全血细胞检测标准操作规程

全血细胞检测标准操作规程

1.【目的】

为了规范化操作，保证检测结果准确可靠。

2.【职责】

2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室

负责人、科主任。

3.【样本类型及实验前准备】

3.1样本类型：静脉血2ml （标本应新鲜，注意避免污染，避免溶血，注意有无血凝块）。

3.2患者准备：要求患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA-2K

3.4仪器设备：Sysmex XT-20i

3.5实验试剂：CELLPACK，STROMATOLYSER-4DL，STROMATOLYSER-4DLS,

SULFOLYSER, STROMATOLYSER-FB, PET-SERACHII, RET-SEARCHII 4.【测定原理】

4.1 RF/DC检测方法：

通过直流电阻的变化测定血细胞的大小，并通过射频电阻测定血细胞内的密度。一个血液样品经过吸液、定量、稀释为指定比，然后输送给相应的检测室。检测室内有一个称为“小孔”的圆孔，两侧均为电极。两个电极之间施以直流电和射频电流。

稀释后样品中悬浮的血液细胞通过该孔，使两个电极之间的直流电阻和射频电阻发生变化。通过直流电阻的改变测定血细胞的体积大小，而射频电阻的变化检测血细胞内的密度（细胞核大小与其它信息），这种检测是以电脉冲的形式进行的。根据这些脉冲大小的不同，可得到血细胞大小和内部密度的二维分布（散点图）。通过对这些分布的检测，可得到各种测量数据。

4.2鞘流。。检测方法（RBC、PLT、HCT）

在该检测器内，样品喷嘴定位在孔的前面且与中心对齐。将稀释后的样品由样品喷嘴推入锥形室以后，由前鞘流内的试剂包裹通过小孔的中心。通过小孔以后，经过稀释的样品由后鞘流中的试剂包裹送入捕集管中。这样就可以防止该区域的血细胞回流，并防止产生假性血小板脉冲。鞘流方法改善了血液计数的准确性和重现性。同时由于血细胞通过在一条直线上的小孔，所以也可防止产生异常血细胞脉冲。

4.3使用半导体激光器的流式细胞计数方法

使用流式细胞计数法检测细胞和其它生物粒子的物理和化学性质。使用流式细胞计数法只需很少的样品就可对这些细胞和粒子进行检测。一个血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。然后将该样品送入流动池中。这种鞘流装置改进了细胞计数的准确性和重现性。同时，由于血细胞颗粒成行通过该流动池的中心，故而防止产生异常血液脉冲并可减少流动池的污染。一个半导体激光束通过该流动池照射到血细胞上。前向散射光由光电二极管接收，侧向散射光和侧向荧光则由光电倍增管接收。光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。

4.4前向散射光和侧向散射光

当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。XE-21检测前向散射光和侧

向散射光，前向散射光的强度反映血液细胞体积大小。侧向散射光的强度反映细胞内部（如细胞核的体积大小）的信息。

4.5侧向荧光

当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。通过测量荧光强度，可以得到有关血细胞染色的信息，XE-21检测侧向荧光。

5.【操作步骤】

5.1试验准备：从冰箱中取出质控品，室温平衡30min。

5.2开机准备及开机：①打开电脑，2min后仪器软件XT-20i自动打开，输入密码后进入待机模式。②打开软件Laboman easyAccess 4.0和进入Lis系统。③打开机器,待其清洗及准备。

5.3上机准备：将要做血常规或血型或网织红的标本接收到Lis系统病区血常规中。并且查看有无送错情况及有无溶血和凝血。

5.4质控：点击XT-20i软件中的质控分析键，进行手动进样，按Start键。待其检测完毕后，查看结果看其是否在控，若不在控则要分析其原因。

5.5上机：将标本按扫码顺序进行编号，并按顺序放入试管架摇匀后上机。点击该软件的进样器键，从1号开始进行检测。

5.6关机：所有标本检测完后，点击关机键，手动进样吸入Cellclean液，按Start 键，进行清洗后再按仪器上关机按钮.

6.【质控程序】

6.1质控:

准备质控品，并在室温下放置10分钟。

将全血质控品颠倒混合10次以上，使用手动模式执行质控分析。

测定全血质控品，确认质控结果。

④依照记录管理程序书将该数据保存于质控管理文件中。

⑤按照项目SOP确认室内质控数据是否在容许范围内。

6.2维护：每日实验结束后务必使用配套清洗液清洗各分析仪之后关闭电源。

6.3保养：定期进行周保养以及月保养。

7.【结果计算与判断】

根据数据，图形和报警结果及临床，在排除溶血和凝血的情况下进行分析，必要时进行血涂片镜检。

8.【生物参考区间】

9.【危急值或警示】

10.【临床意义】

全血细胞分析仪用于血细胞的分类及其相关参数的计算，对于辅助临床疾病的诊断与治疗，预后有着重要的意义。

10.1白细胞临床意义

增加

生理性增加：新生儿、妊娠晚期、分娩期、月经期、饭后、剧烈运动后、冷水浴后及极度恐惧与疼痛等。

病理性增加：大部分化脓性细菌所引起的炎症、尿毒症、严重烧伤、传染性单核细胞增多症、急性出血、组织损伤、手术创伤后、白血病等。

减少病毒感染、伤寒、副伤寒、黑热病、疟疾、再生障碍性贫血、极度严重感染、X 线照射、肿瘤化疗后和非白血性白血病等。

10.2红细胞临床意义

红细胞增加或减少的临床意义与血红蛋白测定相似。一般情况下，红细胞数与血红蛋白浓度之间有一定的比例关系。但在病理情况下，此比例关系会打破，因此，同时测定二者，对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。

10.3血小板临床意义

10.3. 1血小板减少(<1 X 109/L)见于；①血小板生成障碍：再生障碍性贫血、急性白血病、急性放射病等；②血小板破坏增多；原发性血小板减少性紫瘢(ITP)、脾功能亢进；③血小板消耗过多：如DIC等。

血小板增多(>4 X 109/L)见于：①骨髓增生综合征、慢性粒细胞性白血病、真性红细胞增多症；②急性感染、急性失血、急性溶血；③其他：脾切除术后。

11.【注意事项】

11.1所用的质控品要放在4C冰箱保存，且一定要和软件上显示的是同一批号。11.2所有样本顺序不容打乱，一定要一一对应。在单独做某个样本的测试时

若标本号和XT-20i上显示的不一致，则要改变样本号。

11.3标本在上机前一定要摇匀，防止堵管而检测不出。

11.4每隔一个星期打开机器，进行检查，看检测液量是否足够并进行相应的维护。