微生物学实验指导
微生物学实验指导大全
微生物学实验指导黄文芳张松编著华南师范大学生命科学学院第一部分基础实验实验1 培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。
2．高氏1号培养基的配制。
3．马丁氏培养基的配制。
二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2．加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
医学免疫学与微生物学 实验指导
《医学微生物学与医学免疫学》实验指导前言医学微生物学与免疫学是医学院校必设的基础课程之一，该学科具有理论与实践紧密结合的特点及实验教学在学科中的重要性。
本课程设置要求学生不仅要掌握基础理论、基本知识，而且要学习和掌握各项基本技能。
本书结合中药学专业的教学工作实际，编实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，并附有一定量的思考题。
本书依教学进程安排实验次序，可帮助学生巩固基础理论知识，培养学生基本技能，提高教学效果。
实验学时：4学时形态二《医学微生物学》实验指导实验一细菌分布检测、理化及药物因素对细菌影响的检测（一）细菌分布的检测【实验目的与要求】1.掌握无菌操作技术。
2.熟悉细菌菌落的观察及计数方法。
3.了解微生物在自然界及正常人体的分布，增强无菌观念。
【实验原理】细菌广泛分布于自然界中，人的体表和与外界相通的腔道中也有细菌存在。
通过本次实验理解微生物学科实验中强调无菌操作、防止污染和感染的重要性，为今后在医疗实践中建立牢固的无菌观念打下基础。
【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：无菌平皿、普通琼脂平板、血平板、高层琼脂培养基、微波炉、无菌吸管、胶帽、酒精灯、打火机、无菌试管、试管架等。
2.实验试剂：自来水或纯净水、生理盐水等。
【实验项目、方法与步骤】1.空气中细菌分布的检测——沉降法（1）取一个普通琼脂平板并作好标记。
（2）置于实验室某处，揭开盖。
操作时不要用手接触培养基，以免造成结果误差。
（3）让培养基暴露在空气中30min，然后盖好皿盖，置37℃生化培养箱内培养18～24h。
（4）取出观察并纪录结果。
2.水中细菌分布的检测——倾注培养法（1）取已灭菌的吸管，套上胶帽。
（2）右手持吸管带胶帽的一端，其余部分迅速通过火焰，以杀灭吸管表面可能存在的细菌。
（3）以挤压胶帽的办法，吸取1ml自来水或纯净水，置于无菌平皿中（注意：不要错放入平皿盖内）。
（4）取已融化并冷却至50℃左右（手握感觉热而不烫手）的高层琼脂培养基，迅速倾15～20ml 入已盛有1ml待测水的平皿中，立即加上平皿盖，在实验台上轻轻水平摇动，使琼脂与水样充分混合，静置于台面，等待琼脂凝固。
土壤微生物学实验指导
土壤微生物学实验指导实验一培养基的制备和灭菌4学时一、实验目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法和培养基的制备方法。
2.了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。
二、实验方法及原理(一)培养基的制备培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质，用以培养或分离各种微生物。
因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
微生物的生长繁殖除需一定的营养物质以外，还要求适当的pH范围。
不同微生物对pH 要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基是中性或偏碱性的。
所以配制培养基时，都要根据不同微生物对象用稀酸或稀碱将培养基的pH调到合适的范围。
但配制pH低的琼脂培养基时，如预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固，因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌后，在调整pH。
此外，由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有各种微生物，此外，已配制好的培养基必须立即灭菌，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基的酸碱度而带来的不利影响。
（二）干热和高压蒸汽灭菌原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160-170℃），时间长（1-2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
食品微生物学实验指导书
