临床微生物学检验复习重点
临床微生物学与检验重点
微生物与检验重点1. 简述致病菌引起全身感染后，常见的几种类型？答：①毒血症②菌血症③败血症④内毒素血症⑤脓毒血症3. 试述构成细菌侵袭力的物质基础。
答：①荚膜②黏附素③侵袭性物质4. 简述病原菌感染机体后，机体如何发挥抗菌免疫功能？答：首先遇到机体的非特异性免疫包括皮肤与粘膜构成的屏障结构，血脑屏障，胎盘屏障及吞噬细胞对细菌的非特异性的吞噬和体液中杀菌抑菌物质对细菌的攻击。
7-10天后，机体产生特异的细胞免疫和体液免疫与非特异性免疫一起杀灭病原菌1. 简述细菌耐药性产生的主要机制。
答：①钝化酶的产生②药物作用靶位发生改变③胞壁通透性的改变和主动外排机制④抗菌药物的不合理使用形成了抗菌药物的选择压力，在这种压力的作用下，原来只占很少比例的耐药菌株被保留下来，并不断扩大。
1．举例说明细菌命名的原则。
答：细菌的命名一般采用国际上通用的拉丁文双命名法。
一个细菌种的学名由两个拉丁字组成，属名在前，用名词，首字母大写；种名在后，用形容词，首字母小写；两者均用斜体字。
中文译名种名在前，属名在后。
如Mycobaterium tuberculosis（结核分枝杆菌）。
属名亦可不将全文写出，只用第一个大写字母代表，如M. tuberculosis 2.如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌？并确定其有无致病性。
答：①直接镜检，经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌，可初步报告疑为葡萄球菌，需进一步分离培养鉴定。
②分离培养：血培养需经增菌后转种血平板进一步鉴定，若无细菌生长，需连续观察7天，并以血平板确定有无细菌的生长。
脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板，37℃过夜，可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。
金葡菌菌落周围有透明溶血环。
③试验鉴定：血浆凝固酶试验，甘露醇发酵试验，耐热核酸酶试验，肠毒素测定，SPA检测。
致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性，甘露醇发酵试验阳性，耐热核酸酶试验阳性，SPA检测有A蛋白的存在。
临床微生物学检验复习资料总结
临床微生物学检验显性感染（n）：如果宿主的抗感染免疫力较弱，或侵入的病原体数量较多，毒力较强，机体的组织细胞受到不同程度的损害并出现一系列的临床症状和体征。
细菌大小以微米为测量单位。
鞭毛是细菌的运动器官。
培养基按用途分类：1.基础培养基。
2.营养培养基。
3.鉴别培养基。
4.选择培养基（n）:在培养基中加入某些特殊化学物质，抑制某些细菌的生长而有助于需要的细菌种类的生长，使需要菌从混杂的微生物群体中分离出来。
细菌的遗传物质包括染色体和质粒，其化学组成为DNA，DNA籍其构成特定基因来传递遗传信息。
质粒（n）：是染色体外的DNA，携带有编码某些遗传特性的基因，它能独立于染色体进行自我复制。
质粒的特性:不相容性；可转移性；自主复制质粒；质粒可自然丢失或用人工方法消除。
（P67）S-R变异（n）：新从患者体内分离的沙门菌通常为光滑型，经人工培养后菌落呈粗糙型。
丝状菌（或称霉菌n）：营养体呈多细胞类型的真菌是由菌丝和孢子交织组成。
细菌的科学命名：属名在前，是名词，首字母大写；种名在后，是形容词，无论是人名还是地名均小写，两者均用斜体表示。
中文译名则种名在前属名在后。
氧化-发酵试验（O-F）：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须以分子氧作为电子受体的称为氧化型；细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的称发酵型，此类细菌无论有氧或无氧均可以分解葡萄糖，通常为兼性厌氧菌；不分解葡萄糖的细菌称产碱型。
此试验用于细菌种属间的鉴别：肠杆菌科细菌为发酵型，非发酵菌通常为氧化型或产碱型。
此外，微球菌属可氧化葡萄糖，而葡萄球菌属则能发酵葡萄糖。
