(优选)柱色谱分离实验.
柱色谱实验报告
柱色谱实验报告柱色谱实验报告引言：柱色谱（Column Chromatography）是一种广泛应用于化学、生物化学、药学等领域的分离技术。
本次实验旨在通过柱色谱技术对混合物进行分离和纯化，以了解其原理和应用。
实验材料与方法：1. 实验材料：柱色谱柱、样品混合物、溶剂、色谱柱填料等。
2. 实验方法：a. 准备柱色谱柱：将填料均匀填充至柱内，注意保持填料层的均匀性。
b. 样品预处理：将待分离的混合物溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理，如过滤、浓缩等。
c. 样品加载：将预处理好的样品溶液缓慢地加入柱中，避免产生气泡。
d. 溶剂选择：根据样品的特性选择合适的溶剂体系，以实现样品分离。
e. 溶剂梯度洗脱：通过改变溶剂体系中溶剂的组成，控制样品在柱内的停留时间，实现样品分离。
f. 分离效果评价：通过观察柱床上的色带，并进行必要的检测手段，如紫外可见光谱、质谱等，评价分离效果。
实验结果与讨论：柱色谱实验的结果主要通过观察柱床上的色带来进行评价。
色带的宽度和形状可以反映样品的分离程度，色带越窄越尖锐，说明分离效果越好。
在实验过程中，我们可以根据需要收集不同色带的组分，进一步进行纯化和分析。
柱色谱实验的成功与否受到多个因素的影响，其中包括填料的选择、溶剂体系的优化、样品的预处理等。
填料的选择应根据样品的性质和分离要求来确定，不同填料具有不同的亲疏水性和分离能力。
溶剂体系的优化是柱色谱实验中关键的一步，通过调整溶剂的极性和流动速度，可以实现对样品的有效分离。
样品的预处理也是确保柱色谱实验成功的重要环节，如样品的过滤、浓缩等，可以避免填料堵塞和背景噪音的干扰。
柱色谱实验不仅可以用于分离和纯化混合物，还可以用于定性和定量分析。
在实验中，我们可以通过收集不同色带的组分，进行进一步的检测和分析。
例如，通过紫外可见光谱检测，可以确定某个组分的最大吸收波长，从而进行定性和定量分析。
此外，柱色谱实验还可以与其他分析方法相结合，如质谱联用、核磁共振等，进一步提高分析的准确性和灵敏度。
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法柱色谱是一种常见的分离和纯化化学物质的方法，本实验旨在通过柱色谱法对甲基橙和亚甲基蓝进行分离和测定。
通过实验发现，使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，可以实现对两种染料的有效分离。
同时，通过紫外可见光谱测定，可以得出染料的浓度和吸光度等相关参数。
该实验可以有效提高学生对柱色谱分离和测定方法的理解和掌握。
关键词：柱色谱，甲基橙，亚甲基蓝，分离，测定引言柱色谱是一种常见的分离和纯化化学物质的方法，其基本原理是通过样品在柱中的吸附、分配和排出等过程，实现对不同成分的分离。
柱色谱法有很多种，如薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱等，其应用范围广泛，可用于生物、医药、化工等领域。
本实验旨在通过柱色谱法对甲基橙和亚甲基蓝进行分离和测定，以提高学生对柱色谱分离和测定方法的理解和掌握。
实验设计实验仪器和试剂仪器：柱色谱仪、分光光度计试剂：甲基橙、亚甲基蓝、甲醇、水实验步骤1. 准备样品溶液将甲基橙和亚甲基蓝各取适量，分别加入到10ml的容量瓶中，用甲醇-水（70:30）混合溶剂稀释至刻度线，摇匀后备用。
2. 柱层析实验将样品溶液注入柱色谱仪中，使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，调整流速至0.5ml/min，记录吸光度曲线。
根据染料的吸光度曲线，确定各染料的保留时间和峰面积，并计算出各染料的纯度和浓度等相关参数。
3. 分光光度计测定将染料样品分别加入到分光光度计中，测定其在不同波长下的吸光度。
根据吸光度和浓度的线性关系，计算出染料的浓度和摩尔吸光系数等参数。
实验结果1. 柱色谱实验使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，可以实现对甲基橙和亚甲基蓝的有效分离。
甲基橙的保留时间为3.2min，峰面积为0.034，纯度为98.2%，浓度为0.042mg/ml；亚甲基蓝的保留时间为5.7min，峰面积为0.047，纯度为99.1%，浓度为0.034mg/ml。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝实验目的1. 了解柱色谱的分离原理及应用。
2. 掌握柱色谱法的实验操作技术。
实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小，吸附能力弱，解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来;而极性大，吸附能力强，解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