食品微生物学实验指导（食工、烹饪专业用）目录实验一显微镜的构造及使用方法 (5)实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 (9)实验三霉菌的形态观察 (11)实验四细菌的简单染色与形态观察 (13)实验五细菌的革兰氏染色与芽孢染色 (14)实验六培养基的制备与灭菌 (16)实验七细菌的分离培养及培养性状的观察 (22)实验八酵母菌细胞计数 (30)实验九食品中细菌总数的测定 (32)实验十食品中大肠菌群数的测定 (37)附录一常用染色液 (44)附录二常用培养基配方 (45)实验室安全守则1.进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。
2.在进行高压、干燥、消毒等工作时，实验人员不得擅自离开现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。
3.严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方能离开现场。
4.实验完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用（杀菌剂）新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。
5.实验完毕，及时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理，并填写日常工作记录。
6.每日实验结束，认真检查水、相关电源是否关闭和正在使用的设备运转是否正常，并认真记录。
关好门窗，方可离去。
实验室检验总则一、样品的采集（一）采样目的确保采集的样品能代表全部被检验的物质，使检验分析更具代表性。
（二）采样原则1.采集的样品要有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在，同时能反映全部被检食品的组成、质量和卫生状况。
2.应设法保持样品原有微生物状况，在进行检验前不得污染，不发生变化。
3.采样必须遵循无菌操作程，容器必须灭菌，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新洁尔灭、酒精等消毒物灭菌，更不能含有此类消毒药物，以避免杀掉样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可使用。
微生物学类实验指导书(下)
实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。
由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前，能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶，葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。
通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
1. 淀粉酶产生菌的分离与纯化1.1 实验目的学习从自然界中分离淀粉酶产生菌，并进行分离与纯化。
1.2 实验原理淀粉是由葡萄糖通过α-1，4糖苷键构成的直链淀粉和α-1，6位有分支的支链淀粉组成的。
按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶（或异淀粉酶）4大类。
产淀粉酶的微生物有细菌、霉菌和酵母菌等。
利用淀粉遇碘液变为蓝色的特性，将分离的芽孢杆菌（或其他微生物）接种在含有淀粉的固体培养基表面进行培养，利用滴加碘液后菌落周围出现的透明圈判断该菌是否产生淀粉酶及初步判断淀粉酶活力的高低。
1.3实验仪器与材料土壤样品或其他富含淀粉质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、淀粉培养基平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
1.4 实验方法与步骤1.4.1分离1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；2）取1：10土壤悬液5 ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80 ℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置，于30-32 ℃培养24-48 h；4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
环境微生物学实验指导
微生物实验室安全守则基本原则：1.在实验台上不可放臵任何非实验必须的物件或私人用品。
2.每次工作开始及终止时，必须清理并用杀菌液擦拭实验台面 (杀菌液的种类及浓度可参考表1中所列，最常用的为 70% 酒精水溶液) 。
表1、常用杀菌药品名称及其溶液的浓度3.在操作过程中绝不可抽烟、吃东西。
