第三章消毒灭菌与实验室生物安全
第三节 消毒灭菌的运用
一、医疗器械物品的消毒灭菌
（一）高危器械物品用时需进入菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌。。
（二）中危器械物品
用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可。
（三）低危器械物品
只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。 一般用后清洗、消毒即可。
（四）快速周转的医疗器械
干热灭菌 干热的杀菌作用是通过脱水、干燥
和大分子变性。
1.焚烧法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。是一种彻底的灭 菌方法。 适用于废弃物品或动物尸体。
2.烧灼法：直接用火焰灭菌。 适用于接种环，试管口等的灭菌。
3.干烤法：将物品置干烤箱内，加热至160~170℃ ，2h。 适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品。
第三章 消毒灭菌与病原微生物
实验室生物安全
第一节 消毒灭菌的常用术语
灭菌: 杀死物体上所有微生物的方法。
消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法， 并不一定 能杀死含芽胞的细菌或非病原微生 物。 消毒剂----用于消毒的药品。
防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。
清洁：通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量 的过程。
（二）辐射杀菌法
紫外线杀菌
波长200~300nm的紫外线有杀菌作用， 其中以265~266nm最强。 杀菌机制：形成T T,干扰DNA的复制与转录。 杀菌作用特点：穿透力弱，表面消毒。 适用范围：手术室、传染病房、细菌实验室 的空气消毒,或不耐热物品的表面消毒。
电离辐射：高速电子、Ｘ射线、 γ射线等。 杀菌机制：产生游离基，破坏DNA。 应用范围：一次性医用塑料制品；食品。
活动停止。
低温可使细菌的新陈代谢减慢，影响细菌
的生长。
冷冻真空干燥法
化学消毒灭菌法
一、化学消毒剂的杀菌机制
促进菌体蛋白质变性或凝固。
如酚类、醇类、重金属盐类、酸碱类、醛类等。
干扰细菌的酶系统和代谢。
如氧化剂、重金属盐类。
损伤菌细胞膜，降低菌细胞的表面张力并增 加其通透性，胞外液体内渗，致使细胞破裂。
病原微生物实验室生物安全的核心 是防扩散和防感染。
关于病原微生物实验室生物安全， 我国法令包括对病原微生物的分类管理， 对实验室的分级管理，实验室感染的控 制以及监督和法律责任等。
一、病原微生物的分类
根据传染性、感染后对个体或者群体的危害 程度，病原微生物分为四类：
第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的 微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消 灭的微生物。。
第五节 病原微生物实验室生物安全
生物安全（biosafety）是生物技术安全 （safety of biotechnology）的简称。
狭义地指现代生物技术的研究、开发、应 用及转基因生物可能对生物多样性、生态 环境和人类健康产生潜在的危害。
广义地指与生物有关的各种因素对社会、 经济、人类健康及生态环境所产生的危害 或潜在风险。
第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较 容易直接或者间接在人与人、动物与人、动 物与动物间传播的微生物。
第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况 下对人、动物或环境不构成严重危害，传 播风险有限，实验室感染后很少引起严重 疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微 生物。
