犬细小病毒病诊断技术国家标准
犬细小病毒病的诊断与综合防治
业科技技术出版社，2012：112. [6] 周绪正.犬病中西医结合治疗 [M].北京：金盾出版社，2010：57. [7] 汪惠兰.养犬与犬病防治 [M].河南科技技术出版社，2001：90. [8] 孙维平，刘小宝，何海建.宠物疾病诊治 [M].北京：化学工业出
（3）中药治疗；选取上等的黄柏、山药、栀子、黄岑，半夏、 当归、黄芪、板蓝根各 15g，黄连、苍术、砂仁、橙皮、甘草各 10g，地榆 30g，混合煎煮 50min，滤去渣液留汤备用。用法用量： 胃管投药，体重在 5kg 以下的犬用 100~1200ml，5~10kg 的犬用
200~300ml，10kg 以上的犬用 300~400ml。每日 3 次，连用 4 d。 参考文献 [1] 耿志贤.犬细小病毒病的流行状调现查[J].中国畜牧兽医，2009
流免疫电泳、中和试验等方法。 3.3 鉴别诊断
犬细小病毒病要与犬传染性肝炎、犬瘟热、犬出血性肠炎区 分开来。
共同点：精神沉郁、呕吐、腹泻 异同点： （1）犬传染性肝炎：由犬腺病毒引起。病犬怕冷，厌食、喜 饮、腹泻、数小时死亡，轻者出现贫血、黄疸、淋巴结肿大、咽 炎和眼睛半闭。粪便呈黄色糊状，有的伴有少量血液，没有犬细 小病毒病粪便的腥臭味。 （2）犬温热：病犬也会有呕吐，腹泻、精神沉郁等症，但症 状轻微，临床上以双相热型、卡他性肺炎、支气管炎，严重肠管炎、 神经症状等为特征。可以通过胶体金试剂盒实验明显分辩出犬瘟 热和犬细小病毒病。 （3）犬出血性肠炎：典型的特征是剧烈呕吐、腹泻，出现血 便和白细胞减少； 排出胶冻样粘液和血便，呈粉红至棕红色，粪 便比以前更稀，更腥臭；呕吐不止，吃啥吐啥，有时呕吐物呈淡红色； 患犬精神差，喜卧，爱喝水。 4 预防与治疗 4.1 预防
犬细小病的诊断与防治
犬细小病的诊断与防治犬细小病是一种由犬细小病毒引起的病毒性疾病。
该病毒主要通过犬接触、空气传播、粪便或被污染的物品传播。
细小病的症状包括发热、呕吐、腹泻、鼻流涕、咳嗽和疲劳。
如果不及时诊断和治疗，细小病可能会导致犬死亡。
以下是关于犬细小病的诊断和防治的更多信息。
诊断：对于疑似患有细小病的犬，经过应对以下检查和测试：1.生物学检查：通过检查犬的粪便、尿液和口腔分泌物来检测细小病毒。
2.血液检查：在病程的初期通过血液检查可以检测到犬细小病毒抗体的产生。
3.影像学检查：如腹部X射线、超声波检查，可以对病变范围进行详细了解。
4.病理学检查：对已经死亡的犬进行解剖学和组织学检查，确认细小病真正的病变情况。
防治：目前尚未有一种特效的药物可以治疗犬细小病。
因此，预防是最重要的控制手段之一。
以下是预防细小病的方法：1.定期接种疫苗：美国疾病控制中心及美国獽犬拍摄接种麻疹、冠状病毒、犬细小病、卡方氏菌疫苗，并遵循医生的建议进行疫苗接种。
2.良好的卫生习惯：定期清洁犬舍环境，定期给犬洗澡、指甲也要及时剪。
购买犬粮、犬服等物品应尽可能从信誉好、有合法证书的商家购买，避免病原菌的散播。
3.限制犬间接接触：犬之间应保持一定的距离，不同病情的犬不能一起饲养，不能乱接触其他犬只和野生动物。
4.接受定期检查：及早发现和治疗，增加生存机会。
总体来说，预防犬细小病的最佳方法是通过为犬接种疫苗、保持卫生习惯、限制间接接触以及定期检查。
如果犬被诊断出患有细小病，宠物主人应该尽快咨询兽医以获取治疗建议，以降低疾病的危害程度。
犬细小病毒病诊治技术概述
血清 的同时 ，进 行强 心 、补 液 、抗 菌 、消炎 、抗休克和 加强 护理等措
施 下， 可提 高治愈 率。 １ 免疫血清 ： 期使用可提高 ． 早 疗效 。 犬群 中一旦确诊 为本病 ， 立 ０ ｍ ～１ １ 次 ／ 应 ． ｌ ｍ ，２ ３ 日。 即给其他病 犬应 用用高 免血 清 或康
