3,5—二硝基水杨酸法测定还原糖总结
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量
3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量3,5-二硝基水杨酸法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法，其原理基于还原糖在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物，而总糖则在强硫酸存在下加热分解，生成由葡萄糖和六碳糖等组成的还原糖，在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物。
具体操作步骤如下：1. 取一定质量的山楂片粉末，加入适量的蒸馏水，加热水浴至沸腾，过滤，将过滤液冷却至室温。
2. 取0.2 ml 过滤液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。
3. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，还原糖含量的计算公式为：还原糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。
4. 取剩余过滤液，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，浸于沸水中煮2小时，浸于水中冷却，并用蒸馏水将瓶口水洗入容量瓶，摇匀。
5. 取0.1ml 还原糖水样稀释液加入容量瓶，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，摇匀后加入适量的蒸馏水到刻度线，摇匀后离心。
6. 取0.1 ml 离心上清液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。
7. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，总糖含量的计算公式为：总糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。
总之，3,5-二硝基水杨酸法是一种稳定可靠的方法，能够准确测定山楂片中的还原糖和总糖含量，为山楂片的质量控制提供了重要的参考。
35二硝基水杨酸法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖3,5-二硝基水杨酸法是一种常用于测定还原糖含量的分析方法。
该方法的原理是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成有色产物，通过测定产物的吸光度来确定还原糖的含量。
以下是关于3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的详细介绍。
1. 实验原理还原糖是一类具有还原性的糖类化合物，能够与氧化剂反应生成醛基或酮基。
在3,5-二硝基水杨酸法中，还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS）反应生成有色产物，该产物的吸光度与还原糖的浓度成正比。
2. 实验步骤（1）样品制备：将待测样品（如果汁、葡萄糖溶液等）稀释至一定浓度。
（2）反应溶液制备：将3,5-二硝基水杨酸溶解于醋酸钠缓冲液中，得到浓度为0.5%的DNS溶液。
（3）反应过程：取一定体积的样品溶液与DNS溶液按比例混合，放置在沸水中加热反应一定时间。
（4）冷却与稀释：将反应混合液冷却至室温，然后用蒸馏水稀释至一定体积。
（5）吸光度测定：将稀释后的反应混合液的吸光度用分光光度计测定，以确定还原糖的含量。
3. 实验注意事项（1）样品的制备要注意稀释比例，过高或过低的稀释比例都会影响测定结果。
（2）反应溶液的制备要保证溶液浓度的准确性。
（3）反应时间要控制适当，过长或过短的反应时间都会对测定结果产生影响。
（4）测定过程中要保持样品溶液的稳定性，避免外界因素对实验结果的干扰。
4. 数据处理与结果分析通过测定样品的吸光度，可以根据标准曲线或计算公式来计算还原糖的浓度。
通常使用葡萄糖作为标准品制备一系列浓度的标准溶液，然后测定各标准溶液的吸光度，建立标准曲线。
根据标准曲线，可以通过测定待测样品的吸光度来计算其还原糖的浓度。
通过3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量，可以广泛应用于食品、饮料、药品等领域的质量控制和分析研究。
该方法具有操作简便、结果准确、灵敏度高等优点，在实验室和工业生产中得到广泛应用。
3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）测定还原糖
3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法（DNS法）测定还原糖
3,5－⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法(DNS法)测定还原糖
⼀．原理
3,5－⼆硝基⽔杨酸与还原糖共热后被还原成棕红⾊的氨基化合物，再⼀定范围内，还原糖的量与反应液的颜⾊强度成⽐例关系，利⽤⽐⾊法可测知样品的含糖量。