第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病 的微生物。
（二）室内空气消毒灭菌
1.物理消毒法
①紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用； ②滤过除菌：空气通过孔径小于0.2 μm的高效 过滤装置以除去细菌和带菌尘埃。
2．化学消毒法
包括化学消毒剂喷雾和熏蒸：①过氧乙酸喷雾、 熏蒸；②过氧化氢喷雾；③二氧化氯溶液喷洒； ④中草药点燃烟熏。
（三）手和皮肤的消毒
第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。
二、病原微生物实验室的分级
级别
处理对象
一级 二级 三级
对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植 物致病的致病因子。
用肥皂和流动水经常并正确洗手。
病原微生物污染时应用消毒剂消毒。
（四）黏膜的消毒 （五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 （六）病人污染物品的消毒 （七）饮水的消毒 （八）环境的消毒
第四节 影响消毒灭菌效果的因素
一、消毒剂的性质、浓度与作用时间 二、微生物的种类与数量 三、温度 四、酸碱度 五、有机物
无菌：无活菌存在。 无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。
第二节 消毒灭菌的方法
物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法
高温对细菌有明显的致死作用--蛋白质变性；核酸断裂。
有干热灭菌和湿热灭菌两大类，在同一 温度下，前者比后者的效力大。
*湿热中菌体蛋白较易凝固。 *湿热的穿透力比干热大。 *湿热的蒸汽有潜热存在。
微波：波长为1mm到1m左右的电磁波，可穿透 玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，不能 穿透金属表面。 检验室用品、非金属器械、无菌病室 的食品用具、药杯及其它用品的消毒。
（三）滤过除菌法
用物理阻留的方法将液体或空气中的细 菌除去，以达到无菌的目的。
抽气
（四）干燥与低温抑菌法 干燥可使菌体内的水分逸出，使细菌生命
如酚类表面活性剂、脂溶剂等。
二、消毒剂的主要种类
酚类—石炭酸、来苏、洗必泰等 醇类---乙醇（70~75%）、异丙醇。 重金属盐类---硝酸银、汞 氧化剂---过氧化氢、高锰酸钾、过氧乙酸、
碘酒、漂白粉、次氯酸等。 表面活性剂---新洁尔灭、、杜灭芬 烷化剂---甲醛、还氧乙烷、戊二醛等。 染料---龙胆紫 酸碱类---醋酸
4.红外线：利用电磁波的热效应灭菌。1~10m波长的热 效应最强。适用于医疗器械的灭菌。
湿热灭菌 1.巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原 微生物或特 定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐 热成分不被破坏的消毒方法。 61.1~62.8℃ ，30min; 71.7 ℃ ,15~30s 用于牛乳制品、酒类等的消毒。 2.煮沸法: 100 ℃ 水浴，30min。食具、刀剪等消毒。 3.流动蒸气消毒法： 100 ℃ 汽浴，30min。 4.间歇蒸汽灭菌法： 100 ℃ 汽浴，30min/次。 5.高压蒸汽灭菌法：121.3 ℃ 汽浴（103.4kPa)，15~20min。 培养基、生理盐水、手术敷料等 耐高温、耐湿物品的灭菌。
微生物学第三章消毒与灭菌(共60张PPT)
介质的性质
细菌在非水介质中，比水作介质时对热 的抵抗力大
水分、2~4℃石炭酸、油类、干焦空气
不同介质对微生物抗热力的影响
2、低温抑菌法
低温可降低微生物代谢的速度。 大多数微生物对低温有很强的抵抗力 一般的：4-10℃ 淋球菌、脑膜炎球菌、流行感冒杆菌敏感，
伤寒杆菌、白喉杆菌耐低温 冷冻干燥：采用迅速冷冻和抽真空除水。
消毒（Disinfection）：杀灭物体上的病原微生物的方法，
