第三章 消毒与灭菌
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微生物学第三章消毒与灭菌(共60张PPT)
介质的性质
细菌在非水介质中，比水作介质时对热 的抵抗力大
水分、2~4℃石炭酸、油类、干焦空气
不同介质对微生物抗热力的影响
2、低温抑菌法
低温可降低微生物代谢的速度。 大多数微生物对低温有很强的抵抗力 一般的：4-10℃ 淋球菌、脑膜炎球菌、流行感冒杆菌敏感，
伤寒杆菌、白喉杆菌耐低温 冷冻干燥：采用迅速冷冻和抽真空除水。
消毒（Disinfection）：杀灭物体上的病原微生物的方法，
叫消毒。消毒只要求达到消灭传染性的目的，而对非病原微 生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。
防腐(Antisepsis)或抑菌：指阻止或抑制物品上微生物 生长繁殖的方法，微生物不一定死亡。
无菌（asepsis）：指没有活的微生物的状态。
夜培养，残余的芽孢发芽为繁殖体；
第三天：100℃-30分钟，杀死所有微生物。
巴氏消毒法
常用于牛乳及一些饮料
最大限度地消灭病原体，尽可 能少地损害食品的营养物质
•低温维持巴氏消毒法（LTH)： •63～65℃-30分钟； •高温短时间巴氏消毒法(HTST):
•71～72℃-15秒， •超高温巴氏消毒法(UHT): •132℃-1～2秒
•巴氏消毒法
•高压蒸气灭菌法
干热灭菌法
火焰灭菌法
以火焰直接灼烧杀死物 体中的全部微生物的方 法。
灼烧 焚烧
酒精灯
热空气灭菌法
适用于高温下不损坏、 不变质的物品，需在 160℃维持1－2小时，才
能达到杀死所有微生物 及其芽孢、孢子的目的。
干烤箱
湿热灭菌法
煮沸灭菌
100℃，煮沸10～20分钟，可杀死所有细 菌繁殖体，芽孢常需煮沸1－2h才能杀死。
噬菌体（phage）：是指寄生于微生物 （细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及 蓝细菌等）中的病毒。
第3章 消毒与灭菌
长。
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3.温度
温度升高可增强消毒剂的杀菌效果。温度每增高
l0℃，重金属盐类的杀菌作用约增加2～5倍，石炭酸的杀
菌作用约增加5～8倍。
4.酸碱度
消毒剂杀菌作用受pH影响。如新洁尔灭pH 9时
杀菌作用强。同时pH也影响消毒剂的电离度，一般说，未 电离的分子，较易通过细胞壁，杀菌效果好。 5.有机物 6.药物颉抗 7.其他因素 环境中有机物，可降低消毒剂效果。 两种消毒剂合用时，有的能相互颉抗。如阴 湿度、穿透力、表面张力等。
800nm。可见光线只有微弱的杀菌作用。 2.阳光 直射日光有强烈杀菌作用，是天然杀菌因素，紫外线是日光
杀菌作用的主要因素。许多微生物在直射日光下，半小时到数小时即 可死亡。芽抱的抵抗力强，经20h才死亡。
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3.紫外线 紫外线中波长200-300nm部分具有杀菌作用，其 中以265-266nm段的杀菌力最强，这与DNA吸收光谱范围一 致。常用的紫外线杀菌灯波长为 253.7nm，杀菌力强而稳定。
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（1）干热灭菌法 包括火焰灭菌和热空气灭菌两类。
火焰灭菌法是以火焰直接烧灼杀死物体中微生物的方 法。分为灼烧和焚烧两种。 热空气灭菌指利用干热灭菌器以干热空气进行灭菌的 方法。用于耐高温物品。灭菌条件：160℃维持 l-2h，才 能杀死所有微生物（芽孢、孢子）。
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高压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法 121 ℃ 20~30分钟 煮沸消毒法 水煮100 ℃ 5分钟(繁殖体)~2小时(芽胞) 流通蒸汽消毒法 水蒸汽100 ℃ 15~30分钟(繁殖体) 巴氏消毒法 较低的温度（61 ℃ 30分钟）杀灭致病菌 间歇蒸汽灭菌法 反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌
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巴氏消毒法具体方法有三种
消毒与灭菌
烷化剂
蛋白质、核酸烷基化 环氧乙烷
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消毒剂的作用机理
使细胞膜通透性受损；
使菌体蛋白变性和凝固，失去生物活性， 导致细菌死亡；
破坏或改变蛋白质与核酸功能基团，使菌 体酶蛋白失去酶的活性。
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二、化学消毒灭菌法
（一）高效消毒剂 （high-level disinfectants） 1.含氯消毒剂；2.过氧化物消毒剂； 3.醛类消毒剂；4.环氧乙烷
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生物安全水平分级
生物安全防护水平（biosafety level，BSL）分 为4级，以表示实验室的相应生物安全防护水平。
BSL－1：防护水平最低,普通建筑物即可，每个 实验室应设洗手池。
BSL-2：实验室的门有可视窗。在实验室工作区 域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室 内使用专门的工作服；应戴乳胶手套。配备高压 蒸汽灭菌器，在实验室内配备生物安全柜。
间歇灭菌法
本法是利用反复多次的流通蒸汽灭菌，以达到 灭菌的目的。
只适用于不耐热（100℃以内）的营养物质如 某些培养基的灭菌。
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高压蒸汽法 Autoclaving
压力：1.05kg/cm2 温度：121.3℃ 时间：15～30min 效果
杀死一切微生物， 包括芽胞
（二）中效消毒剂 （intermediate-level disinfectants） 1.含碘消毒剂；2.醇类消毒剂
（三）低效消毒剂 （low-level disinfectants） 1.季铵盐类；2.氯已定；3.高锰酸钾
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第三章 消毒与灭菌
高压蒸汽灭菌锅构造
1、压力表 2、安全阀 3、放气阀 4、软管 5、紧固螺栓
6、灭菌桶
7、筛架
8、水
手提式高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌锅使用方法
1、加水至止水线；
2、灭菌物品包裹好；
3、开启放气阀； 4、加热排气； 5、达到预定表压，开始计时； 6、关闭热源，当压力降至 0.05MPa时，缓慢开启放气阀。
日光杀菌作用的原理 日光杀菌作用的主要因素是紫外线，紫 外线波长为200～300nm，而以260～ 265nm杀菌力最强。
实验室使用的紫外灯，其波长通常为 253.7nm。 紫外线的穿透力不强，仅限于照射物的 表面。
紫外线杀菌原理 紫外线照射细菌时，能使同一股 DNA上相邻的两个胸腺嘧啶通过共价键结 合成二聚体，以致影响DNA正常碱基的配 对，引起致死性突变而死亡。 还有人认为紫外线可使空气中的氧 分子转变为臭氧，臭氧再释放出氧化能 力强的原子氧而具有杀菌作用。
但也有些细菌对低温持别敏感，在冰箱内保 存比在室温下保存死亡更快。如禽多杀性巴 氏杆菌。
冷冻干燥法：将保存物置玻璃容器内，在
冷冻真空干燥器中迅速冷冻，然后抽去容器 内的空气，使冷冻物中的水分在真空下直接 升华而逐渐干燥，最后在真空下将玻璃容器 焊封严密。在这样的冻干状态下，细菌及生 物制剂可保存数月至数年而不丧失其活力。 冷冻干燥(冻干)法是保存菌种、疫苗等良 好方法。
3.流通蒸汽灭菌法 100℃的蒸汽维持30min (不能杀死芽胞） 4.高压蒸汽灭菌
在一个加有少量水的密闭的金属容器内，通
过加热来加大蒸汽压力，以提高温度，达到
在短时间内完全灭菌的效果。
①高压蒸汽灭菌时压力与温度的关系
10磅(磅/平方英寸），115 ℃ ， 15磅，121 ℃ ， 20磅，126 ℃ 。
消毒与灭菌
1、在液体培养基中 噬菌现象可使浑浊菌液变为 澄清. 澄清. 2、在固体培养基上 噬菌体裂解宿主菌细胞使相 应菌苔上形成的一个个透亮 不长菌的圆斑，称为噬菌斑 噬菌斑， 不长菌的圆斑，称为噬菌斑， 亦称空斑。 亦称空斑。 噬菌斑可用于细菌或噬菌 体的鉴定和纯种分离。 体的鉴定和纯种分离。
6.噬菌体的应用 噬菌体念