迟缓分解乳糖(n):只有β-半乳糖苷酶而缺乏半乳糖苷渗透酶（或是其活性很弱）的细菌，不能很快将乳糖运送到细菌细胞内，需要几天时间乳糖才能被分解。
氧化酶试验：氧化酶或称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。
作氧化酶试验时，此酶首先使细胞色素C氧化，然后氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
临床微生物学检验考试重点知识总结
临床微生物学检验第一章微生物感染与宿主免疫根据微生物与人体的关系：有益微生物条件致病微生物病原微生物。
肠道中双歧杆菌最为典型P11 *1潜伏感染：若宿主与病原病体在相互作用过程中暂时处于平衡状态，病原体潜伏在病灶内或某些特殊组织内，一般不排除体外。
（如果宿主的抗感染免疫力减弱，或侵入的病原体数量增多，毒力较强，机体的组织细胞受到不同程度的损害并出现一系列临床症状和体征，则称为显性感染。
）病原微生物的传播V：空气传播飞沫传播接触传播共同媒介物传播虫媒传播多途径传播P21 2，（病原菌的毒力包括侵袭力和毒素。
）侵袭力：病原菌在宿主见传播侵袭定植并逃避免疫的能力，称为侵袭力。
由菌体表面结构和侵袭物质等构成P25 3、胞内菌感染免疫：胞内菌分专职和兼职，兼职胞内菌在宿主体内主要寄居在细胞内生长繁殖，但是亦可在细胞外没有无活细胞的环境生存繁殖。
（如结核分支杆菌麻风分枝杆菌）第二章细菌的基本形状P38 1、细菌大小以微米um为测量单位。
人肉眼的最小分辨率为0.2mm. 按其外形：球菌杆菌螺旋菌球形呈圆球形、近圆球形、矛头状和肾形P41 2 、鞭毛功能：1）动力：鞭毛是细菌的运动器官，（旋转运动是由基础小体的同心环旋转产生，推动力来自质子动能，即质子浓度梯度流动所释放的ATP。
鞭毛旋转方向决定运动类型，观察细菌动力用悬滴法或压滴法在显微镜下观察其运动，也可将细菌接种于半固体培养基观察动力）2）鉴别细菌；鞭毛及细，一般染色不能看见，常用特殊染色和镀银染色观察细菌有无鞭毛及鞭毛数量、分布，可用于鉴别细菌P42 3、性菌毛可也结合的方式在细菌之间传到DNA，导致细菌毒性及耐药性的变异6、糖萼功能 1）与细菌毒力有关：有糖萼的细菌表面光滑，不易被细菌细胞吞噬，消化，逃避免疫吞噬后的细菌可在机体组织细胞中生长繁殖引起感染。
2）细菌的鉴别和分形：夹馍物质具有特异性抗原，可作为细菌的鉴别和分形。
3）形成生物膜7、革兰阴性菌细胞壁特有组分-----磷壁酸8、芽孢功能：1）对热力、干燥、辐射、化学消毒具有强大抵抗力2）以是否能杀死芽孢作为物品消毒灭菌效果的判断指标，3）芽孢在菌体的位置和直径的大小随菌种的不同，这种形态特点有利于细菌的鉴别。
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临床微生物学检验复习重点临床微生物学检验复习重点第一章生物安全和医院感染1.实验室生物安全保障：指单位和个人为防止病原体或毒素丢失、被盗、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。
2.医院感染（NI）：在医疗机构中获得的感染。
包括外源性和内源性，外源性来自于另一感染者/环境内源性：患者，正常菌群迁徙至其他部位等导致病原体过度生长。
第二章临床微生物检验标本的采集1.标本的一般采集原则1.1早期采集病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素或其他抗菌药物之前。
1.2无菌采集：采集的标本应无外源性污染。
消毒，无菌容器。
1.3根据目的菌的特性用不同的方法采集1.4采集适量标本伤寒-1周：血液 2周：粪便和尿夜1.5安全采集2.厌氧菌：在有氧条件下不生长，在无氧条件下生长的细菌。
2.1厌氧菌感染的条件：组织缺氧或氧化还原电势降低→原因：局血障：血管损伤、肿瘤压迫、烧伤、动脉硬化、组织水肿、坏死、有异物等，刺伤，大面积外伤2.2厌氧菌感染的临床特征（1）分泌物具典型的腐臭，血性渗出物呈黑色。
在紫外线下可发红色荧光(产黑色素普氏菌或卟啉单胞菌感染)。
（2）感染组织局部有大量气体产生→皮下有捻发音时为产气荚膜梭菌。