次法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质⼲扰较少，是⼀种很好的糖定量测定⽅法。
⼆．试剂
1. 3,5－⼆硝基⽔杨酸试剂(DNS试剂)
甲液－溶解6.9克结晶酚（苯酚）于15.2毫升10％氢氧化钠中，并稀释⾄69毫升，再此溶液中加⼊6.9克亚硫酸氢钠。
⼄液－称取255克酒⽯酸甲钠，加到300毫升10％氢氧化钠中，再加⼊880毫升1％3,5－⼆硝基⽔杨酸溶液。
将甲液和⼄液相混合即得黄⾊试剂，保存于棕⾊试剂瓶中，在室温下放置7－10天后使⽤。
2.0.1％葡萄糖标准液
准确称取100毫克分析纯的葡萄糖（预先在105℃⼲燥⾄恒重），⽤少量蒸馏⽔溶解后定容⾄100毫升，保存于冰箱备⽤。
三.制作标准曲线
取9⽀⼤试管，分别按表⼀顺序加⼊各种试剂。
表⼀
将上述各管溶液混后，在紫外可见分光光度计上⽤绿⾊滤光⽚(520nm) 进⾏⽐⾊测定，⽤空⽩管溶液调零，记录光密度值。
以光密度值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
四.定糖
根据所取样品的个数来确定所需的试管数，在这⾥以7⽀试管为例，分别按表⼆顺序来加⼊各种试剂。
将各管混匀后，按制作标准曲线时的同样⽅法的操作，测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出还原糖含量。
还原糖%= (还原糖毫克数?样品稀释倍数)/培养基中总含糖量?100
表⼆。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
还原糖和总糖含量的测定(3,5 一二硝基水杨酸比色法)
还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132更新时间：2021-5-1311:29:24一、目的植物体内的还原成糖，主要就是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的原产，不仅充分反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也就是呼吸作用的基质。
还原成糖还能够构成其他物质例如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也就是始终如一其品质的关键指标。
还原成糖在有机体的新陈代谢中起至着关键的促进作用，其他碳水化合物，例如淀粉蔗糖等，经水解也分解成还原成糖。
通过本实验，掌控还原成糖定量测定的基本原理，练比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的采用方法。
二、原理各种单糖和麦芽糖就是还原成糖，蔗糖和淀粉不为还原成糖。
利用溶解度相同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别抽取出，再用酸水解法并使没还原性的双糖和多糖全盘水解班莱班县还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3，5一二硝基水杨酸共热，3，5一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原成糖则被水解成糖酸及其他产物。
一定范围内，还原成糖的量与棕红色物质颜色厚薄的程度成一定的比例关系，540nm波长下测量棕红色物质的消光值，收信标准曲线并排序，便可以分别谋出来样品中还原成糖和总糖的含量。
三、仪器、试剂和材料1.仪器（1）刻度试管：25mlx11（2）离心管或玻璃圆柱形x2（3）烧杯：1oomlx1（4）三角瓶：100m1x1（5）容量瓶：100mlx3（6）刻度液体：1mlx1，2m1x4,10mlx1（7）恒温水浴（8）沸水浴（9）离心机（过滤法不用此设备）（10）电子顶载天平（11）分光光度计2.试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
3,5-二硝基水杨酸比色法测还原糖含量
（四）OD540的测量及标准曲线的制作
1、在10支试管中加入0.5ml DNS试剂，混匀，十只试管放入500ml装有少量水的烧杯中，进行沸水浴加热5min，再流水冷却。
2、每支试管加入再4.0ml蒸馏水并摇匀。
3、取液体装入比色皿中，每个样品测三次，取其平均值为其OD540，以未加葡萄糖的试管即1号试管内的液体作为参比液。
酚酞试剂：0.1g酚酞溶于250ml 85%的乙醇中，棕色瓶储存。
6mol/LHCl溶液
6mol/LNaOH溶液
面粉样品
0.5mg/mL葡萄糖溶液：精确称取105℃烘至恒重的葡萄糖1g，用水定容到1000ml。
四.实验仪器
（一）每组配置
试管：10ml*10试管架：1
试管夹：2铁架台：1
移液管：1ml*25ml*2 10ml*1移液管架：1
（二）还原糖液的提取
1、精确称取面粉1.0g于100ml小烧杯中，少量水调成糊状后，再加入50ml蒸馏水搅匀。
2、水浴50℃保温20min后，用水定容到100ml。
3、过滤，取滤液1ml于7、8号试管中，待用。
（三）总糖的水解与提取
1、称取面粉1.0g，放入100ml小烧杯中。
2、加入10ml 6mol/L的HCl，和15ml蒸馏水，沸水浴加热25min.
