生物碱类药物的含量测定
乌头碱类生物碱的含量测定方法概述
乌头碱类生物碱的含量测定方法概述陆燕萍;巩晓宇;陈秋燕;邱凤邹【摘要】The content determination methods of single ester alkaloids, diester alkaloids and total alkaloid in radix aconiti, kusnezoff monkshood, aconite and other aconitine drugs are described in this article including HPLC, RP-HPLC, LC-MS, TLCS, High Performance Capillary Zone Electrop- horesis and Spectrophotometry. Based on different mobile phase, HPLC and RP-HPLC is classified. At the same time, the classification of TLCS is carried out studied according to different deployment agents.%总结概括目前川乌、草乌、附子等乌头碱类药物的单酯型生物碱、双酯型生物碱及总生物碱的含量测定方法，主要有高效液相色谱法、反相高效液相色谱法、液－质联用方法、双波长薄层扫描法、高效毛细管电泳法和分光光度法。
该文根据不同的流动相对高效液相色谱法和反相高效液相色谱法进行分类，同时根据不同的展开剂对双波长薄层色谱法进行了分类。
【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2016(025)007【总页数】3页(P1-2,3)【关键词】乌头碱类生物碱;含量测定;高效液相色谱法;反相高效液相色谱法;液-质联用方法【作者】陆燕萍;巩晓宇;陈秋燕;邱凤邹【作者单位】广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳 518172;广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳 518172;广东医学院，广东东莞 523808;广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳 518172【正文语种】中文【中图分类】R282.41;R286.0乌头碱类药物的主要成分是生物碱，包括单酯型生物碱、双酯型生物碱、氨醇型生物碱和其他类型化合物。
实验六硫酸阿托品注射液的鉴别与含量测定实验七阿司匹林片剂的鉴别和含量测定
2CH 2 SO4
(V0
V) ms
103
M阿
平均片重 标示量 100%
药典规定:标示量％应为95.0％~105.0％。
二、实验内容
（二）含量测定
2．方法：
2组共用
12片量
称取30片（规格25mg）乙酰水杨酸片→ 于研钵中研细
→ 称取适量（相当于乙酰水杨酸0.3g）
片粉
20mL 乙醇
振摇
3d 酚酞
用NaOH滴定至粉红色
化钾醇溶液和固体氢氧化钾作用→ 醌型产
物（深紫色）。
2、方法：
一支针剂5mg/mL
本品
（约相当于硫酸 阿托品5 mg)
水浴 蒸干
残渣
5d 发烟硝酸
水浴蒸干
黄色残渣
放冷
2~3d 乙醇
1小粒 固体KOH
观察颜色
深紫色
二、实验内容
（二）含量测定（酸性染料比色法 ）
利用碱性药物在一定pH下与某些酸性染料结合显 色，而进行分光光度法测定药物含量的方法。
＝
A
供
C对 稀释倍数 A对
1 标示量
1.027
100%
50µg/mL
本品为硫酸阿托品的灭菌水溶液，以含 （C17H23NO3）2H2SO4·H2O含量表示
药典规定:标示量％应为90.0％~110.0％。
实验七 阿司匹林片剂的鉴别 和含量测定
一、实验目的
掌握水杨酸类药物鉴别反应的实验原理。 掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂的基本 原理。 了解制剂中辅料对测定的影响和排除方法。
二、实验内容
（一）鉴别 1．原理：
COOH
OCOCH3 + H2O
COOH OH + CH3COOH
桑叶中生物碱的的含量测定方法
实验方法：将桑叶粗提物样品用蒸馏水溶解后经制备型液相色谱仪分离，质谱 引导，质谱检测质荷比163.3+1（DNJ+H）,柱温为室温，流速10mL/min。通 过质谱对收集液进行鉴定，离子轰击源为点喷雾ESI电离源，雾化气N2，对分离 纯化的 DNJ 溶液，50℃恒温旋转蒸发去除乙腈，-50 ℃冷冻干燥成淡黄色粉末。 经柱前荧光衍生-反相高效液相色谱法检测DNJ的含量，样品DNJ纯度＞95% 。
原理：气相色谱法主要是利用物质的沸点、极性及 吸附性质的差异来实现混合物的分离，如右图所示:
待分析样品在汽化室汽化后被载气带入色谱柱， 柱内含有液体或固体固定相，由于样品中各组分的 沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在 流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于 载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也 正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反 复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度 大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大 的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检 测器。检测器能够将样品组分转变为电信号，而电 信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。
二、重量法
硅钨酸是生物碱沉淀试剂之一，桑叶生物碱与硅钨酸反应生成白色沉淀。 重量法的原理是在酸性环境下，硅钨酸能够和多数生物碱生成一定的沉淀， 一分子硅钨酸可以和四分子含一个碱性氮原子或二分子含二个碱性氮原子 的生物碱相结合，生成硅钨酸盐沉淀。
乌头碱类生物碱的测定
乌头碱类生物碱的测定
乌头碱是一种含氮的生物碱，主要存在于乌头属植物中，如乌头、白附子等。
测定乌头碱的方法有多种，常用的方法有以下几种：1. 酸碱滴定法：将待测样品加入酸性介质中，使乌头碱转变为酸性溶液，再加入酸性碘化钾溶液，溶液呈现深蓝色，用硫酸滴定至溶液颜色变浅为止，根据滴定所需的硫酸量计算乌头碱的含量。
2. 气相色谱法：将待测样品经过提取和洗涤，得到乌头碱的纯化样品。
然后将样品注入气相色谱仪中，通过样品在色谱柱中的分离和检测，测定乌头碱的含量。
3. 高效液相色谱法：将待测样品经过提取和洗涤，得到乌头碱的纯化样品。
然后将样品注入高效液相色谱仪中，通过样品在色谱柱中的分离和检测，测定乌头碱的含量。
4. 紫外分光光度法：将待测样品溶解于酸性溶液中，然后使用紫外分光光度计测定样品溶液的吸收光谱，根据乌头碱在特定波长下的吸光度值，计算乌头碱的含量。
以上是常用的几种乌头碱的测定方法，具体选择哪种方法可以根据实际情况和实验要求来确定。
试验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量
实验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量一、目的要求1.掌握用连续回流提取法定量提取中药制剂中生物碱的原理和操作方法。
2.掌握柱色谱法净化样品和用吸收系数法测定盐酸小檗碱的基本原理和操作方法。
二、基本原理用连续回流提取法，将生物碱以盐的形式提取后，用氧化铝做净化剂进行液-固萃取净化处理，使提取液中具有紫外吸收的黄酮类及其他极性大的干扰组分保留于柱上，小檗碱、药根碱等小檗碱型生物碱被洗脱，以消除干扰。
盐酸小檗碱在345nm±1nm处有最大吸收，在此波长处测定洗脱液的吸收度，以吸收系数法按盐酸小檗碱计算总生物碱含量。
三、仪器与试药1.分析天平、恒温水浴锅、分光光度计。
2.量瓶、三角瓶、烧杯、刻度吸管、量筒、索氏提取器、色谱柱。
3.色谱用中性氧化铝，其他试剂均为AR级。
4.万氏牛黄清心丸(市售品)。
四、操作步骤1.提取去剪碎的万氏牛黄清心丸约4g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇(1﹕100)适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50mL量瓶中，用盐酸-甲醇(1﹕100)稀释至刻度，摇匀。
2.净化精密量取上述提取液5mL，置氧化铝柱(内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用30mL乙醇预洗)上，用25mL乙醇洗脱，收集洗脱液，置50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。
3.测定法精密量取上述净化液2mL，置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。
以2mL乙醇及0.05mol/L H2SO4液稀释至50mL的混合液为空白，用1cm比色池，E)为728计算即在345nm波长处测定吸收度。
按盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCL)的吸收系数(1%1cm得。
本品按干燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于1.7%。
五、思考题1.本实验操作中应注意哪些问题？2.欲证明此方法的可靠性，须做什么试验？如何设计？。
生物碱类药物的分析
CH3O
HO C
N H
H
N
H2SO4·2H2O
2
硫酸奎尼丁
主要化学性质
1.碱 性：喹啉环上的N为芳环氮，碱性 较弱；喹核碱含脂环氮，碱 性强，能与硫酸成盐。