叫消毒。消毒只要求达到消灭传染性的目的，而对非病原微 生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。
防腐(Antisepsis)或抑菌：指阻止或抑制物品上微生物 生长繁殖的方法，微生物不一定死亡。
无菌（asepsis）：指没有活的微生物的状态。
夜培养，残余的芽孢发芽为繁殖体；
第三天：100℃-30分钟，杀死所有微生物。
巴氏消毒法
常用于牛乳及一些饮料
最大限度地消灭病原体，尽可 能少地损害食品的营养物质
•低温维持巴氏消毒法（LTH)： •63～65℃-30分钟； •高温短时间巴氏消毒法(HTST):
•71～72℃-15秒， •超高温巴氏消毒法(UHT): •132℃-1～2秒
•巴氏消毒法
•高压蒸气灭菌法
干热灭菌法
火焰灭菌法
以火焰直接灼烧杀死物 体中的全部微生物的方 法。
灼烧 焚烧
酒精灯
热空气灭菌法
适用于高温下不损坏、 不变质的物品，需在 160℃维持1－2小时，才
能达到杀死所有微生物 及其芽孢、孢子的目的。
干烤箱
湿热灭菌法
煮沸灭菌
100℃，煮沸10～20分钟，可杀死所有细 菌繁殖体，芽孢常需煮沸1－2h才能杀死。
噬菌体（phage）：是指寄生于微生物 （细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及 蓝细菌等）中的病毒。
实验室生物安全规章制度
实验室生物安全规章制度第一章总则第一条目的和依据为保障实验室内生物实验的安全性和有效性，遵守国家相关法律法规、标准和规范，制定本规章制度。
第二条适用范围本规章制度适用于实验室内进行生物实验的所有工作人员。
第三条主管单位本实验室生物安全规章制度由实验室主管单位制定并负责实施。
第四条职责与义务所有工作人员都有义务遵守本规章制度，确保实验室内生物实验的安全和有序进行。
第五条管理原则实验室生物安全管理以预防为主，综合管理为辅，不断完善规章制度，提高生物实验的安全性和效率。
第六条安全风险评估实验室内生物实验前必须进行安全风险评估，并根据评估结果确定相应的安全防护措施。
第二章生物实验室的安全要求第七条实验室安全标识实验室内必须摆放安全警示标识，明确标识出禁止、警告、注意和指引信息，提醒工作人员注意安全。
第八条个人防护工作人员进入实验室必须穿戴符合要求的个人防护用品，包括实验服、手套、防护眼镜等。
第九条实验室进出管理实验室内必须有专门的管理人员负责进出实验室的管理，记录工作人员的姓名、时间和目的。
第十条生物实验物品管理实验室内的生物实验物品必须分类归档，定期清点，确保物品数量和质量不会出现差错。
第十一条废弃物品处理实验室内产生的废弃物品必须按照相关规定进行分类、包装和处理，禁止随意丢弃。
第十二条紧急救援程序实验室内必须制定紧急救援程序，明确各类紧急事件的处理流程和责任分工，确保及时有效的应急措施。
第三章生物实验操作规范第十三条操作规范进行生物实验时必须按照操作规范进行，禁止随意操作或违规操作。
第十四条实验设备使用实验设备使用前必须进行检查并确定设备正常运转，使用后要及时清理和维护。
第十五条试剂使用试剂使用时必须按照说明书要求进行，禁止混用或超量使用。
第十六条实验操作记录进行生物实验时必须及时记录实验过程和结果，确保实验数据的准确性和完整性。
第十七条实验结束处理实验结束后必须及时清理实验室环境，归档实验记录，并按照相关规定处理实验废弃物品。
生物安全实验室常规消毒灭菌
生物安全实验室常规消毒灭菌一、室内空气消毒具备排风净化功能的负压实验室，根据所操作的微生物因子不同，空气可以经高效过滤器过滤后排放，但应采取通风控制系统来防止实验室出现正压。
室内空气经高效过滤器过滤后排到建筑物以外并远离该建筑的进气口。
无排风净化功能的常压实验室，使用可汽化过氧化氢、气体二氧化氯对空间进行气体熏蒸或气溶胶喷雾等方法消毒，同时需做好个人防护与消毒后消毒剂残留的去除处理。
二、室内环境表面消毒若地面、实验台面等被明显污染，应立即用吸液布覆盖，喷洒消毒剂（从外向内）于吸液布上，使吸液布湿透，作用60min 后用清水擦拭干净。
实验台面、桌椅、门把手、生物安全柜和解剖柜台面、侧壁等可用消毒剂喷洒、擦拭。
表面消毒可使用含氯消毒剂，含有500～1 000mg/L有效氯溶液适于普通的环境表面消毒。