（3）部位为黏膜附近（4）长期使用氨基糖苷类抗生素无效者，新近流产史，胃肠术后（5）深部外伤枪伤，咬伤后继发感染（6）分泌物经革兰染色后，有细菌，规培：阴性液体及半固体培养基深部生长第三章临床细菌学检验技术1.细菌形态学检查→显微镜检其菌体形态1.1涂片 1.2干燥 1.3固定1.4 染色：（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
（3）（3）脱色：将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒，立即用水冲净酒精。
（4）复染：用复红液染1—2分钟，水洗。
1.5镜检：干燥后，置油镜观察。
革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
临床微生物学检验重点知识归纳
临床微生物学检验重点知识归纳
临床微生物学检验重点知识归纳：
1.细菌的基本结构有：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质。
2.细菌的特殊结构：荚膜（抗吞噬作用）、菌毛（细菌的黏附器官）、鞭毛（细菌的运动器官）、芽胞（细菌在不良环境中的存活方式）。
3.肽聚糖：为革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁的共同成分。
4.磷壁酸：为革兰阳性菌细胞壁特殊成分。
5.外膜层：为革兰阴性菌细胞壁特殊成分。
6.质粒：是细菌染色体外的遗传物质，存在于细胞中，是小的双股闭合环状DNA分子，可独立于染色体存在并复制，也可整合到染色体上。
7.细菌L型：是细胞壁缺陷型细菌。
8.细菌以“二分裂”方式繁殖。
9.细菌的生长曲线主要包括四期：延缓期、对数期（最佳研究时期）、稳定期、衰亡期。
10.细菌常见的遗传变异类型：
①转化（供体菌游离的DNA片段直接进入受体菌）；
②接合（通过性菌毛互相连接，将遗传物质从供体菌转移给受体菌）；
③转导（以温和噬菌体为载体，将遗传物质从供体菌转移给受体菌）；
④S-R变异（细菌菌落由光滑型到粗糙型的变异）。
11.细菌非染色标本：检查细菌动力。
12.革兰染色：是细菌学中最经典、最常用的染色方法。
13.革兰染色步骤：初染（结晶紫）、媒染（碘液）、脱色（酒精）、复染（石炭酸复红）。
14.标本处理的一般原则：早期、无菌、适量、方法、安全。
15.培养基种类：基础培养基、选择培养基（SS培养基）、鉴别培养基（克氏双糖铁）、营养培养基（巧克力平板）、特殊培养基（细菌L型培养基）。
临床微生物检验复习整理
第一章细菌检验的基本技术第一节细菌形态学检查第二节细菌的培养和分离技术1、可用哪些方法观察细菌的动力？有动力细菌的运动和布朗运动有何区别？1)不染色标本直接镜检(常用的方法：悬滴法和压滴法)。
2)鞭毛染色：具有鞭毛的细菌具有运动能力（硝酸银染色法）有动力：可见鞭毛；无动力：不见鞭毛。
3)半固体穿刺接种法有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移。
无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。
2、用普通光学显微镜进行染色细菌形态学观察主要观察什么？染色标本的检查，主要观察细菌的染色性、形态、排列、大小、某些特殊结构等。
3、革兰染色法的影响因素。
①菌龄：选取对数生长期的细菌进行染色，可正确反映染色的结果，若菌体细胞未成熟或已老化，染色结果可能会出现完全相反的情况；②涂片质量：涂片太厚，菌体明显堆积在一起，不易脱色或脱色不完全，使革兰氏阴性菌成革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌残留大量结晶紫，经复染后难以观察到典型的蓝紫色。
③媒染时间：媒染时间过短,不利于初染液结晶紫与细胞之间的结合,因而可能造成阳性菌呈阴性结果;反之,媒染时间过长,容易使阴性菌呈假阳性。
媒染时间应控制在60s左右为宜。
④乙醇脱色时间:若脱色时间过长,革兰氏阳性菌也有可能被脱色,成为假阴性菌。
同样若脱色时间不足,革兰氏阴性菌细胞壁的部分类脂质未被乙醇溶解,使结晶紫—碘复合物不能被洗脱出来,成为假阳性菌4、平板分区划线的目的是什么？是细菌分离培养常用的一种方法。
其目的是使标本或培养物中混杂的多种不同细菌分散生长，形成单个菌落。