０日龄 以上 有特殊 腥 味。病 犬很 快呈 现脱 水症 日龄 的犬应 注射 ３次 ，９
次 每次 间隔为 ２ ～ 犬细小病 毒对 外界 因素 的抵抗 状 ，此时病犬精神沉 郁 ，食欲废绝 ， 的犬注射 ２ 即可 ， 力较强 ，在 ４ ０ ｃ ～１ ｃ 存活 １ ０ ， ８ 天 在 体温 升至 ４ ｃ 以上 ， ０ｃ 渴欲 增加。 有的 ４ 。每次注 射 １ 周 头份 剂量 ，以后每
法及 用量 ：２ ｇ～４ ｇ 重的犬 口服 ｋ ｋ体 （ ２）口服补 液法 ：当病 犬表现 １～２ ／ ， ｋ ～１ ｋ 的犬服 ２ 片 次 ５ｇ ｇ Ｏ —４
复犬血清 。高免血清的用量为 ０５ 不食 ， ．～ 心率加快 ， 如无呕吐 ， 具有食 片 ，每 日 １ 次 。由病毒引起的腹 ～２ １ Ｉｋ ／ｇ体重 ，康复犬血清 为 ０５～ 欲或饮欲 时 ， ｍ ． 可给 予 口服 用补 液盐： ２ ｌ ｇ 重 ，连 用 ３ 天。如高免 氯化钠 ３５ 、碳酸氢 钠 ２５ 、氯 化 ｍ／ 体 ｋ ～５ ．ｇ ．ｇ 泻 ，药量加倍。
洲分离获得该病毒 ， 我国于 １ ８ 年 冬 、春季较 为多见 。天气寒冷 、气温 凝试 验可 以很 快测 出该病 毒。必 要 ９２
犬细小病毒病
属于细小病毒科，细小
病毒属
这种病毒在环境中具有
很强的抵抗力，能够耐
1
受广泛的pH值和温度 范围
此外，CPV还具有血凝
性，能够在4℃的温度
下凝集猪和恒河猴的红 细胞
4
一旦感染，病毒会攻击 犬的免疫系统，导致严
重的疾病甚至死亡
犬细小病毒病是一种全
球性的疾病，各个年龄
段的犬都可能被感染， 但断奶前后的幼犬的易
3. 症状
这种类型的病犬常常没有先兆性症状， 或仅表现轻微的腹泻，然后突然衰弱、
呻吟，粘膜发绀
PART.4
4. 诊断
12 4. 诊断
犬细小病毒的诊断通常通过临床症状、 实验室检查和病史综合分析来确定
实验室检查包括病毒分离、血清学检测 和PCR检测等
5. 防治技术
5. 防治技术
预防犬细小病毒病的关键 在于疫苗接种
进康复
这包括维持体液平衡、 控制腹泻、防止继发感
染、提供营养支持等
在治疗过程中，需要密 切观察犬只的症状和体 征，及时调整治疗方案，
避免病情恶化
发展犬细小病毒的感染是来自一种严重的疾病，需要及早诊断和治疗
治疗犬细小病毒病的 方法主要包括对症治
疗和支持疗法
对于重症病例，可能需 要进行静脉输液、抗生 素治疗和其他支持性治
犬细小病毒病
汇报人：xxxx
日期：20XX
-
1 1. 病原学 3 3. 症状 5 5. 防治技术
2 2. 流行病学 4 4. 诊断 6 6. 治疗
犬细小病毒病
犬细小病毒病 (CPV)
PART.1
1. 病原学
1. 病原学
犬细小病毒
(Canine Parvovirus，
犬细小病毒生物学特征及检测技术研究进展
白 Ｖ １ ＶＰ ｌ 。 Ｃ Ｖ 的 编 码 区 基 因 是 相 互 重 叠 Ｐ 、 ２３ Ｐ
犬的细小 病 毒 病 （ ａ ｉｅｐ ｒｏ ｉ ｓｄｓａｅ ， 床 Ｃ ｎｎ ａｖ ｖｒ ｉ ｓ） 临 ｕ ｅ
以剧 烈 呕 吐 、 血 性 肠 炎 、 肌 炎 和 白细 胞 显 著 减 少 出 心
以 前 的 Ｃ Ｖ 毒 株 已 发 展 为 Ｃ Ｖ２ 、 Ｐ ｂ Ｐ ２ Ｐ ａ Ｃ Ｖ２ 、 Ｃ Ｖ２ （ ）Ｃ Ｖ２ （ ） 同 的 亚 型 。 欧 洲 地 区 主 要 Ｐ ｃａ 、 Ｐ ｃ ｂ 不
户 “０ Ｐ 口 志户
ｖｒ ｓ Ｐ 、 肠 炎 病 毒 （ ｎ ｉｕ ，Ｆ Ｖ） 貂 Ｍｉｋ
１ １ 病 原 分 类 ．
Ｃ Ｖ 在 自然 界 广 泛 存 在 ， 是 其 主 要 自然 宿 Ｐ 犬
Ｃ Ｖ在 分类 地 位 上属 于细 小 病 毒 科 细 小 病 毒 Ｐ