主要装置装柱装样品亚甲基蓝先被洗脱甲基橙后被洗脱实验步骤1. 取口径10mm，长200mm洁净干燥的层析柱一支，在活塞处涂上一层薄薄的凡士林，向一个方向旋转至透明，竖直安装在铁架台上。
关闭活塞，向柱中倒入95%乙醇至柱高4/5处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入10g中性氧化铝，待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开柱下活塞，调节流速约1滴/秒，并用木棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密。
装满100mm高度后在上面加一层石英砂(约5mm)。
在此过程中应始终保持吸附剂沉积面上有一段液柱。
2. 打开柱下活塞放出柱中乙醇，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物。
打开活塞，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，用少量95%乙醇沿加样处冲洗柱内壁。
再打开活塞将液面降至与石英砂平面相切。
依上法重复操作直至柱壁和顶部的淋洗剂均无颜色。
3. 用95%乙醇作为洗脱剂，打开柱下活塞，控制流出速度为1滴/秒。
观察柱中色带下行情况。
随着色带向下行进逐渐分为两个色带，下方的为蓝色，上方为黄色。
当蓝色带(亚甲基蓝)到达柱底时更换接收瓶接收(在此之前接收的无色淋洗剂可重复使用)。
当蓝色带接收完后更换接收瓶接收空白带，并改用蒸馏水继续洗脱甲基橙。
当空白带接完后再换接收瓶接收黄色带(甲基橙)。
柱色谱实验报告
柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线的研究一：实验目的1、 2、 3、掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂 1、仪器气相色谱仪 2、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤 1、调试气相色谱仪 2、分别进行进样3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录1、色谱条件:50m 柱经：320μm 固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：fid 检测器温度：150℃柱温：95℃气化室温度：165℃气体流量：载气30ml／min 2、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：白酒中甲醇含量的测定一、实验目的 1、 2、掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
二、实验原理气相色谱法是一种分离效果好，分离速度快，灵敏度高，操作简单，应用范围广的分析方法，它是以气体为流动相，当气体携带着欲分离的混合物流经色谱柱中的固定相时，由于混合物中各组分的性质不同，它们与固定相的作用力大小不同，所以组分在流动相与固定相之间的分配系数不同，经过多次反复分配之后，各组分在固定相中滞留的时间不同，与固定相作用力小的先流出色谱柱，与固定相作用力大的后流出色谱柱，从而实现分离。
柱色谱实验
高度以下，这样将会出现气泡或裂缝。柱顶部 1/4处一般不充填吸附剂，以便使吸附剂上面始 终保持一液层。
（2）展开及洗脱
当溶剂下降到吸附剂表面时，立即开始使用色谱柱。 把试样溶解在最少量体积的溶剂中，该溶剂一般是展开色 谱的第一个洗脱剂。
用滴管把试样溶液转移到色谱柱中，并用少量溶剂分 几次洗涤柱壁上所沾试液，直至无色。不断加入展开剂， 由于不同极性的组分在柱中移动的快慢不同，因而混合物 中的各个组分在柱上分成不同的色谱带（指有颜色的组 分）。使用不同的洗脱剂将色带一一洗脱下来，若洗脱速 度较慢，若洗脱速度较慢，可以用水泵稍稍减压。
常用洗脱剂的极性： 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯 甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜ 甲醇＜ 水＜ 乙酸
柱色谱实验
操作过程
（1）装柱
色谱柱的大小，取决于分离物的量和吸附物性质，一般的 规格是柱的直径为其长度的1/10至1/4.实验中常用的色谱柱直 径在0.5cm至10cm之间。
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柱色谱实验
柱色谱
1 吸附剂 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性 炭或纤维素粉。 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化 学反应。 吸附能力与以下几点有关： （1）吸附剂颗粒大小 （2）吸附剂含水量