根据菌落的形态特征，挑选单个菌落进行纯培养，为进一步对目的菌进行研究和鉴定提供条件。
5、细菌培养的方法有哪些？1)需氧培养法2)二氧化碳培养法（5%--10%CO2）3)厌氧培养法4)微需氧培养法（5% O2、10%CO2、85%N2）6、何为“选择培养基”？培养基中加入抑制剂，抑制标本中杂菌生长，选择性让目的菌生长的培养基。
临床微生物检验考试复习重点知识总结
临床微生物检验细菌整理（球菌）临床微生物检验细菌整理（肠杆菌科）临床微生物检验细菌整理（肠杆菌科）临床微生物检验细菌整理（肠杆菌科）临床微生物检验细菌整理（不发酵革兰阴性杆菌）临床微生物检验细菌整理（苛氧菌）★定义：苛养菌是对营养要求高，培养条件苛刻,普通培养基上不生长或很难生长的一类细菌。
体外培养时需添加生长因子或其它营养成分，提供特殊的生长环境，需要长时间才能检测到生长，故又称“难培养的细菌”。
临床上常见的苛养菌：①球菌：肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。
②阴性杆菌：“HACEK”细菌群、军团菌属、布鲁菌属、鲍特菌属等。
“HACEK”细菌群由五个菌属组成：H →嗜血杆菌属A →凝聚杆菌属C →心杆菌属E →艾肯菌属K →金氏杆菌属临床微生物检验细菌整理（弧菌属）本属细菌的一些主要特点：①生化反应：OXI+（麦氏弧菌除外）、GLU（F）、O/129（S）②嗜盐性：钠离子可刺激细菌生长，除霍乱弧菌和拟态弧菌外，其它所有弧菌绝对需要钠离子，某些细菌无盐不生长。
③生长特性：BAP可出现各种溶血现象，肠道选择培养基上为糖不发酵菌落。
④选择培养基：TCBS琼脂和碱性蛋白胨琼脂。
分解蔗糖的菌种在TCBS琼脂形成黄色菌落，不分解者为绿色菌落；某些弧菌在此培养基上不生长。
临床微生物检验细菌整理（气单胞菌属和邻单胞菌属）临床微生物检验细菌整理（棒状杆菌属）临床微生物检验细菌整理（有芽孢需氧革兰阳性杆菌）临床微生物检验细菌整理（分枝杆菌属）★分枝杆菌属的形态特点：①菌体形态：为微弯曲或直的杆菌。
②细菌排列：单个、V、Y、T或条索状排列，有的堆积成球状。
③染色：革兰阳性菌，但不易着色，镜下可见“影子”细菌。
④形态异质性：菌种不同，形态有差异；不同生长环境同一菌株形态不同。
③严禁在涂抹标本的同时对载玻片进行加热④涂片应厚薄均匀，通过标本膜看报纸上5号字，字迹较模糊为适宜厚度。
⑤染液需覆盖痰膜，加热用微火至染液呈现蒸汽，离开火焰维持5分钟，及时补充染液，勿使染液干涸⑥细流水轻缓冲洗⑦染色后肉眼观察痰膜呈兰色，不得有红色斑块⑧痰膜脱落部分在10%以下⑨镜下视野背景清晰，抗酸菌呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色⑩操作应在生物安全柜中进行。
临床微生物检验考试复习重点知识总结
绪论，1.细菌的发现者：安东尼·范·列文虎克，1665年，列文虎克研制出了第一台显微镜，1675年，通过显微镜看到了细菌。
法国的化学家、微生物学家巴斯德：“曲颈瓶实验”建立了病菌学说；创立了巴氏消毒法；研制了鸡霍乱杆菌、炭疽杆菌减毒菌苗、狂犬疫苗。
德国的细菌学家郭霍：发明了固体培养基，并创立了细菌染色法；创立了实验动物感染方法。
英国细菌学家亚历山大·弗莱明发现了青霉素2.微生物：是存在于自然界的一大群形体微小、结构简肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜和电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的微小生物。
按照微生物的大小、结构和组成分类：原核细胞型微生物（细胞核无核膜、核仁，呈环状裸DNA结构，包括细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体）真核细胞型微生物（细胞核分化程度高，有核膜、核仁，细胞器完整，包括真菌和原虫）非细胞型微生物（仅有一种核酸类型，包括病毒、亚病毒、朊粒）根据微生物与人类的关系分类：正常菌群：定居在人类皮肤和黏膜上的各类微生物，在正常情况下无害，而且具有拮抗外来病原微生物和提供某些营养物的作用。
条件致病微生物：原属正常菌群中的细菌，由于机体抵抗力下降、寄居部位改变或寄居微生物丛平衡失调，能引起内源性感染。