属 ，与 猫 泛 白 细 胞 减 少 症 病 毒 （ ｅｉｅ Ｆｌ ｎ
主， 各年 龄和性别 的犬均 有易感 性 ， 幼犬 的易感 性 但 最 高 。除感 染犬外 ， Ｐ 也 可感 染其 他犬 科 动物 如 Ｃ Ｖ 狼、 丛林狼 、 蟹 狐 、 美 狗和 亚 洲 狸 等 。患 病 动 食 南 ］ 物是 主要传染 源 ， 毒 随粪 便 、 液 、 吐物 及 唾液 病 尿 呕 排 出体外 ， 污染食 物 、 垫料 、 食具 和周 围环境 ， 复犬 康 的粪便 可 长 期 带 毒 ， 年 四 季 均 可 发 病 。近 年 来 ， 一 Ｃ Ｖ 的抗原 性 随 着 时 间 的推 移 而 发 生 了很 大 的改 Ｐ 变， 不断 出现新 的 Ｃ Ｖ 变异株 ， Ｐ 宿主 范围不 断扩 大 。
（ 国农 业 科 学 院 北京 畜 牧 兽 医 研究 所 ， 中 北京 １ ０ ９ ） ０ １ ３
犬细小的诊断方法
犬细小的诊断方法犬细小（Canine Parvovirus，简称CPV）是一种由犬细小病毒感染引起的严重、高度传染性的犬只疾病。
这种病毒主要通过粪口传播途径感染，表现为呕吐、腹泻、食欲不振等症状，严重情况下甚至会导致死亡。
因此，及早发现和诊断犬细小病毒的感染是十分重要的。
以下将介绍一些犬细小的诊断方法。
1. 临床症状观察：犬细小病毒感染后，犬只会出现明显的症状，包括呕吐、腹泻、食欲不振、虚弱、脱水等。
在临床症状观察中，兽医会根据犬只出现的症状来初步判断是否存在犬细小病毒感染的可能性。
2. 粪便检测：粪便检测是一种直接检测犬细小病毒的方法。
兽医会收集犬只的粪便样本，然后进行快速检测或实验室检测。
快速检测方法包括免疫层析试验、酶联免疫吸附测定等，实验室检测方法包括PCR、ELISA等。
这些检测方法可以快速、准确地确认犬只是否感染了犬细小病毒。
3. 血液检测：血液检测可以帮助兽医评估犬只的免疫状态，判断是否存在犬细小病毒感染。
其中，血液中白细胞、红细胞计数、血小板计数等指标的异常变化可以提示犬只可能存在感染。
此外，还可以通过血清学检测来检测犬只的抗体水平，判断其对犬细小病毒的免疫情况。
4. 体温测量：犬细小病毒感染往往会导致犬只出现发热的症状。
因此，通过体温测量可以初步判断犬只是否感染了犬细小病毒。
一般来说，正常犬只的体温范围在38C到39C之间，如果体温超过39.5C，就可能存在发热，需要引起警惕。
总的来说，犬细小的诊断主要依靠临床症状观察、粪便检测、血液检测和体温测量等多种方法综合判断。
通过这些方法的应用，可以快速、准确地诊断犬细小病毒感染，为后续的治疗和预防工作提供重要依据。
此外，对于有可能感染犬细小病毒的犬只，兽医还会建议进行其他相关检查，如心电图检查、X光检查等，以评估犬只全身状况。
同时，兽医也会根据病情的发展情况，及时调整诊断方案，并进行相应的治疗和护理工作。
犬细小病毒病诊断技术-最新国标
犬细小病毒病诊断技术1 范围本文件规定了犬细小病毒病的临床检查、血凝与血凝抑制试验、PCR检测、荧光定量PCR、胶体金试纸检测的操作方法。
本文件适用于犬细小病毒病的诊断、鉴定及流行病学调查和监测。
其中病毒分离、血凝与血凝抑制试验、PCR检测、荧光定量PCR、胶体金试纸检测适用于犬细小病毒病的病原诊断。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4 试剂和材料4.1 除有特殊说明，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水符合GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法中一级水的要求。
4.2 FK81细胞(猫肾细胞)。