消毒 灭菌 防腐 无菌 无菌 操作
杀死物体上病原微生物的方法,并不 杀死物体上病原微生物的方法 并不 一定能杀死含芽胞的细菌或非病原 微生物 杀灭物体上所有微生物的方法。 杀灭物体上所有微生物的方法。 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 不存在活菌的意思 在没有细菌和其他微生物存在的环 境下所从事的一切工作
细菌的鉴定
噬菌体与宿主菌的关系有高度特异性，具有种和型 的特异性。用于未知细菌的鉴定和分型。
细菌感染的诊断与治疗
应用噬菌体效价增长试验可检测标本中的相应细菌。 应用噬菌体效价增长试验可检测标本中的相应细菌。 在怀疑有某种细菌存在的标本中，加入一定数量的已 知噬菌体，37℃孵育6~8h，再测定该噬菌体的效价。 知噬菌体，37℃孵育6~8h，再测定该噬菌体的效价。 辅助治疗。
滤菌过程
微孔滤膜
第二节
化学因素对微生物的影响
一、化学消毒剂的种类 二、化学消毒剂的作用机制 三、影响消毒剂作用的因素
常用消毒剂种类
类别 酚类 醇类 氧化剂 重金属盐 表面活性剂 染料 酸 类 类
变
作用机制 蛋白变性，细胞膜损伤 蛋白变性 氧化、蛋白沉淀 氧化、蛋白酶变性 蛋白变性，细胞膜损伤 干扰氧化、抑制繁殖
1年~数年
温度越低保存时间越长 （2）真空冷冻干燥法 ） 在低温状态下真 空抽去水分
消毒与灭菌技术PPT课件
煮沸消毒法（boiling sterilization）
要求 适用 方法 注意
❖殖❖配可强防❖物❖橡▪▪▪▪经应 有 空 物煮将 的体成提杀锈取 将适如❖浸沸❖❖第品胶轴将腔品消间从间后轴碗应 置5前将消如出，1高菌。▪， ， 当碳用金没二根玻橡～节物导不类及冷为放节、毒用 于%物毒中海 水 延水据璃胶达沸作酸的管品宜于属在次消水入1或盆1时等无 无～0器制物拔 长0器须刷放的品时途毒或，盖不到点用氢～的耐、水水间菌 菌分2皿品品械洗先置高时温时沸打能1刷间加沸消达，钠煮%湿搪；中沸器 容5应用性钟或在干过间水间开重的点m点洗从入毒还1海加时的用纱质、瓷械 器，后带腔净多中为叠再i可地n受0也纱布决干水物拔内盖，将 内效可入浓放5，放耐 、5然重区杀气～低布 包定℃灌的大每入要入物净沸品果去水度高玻后新气1压灭包 好放水容小，，保水，增0品，后，。污中时温璃m压加计裹 ，入影煮器相繁需消证中高增及i全计则n好 待水、低，，应同响的和热时毒物后适时后 水的部算在时煮， 沸时
特点：紫外线穿透力较弱
紫外线可杀灭多种微生物，包括杆菌、 病毒、真菌、细菌繁殖体等。杀灭繁殖 体需3~5s；杀灭芽孢需10min以上。
杀菌机制
使菌体DNA失去转换能力而死亡； 破坏菌体蛋白质中的氨基酸，使菌体蛋白光解 变性； 降低菌体内氧化酶的活性，使氧化能力丧失； 使空气中的氧电离产生具有极强杀菌作用的臭 氧。
第三章 清洁、消毒与灭菌技术
一、基本概念 二、物品清洁法 三、物理方法 四、化学方法
一 基本概念
洁清消 毒灭菌防 腐
是切清 上清上污抑 与清除 的除的迹制 繁除或 一脂物病,微 殖如或杀 切品等原生尘杀灭 微上微物埃灭物生的生的,物品物油一物生品, 长 以杀灭芽孢为准
4 消毒灭菌
A． B． C． D． E. 核酸吸收紫外线的能量 破坏DNA DNA构型 破坏DNA构型 穿透力强 常用于空气消毒 刺激眼睛和皮肤
9. 能达到灭菌效果的方法
A．煮沸10分钟 煮沸10分钟 10 干烤160℃ 1～ B．干烤160℃ 1～2小时 C．巴氏消毒法 D．高压蒸汽灭菌 E. 滤菌器滤过除菌
（3）人工紫外线灯原理：将水银放入石 人工紫外线灯原理： 英玻管中通电气化而成。 英玻管中通电气化而成。 （4）紫外线的穿透能力弱，不能通过普 紫外线的穿透能力弱， 通玻璃、尘埃， 通玻璃、尘埃，只能用于消毒物体表面及 空气、手术室、 空气、手术室、无菌操作实验室及烧伤病 亦可用于不耐热物品表面消毒。 房，亦可用于不耐热物品表面消毒。 杀菌波长的紫外线对人体皮肤、 （5）杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。
第三章 消毒与灭菌
梅 雪
一 基本概念
消毒（Disinfection） 消毒（Disinfection）
杀灭物体上病原微生物的方法。 杀灭物体上病原微生物的方法。用以消毒的 药物称为消毒剂(Disinfectants) (Disinfectants)。 药物称为消毒剂(Disinfectants)。一般消毒剂 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。对于芽胞 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。