病原微生物：指少数能引起人类和动、植物致病的微生物。
3.微生物学：是生物学的一个分支，它是研究微生物的类型、分布、形态结构、生命活动及规律、遗传、进化以及与人类、动物、植物等相互关系的一门学科。
随着其研究的深入，形成了很多分支学科。
4.医学微生物学：是研究与医学和疾病有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性以及特异性诊断和预防治疗措施的学科。
5.临床微生物学的性质和任务：1.研究感染性疾病的病原体特征2.提供快速而准确的病原学诊断3.指导临床合理使用抗菌药物4.对医院感染进行监控6.临床微生物检验的思路与原则：1.确保分析前质量2.全面了解机体的正常菌群3.保证检验过程中的质量4.采用三定一结合（定性、定量和定位，结合病情）5.重视和加强与临床的联系第一章1.生物安全：采用微生物学技术、安全设施、保护设备,防止实验室工作人员、环境及公众暴露于实验室中处理储存的已知或潜在的感染性微生物。
微生物学检验重点知识总结
微生物学检验重点知识总结微生物学是研究微生物的结构、生理、生化、生态以及与人类和环境的关系的一门学科。
在微生物学检验中，掌握以下重点知识是非常重要的。
1.微生物分类学：微生物可以分为原核生物和真核生物。
原核生物包括细菌和古细菌，真核生物包括真菌、原生动物和线虫等。
了解微生物的分类和命名体系，对于正确识别和鉴定微生物是至关重要的。
2.微生物培养技术：微生物的培养是检验微生物的基础。
掌握常见的微生物培养方法，如液体培养、平板培养和深层培养等，并了解培养基的配制和消毒操作的方法。
3.微生物的生长特性：微生物的生长特性包括生长曲线、生长速率、最适生长温度和最适生长pH等。
了解微生物的生长特性对于选择合适的培养条件和进行微生物检验是非常重要的。
4.微生物的鉴定方法：微生物的鉴定是微生物学检验的重点。
常见的微生物鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性检测、免疫学检测和分子生物学检测等。
掌握常用的微生物鉴定方法和技术，可以准确快速地鉴定微生物。
5.微生物与人类健康的关系：微生物在人类健康中起着重要作用。
了解微生物对人类健康的影响，如微生物的致病机制、致病微生物的鉴定和抗微生物药物的应用等，有助于预防和治疗微生物引起的疾病。
6.微生物在环境中的作用：微生物在环境中起着重要的生态作用。
了解微生物在土壤、水体和大气中的功能和影响，对于环境保护和资源利用具有重要意义。
7.微生物学检验方法：微生物学检验方法包括微生物计数、微生物培养、抗微生物药敏试验、细菌鉴定和病毒检测等。
掌握常见的微生物学检验方法和技术，能够准确、快速地检测微生物。
8.检验结果的解读和分析：对于微生物学检验结果的解读和分析是非常重要的。
了解常见的微生物学检验参数和阈值，能够根据检验结果判断微生物的致病性和药物敏感性等。
总结起来，微生物学检验的重点知识包括微生物的分类和命名、微生物培养技术、微生物的生长特性、微生物的鉴定方法、微生物与人类健康的关系、微生物在环境中的作用、微生物学检验方法以及检验结果的解读和分析等。
临床微生物检验学考试复习知识重点资料
第一章微生物感染与宿主免疫1.显性感染：如果宿主的抗感染免疫力较弱，或侵入的病原体数量较多、毒力较强，机体的组织细胞受到不同程度的损害并出现一系列的临床症状和体征，则称为显性感染。
2.病原菌的毒力包括侵袭力和毒素。
病原菌在宿主间传播、侵袭、定植并逃逸免疫的能力，称为侵袭力。
3.侵袭力【黏附：可由黏附素介导，革兰阴性菌为菌毛，革兰阳性菌为磷壁酸。
宿主黏膜上皮细胞表面的黏附素受体一般是糖蛋白或糖脂。
】第二章细菌的大小与形态1. 细菌的大小以微米（um）为测量单位。
2. 鞭毛功能动力，鞭毛是细菌的运动器官，呈现旋转运动是由基础小体的同心环旋转产生，推动力来自于质子动能，即质子浓度梯度流动所释放的ATP。
鞭毛旋转方向决定运动类型。
3. 观察细菌动力可用悬滴法或压滴法在显微镜下直接观察其运动，也可将细菌穿刺接种半固体培养基观察动力。
4.选择培养基：在培养基中加入某些特殊化学物质，抑制某些细菌生长而有助于需要的细菌种类生长，使需要菌从混杂的微生物群体中分离出来。
第三章细菌的遗传与变异1. 细菌的遗传物质包括染色体、质粒。