柱色谱实验
2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附 活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非 极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极 性，将不同化合物依次洗脱。
装柱要求吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有 裂缝，否则将影响洗脱和分离。通常采用糊状填料法，即把 柱竖直固定好，关闭下端活塞，底部用少量脱脂棉或玻璃棉 轻轻塞紧，加入约1cm厚的洗净干燥的石英砂层，然后加入 溶剂到柱体积的1/4,；用一定量的溶剂和吸附剂在烧杯内调成 糊状，打开柱下端的活塞，让溶剂一滴一滴地滴入锥形瓶中， 把糊状物快速倒入柱中，打开柱下端的活塞，在不断敲打柱 身的情况下，填加固体吸附剂。柱填好后，上面再覆盖1cm 厚的砂层。注意自始自终不要柱色使谱实柱验内的液面降到吸附剂
大学柱色谱实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解柱色谱分离的基本原理和方法。
2. 掌握柱色谱实验的操作技能，包括样品的制备、色谱柱的填充、洗脱剂的选择和样品的收集。
3. 学习如何分析色谱分离的结果，并能够根据分离效果评估实验条件。
二、实验原理柱色谱是一种利用混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的不同来实现分离的技术。
实验中，将含有目标组分的混合物通过填充有吸附剂的色谱柱，由于不同组分在固定相和流动相中的分配系数不同，它们在色谱柱中的移动速度也会不同，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：- 柱色谱柱（玻璃或塑料）- 漏斗- 烧杯- 滴定管- 铁架台- 秒表2. 试剂：- 吸附剂（如硅胶、氧化铝等）- 混合样品（含目标组分）- 洗脱剂（根据目标组分的极性选择）- 标准样品（用于对照和定量分析）四、实验步骤1. 准备色谱柱：将吸附剂倒入漏斗中，用滴定管缓慢倒入色谱柱中，使其填充紧密。
2. 样品制备：准确称取一定量的混合样品，用适量的溶剂溶解。
3. 样品上样：将样品溶液缓慢滴加到色谱柱顶部，注意控制流速。
4. 洗脱：将洗脱剂滴加到色谱柱顶部，控制流速，收集流出液。
5. 收集分离组分：观察色谱柱中的分离情况，记录各组分对应的收集时间。
6. 样品分析：将收集到的各组分进行进一步的分析，如薄层色谱、红外光谱等。
五、实验结果与分析1. 分离效果：观察色谱柱中的分离情况，记录各组分对应的收集时间，分析分离效果。
2. 定量分析：根据收集到的各组分量，计算其含量，并与标准样品进行对照。
3. 优化实验条件：根据分离效果，分析实验条件对分离效果的影响，如吸附剂类型、洗脱剂类型、流速等，并对实验条件进行优化。
六、问题与讨论1. 实验中遇到的问题：- 色谱柱填充不均匀，导致分离效果不佳。
- 洗脱剂选择不当，导致分离效果不佳。
- 流速控制不当，导致分离效果不佳。
2. 解决方法：- 优化色谱柱填充方法，确保填充均匀。
- 根据目标组分的极性选择合适的洗脱剂。
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法柱色谱法是一种常用的分离和测定化合物的方法，本实验以甲基橙和亚甲基蓝为目标化合物，探究了柱色谱法的分离和测定方法。
实验中采用硅胶柱和甲醇-水（9:1）为流动相，通过比较不同流速和不同浓度的流动相对甲基橙和亚甲基蓝的分离效果，得出最佳的柱色谱条件。
同时，本实验还使用紫外-可见分光光度计对分离后的甲基橙和亚甲基蓝进行了定量测定，以此验证柱色谱法的准确性和可靠性。
实验结果表明，柱色谱法是一种简便、快速、准确的分离和测定化合物的方法，可以应用于化学、生物等多个领域的实验教学和科研工作中。
关键词：柱色谱法；甲基橙；亚甲基蓝；分离；测定1、实验原理柱色谱法是一种分离和测定化合物的方法，其原理是利用不同化合物在固定相和流动相之间的分配系数不同，使化合物在固定相中发生分离。
在本实验中，采用硅胶为固定相，甲醇-水（9:1）为流动相，利用甲基橙和亚甲基蓝在硅胶柱中的分配系数不同，实现两者的分离。
甲基橙和亚甲基蓝是两种常用的指示剂，均为有机染料。
甲基橙为黄色晶体，可溶于水和乙醇，常用于酸碱滴定中的指示剂。
亚甲基蓝为蓝色晶体，可溶于水和乙醇，常用于氧化还原滴定中的指示剂。
2、实验步骤2.1 实验器材和试剂硅胶柱、滴漏、紫外-可见分光光度计、甲基橙、亚甲基蓝、甲醇、去离子水。
2.2 实验操作2.2.1 制备样品溶液将甲基橙和亚甲基蓝分别加入10 mL的甲醇中，摇匀制备样品溶液。
2.2.2 柱色谱分离将硅胶柱装入滴漏中，用去离子水预先洗涤，让水从柱底流出。