胶头滴管：2培养皿：1
容量瓶：100ml*3漏斗:1
烧杯:100ml*3500ml*1
（二）公用仪器
分光光度计：3比色皿：3*4
水浴锅：6蒸馏水：瓶*3
滤纸：若干称量纸：若干
废液缸：1L烧杯*3
五．操作步骤
（一）标准梯度糖液配制
分别取0.5mg/ml的葡萄糖标准液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml于1~6号试管中，并用蒸馏水补足到1ml。
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四、操作步骤
（四）小麦样品中总糖和还原糖的测定 1.取3支试管，编号分别为 1-3 ，按下表向每支试管中加入试剂。 管号
试剂
还原糖抽提液（ml） 总糖抽提液（ml） DNS(ml) 水（ml）
1
0 0 0.5 4.5
2
0.5 0 0.5 4
3
0 0.5 0.5 4
2.将3支试管放入沸水浴中加热煮沸 5min后，冷却。 3.以空白试管（1号管）作对照，于 540nm 波长下，分别测定各管 OD 值并记录。
三、试剂与仪器
（3）3，5—二硝基水杨酸 把 6.3g3，5—二硝基水杨酸溶于 262ml 2 mol/l 的氢氧化钠中将此溶液与500ml 含有 182g 酒石酸钾钠的热水混合，向该溶液中加入 5g 重蒸 酚和 5g 亚硫酸钠，充分搅拌溶解待溶液冷却后， 用水稀释到 1000ml，存储于棕色瓶中。
三、试剂与仪器
（一）仪器
小麦面粉、pH 试纸、容量瓶、玻璃漏斗、移液 管、量筒、试管、沸水浴锅
（二）试剂
（1）6mol/l HCl 和 6mol/l NaOH溶液 （2）1mg/ml葡萄糖溶液 准确称取 80℃烘干恒重的分析纯葡萄糖 0.1g，置于小 烧杯中加入少量蒸馏水溶解后，移到 100ml 容量瓶中，用蒸 馏水定溶至 100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
二、实验原理
• 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及产物，3 ，5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基-5-硝 基水杨酸。 • 在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深 浅成正比关系，利用分光光度计在 540nm 波长下 测定光密度值查对标准曲线并计算，便可求出样品 中还原糖和总糖的含量。
3，5—二硝基水杨酸法测定还原糖
一、实 验 目 的
• 掌握还原糖定量测定的原理和方法 。 • 掌握分光光度计的使用。
二、实验原理
• 还原糖的测定是糖的定量测定的基本方法。 • 还原糖是指含有自由醛基和酮基的糖类。 • 单糖均为还原性糖，双糖不一定是还原性糖，其中乳 糖和麦芽糖为还原性糖，蔗糖和淀粉为非还原性糖。 • 利用糖的溶解度不同，可将样品中的单糖、双糖、多 糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用 酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。再分 别求出样品中还原糖和总糖的含量。
四、操作步骤
（三）样品的酸水解和总糖抽提液的制备 1.把 1g 小麦粉溶于 15ml 水中并加入 10ml 6N 的盐 酸溶液混合。 2.将烧杯放入沸水浴中加热煮沸 30min 后，冷却。 3.加入 6N 的氢氧化钠中和烧杯内含物。 4.将中和后的溶液转入一个 100ml 的容量瓶中，加水 至刻度，充分混匀。 5.将容量瓶中的溶液过滤。 6.取 1ml 滤出液加水至 10ml，即得总糖的抽提液。
注：由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一个水 分子，所以在计算多糖含量时应乘以 0.9。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
四、操作步骤
（一）葡萄糖标准曲线的绘制 1.按下表制备 9 个管
四、操作步骤
2.向九支试管中分别加入 0.5mlDNS 试剂，充分混合。 3.将九支试管放入沸水浴中加热煮沸 5min。 4.将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。 5.向试管中分别加入 4ml 蒸馏水，充分混合。 6.以空白试管试管作对照，于 540nm 波长下，分别测定 各管 OD 值并记录。 7.以每管的吸收值即 OD 值为纵坐标，相对应管的葡萄 糖浓度为横坐标作图，得到一条直线，该直线通过零 点。
五、计算
1、葡萄糖的标准曲线
1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 200
吸光度
y = 0.0019x - 0.0106 2 R = 0.9967
400 600 浓度(ug/ml)
800
1000
五、计算
从曲线中算出还原糖的浓度（mg/ml） x v x100 还原糖%= ----------------------------------------------样品中mg数 从曲线中算出总糖的浓度（mg/ml）x v x100x0.9 总糖%= -----------------------------------------------样品中mg数 N:稀释倍数
四、操作步骤
（二）还原糖抽提液的制备 1.称取 2g 小麦粉，把它放入一个 100ml 的烧杯中， 然后加入 50—60ml 蒸馏水，搅拌均匀。 2.把烧杯放入一个 50℃水浴中保温 30min。 3.拿出烧杯，将烧杯内含物转入一个 100ml 容量瓶中 ，加水至刻度，充分混匀，过滤之，（滤出液用于测 定还原糖）即得还原糖抽提液。