当处理高危环境时建议使用5 000mg/L有效氯溶液。
用于金属表面消毒处理时，消毒结束后应尽快使用清水清除表面残余消毒剂。
三、生物安全防护设备的消毒（一）生物安全柜消毒在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用中高效消毒剂进行擦拭，不触及送风滤器的扩散板。
75%乙醇消毒后需及时擦净水痕。
采用含氯消毒剂处理后，须用水擦拭干净，防止对生物安全柜的腐蚀。
试剂溢漏或泼洒后，立即消毒污染物及污染的表面。
生物安全柜在移动或更换过滤器之前，要使用汽化过氧化氢、二氧化氯气体或甲醛蒸汽对生物安全柜进行终末消毒。
（二）高效过滤器的消毒采用汽化过氧化氢消毒法或甲醛熏蒸法进行消毒。
消毒器应与排风过滤器排风箱体的消毒接口连接，利用循环气流带动蒸汽循环实现原位消毒。
消毒后可将滤器卸载，装入医用废物塑料袋中，进行压力蒸汽灭菌。
操作时做好个人防护。
（三）个体防护装备的消毒一次性帽子、口罩、手套，使用后应放入废物袋内高压灭菌。
防护鞋、防护眼罩、防护面具（半面具）、防护面罩（含正压面罩）表面用消毒剂喷雾或擦拭消毒，作用到预定时间后清洗晾干备用。
生物安全及消毒灭菌
病原微生物所致的安全问题，如病原微生物 实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大 传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最 现实的生物安全问题。 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和 防感染。 关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包 括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管 理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等。
1.高效消毒剂
可杀灭包括细菌芽胞在内的所有
微生物。 （1）含氯消毒剂 次氯酸钠，二氯异氰酸尿酸钠， 漂白粉（氯化钙+次氯酸钙）； （2）过氧化物消毒剂 过氧化氢，过氧乙酸， 二氧化氯； （3）醛类消毒剂 戊二醛，甲醛； （4）环氧乙烷 杂环类化合物。
2.中效消毒剂
不能杀灭芽胞，能杀灭细菌繁殖体，真 菌和大多数病毒。 （1）含碘消毒剂 碘酊，碘伏。 （2）醇类消毒剂 乙醇，异丙醇。
一、热力消毒灭菌法
• 热力杀菌的原理：高温对微生物有明显的致 死作用，其主要是通过使菌体蛋白变性或者 凝固，酶失去活性、核酸崩解及细胞膜破坏。 • 方法 （1）湿热消毒灭菌法 （2）干热灭菌法
湿热灭菌与干热灭菌的比较
同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好
• 细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性。 • 湿热穿透力强。 • 湿热蒸气有潜热存在，水蒸汽凝固成水释 放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度。
高压蒸汽灭菌器
二、 辐射灭菌法
(一）日光与紫外线
1、杀菌原理：使细菌DNA形成胸腺嘧啶双聚 体，DNA复制被干扰，从而导致细菌死亡。 2、杀菌特点：265-266nm波长的紫外线杀菌 力最强，但穿透力较弱。 3、应用：物体表面和空气的消毒。
紫外线对人的影响
1.UV-A：波长在315-400nm，能使人的皮肤产生黑色素，使皮 肤变黑。 2.UV-B：波长在280-315nm的紫外线，UV-B能致癌，令皮肤起 皱纹老化。 3.UV-C：波长在200-280nm波段有杀菌、消毒效能。
实验室生物安全规章
实验室生物安全规章第一章总则第一条为了保护实验室工作者的生命安全和健康，确保实验室内生物实验的安全进行，制定本规章。
第二条实验室生物安全规章适用于所有从事生物实验相关工作的人员，包括实验室工作者、研究人员、技术人员等。
第三条实验室严格遵守国家有关生物安全法律法规，确保实验室内生物实验的合法合规进行。