4.在操作过程中必须穿上清洁的实验服，若蓄长发须将长发束好，在实验室中任何时候皆应有整齐的装束。
5.实验室内的各种培养基、仪器，尤其是各种实验的样品及微生物培养，皆不可任意移至实验室外。
6.实验室內任何一种微生物样品，在处理时均须遵守下列事项：◎决不可用口吸取任何一种微生物样品。
◎如果微生物样品打翻，必須以吸满杀菌液的卫生纸加以覆盖 15 分钟后，卫生纸才可移除，并依照一般微生物实验室的废弃物加以处理。
◎任何微生物样品在室內搬移时都必须加盖。
7.在任何操作过程的开始前及终止后，双手都必须用清洁剂清洗（例如：70 % 的酒精水溶液）。
微生物实验室內，任何微生物的样品、废弃物 (对具感染性的废弃物应特别注意) 都必须高温高压灭菌后，才能以一般垃圾处理。
操作时注意事项:1.机器运转中如有不正常现象，应立即报告实验老师或任课教师，若时间急迫，可先切断电源。
2.发现仪器故障者，应在机器上清楚标示，尽到告知义务，以免发生危险。
3.任何药品使用前需详知其性质及使用方法，配制或使用有毒物品需戴手套口罩等操作，挥发性溶剂则需在通风柜内使用，并应随时加盖，以免发生危险。
4. 挥发性溶剂如酒精、丙酮、乙醚、苯、二硫化碳、冰醋酸、石油醚、甲苯、二甲苯等均易燃烧，故切勿靠近火焰。
不溶于水的有机溶剂着火时，切勿以水灭火，以免更助长火势蔓延。
5.不得将纸屑、玻璃碎片等流入排水管。
6.当加热试管内物质时，为避免烧破试管或致使试管內物质喷出，应常旋转试管或避免仅加热一处，切勿将试管口对着自己或邻座同学，以免试管内物质喷出伤害自身或其他同学。
7.稀释浓硫酸或其他强酸应徐徐将浓硫酸加入水中，并轻轻摇晃混合，切勿加水于酸中，以免因稀释时产生大量的热，致硫酸因沸腾而溅出。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
微生物学实验
微生物学实验微生物学实验是研究微生物的生长、活动和相互作用的一种科学实验。
通过实验可以了解微生物的生理特性和遗传特性，探究微生物与环境的关系，以及微生物对人类健康和环境的影响。
本文将介绍微生物学实验的常见内容和方法，并举例说明其应用。
1. 常见（1）微生物的培养与分离：将微生物样品接种于培养基上，提供适宜的环境因素使其生长繁殖。
利用孵育箱或培养皿进行培养，观察微生物的孢子、菌丝和菌落等形态特征，通过分离与鉴定，确定微生物的种类和数量。
（2）微生物的生长曲线：利用培养皿或发酵罐等装置，监测微生物在不同时间内的生长情况，绘制生长曲线。
通过分析曲线上的不同阶段，了解微生物的生长特性，包括潜时期、对数期、平稳期和死亡期等。
（3）微生物的代谢分析：通过测定微生物培养过程中的代谢产物，如酸、气体、酶等，分析微生物的代谢途径和代谢产物对生物工艺和环境的影响。
常用的方法包括气相色谱、质谱和高效液相色谱等技术。
（4）微生物的遗传分析：通过构建基因工程菌株或利用遗传标记技术，研究微生物的基因表达、突变和遗传传递等现象。
例如，利用PCR技术检测微生物的特定基因序列，分析其在不同环境条件下的表达水平。
2. 微生物学实验方法（1）杀菌与消毒：在进行微生物实验前，需要对实验器材、培养基和试剂等进行杀菌和消毒处理，以防止外源菌的污染。
常用的方法有高温高压灭菌、酒精喷雾消毒和过滤器材消毒等。
（2）无菌技术：在进行微生物的培养和分离实验时，需要避免外界细菌的污染。
常用的无菌技术包括细菌装液的操作在无菌台上进行，采用无菌培养皿、培养基和工具，以及穿戴无菌手套等措施。
（3）微量液体处理：有些微生物实验需要处理微量的液体，如微生物菌液的接种、稀释和移液等。
在这种情况下，需要使用微量吸管、微量移液器和微量离心机等微量操作工具，保证实验的准确性和可重复性。
（4）统计分析：微生物学实验的数据分析通常需要进行统计处理，以确定实验数据的可靠性和显著性差异。
医学微生物学实验指导
医学微生物学实验指导皖南医学院微生物学和免疫学教研室2006年5月微生物学实验的目的与要求医学微生物学的实验课是本课程学习中的重要环节。
医学微生物学实验课的目的：在于使学生加深和巩固对讲课内容的明白得和体会，并在系统学习理论的基础上，使学生学习并把握微生物学的差不多操作技术，培养独立摸索的能力，为今后的临床实践及科学研究工作打下良好的基础。
为了提高实验课的成效，应做到以下几点：一、每次实验前作好预习，明确实验目的，内容，操作中注意点及其理论依据，幸免或减少错误发生。
二、在实验过程中，应持严肃认确实科学态度，并要注意合理地分配和利用时刻。
三、在微生物学的整个实验过程中，应严格加强“无菌观念”的培养和训练。
四、实验结果须真实记录，进行分析，得出结论。
如实验结果与理论不符，应探讨缘故，训练科学思维的能力。
实验完成后，要写出实验报告。
微生物学实验室规则微生物学实验的对象大多是病原微生物，因此必须严格贯彻“无菌观念”，防止实验中自身感染和环境污染是微生物学实验室的最重要原则。
一、尽量不带个人一辈子活、学习用品入实验室，必要的用具带入后，应放在远离操作的位置。
二、进入实验室后穿上工作衣，离室时脱下反叠带走。
在实验室内应保持安静、整洁、有秩序，不得高声谈笑，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。