4.3 0.9%生理盐水：配制参见附录A中A.1。
4.4 1%猪红细胞液：配制参见附录A中A.2。
4.5 犬细小病毒阳性血清。
4.6 96孔“v”形微量反应板。
4.7 Taq酶及10倍Taq酶反应缓冲液：Taq酶浓度为5 U/μL，-20℃保存。
4.8 1.5 mL Eppendorf管。
4.9 0.2 mL PCR薄壁管。
4.10 dNTP：含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10 mmol/L，-20℃保存。
4.11 10%十二烷基硫酸钠：配制参见附录A。
4.12 蛋白酶K贮备液：配制参见附录A中A.4。
4.13 5×TBE电泳缓冲液：配制参见附录A中A.6。
4.14 2×SYBR Premix。
4.15 犬细小病毒胶体金抗原检测试纸条：有国家批准的正式生产文号，批签发的合格产品。
5 器材和设备5.1 PCR仪5.2 高速台式冷冻离心机：可控温至4℃、离心速度可达12000 g以上5.3 水平电泳仪5.4 凝胶成像系统5.5 荧光定量PCR扩增仪6 临床检查6.1 流行病学特点6.1.1 病犬和带毒犬是主要传染源，通过分泌物、排泄物大量排毒，经消化道、皮肤和黏膜接触而感染。
犬细小病毒的诊断与防治
摘 要：犬细小病毒病（CPV）又称犬传染性出血性肠炎，是由犬细小病毒引起的一种急性传染病。
临床表现为肠炎型和心肌炎型，肠炎型以剧烈呕吐、番茄样腹泻、脱水、白细胞显著减少和小肠出血性坏死性肠炎为特征；心肌炎型以急性非化脓性心肌炎为特征。
关键词：犬细小病毒；诊断；防治1 流行特点易感动物主要是犬，各种年龄和品种的犬均可感染，断奶前后的犬易感性最高，经常以同窝或同群发病为特征，1月龄前后的哺乳犬发病呈急性致死性心肌炎为主，其它以肠炎为主。
病犬是主要的传染源，主要经消化道传染，其排出的粪、尿、呕吐物和唾液中含有大量病毒，污染饲料、饮水、饮食具、厩舍和周围环境。
健康犬通过直接或间接接触的方式而被感染发病。
犬细小病毒对外界因素的抵抗力较强，于60℃环境可存活1h，在偏酸偏碱的环境中病毒仍有感染性。
在粪便和固体污染物上的病毒可存活数月至1年。
于低温环境，其感染性可长期保持。
但对紫外线敏感，消毒剂可选用3～4%氢氧化钠、1％福尔马林、1％过氧乙酸、5～6％次氯酸钠等都可有效灭活病毒。
2 临床症状本病在临床上主要表现为肠炎型和心肌炎型。
（1）肠炎型常发于两个月以上的断奶犬，潜伏期为7～14d，临床上常出现突然呕吐，继而腹泻，粪便呈黄色或灰黄色，内含多量黏液和伪膜。
病后2～3d，排出呈番茄汁样稀粪，腥臭难闻。
这时病犬精神沉郁、食欲废绝，饮欲增加，喜睡阴凉处，体温升高到40℃左右。
血液学检查：血液粘稠，血清总蛋白减少，白细胞总数显著减少，转氨酶指数上升。
因为呕吐和严重腹泻很快呈现脱水症状。
后期病犬体温降致常温以下，严重脱水，营养不良，可视粘膜苍白，呼吸微弱，全身衰竭而死亡。
病程一般5～7d。
有的病犬症状稍轻微，耐过7d以后，经治疗一天比一天好转的犬有较高的治愈率。
（2）心肌炎型常发于2月龄以内的幼犬，突然发病，偶见呕吐或腹泻或呼吸困难，呻吟、可视粘膜苍白，脉快而弱，心律不齐，因心力衰竭而在数小时至1d内死亡。
通常可根据流行特点、临床症状作出初步诊断。
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中国工作犬业
1范围
本标准规定了犬细小病毒病的临床检查、血凝与血凝抑制试验、PCR 检测的操作方法。
本标准适用于犬细小病毒病的鉴定及其流行学调查、诊断和监测。
其中病毒分离、血凝与血凝抑制试验、PCR 检测适用于犬细小病毒的病原诊断。
2试剂和材料
2.1 FK81细胞（猫肾细胞）。