2. 质粒：是细菌染色体外的DNA，携带有编码某些遗传特性的基因，它能独立于染色体进行自我复制。
3. 质粒的特性：a.不相容性【是指相似的质粒在同一细胞中不能共存】b.可转移性【质粒的转移方式随不同质粒而不同，最重要的一种方式是有质粒编码的接合系统】c.自主复制质粒【利用宿主系统独立于染色体进行复制】d.质粒可自然丢失或用人工方法消除。
4. 培养特性变异新从患者体内分离的沙门菌通常为光滑型，经人工培养后菌落呈粗糙型，这种变异称S-R变异。
S-R变异常伴有抗原、毒力和某些生化特性的改变。
第四章病毒的基本性状1. 病毒的结构可分为基本结构和辅助结构。
病毒的基本结构包括核心、衣壳。
辅助结构是包膜（是包围在病毒核衣壳外面的双层膜结构），包膜对乙醚是敏感的，若呈阳性，则说明有乙醚存在。
第五章真菌的基本性状1．营养体呈单细胞类型的真菌又称酵母菌。
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临床微生物学检验复习重点第一章生物安全和医院感染1.实验室生物安全保障：指单位和个人为防止病原体或毒素丢失、被盗、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。
2.医院感染（NI）：在医疗机构中获得的感染。
包括外源性和内源性，外源性来自于另一感染者/环境内源性：患者，正常菌群迁徙至其他部位等导致病原体过度生长。
第二章临床微生物检验标本的采集1.标本的一般采集原则1.1早期采集病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素或其他抗菌药物之前。
1.2无菌采集：采集的标本应无外源性污染。
消毒，无菌容器。
1.3根据目的菌的特性用不同的方法采集1.4采集适量标本伤寒-1周：血液 2周：粪便和尿夜1.5安全采集2.厌氧菌：在有氧条件下不生长，在无氧条件下生长的细菌。
2.1厌氧菌感染的条件：组织缺氧或氧化还原电势降低→原因：局血障：血管损伤、肿瘤压迫、烧伤、动脉硬化、组织水肿、坏死、有异物等，刺伤，大面积外伤2.2厌氧菌感染的临床特征（1）分泌物具典型的腐臭，血性渗出物呈黑色。
在紫外线下可发红色荧光(产黑色素普氏菌或卟啉单胞菌感染)。
（2）感染组织局部有大量气体产生→皮下有捻发音时为产气荚膜梭菌。
（3）部位为黏膜附近（4）长期使用氨基糖苷类抗生素无效者，新近流产史，胃肠术后（5）深部外伤枪伤，咬伤后继发感染（6）分泌物经革兰染色后，有细菌，规培：阴性液体及半固体培养基深部生长第三章临床细菌学检验技术1.细菌形态学检查→显微镜检其菌体形态1.1涂片 1.2干燥 1.3固定1.4 染色：（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
（3）（3）脱色：将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒，立即用水冲净酒精。
（4）复染：用复红液染1—2分钟，水洗。
1.5镜检：干燥后，置油镜观察。
革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
固定的目的①杀死微生物，固定其细胞结构；②保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉；③改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。
实验原理细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。
经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，所以染色的前二步结果是一样的，但在G+细胞中，乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘的复合物分子太大，不能通过细胞壁，保持着紫色。
在Gˉ细胞中，乙醇处理不但破坏了胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。