将样品溶液注入柱中，用甲醇-水（9:1）为流动相，调节流速和浓度，收集出流液，分别得到甲基橙和亚甲基蓝的分离液。
2.2.3 紫外-可见分光光度计测定将分离液分别用紫外-可见分光光度计进行定量测定，得到甲基橙和亚甲基蓝的吸光度值。
3、实验结果与分析3.1 柱色谱分离结果在本实验中，通过调节流速和浓度等柱色谱条件，得到了最佳的甲基橙和亚甲基蓝的分离液。
柱色谱分离
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（二）数据记录
将展开的薄层板画下来并计算黄色 斑点比移值
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（三）注意
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1、用过的洗脱液统一回收，不准倒入水池 2、色谱柱中的硅胶要清理干净，统一倒在 垃圾桶中 3、浓缩的混合样留少许做对比用
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3、柱色谱分离: 选用内经1cm，长约20cm的层析柱，按照有机化合物
的分离和提纯中3.9.2节[1]中的方法，用8.0g硅胶 （100~200目）在30毫升石油醚中装柱（湿法装柱）。柱 装好后用滴管汲取大部分混合色素的浓缩液，将混合液加 入柱中，小心冲洗柱内壁后改用体积为3：8的石油醚 （36~60℃）-二氯甲烷混合液淋洗，用接收瓶接收先流出 柱子的黄色色带并量取洗脱该色带体积。
0.5%CMC)，晾干后活化0.5h
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2、色素的萃取和浓缩: 将干的红辣椒剪碎研细，称取1.0g，置于25mL圆
底烧瓶中，加入10mL二氯甲烷和1粒沸石，水浴加热 回 流 20min 。 冷 至 室 温 后 过 滤 。 将 滤 液 浓 缩 至 剩 约 1mL，即为混合色素的浓缩液。
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（四）提问
1.如何制备好的薄层板？ 2.如何使柱色谱分离效果良好？
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五、实验讨论
本实验分离效果如何？ 你有什么改进方法？
柱色谱的原理及应用实验
柱色谱的原理及应用实验1. 柱色谱的概述柱色谱（Chromatography）是一种分离技术，通过样品在固定相和流动相的作用下，使得不同组分在柱上发生吸附和解吸附过程，从而实现分离和测定的方法。
柱色谱是分析化学中常见的实验方法之一，其原理及应用被广泛研究和应用。
2. 柱色谱的原理柱色谱的分离原理基于样品组分在固定相和流动相之间吸附和解吸附的差异。
当样品溶液通过填充在柱子内的固定相时，样品组分会以不同的速率被固定相吸附并解吸附，从而分离出不同的组分。
具体来说，柱色谱可分为液相色谱和气相色谱两种类型：2.1 液相色谱液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是利用液体作为流动相的柱色谱。
液相色谱中的固定相一般是具有大量微孔的固体颗粒，称为填充剂。
样品在流动相的作用下，通过填充剂与流动相之间的相互作用，进行组分分离。
常见的液相色谱包括高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）和毛细管电泳色谱（Capillary Electrophoresis，CE）等。
2.2 气相色谱气相色谱（Gas Chromatography，简称GC）是利用气体作为流动相的柱色谱。
气相色谱通过样品在气相状态下与固定相之间的相互作用，实现组分的分离。
在气相色谱中，固定相一般是高沸点、官能团化或载体型的吸附剂物质，如活性炭、分子筛等。
样品通过进样器进入气相色谱柱，在高温下通过柱子进行分离。
3. 柱色谱的应用实验柱色谱技术在多个领域中都有广泛的应用，可以用于物质的分离、纯化和分析等方面。
3.1 药物分析柱色谱在药物分析中有着重要的应用。
通过柱色谱技术，可以对药物的纯度、含量和成分进行分离和定量分析。
例如，药物研发过程中会使用高效液相色谱（HPLC）技术对新药品的质量进行评估，为药物研发提供支持。
3.2 食品安全检测柱色谱技术在食品安全检测中也起着重要的作用。
柱色谱实验报告苯甲酸
一、实验目的1. 掌握柱色谱的基本原理和操作方法。
2. 通过柱色谱实验，实现对苯甲酸的分离和鉴定。
3. 学习并应用化学分析方法，提高实验技能。
二、实验原理柱色谱是一种利用不同物质在固定相和流动相中的分配系数差异，实现混合物分离的方法。
本实验中，苯甲酸作为待分离物质，与固定相（如硅胶）和流动相（如正己烷-乙酸乙酯混合溶剂）相互作用。
由于苯甲酸在固定相和流动相中的分配系数不同，从而在柱上实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：苯甲酸、硅胶、正己烷、乙酸乙酯、蒸馏水、无水硫酸钠、硅胶G 薄层板、展开剂、显色剂等。