A． 杀灭物体上所有微生物的方法 B． 杀死物体上病原微生物的方法 C． 抑制微生物生长繁殖的方法 D．杀死细菌芽胞的方法 E. 物体中没有任何活的微生物存在
2．杀灭细菌芽胞最有效的方法是
A． 煮沸法 B． 流动蒸汽消毒法 C． 间歇灭菌法 D． 高压蒸汽灭菌法 E. 巴氏消毒法
9. 能达到灭菌效果的方法
A．煮沸10分钟 煮沸10分钟 10 干烤160℃ 1～ B．干烤160℃ 1～2小时 C．巴氏消毒法 D．高压蒸汽灭菌 E. 滤菌器滤过除菌
（3）人工紫外线灯原理：将水银放入石 人工紫外线灯原理： 英玻管中通电气化而成。 英玻管中通电气化而成。 （4）紫外线的穿透能力弱，不能通过普 紫外线的穿透能力弱， 通玻璃、尘埃， 通玻璃、尘埃，只能用于消毒物体表面及 空气、手术室、 空气、手术室、无菌操作实验室及烧伤病 亦可用于不耐热物品表面消毒。 房，亦可用于不耐热物品表面消毒。 杀菌波长的紫外线对人体皮肤、 （5）杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。
第三章 消毒与灭菌
梅 雪
一 基本概念
消毒（Disinfection） 消毒（Disinfection）
杀灭物体上病原微生物的方法。 杀灭物体上病原微生物的方法。用以消毒的 药物称为消毒剂(Disinfectants) (Disinfectants)。 药物称为消毒剂(Disinfectants)。一般消毒剂 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。对于芽胞 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。
A． 杀灭物体上所有微生物的方法 B． 杀死物体上病原微生物的方法 C． 抑制微生物生长繁殖的方法 D．杀死细菌芽胞的方法 E. 物体中没有任何活的微生物存在
2．杀灭细菌芽胞最有效的方法是
A． 煮沸法 B． 流动蒸汽消毒法 C． 间歇灭菌法 D． 高压蒸汽灭菌法 E. 巴氏消毒法
第三章 消毒与灭菌
耐热药品、手术敷料等。
手提式高压蒸汽灭菌器
二. 辐 射
辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。按辐
射对微生物的灭活作用分：
1.非电离辐射: 可见光、日光、紫外线 2.电离辐射: 、、γ 、χ 射线以及高能质子、 中子等
(一)非电离辐射
1.可见光: 指在红外线和紫外线之间的肉眼可见的光线，
其波长400～800nm。可见光线对微生物一般无多大影 响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故
4. 何谓细菌素？
5. 毒性噬菌体和温和噬菌体的概念。 6. PFU的概念。
(2)巴氏消毒法 :以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，
而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法 . 1.低温维持巴氏消毒法 63～65℃30min 2.高温瞬时巴氏消毒法 71～72℃15s 3.超高温巴氏消毒法 132℃1～2s
（3）流通蒸汽灭菌法 ：是一种常压蒸汽消毒法，细
菌繁殖体15-30分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。
培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。
光感作用 :指可见光具有微弱的杀菌作用，若将某些染料 如结晶紫、美蓝、汞溴红、伊红、沙黄等加到培养基或涂 在外伤表面，能增强可见光的杀菌作用 。
2.阳光: 直射日光有强烈的杀菌作用，是天然的杀菌因
素。许多微生物在直射日光的照射下，半小时到数小 时即可死亡。芽胞对日光照射的抵抗力比繁殖体大得 多，往往需经20h才死亡。日光的杀菌效力因地、因
（二）植物杀菌素 ：某些植物中存在的杀菌物质。
如黄连、大蒜、板蓝根等。
（三）细菌素 ：某种细菌产生的一种具有杀菌作用的
蛋白质，只能作用于与它同种不同菌株的细菌 以及与它亲缘关系相近的细菌，如大肠菌素 。