2.旋光性：二者为立体异构，奎宁为 左旋体，奎尼丁为右旋体。
鉴别试验 1.荧光反应 硫酸奎宁稀H2SO4 蓝色荧光
2. SO42 的反应
第二节 托烷类药物的分析
托烷类药物大多数是由莨菪烷衍生的氨 基醇与不同的有机酸缩合成酯的生物碱，常 见的有颠茄生物碱和古柯生物碱，根据其结 构特征均属于杂环类药物。现以最常用的典 型药物硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱为例， 就其鉴别和杂质检查的有关问题进行讨论。
CH3 N
脂环胺pKb 4.35
O CO CH CH2OH
3. 绿奎宁反应 含氧喹啉衍生物的特征反应
奎宁 奎尼丁
Br2H或+ Cl2
褪色
氨水
翠绿色
硫酸奎宁的特殊杂质的检查
（一）氯仿—乙醇中不溶物的检查 残渣≤2mg（105℃）
（二）其他金鸡纳碱的检查 TLC高低浓度对比法
含量测定——非水溶液滴定法
（一）硫酸奎宁 HClO4直接滴定 反应摩尔比为1∶3
鉴别试验 1. Vitaili反应
托烷生物碱均显莨菪酸结构的特征反应
2. SO42 的反应
（1） SO42 Ba2 BaSO4 白 (不溶于盐酸或硝酸）
（2）SO
2 4
Pb2
PbSO 4
白
(溶于醋酸铵或氢氧化钠）
（3）+HCl→不生成白色沉淀
硫酸阿托品中特殊杂质检查
（一）硫酸阿托品中莨菪碱的检查 （dl） （l）
生物碱类药物含量测定方法
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定与质量评价
黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定与质量评价黄柏片剂是一种常见的中药饮片，具有清热、解毒、活血等药理作用。
其中，生物碱类物质是黄柏片剂的重要活性成分之一，对于黄柏片剂的质量评价具有重要意义。
本文将围绕黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定与质量评价展开论述。
一、黄柏的生物碱类物质黄柏是常用的中药材之一，其主要成分是黄连素和盐酸黄连素。
黄连素是一种含氮的生物碱，具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种生物活性。
盐酸黄连素是黄连素的盐酸盐，具有更强的溶解性和更好的药效。
这两种生物碱类物质是黄柏片剂的重要活性成分，对于黄柏片剂的质量评价具有重要意义。
二、黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定方法1. 高效液相色谱法高效液相色谱法是测定黄柏片剂中生物碱类物质含量的常用方法。
该方法利用样品中黄连素和盐酸黄连素在固定相上的保留时间进行定量分析，通过对标准品的峰面积与样品峰面积的比值，可以计算出样品中生物碱类物质的含量。
2. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是测定黄柏片剂中生物碱类物质含量的快速、简便的方法。
该方法利用生物碱类物质带有特征性的紫外吸收峰进行定量分析，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以计算出样品中生物碱类物质的含量。
三、黄柏片剂质量评价指标1. 含生物碱类物质的含量黄柏片剂中生物碱类物质的含量是评价其质量的重要指标之一。
根据国家药典中对黄柏片剂生物碱含量的规定，每克黄柏片剂应含黄连素不少于0.12毫克和盐酸黄连素不少于0.90毫克。
只有在符合这两个含量要求的前提下，才能保证黄柏片剂的质量。
2. 总生物碱含量总生物碱含量是衡量黄柏片剂生物活性成分的综合指标。
根据国家药典的规定，黄柏片剂的总生物碱含量应不低于6.0%。
总生物碱含量越高，说明黄柏片剂中的生物活性成分越多，功效更强。
3. 残留溶剂含量残留溶剂是指制剂过程中使用的溶剂残留在最终成品中的量。
针对黄柏片剂，国家药典规定其残留溶剂含量应符合药典中的要求。
这些残留溶剂对人体有潜在的毒性，超标的残留溶剂可能对患者造成潜在的健康风险。
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适用于碱性比较强的的药物分析。(pkb=6-9)
生物碱类药物的含量测定
（二）滴定方式
1.直接滴定法----用于碱性较强的生物碱。 2.剩余滴定法----用于碱性较弱的生物碱。 3.提取剩余滴定法----用于对热不稳定的生物碱。
生物碱类药物的含量测定
生物碱类药物的含量测定
一、非水溶液滴定法（非水碱量法）
(一)原理和方法
游离生物碱：生成生物碱的高氯酸盐
生物碱盐：置换滴定，即强酸滴定液置换出与游离碱结合的
较弱的酸。
BH+·A- + HClO4
BH+·ClO4- + HA
生物碱法
生物碱类药物的含量测定
三、酸性染料比色法
生物碱与某些酸性染料，在一定pH条件下可定量结合显色， 然后用比色法测定含量。 特点：灵敏度高、方便，并且具有一定专属性和准确性。适 用于含量较低的样品测定。
生物碱类药物的含量测定
四、紫外-可见分光光度法 五、荧光分析法 六、高效液相色谱法