第四条实验室内的实验材料必须经过安全审批，达到相应的生物安全等级标准后方可使用。
第五条实验室应当建立健全的生物安全管理体系，明确责任分工，确保实验室内生物实验的安全进行。
第六条实验室负责人应当负有生物安全管理责任，对实验室内生物实验进行全面监督和管理。
第七条实验室应当配备专业的生物安全专家，负责指导和监督实验室的生物安全工作。
第八条实验室工作者应当接受相应的生物安全培训，掌握生物实验的安全操作技能。
第二章实验室环境安全第九条实验室应当保持干净整洁，定期进行消毒和清洁，确保实验室内环境的卫生安全。
第十条实验室应当配备必要的通风设备，保证实验室内空气的清新和流通，防止有害气体的积聚。
第十一条实验室应当设立生物废弃物处理区，配备相应的生物废弃物处理设施，确保废弃物得到安全处理。
第十二条实验室应当建立健全的实验室安全防护措施，对生物实验用具、试剂等材料进行安全保护。
第十三条实验室应当配备应急救援设备和药品，训练实验室工作者进行应急救援操作，保障生物实验的安全进行。
第三章生物实验安全第十四条实验室内生物实验必须按照规定的程序进行，切勿擅自改变实验计划。
第十五条实验室内生物实验必须严格遵守实验操作规程，做好实验前的准备工作，保证实验安全进行。
第十六条实验室内生物实验必须遵守实验操作规程，穿着相应的防护服装，戴上口罩、手套等防护用具。
第十七条实验室内生物实验必须做好实验现场的安全隔离措施，防止生物实验材料泄漏和污染。
第十八条实验室内生物实验必须保持实验室内的安静环境，避免产生干扰和误操作。
第十九条实验室内生物实验应当严格按照实验计划进行，不得随意更改或增减实验内容。
消毒灭菌和病原微生物实验室生物安全
（三）低效消毒剂 1.季铵盐类消毒剂 （苯扎溴铵） 2.氯已定 3.高锰酸钾
第二节 消毒灭菌旳利用
医疗器械物品旳消毒灭菌 室内空气消毒灭菌 手和皮肤旳消毒 黏膜旳消毒 病人排泄物与分泌物旳消毒灭菌 病人污染物品旳消毒 饮水旳消毒 环境旳消毒
过程。 无菌(asepsis)和无菌操作：无菌是无活菌旳意思，多是灭菌旳成果。
预防细菌进入人体或其他物品旳操作技术，称为无菌操作。
第一节 消毒灭菌旳措施
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
干热灭菌法 湿热灭菌法
高效消毒剂 中效消毒剂 低效消毒剂
（一）热力灭菌法
菌种保存管
（五）化学消毒灭菌法
杀菌机制 增进菌体蛋白质变性或凝固。 干扰细菌旳酶系统和代谢。 损伤细菌旳细胞膜，使细胞膜通透性增长，胞外液内渗，
细菌裂解。
化学消毒剂旳种类
（一）高效消毒剂 1.含氯消毒剂 （次氯酸钠、漂白粉） 2.过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸） 3.醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛） 4.环氧乙烷
➢ 高压蒸汽灭菌法
在103.4kPa蒸气压下，温度到达121.3℃，维持15~20min
高压蒸汽灭菌器 用于一般培养基、生理盐水、耐热药物、手术敷料等。
（二）辐射灭菌法
非电离辐射: 紫外线 电离辐射: 、、γ、χ射线以及高能质子、 中子等
紫外线(ultraviolet ray, UV)
作用于DNA，使相邻旳胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干 扰DNA复制。
1. 干热灭菌法 2. 湿热灭菌法 在同一温度下，湿热效力比干热大。 原因：（1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；
消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
病原微生物所致的安全问题，如病原微 生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐 怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社 会所面临的最现实的生物安全问题。
病原微生物实验室生物安全的核心是防 扩散和防感染。