三、实验室内严禁吸烟、进食、饮水，严禁用嘴吸移液及润湿标签，尽量不要用手触摸头面部及躯体其他暴露部位。
四、如遇不慎而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情形，应赶忙报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。
五、被污染过且需要回收的吸管、滴管、试管、玻片等物应用完后赶忙投入已预备的消毒液中，不得放在桌面上或水槽内。
六、爱护公物，节约试剂材料，不得将实验室任何物品私自带走。
如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。
七、实验完毕，整理桌面，值日生打扫室内卫生，最后离开的同学应注意关好水电、门窗，洗手后离室。
实验一自然界与人体的微生物检查实验目的：了解微生物在空气、物体表面及正常机体表面的分布，增强消毒及无菌操作的观念。
微生物学实验教案
微生物学实验教案引言：微生物学作为生物学的重要分支，研究微观领域的微生物，对于理解生命的起源、发展和进化具有重要意义。
通过实验教学的方式，可以帮助学生深入了解微生物的结构、生命周期、培养和识别方法等基本知识，培养学生的实验操作能力和科学思维能力。
本教案将介绍一节关于微生物学实验的教学内容和相关教学方法。
一、实验目的：本实验旨在让学生了解微生物的基本特征、培养和识别方法，并能熟悉常见微生物的形态特征和培养条件。
二、实验器材和试剂：1. 微生物培养皿、试管、移液器等基本实验器材；2. 细菌营养琼脂、琼脂平板等培养基；3. 青霉抑菌剂等抑菌剂。
三、实验步骤：1. 实验前准备：a. 检查实验器材是否齐全，并进行消毒处理；b. 准备好细菌营养琼脂和琼脂平板，并进行无菌处理；c. 检查抑菌剂的质量和有效期。
2. 培养常见细菌：a. 在无菌操作台上，用移液器将待培养的细菌悬浮液滴在琼脂平板上，轻轻摇动平板使细菌均匀分布；b. 将平板培养基倾斜固化，然后在恒温培养箱中培养一定时间。
3. 观察和识别微生物：a. 借助显微镜观察培养好的细菌样本，记录下其形态特征、生长方式和颜色等细节；b. 根据已有的微生物形态特征图谱对菌落进行初步鉴定，并与其他组员进行交流和讨论；c. 制作菌液鉴别板，通过不同的培养基和抑菌剂来进一步鉴定细菌的种类。
四、实验注意事项：1. 实验过程中要注意无菌操作，严格保持培养器材的无菌性；2. 实验完毕后要及时清洗和消毒相关实验器材，做到彻底无菌；3. 在观察和识别微生物过程中要细心观察，记录准确的特征和数据；4. 实验结束后将菌液鉴别板焚烧处理，防止细菌外泄。
五、实验结果和讨论：学生们完成实验后应整理实验结果和观察数据，进行实验结果的分析和讨论。
可以对不同微生物的形态特征和培养条件进行比较，总结不同细菌的培养特点和识别方法。
通过实验结果的讨论，可以培养学生的科学思维能力和实验数据分析能力。
结论：本实验通过培养和观察微生物，让学生了解了微生物的基本特征和培养方法，提高了学生的实验操作能力和科学思维能力。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
微生物学实验指导长春理工大学生命科学院生物工程系微生物学实验指导书一、课程教学与实验教学计划学时比 48/48二、适用专业生物工程与生物技术专业三、实验的目的与基本要求微生物学实验课程是微生物学理论课程的补充和深化微生物学实验课程是微生物学理论课程的补充和深化，，以实践环节为主,围绕技术围绕技术、、综合和创新三个要素设计课程内容三个要素设计课程内容，，由附属于理论课的直观验证为主向着相对独立并以技术和技能为主由附属于理论课的直观验证为主向着相对独立并以技术和技能为主、、具有逐渐完善的学生考核体系的实验技术方向发展逐渐完善的学生考核体系的实验技术方向发展，，同时注重对学生综合运用技术的能力和创新能力的培养培养。
通过微生物学实验教学通过微生物学实验教学，，使学生掌握微生物学的使学生掌握微生物学的常规实验技术常规实验技术常规实验技术，，掌握规范的无菌操作技术要领掌握规范的无菌操作技术要领。
并在此基础上通过综合创新性实验设计的锻炼使学生达到对理论与各项实验技术的灵活运用并在此基础上通过综合创新性实验设计的锻炼使学生达到对理论与各项实验技术的灵活运用，，初步的培养学生思考问题和独立解决实际问题的能力的培养学生思考问题和独立解决实际问题的能力。
实验一 培养基的制备培养基的制备、、灭菌与消毒1Ⅰ.牛肉膏蛋白胨培养基的制备1（一） 实验目的要求实验目的要求1.明确培养基的配制原理。
2．通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（二） 基本原理基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基，由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl 提供无机盐。