2. 实验仪器：柱色谱柱、柱塞、玻璃棒、烧杯、电子天平、移液管、滴定管、烘箱、紫外灯等。
四、实验步骤1. 准备柱色谱柱：将硅胶装入柱色谱柱中，填充高度约为10cm，用玻璃棒轻轻捣实。
2. 湿法装样：取苯甲酸样品，加入适量正己烷-乙酸乙酯混合溶剂，溶解后转移至柱色谱柱中，用玻璃棒轻轻捣实。
3. 上样：将溶解好的苯甲酸样品缓慢倒入柱色谱柱中，待样品流出后，加入适量的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂，使样品完全进入柱色谱柱。
4. 洗脱：用正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，收集流出液。
5. 检测与鉴定：将收集到的流出液滴加到硅胶G薄层板上，用紫外灯照射，观察苯甲酸斑点出现的位置，并与标准样品进行对比鉴定。
五、实验结果与分析1. 柱色谱分离效果：根据实验结果，苯甲酸在柱色谱柱上得到了较好的分离，出现了明显的分离带。
2. 鉴定结果：通过紫外灯照射，观察到苯甲酸斑点在硅胶G薄层板上呈现特征吸收峰，与标准样品一致，证明实验成功分离并鉴定了苯甲酸。
六、实验讨论1. 柱色谱分离效果的影响因素：柱色谱分离效果受多种因素影响，如硅胶的粒度、固定相和流动相的选择、洗脱剂的选择等。
在本实验中，通过优化实验条件，实现了苯甲酸的较好分离。
2. 柱色谱在有机合成中的应用：柱色谱是一种常用的分离纯化方法，在有机合成、药物分析等领域具有广泛的应用。
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• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝， 否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响 样品的分离，应用质软的物体如吸耳球等 轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排 除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无 凹凸面．
三、实 验 内 容
加样 样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选
择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管 壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。
（优选）柱色谱分离实验
一、实 验 目 的
了 解：
1. 柱色谱法分离有机物的原理。 2．固定相和流动相的选择原则。
掌 握：
1. 色谱柱的填充方法。 2．柱色谱分离的基本操作。
色谱法简介
色谱法亦称色层法， 层析法等，是分离，纯化 和鉴定有机化合物的重要 方法之一，还可定量分析。
二、实 验 原 理
液—固色谱法
洗脱
三、实 验 内 容
在柱顶不断加入洗脱剂，使 洗脱剂永远保持有适当的量，不 要让洗脱剂表面流干，使流动相 流速适当。
•洗脱时应注意：
•（1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安 装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒。 逐渐出现色层带分离。
•（2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层 的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！
三、实 验 内 容
收集 试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后
分别收集各个组分。
试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收 集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样 的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小， 分离效果越好。
三、实 验 内 容
鉴定
试样有色 依据颜色直接鉴定
试样无色 可结合薄层色谱结果
级的物质量。
分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试样 分析。
柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝
实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:
甲基橙
亚甲基蓝