关于病原微生物实验室生物安全，我国 法令包括对病原微生物的分类管理，对实验 室的分级管理 ， 实验室感染的控制以及监督 和法律责任等。
实验室概况—布局及流程 ☜☜
一、二级实验室不得从事高致病性 病原微生物实验活动。三级、四级实验 室从事高致病性病原微生物实验活动。
从事高致病性病原微生物相关实验 活动应当有２名以上的工作人员共同进 行。在同一个实验室的同一个独立安全 区域内，只能同时从事一种高致病性病 原微生物的相关实验活动。应有健全安 全保卫制度 。
实验室相关感染的原因
接触感染材料（倾倒、溅开） 针头刺伤 破碎玻璃器皿损伤 被感染的动物或昆虫咬伤、抓伤 感染微生物气溶胶
气溶胶
是指悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001-100μm的固态或液态微小粒子形 成的相对稳定的分散体系。
微生物气溶胶特点：
◙ 无色无味，无孔不入，不易发现，难以预防; ◙ 容易发生病原体在人与人、人与动物、动物与
坡、我国台湾和北京先后发生实验室SARS冠 状病毒感染。
实验室感染的历史与现状
实验室感染可间接传播至社区人群：
◙ 1992年，荷兰从1名儿童体内分离出1株脊髓 灰质炎疫苗病毒,该儿童的父亲在工作中曾意 外接触过大量脊髓灰质炎疫苗病毒。
◙ 2002年11月至2003年3月，印度西部地区从7 例脊髓灰质炎患者体内分离到Ⅱ型实验室标 准株,推测可能为实验室感染。
《医学微生物学》第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全练习题及答案
《医学微生物学》第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全练习题及答案【知识要点】1.掌握：（1）消毒、灭菌、清洁、防腐、无菌及无菌操作的概念。
（2）消毒灭菌的运用（3）病原微生物实验室的分级2.熟悉：常用的高压蒸气灭菌法、巴氏消毒法等热力杀菌法日光与紫外线杀菌机理及其应用；常用的化学消毒剂的种类及其应用。
实验室感染的控制以及监督和法律责任。
3.了解：热力灭菌法的种类和应用范围；常用化学消毒剂的作用机制及影响作用的因素。
【课程内容】第一节消毒灭菌常用术语第二节消毒灭菌的方法一、物理消毒与灭菌（一）热力灭菌法（二）辐射杀菌法（三）滤过除菌法（四）超声波消毒法（五）干燥与低温抑菌法二、化学消毒灭菌法（一）化学消毒灭菌法的原理（二）消毒剂的主要种类第三节消毒灭菌的运用一、医疗器械物品的消毒灭菌二、室内空气消毒灭菌三、手和皮肤的消毒四、黏膜消毒五、病人排泄物与分泌物的消毒灭菌六、病人污染物品的消毒七、饮水的消毒八、环境的消毒第四节影响消毒灭菌效果的因素一、微生物的种类二、微生物的物理状态三、微生物的数量四、消毒剂的性质、浓度与作用时间五、温度六、酸碱度七、有机物第五节病原微生物实验室生物安全一、病原微生物的分类二、病原微生物实验室的分级实验室感染的控制以及监督和法律责任【应试习题】一、名词解释1．防腐2．高压蒸气灭菌法3．灭菌4．无菌5．消毒6．抑菌7．巴氏消毒法8. 清洁二、填空题1．化学消毒剂杀菌或抑菌的作用机理是_______、_______和。
2．高压蒸气灭菌法的蒸气压力为_______kg／C㎡，温度达_______℃，维持时间是_______min。
3．紫外线杀菌力最强的波长为_______，常用于无菌室的_______消毒。
4．预防新生儿淋病奈瑟菌感染常用的滴眼剂是_______。
5．消毒手术包常采用的方法是______________________，其温度达到______________，维持时间是_____________________，可去除细菌及___________________。
第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全-临床执业医师考试医学微生物学重点培训讲义
第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全-临床执业医师考试医学微生物学重点培训讲义第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全第一节消毒灭菌的常用术语1、灭菌：杀灭生物体上所有微生物的方法。