（三）实验设备实验设备1．溶液或试剂 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1 mol/L NaOH， 1 mol／L HCl。
2．仪器或其他用具 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH 试纸(pH 5．5—9．0)，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
（（四）操作步骤操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏，蛋白胨、NaCl 放人烧杯中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒人烧杯．也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片．蛋白胨很易吸湿蛋白胨很易吸湿蛋白胨很易吸湿，，在称取时动作要迅速在称取时动作要迅速．．另外另外，，称药晶时严防药晶混杂称药晶时严防药晶混杂，，一把牛角匙用于一种药晶药晶，，或称取一种药晶后或称取一种药晶后，，洗净洗净．．擦干擦干，，再称取另一药晶再称取另一药晶．．瓶盖也不要盖错瓶盖也不要盖错．．2．溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解(图V—1)．将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分．在制备用三角瓶盛固体培养基时般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1．5％一2．0％的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间． 在琼脂溶化过程中在琼脂溶化过程中在琼脂溶化过程中，，应控制火力应控制火力，，以免培养基因沸腾而溢出容器以免培养基因沸腾而溢出容器．．同时同时，，需不断搅拌需不断搅拌，，以防琼脂糊底烧焦脂糊底烧焦．．配制培养基时配制培养基时，，不可用铜或铁锅加热溶化不可用铜或铁锅加热溶化，，以免离子进入培养基中以免离子进入培养基中，，影响细菌生长影响细菌生长．．3．调PH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1 mol/LNaOH边加边搅拌，井随时用pH试纸测其pH，直至pH达7．6．反之，用1mol/LHCL进行调节．对于有些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)． pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度．配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固．因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整PH．4．过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察．一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去(本实验勿需过滤)．5．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内．分装装置见图V—2．(1)液体分装 分装高度以试管高度的1／4左右为宜．分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确．(2)固体分装 分装试管，其装量不超过管高的1／5，灭菌后制成斜面．分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜．(3)半固体分装 试管一般以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝．分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染．6．加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)．7．包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞其外再用一道麻绳扎好．用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期．三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期．（有条件的实验室，可用市售的铝箔代替牛皮纸，省去用绳扎，而且效果好．)8．灭菌将上述培养基以0．103 MPa,121℃，20 nllrl高压蒸气灭菌．9．搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜(图V—3)．10．无菌检查将灭菌培养基放人37℃的温室中培养24—48h，以检查灭菌是否彻底．Ⅰ号培养基的制备2Ⅱ. 高氏高氏Ⅰ实验目的要求（一）实验目的要求通过对高氏1号培养基的配制，掌握配制合成培养基的一般方法。