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第一节 物理消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
2018/9/14
医学微生物学
一. 热力灭菌法
干热灭菌法
焚烧：废弃物、尸体 灼烧：接种环、试管口 干烤（160~170℃，2h）:玻璃器皿、瓷器 红外线: 医疗器械
2018/9/14
医学微生物学
电离辐射
微波
ห้องสมุดไป่ตู้. 滤过除菌法
——用物理阻留的方法除去液体或空气中的细 菌, 真菌。
常用滤器：薄膜滤器、玻璃滤器、石棉滤器 （Seitz） 特点：只能除去细菌，真菌, 不能除去病毒、支 原体、L型细菌。
应用：用于一些不耐高温灭菌的血清、
毒素、抗生素，以及空气的除菌。
五. 干燥低温抑菌法
湿热灭菌法 巴氏消毒法：61.1-62.8 ℃ 30min 或71.7℃1530s, 主要用于牛乳、酒类消毒。 煮沸法（100 ℃，5min）杀死繁殖体. 食具、注 射器等消毒. 流动蒸汽消毒法（100 ℃ 15-30min）杀死繁殖 体. 间歇蒸汽灭菌法（100 ℃ 15-30min，37 ℃ 24h×3天） 高压蒸汽灭菌法 2 压力—103.4 kPa（1.05kg/cm ） 温度—121.3 ℃ 时间—15-20 min 效果—杀灭包括芽胞在内所有微生物 应用—所有耐高温、高压、耐湿的物品
第6章 消毒灭菌与病原微生物 实验室生物安全
Disinfection and sterilization
2018/9/14
医学微生物学
消毒(disinfection)：杀死物体上或环境中的 大部分微生物，并不一定能杀死细菌芽胞或 所有微生物的方法。用以消毒的药品称为消 毒剂(disinfectant)。 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物 的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌 芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 防腐(antisepsis)：体外防止或抑制细菌生 长繁殖的方法， 一般用于有机体。 无菌(asepsis)：不存在活菌，多是灭菌的结 果。 无菌操作（aseptic technique）防止微生物 进入人体或其它物品的操作技术。
湿热灭菌法与干热灭菌法效果比较
结论—同样温度下，湿热比干热灭菌效果好
原因： —蛋白含水量多时易凝固变性 —湿热穿透力比干热大 —湿热的蒸汽具有潜热
2018/9/14
医学微生物学
二. 辐射杀菌法
紫外线
其主要作用是干扰DNA复制与转录，导致细菌变 异和死亡，并可杀灭病毒。 特点：穿透力较弱 应用：物体表面及空气消毒 高速电子、X射线、γ射线
膜、手、空气、饮水、器械、环境。
消毒灭菌的应用
一、医疗器械物品的消毒灭菌
高危器械物品:用时需进入无菌组织的物品。所有这 些物品都应该灭菌。 ( 腹腔镜、关节镜、宫腔镜等 ) 。 中危器械物品:用时不进入无菌组织但接触黏膜的器 械。采用消毒即可。(气管镜、胃镜、肠镜等) 低危器械物品 : 只接触未损伤皮肤 , 但不进入无菌组 织和不接触黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。 (食品器皿等) 快速周转的医疗器械:
影响消毒灭菌效果的因素
微生物的种类: 敏感性由高到低依次为: 真菌、 细菌繁殖体、有包膜病毒、无包膜病毒、分 枝杆菌、细菌芽胞。 微生物的物理状态: 营养差, 抵抗力强; 细菌 自稳定期开始, 抵抗力差. 微生物的数量: 消毒剂的性质、浓度与作用时间(70% 乙醇) 温度: 酸碱度: 有机物: 脓汁、痰
干燥法: 保存食物
低温法：低温可使细菌的新陈代谢减慢，
常用作保冷冻真空干燥法是目前保存菌种最好 的方法目前保存菌种的最好方法。
2018/9/14
医学微生物学
二 化学消毒灭菌法
消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化
剂、表面活性剂、烷化剂(甲醛)。
消毒剂的特点：作用无选择性 对人体细胞有 损伤 故只能外用, 不能内服。 消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、粘