红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，红色显示不出来2.细菌分离培养及鉴定→培养基培养，生化反应鉴定3.细菌的非培养→免疫学检测分子生物学检测毒性检测动物实验第四章细菌的耐药性检测1.抗菌药物敏感试验的意义（AST)：（1）可预测抗菌治疗的的效果（2）指导抗菌药物的临床应用（3）发现或提示细菌耐药机制的存在（4）监测细菌耐药性2.敏感（s）：所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓度所抑制。
3.耐药（R）：指所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药物浓度所抑制。
4.中介（I）：抗菌药物在生理浓集的部位具有临床效力，还包括一个缓冲区，以避免微小的、不能控制的技术因素造成重大的结果解释错误。
5.纸片扩散法（M-H培养基、琼脂厚度：4mm）原理：纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。
在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。
不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小方法：（1）接种：用无菌棉拭子蘸取菌液，均匀涂布（2）贴抗菌药物纸片：无菌镊子各纸片中心相距>24mm，纸片-平板边缘>15mm（3）孵育35℃16-18h结果判读和报告量取抑菌圈直径，根据CLSI标准，判断“敏感”、“耐药”、“中介”6.微量肉汤稀释法1.2.1.抗菌药物和培养基制备同常量肉汤稀释法。
1.2.2.MIC板制备无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10μl，第12孔不加药作为生长对照，冰冻干燥后密封，-20℃以下保存备用。
1.2.3.接种物制备（步骤）将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液，经M-H肉汤1∶1000稀释后，向每孔中加100μl，密封后置35℃普通空气孵箱中，孵育16~20h判断结果。
此时，第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
1.2.4.结果判断以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
当阳性对照孔（即不含抗生素）内细菌明显长试验才有意义。
当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。
如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。
通常对革兰阴性杆菌而言，微量肉汤稀释法测得的MIC与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度（1孔或2倍）。
7.细菌的耐药机制1.产生灭活抗生素的各种酶（水解酶，钝化酶，修饰酶）【专一性】2.改变药物作用靶位【专一性】3.细胞膜透性下降（细菌生物被膜的形成和通道蛋白的丢失）【无专一性】4.细菌主动外排系统的过度表达【无专一性】第七章球菌需氧或兼性厌氧：葡萄球菌、肠球菌、链球菌等G+专性厌氧：消化球菌科球菌需氧或兼性厌氧：奈瑟菌属、莫拉菌G-专性厌氧：韦荣球菌科一、葡萄球菌：存在于皮肤粘膜上（白色、金黄色、柠檬色）1.G+2.葡萄球菌无鞭毛，无芽孢，体外培养时一般不形成荚膜。
3.在血琼脂平板上，有的菌株菌落周围形成明显的全透明溶血环（β溶血），溶血菌株大多有致病性。
4.致病物质：凝固酶、耐药核酸酶、透明质酸酶、磷脂酶、葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1凝固酶有两种：游离凝固酶－血浆凝固；结合凝固酶－细菌凝聚。
导致β溶血的是α溶素。
表皮剥脱毒素可引起SSSS，又称剥脱性皮炎。
5.所致疾病：（1）菌群失调性假膜性肠炎：长期使用广谱抗生素。