基本原理（二）基本原理高氏Ⅰ号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。
如果加入适量的抗菌药物(如各种抗生素、酚等)，则可用来分离各种放线菌。
此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。
此外，合成培养基有的还要补加微量元素。
实验设备（三）实验设备1．溶液或试剂 可溶性淀粉，KNO3，NaCI，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，琼脂，1 mol／L NaOH,1 mol／L HCl．2．仪器或其他用具 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH 试纸(pH 5．5—9．0)，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳或橡皮筋，纱布等． （（四）操作步骤操作步骤1．称量和溶化按配方先称取可溶性溶粉、放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化．然后再称取其他各成分依次逐一溶化．对微量成分FeSO4，·7H2O 可先配成高浓度的贮备液按比例换算后再加入，方法是先在100ml 水中加入1g 的FeSO4·7H2O 配成0．01g／ml，再在1 000m1培养基中加1ml 的0．01g／ml 的贮备液即可．待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积．如要配制固体培养基，其溶化过程同前实验．2．pH 调节、分装，包扎、灭菌及无菌检查同前实验Ⅲ. 马丁氏培养基的制备2（一）实验目的要求实验目的要求通过对分离真菌的马丁氏(Nartin)培养基配制、掌握选择培养基的配制方法，并明确选择的原理。
（二）基本原理基本原理马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。
这种培养基的特点是培养基中加入的孟加拉红和链霉素能有效的抑制细菌和放线菌的生长，而对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。
（（三）实验设备实验设备1．溶液或试剂 KH2PO4，MgSO4·7H2O，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，孟加拉红(1％的水溶液)，链霉素(1％水溶液)。
2．仪器或其他用具 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅等。
（（四）操作步骤操作步骤1．称量和溶化按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中．将各成分完全溶化后，补足水分到所需体积．再将孟加拉红配成1％的溶液，在1 000ml 培养基中加人1％的孟加拉红溶液3．3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化(方法同前实验)。
2．分装，加塞、包扎、灭菌、无菌检查与前实验相同。
3．链霉素的加入。
将链霉素配成1％的溶液，在100ml 培养基中加l％链霉素液0．3ml，使每毫升培养基中含链霉素30 ug。
由于链霉素受热容易分解由于链霉素受热容易分解，，所以临用时所以临用时，，将培养基溶化后待温度降至45~5045~50℃℃时才能加入时才能加入。
Ⅳ.血液琼脂培养基的制备（一）实验目的实验目的掌握血液琼脂培养基的制备方法，明确血液培养基的用途。
（二）基本原理基本原理（三）实验设备实验设备1．培养基 牛肉膏蛋白胨培养基。
2．仪器或其他用具 装有5—10粒玻璃珠的无菌三角瓶，无菌注射器，无血平皿等。
3.动物 健康的兔或羊。
（四）操作步骤1．牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的制备(见实验十六)。
2．无菌脱纤维兔血(或羊血)的制备。
用配备18号针头的注射器以无菌操作抽取全血(无菌采血操作见实验五十四)，并立即注入装有无菌玻璃珠(约3mm)的无菌三角瓶中，然后摇动三角瓶10min 左右，形成的纤维蛋白块会沉淀在玻璃珠上，把含血细胞和血清的上清液倾人无菌容器即得到脱纤维兔血(或羊血)，置冰箱备用。
整个过程必须严格无菌操作整个过程必须严格无菌操作；；制备脱纤维血液时制备脱纤维血液时，，应摇动足够时间以防凝固应摇动足够时间以防凝固。
3．将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化，待冷至45℃一50℃时，以无菌操作按10%，加入无菌脱纤维兔血(或羊血)于培养基中，立即摇荡，以便血液和培养基充分混匀。