2.2 0.9%生理盐水。
2.3 1%猪红细胞液。
2.4 犬细小病毒阳性血清。
2.5 96孔“v”形微量反应板。
2.6 Taq 酶及10倍Taq 酶反应缓冲液：Taq 酶浓度为5U/μL，-20℃保存。
2.7 1.5mL Eppendorf 管。
2.8 0.2mL PCR 薄壁管。
2.9 dNTP:含dCTP、dGTP、dATP 、dTTP 各10mmol/L，-20℃保存。
2.10 引物：浓度为20μmol/L，其序列如下：
上游引物（CPVF ）：5’GAA TCT GCT ACT CAG CCA CCA AC3’；
下游引物（CPVR ）：5’GTG CAC TAT AAC CAA CCT CAG C3’。
2.11 10%十二烷基硫酸钠：配制参见附录A。
2.12 蛋白酶K 贮备液。
2.13 5×TBE 电泳缓冲液。
3器材和设备
3.1 PCR 仪。
3.2 高速台式冷冻离心机：可控温至4℃、离心速度可达12000g 以上。
3.3 水平电泳仪。
3.4 凝胶成像系统。
4临床检查
4.1 临床特征
4.1.1 潜伏期1周到2周，病初无任何症状，食欲减退或废绝，体温40℃以上，粉红色黏稠血样物。
4.1.2 病犬先出现呕吐，呕吐出白色泡沫或黄色液体，继而腹泻，粪便稀薄而恶臭，剧烈的腹泻呈喷射状，粪便呈红色，混有大量黏液或假膜。
后期排番茄汁样稀便，并有特殊的腥臭味。
4.1.3 患犬迅速消瘦，倦卧不起，目光呆滞，眼窝下陷，腹围紧缩，机体脱水，皮肤干燥、弹性降低。
4.2 病理变化
4.2.1 心脏肿大呈灰黄色，切面外翻，质地松软，心肌有出血性斑纹。
4.2.2 肝脏肿大，包膜紧张，多呈黄褐色，质地松软有局灶性坏死，断面有豆蔻状花纹。
4.2.3 胃空虚，黏膜轻度潮红，附有大量黏液；小肠壁增厚，肠管变粗，肠腔狭窄，形成厚层黏膜皱褶，易于剥落，肠腔内充满紫红色粥样内容物并混有血凝块。
4.3 判定
若临床症状符合4.1.1或4.1.2且出现4.2.1或4.2.3的病理变化，则可判定疑似犬细小病毒病，其他临床症状和病理变化可作为参考指标；疑似病例可采用血凝与血凝抑制试验或PCR 检测进行确诊。
5血凝与血凝抑制试验
5.1 血凝试验（HA ）的操作方法
5.1.1 样品采集活犬的泪液、鼻液、粪便，病死犬的肝、脾、肺等组织器官。
将待检组织或粪便样品加等体积生理盐水研磨匀浆，3000g离心15min，收集上清液待检；口腔拭子、粪拭子用少量生理盐水浸润后，取上清液待检。
5.1.2 在96孔“v”形微量反应板上进行，自左至右各孔加50μL 理盐水。
5.1.3 于左侧第1孔加50μL 待检样品混合均后，吸50μL 至第2孔，混合均匀后，吸50μL 至第3孔，依次倍比稀释，至第11孔，吸弃50μL，稀释后病毒稀释度为
犬细小病毒病诊断技术国家标准
nformation· Reference
I
资料 参考
第1孔1∶2，第2孔1∶4，第3孔1∶8……最后12孔为对照。
5.1.4 由左至右依次向各孔加1%猪红细胞悬液50μL置微型混合器上振荡，使血球与病毒充分混合，在37℃温箱中作用15min~30min后，待对照红细胞已沉淀可观察结果。
5.1.5 判定结果：以100%凝集（血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底）的病毒最大长稀释孔为该病毒血凝价，即一个凝集单位，不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。
5.2 血凝抑制试验（HI）的操作方法
5.2.1 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配成4个血凝单位病毒溶液。
