。只能暂时的放在超净台上。具体如下，中午将空调温度打到最高（也只有31度），超净台开紫外。下午早点来关紫外，将细胞转到超净台内，用75％酒精擦洗培养箱，再用无臭氧型可移动的紫外等照射半小时，然后将细胞放回即可（切记CO2瓶子阀门要关紧啊，不然气全跑光了）。再消毒实验室，先把室内空调和消毒柜过滤网都拆下清洗，在锥形瓶内加点高锰酸钾，放在实验室地上，然后倒入甲醛，立马关门走人就可以了。2天后再开门装好东西，和往常一样开始工作了。由于2天不能做事，个人细胞要先计划好，大家都可以休息两天。

shaverwoo：确实应该仍了，否则挽救只会浪费你更多的时间。我也遇见过，还曾经挽救过，我用了制霉菌素来反复洗涤细胞，并在培养液里也加了，看着细胞长好了，还以为成功了，接着传了二代，还冻了些，可是之后，仍然不断的有霉菌污染发生，取出冻的细胞一复苏，根本不贴壁，一查，是真菌，所以赶紧消毒实验室还有你用的所有材料吧，一定要全部重新彻底消毒

jcl738：三天之内竟然发现有两瓶LB培养基出现了霉菌污染（一瓶加了氨苄），很郁闷，今天不得不把摇的菌倒掉了.使用时严格按照无菌操作了，但为什么还是被污染了呢？

我爱标标：霉菌污染是防不胜防的,你的培养基被污染了,只能说明一个问题:你的实验技术还不过关.再继续努力吧!

frederick：可能是周围的空气中有霉菌，你那操作台附近最近有没有搬过什么中大型的东西，或移动了什么。我们这里前几天移了一下冰箱，那个星期的平板摇瓶全染霉菌了，