（2）皮肤化脓性感染：毛囊炎、疖、痈、伤口化脓、脓肿（3）器官化脓性感染：气管炎、肺炎、心包炎、心内膜炎（4）食物中毒（呕吐）、毒性休克（猩红热）、烫伤样皮肤综合征（婴幼儿、免疫力低下）、（5）医院感染6.葡萄球菌A蛋白（SPA）：菌细胞壁的一种表面蛋白。
7.金黄色葡萄球菌：血琼脂-透明溶血环，10%-15%NaCl生长，甘露醇高盐平板上为黄色菌落、耐干燥，抵抗力强，测定macA可快速检出。
生化反应：触酶阳性、动力阴性、凝固酶阳性、耐热核酸酶试验阳性、肠毒素试验（幼猫：呕吐腹泻/死亡）阳性8.标本采集：化脓性病灶采取脓汁、渗出液；疑为败血症采取血液；脑膜炎采取脑脊液；食物中毒则分别采集剩余食物、病人呕吐物和粪便等。
9.致病性葡萄球菌的鉴定主要根据产生凝固酶和耐热核酸酶，产生金黄色色素，有溶血性。
发酵甘露醇等作为参考指标。
二、链球菌属基本知识点：1.G+2.根据溶血现象分类：甲型溶血性链球菌菌落周围有1～2mm宽的半透明的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，这类菌也称草绿色链球菌。
α溶血环中的红细胞并未完全溶解。
这类链球菌多为条件致病菌。
乙型溶血性链球菌菌落周围有2～4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，称乙型溶血或β溶血，β溶血环中的红细胞完全溶解，这类菌也称溶血性链球菌。
这类链球菌致病力强。
丙型链球菌不溶血，不致病。
3.青霉素是链球菌感染的首选药。
4.致病物质：链球菌溶素、致热外毒素、透明质酸酶、M蛋白、链激酶、链道酶、F蛋白。
链球菌溶素有两种：O（SLO)和S(SLS)。
致热外毒素也称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性物质。
5.所致疾病：A群链球菌可分成侵袭性、毒素性、变态反应侵袭性：蜂窝组织炎、菌血症、急性淋巴管炎（菌血症、脑膜炎无乳链球菌）草绿色链球菌是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起：亚急性细菌性心内膜炎毒素性：猩红热变态反应：风湿热、急性肾小球肾炎、6.基本特征：肺炎链球菌：矛尖状7.培养特性：肺炎链球菌和草绿色链球菌需要CO2，营养要求高，加血液或血清血平板：灰白色，透明，表面光滑，小菌落牛型链球菌：无溶血性环，呈灰色菌落。
液体培养基表现为絮状和颗粒沉淀。
肺炎链球菌因荚膜多糖使菌落呈黏液状，因产生自溶酶，在平板上培养48小时后出现中心凹陷的“脐窝”状菌落----自溶产生8.标本采集：咽拭子、痰液、脓汁、血液9.分离培养：α溶血：菌落周围的部分红细胞被破坏，呈草绿色溶血环。
β溶血：菌落周围红细胞完全溶解，呈现一个清楚透明溶血环。
与B群抗血清凝集的菌株可直接确认为无乳链球菌。
10.CAMP试验：侮辱链球菌能产生CAMP因子，可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，产生显著的协同溶血作用，作为无乳链球菌的初步鉴定实验。
三肠球菌属1.引起肠道外感染（最常见：粪肠球菌）2.致病因素：表面粘附素、炎症调节因子、毒素3.致病类型：泌尿系统感染、心内膜炎、腹膜炎、牙髓疾病4.基本特性：含6.55NaCl肉汤中生长，40%胆汁培养基中分解七叶苷。
10℃、35℃、45℃生长，部分在含有兔血，马血和人血平板上出现β溶血，羊血不出现。
5.生化反应：触酶阴性、胆汁七叶苷、PYR阳性四、奈瑟菌属：1.脑膜炎奈瑟菌：G-，多位于中性粒细胞内，巧克力（色）培养基，主要致病物质是内毒素，是流脑的病原菌。
乙脑（流线性乙型脑炎）和流脑（流行性脑脊髓炎）的区别：乙脑是由乙脑病毒引起的，此种病毒通过蚊虫先在牲（如幼猪、马、牛等）中传播，而后再传播给人。
流脑是脑膜炎双球菌引起的，是由带菌者或病人经呼吸道飞沫传染。
乙脑流行有严格的季节性，大都在夏季和初秋。
流脑流行每于冬末开始，春节盛行，到初夏就明显下降，季节性不如乙脑严格。
两种病发病开始都有发热、头疼、恶心呕吐，典型病人可以有嗜睡、抽搐、昏迷等，但乙脑病人没有菌血症期，不会出现皮肤淤点，也少有很快出现休克者。
重症的病人都会发生颅内压增高的种种危险症状，但乙脑病程进展不象流脑那么迅速。
恢复期常在口、鼻周围起疱疹，而乙脑病程约经2周方进入恢复期，甚至在发病6个月后仍遗留神经、精神方面的症状。