5.2.2 在96“v”形微量板上进行，用固定病毒稀释血清法，自第1孔至第10孔各加50μL生理盐水，11和12孔分别为4单位CPV细胞病毒培养液和抗犬细小病毒阳性血清对照。
5.2.3 第1孔加犬细小病毒阳性血清50μL，混合均匀，吸50μL 至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50μL，如此稀释后血清浓度为第1孔1：2，第2孔1：4，第3孔1：8……
5.2.4 由第1孔至11孔各加50μL，4单位待测病毒液，第12孔50μL血清，混合均匀，置37℃温箱再作用15min~30min，待4单位病毒已凝集红细胞可观察结果。
5.2.5 判定结果：被已知犬细小病毒阳性血清抑制血凝者，该病毒为犬细小病毒。
6 PCR检测
6.1 病料的采集及处理
采集的样品包括犬的泪液、鼻
液、唾液、粪便及病死犬的肝、脾、
肺等组织器官。
将待检组织或粪便
样品加等体积生理盐水研磨匀浆，
3000g离心15min，收集上清液待
检。
口腔拭子、粪拭子用少量生理
盐水浸润后，取上清液待检。
经细
胞病原分离培养的样品，收集细胞
沉淀待检。
CPV阳性对照样品和阴
性对照样品的同样处理。
6.2 DNA抽提
取上清液465μL，加入25μL
10%十二烷基硫酸钠和10μL的
20mg/mL蛋白酶K，50℃水浴摇床
上放置2h；加入等量的饱和酚溶
液500μL，振荡混匀20s，12000g
离心5min，取上清液；加入等量的
酚：三氯甲烷：异戊醇（25：24：
1），振荡混匀20s，12000g离心
5min，取上清液；再加入等量的三
氯甲烷：异戊醇（24：1），振荡混
匀20s，12000g离心5min，取上清
液；最后加入两倍体积的无水乙醇，
上下颠倒混匀，12000g离心10min，
弃上清，室温干燥后，加入50μL
双蒸水溶解沉淀，即得DNA模板，-
20℃贮存备用。
CPV阳性对照样品
和阴性对照样品与待检样品同步进
行样品处理，并进行DNA抽提。
另
外，DNA抽提也可采用市售的商品
化DNA抽提试剂盒进行。
6.3 PCR检测
在0.2mLPCR薄壁管中，按每
个样品10倍Taq酶浓缩缓冲液
2.5μL、dNTP0.5μL、Taq酶0.5μL、
DNA模板2μL、上游引物和下游引
物（CPVE、CPVR）各0.5μL、三蒸
水18.5μL，配制PCR检测体系。
将PCR管置PCR仪上按如下程序扩
增：首先94℃变性2min；再94℃、
30s，55℃、30s，72℃、40s进行
35个循环；最后72℃、3min。
用
TBE电泳缓冲液配制1.5%的琼脂
糖平板（含0.5μg/mLEB），将平板
放入水平电泳仪，使电泳缓冲液刚
好没过胶面，将10μLPCR产物和
2μL加样缓冲液（6X），混匀后加入
样品孔。
在电泳时设立DNA标准分
子量作对照。
5V/cm电泳约30min，
当溴酚蓝到达底部时停止，用凝胶
成像系统观察结果。
6.4 结果判定
6.4.1 经PCR检测，CPV阳性
对照样品可扩增出大小为609bp的
核酸片段，且阴性对照样品无扩增
条带，否则试验结果视为无效。
6.4.2 在符合6.4.1的条件下，
若待检样品扩增出了大小为609bp
的核酸片段，则初步判定犬细小病
毒核酸阳性；若待检样品无扩增条
带或扩增条带大小不为609bp，则
判定犬细小病毒核酸阴性。
6.4.3 待检样品扩增出的阳性
基因片段应进行核酸序列测定，若
其序列与提供的比对序列的同源性
大于等于90%，则可确诊为犬细小
病毒核酸阳性，否则判定犬细小病
毒核酸阴性。
6.4.4 若犬细小病毒核酸阳性
且病原分离也呈阳性，则可判定犬
细小病毒感染阳性。
nformation· Reference
I资料 参考
67
中国工作犬业。