由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们 的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能
力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、 解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实 验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸 馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
三、实实验验步 内骤: 容 柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶 +乙醇
•先用乙醇 后用水
•操作
•组分颜色
装柱
加样
洗脱
收集
鉴定
•1mL样品
•加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
•组分颜色
仪器和试剂
• 1.仪器 • 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 • 2.试剂 • 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲
基橙、亚甲基蓝。
•（3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底 部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。
•（4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定 的回收瓶中。
•（5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从 活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒 入垃圾桶里。
和 和
三、实实验验步 内骤: 容 柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶 +乙醇
•先用乙醇 后用水
•操作
•组分颜色
装柱
加样
洗脱
收集
鉴定
•1mL样品
•加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
•组分颜色
三、实 验 内 容
装柱 干法装柱 湿法装柱
吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
柱色二谱、实分验离原示理意图
洗脱剂(流动相) 混合物
吸附剂(固定相)
二、实 验 原 理 影响分离效果主要因素
化合物的结构：化合 物的吸附性和它们的 极性成正比
洗脱剂的极性：溶解 度适中、不反应、易 获取回收
吸附剂的性质：均匀、 表面积大、不反应、 吸附能力不同
在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？
• H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
装置图
洗脱
装柱
实验步骤
• 装柱：
• 1、装色谱柱： • （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂
直固定在铁架台上。 • (2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的
四、注 意 事 项
• 玻砂防堵塞 • 装柱需紧密 • 加压不可大 • 溶剂勿流干
小结
色谱法在有机化学中的应用:
分离混合物 精制提纯化合物 利用比移值(Rf)鉴定化合物 跟踪反应进程
色谱法的特点:
小结
分离效率高 复杂混合物,同系物,异构体等。
灵敏度高 1(10-9)
可以检测出μg• g-1(10-6)级甚至ng• g-
1/2） • （3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻
璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型 瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（ ，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
固定相、流动相的物理状态
气—固色谱法 气—液色谱法
液—液色谱法
柱色谱法（column chromatography）
色
纸色谱法（paper chromatography）Βιβλιοθήκη 谱 法 分 类操作形式
薄层色谱法（TLC） 气相色谱（GC） 高效液相色谱（HPLC）
吸附色谱法
分离原理
分配色谱法
离子交换色谱法 排阻色谱