2、消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物，并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。
3、防腐：防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。
4、无菌：无菌即不存在活菌，多是灭菌的结果。
无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。
5、清洁：减少微生物数量的过程。
第二节消毒灭菌的方法一、物理消毒灭菌法：热力、辐射、滤过、干燥和低温等。
㈠热力灭菌法：分为干热灭菌和湿热灭菌1、干热灭菌法：一般细菌繁殖体在干燥状态下，80-100℃经1小时可被杀死，芽胞则需要更高温度才能被杀死。
①焚烧：废弃物、尸体②灼烧：接种环、试管口③干烤：(160~170℃，2h)利用干烤箱灭菌，一般加热至171℃经1h或160℃ 2h或1 21℃ 16h。
适用于高温下不变质、不损害、不蒸发的器皿(如：玻璃器皿)。
④红外线(0.7~1000um波长的电磁波)：医疗器械2、湿热灭菌法：最常用，在相同温度下湿热灭菌法比干热灭菌法效果更好，因为：ⅰ湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性;ⅱ湿热的穿透力比干热大;ⅲ湿热的蒸汽有潜热效应存在。
①巴氏消毒法：用较低的温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，以保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法(61.1-62.8 ℃ 30min 或71.7℃15-30s，主要用于牛乳消毒和酒类)。
②煮沸法(100 ℃，5min)食具、注射器等消毒③流动蒸汽消毒法(100 ℃ 15-30min)④间歇蒸汽灭菌法(100 ℃ 5-30min，37 ℃24h×3天)⑤高压蒸汽灭菌法：*压力—103.4KPa(1.05Kg/cm2)*温度—121.3 ℃*时间—15-20min*效果—杀灭包括芽孢在内所有微生物*应用—所有耐高温、高压、耐湿的物品㈡辐射杀菌法：①紫外线：波长240—300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265—266nm最强。
医学微生物学消毒与灭菌和生物安全
微生物的分布
❖ 1、土壤中的微生物： ❖ 多为非致病菌，少数有致病性。 ❖ 芽孢菌致病；药材霉变。 ❖ 2、水中的微生物： ❖ 主要来自人和动物的排泄物、污物。 ❖ 常引起消化道传染病。 ❖ 3、空气中的微生物： ❖ 来源于人畜呼吸道的飞沫及飘扬的尘埃； ❖ 常引起呼吸道传染病。
Carbolic Steam
uW/cm2
紫外线杀菌车
（二）电离辐射
包括高速电子、X射线、β、和 射线：60Co－
尤其是γ射线穿透力强，不升高温度，对各种细菌均有致死作用
杀菌机理： 细胞中的水分被电离成H+和OH-，这些游 离基是强烈的氧化剂和还原剂，能破坏微 生物的核酸、蛋白质、酶，使微生物死亡
应用范围：
不耐热的一次性医用塑料制品的 消毒， 食品、药品、生物制品的消毒， 不破坏其营养成分
净台（层流工作柜）、无菌病房。
特点 仅能除去细菌，不能去除病毒、支原体、 衣原体和有些L型细菌等。
滤菌器的种类
➢ 薄膜滤菌器：孔径0.22～0.45m时，可 除去细菌；20～100nm时可除去病毒
➢ 玻璃滤菌器 ➢ 石棉滤菌器 ➢ 素陶瓷滤菌器
滤过除菌法的常用器具
滤菌器
六. 渗透压
主要用于防腐
相互比较
灭菌与消毒的比较：杀菌更彻底。 消毒与防腐的比较：浓度和时间。 无菌：本身无菌或灭菌处理。 无菌操作：保持着原生态的环境。
第一节 物理消毒灭菌法
❖ 一热力消毒灭菌法
干热灭菌法 湿热灭菌法
❖ 二 干燥和低温抑菌法
❖ 三辐射杀菌法
❖ 四超声波杀菌法
❖ 五 滤过除菌法——用物理阻留 方法除去细菌。
第二节 化学消毒灭菌法 用于防腐、消毒甚至灭菌的化学药物称 为化学消毒剂。只能外用或用于环境的消毒。