实验三十四增强免疫力功能试验
探究产品免疫增强免疫实验(从淋巴细胞数目及活性角度)
× 100%
细胞活力检测：
（死细胞被台盼蓝染成蓝色，活细胞不着色）
谢谢观赏
小心将上述血液加在分离液面之上。 • 平衡，2000转／分; 20分钟。 • 用滴管直接插入PBMC，吸取PBMC 。 • 在PBMC中加入5mlPBS液，充分混匀。 • 1000转／分; 10分钟.弃去上清液，即获得纯PBMC。 • 加PBS液到终体积为1m1，混匀。
实验步骤
• 取上述提取的PBMC溶液1滴+台盼蓝1滴，混匀， 染色5-10分钟。
免疫细胞分离一般原理
➢ 种类、密度、内容物不同 ➢ 表面标志(如分化抗原) ➢ 生物学特性和其它活性：吞噬、粘附
密度梯度离心法的原理
• 根据各类血细胞的比重不同，采用分层液提取 淋巴细胞。PBMC与血液中的其他成分存在密度 差异。
• 利用密度在1.077±0.001g/L之间而且近于等 渗的淋巴细胞分层液作密度梯度离心时，各 种血液成分按密度梯度重新分布聚集。
红细胞
Hale Waihona Puke 1.093外粒细胞
周
血
单个核细胞
(PBMC)
淋巴细胞 单核细胞
1.092 1.075
血小板
1.030~1.035
Ficoll：1.077±0.001
1、血浆和血小板密度较低，故悬浮于分层液上部， 2、红细胞和粒细胞密度较大，故沉于分层液底部， 3、PBMC密度稍低于分层液，故位于分层液层面上， 这样就可以获得PBMC。
• 取上述提取的PBMC溶液1滴+3滴PBS，混匀 • 细胞计数板：上部分：加入为染色细胞
下部分：加入染色细胞
数上不数下，数左不数右。
计算方法
细胞计数板上半部分结果用于计算细胞密度： （4大格细胞数之和/4）×104×稀释倍数
大学生免疫实验报告范文
大学生免疫实验报告范文实验目的本次实验的目的是了解和研究大学生免疫系统的功能和特点。
通过分析大学生的免疫能力，有助于提高我们的健康意识和掌握自身免疫系统的保护机制。
实验材料和方法实验材料- 大学生志愿者- 免疫分析仪器- 免疫实验试剂盒实验方法1. 采集志愿者的血液样本。
2. 提取血液中的白细胞进行免疫分析。
3. 使用免疫分析仪器对样本中的免疫细胞数量和活性进行检测。
4. 根据实验结果分析大学生免疫系统的状态和免疫能力。
实验结果经过对志愿者血液样本的免疫分析，我们得到了以下结果：1. 白细胞数量：与正常数值相比，大学生的白细胞数量整体偏低，但仍处于正常范围内。
2. 免疫细胞活性：大学生的免疫细胞活性相对较高，表明其免疫系统对外界侵袭具有较好的响应能力。
3. 免疫抗体水平：志愿者的免疫抗体水平相对偏低，可能是由于日常生活中的不良生活习惯或营养不均衡所致。
实验分析与讨论通过对大学生免疫系统的实验分析，我们可以得出以下结论：1. 大学生免疫系统相对脆弱：大学生处于高强度的学习和生活压力之下，缺乏充足的休息和锻炼，容易导致免疫系统的不稳定，降低身体的抵抗力。
2. 免疫系统活性受到积极影响：尽管大学生面临许多应激因素，但他们的免疫细胞活性较高，可能与年轻人的新陈代谢活跃有关。
3. 不良生活习惯可能影响免疫系统：不规律的作息时间、饮食不平衡以及缺乏运动等不良生活习惯可能导致大学生免疫抗体水平相对较低，容易受到感染和疾病侵袭。
实验结论通过本次实验的研究和分析，得出以下结论：1. 大学生免疫系统整体较为脆弱，需要更加注重健康管理和保护自身的免疫系统。
2. 充足的休息、良好的饮食和适量的运动对大学生的免疫系统具有积极的影响。
3. 需要加强大学生对免疫系统的认识和健康教育，培养良好的生活习惯和健康意识。
参考文献- [免疫学基础教程](- [大学生免疫系统调查研究](。
实验三十四增强免疫力功能试验
实验三十四增强免疫力功能试验一、实验目的与要求1 熟悉动物实验的操作技术与要求；2 掌握保健食品增强免疫力功能检验与评价的方法。
二、实验原理1 免疫力是人体免疫系统进行自我保护的一种能力，主要的作用之一是指身体抵抗细菌或病毒等感染的能力。
健全的免疫系统主要有三大功能：（1）防御功能——保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒以及避免发生疾病；（2）稳定清洁功能——不断清除衰老死亡的细胞，保持体内的净化更新；（3）监控功能——及时识别和清除染色体畸变或基因突变的细胞，防止肿瘤和癌变的发生。
2 机体的免疫力功能包括细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性4个方面，通过检测动物实验后免疫系统的变化来判断样品是否具有增强免疫力的功能。
三、实验仪器与试剂1 仪器（1） 200目筛网；（2） 24孔培养板；（3） 96孔培养板（平底）；（4）玻片架；（5）微量血凝实验板；（6）血色素吸管；（7）手术器械；（8）打孔器；（9）计时器；（10）二氧化碳培养箱；（11）超净工作台；（12）恒温水浴；（13）离心机；（14）酶标仪；（15） 721型分光光度计；（16）显微镜。
2 试剂（1）生理盐水；（2）丙酮；（3）甲醇；（4）盐酸；（5）异丙醇；（6） DNFB；（7）麻油；（8）硫化钡；（9） Na2CO3；（10） RPMI1640细胞培养液；（11）小牛血清；（12） 2巯基乙醇（2ME）；（13）青霉素；（14）链霉素；（15）刀豆蛋白A（ConA）；（16） Hank s液；（17） PBS缓冲液（pH7.2~7.4）；（18） SA缓冲液；（19）琼脂糖；（20）印度墨汁；（21） SRBC；（22）鸡红细胞；（23） YAC1细胞；（24）补体（豚鼠血清）；（25） MTT；（26） Giemsa染液；（27）乳酸锂或乳酸钠；（28）硝基氯化四氮唑（INT）；（29）吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）；（30） NAD；（31） 0.2mol/L的TrisHCl缓冲液（pH8.2）；（32） 1%NP40或2.5%Triton。
增强免疫力功能试验
免疫学实验 多抗制备2-加强免疫
初次应答（primary response) ：
1. 是抗原第一次进入机体时引起的应答。 2. 特点：
①潜伏期长（1～2周） ②主要产生低亲和力的IgM类抗体 ③抗体浓度低 ④维持时间较短
再次应答（secondary response) ：
1. 是机体再次接触相同抗原时的应答。 2. 特点：
①潜伏期短，约为初次应答的一半。 ②主要产生高亲和力的IgG类抗体 ③抗体浓度高 ④维持时间长
实验四 多抗制备（加强免疫1）
第一部分 多抗制备（加强免疫1）
一、实验目的 1.掌握多克隆抗体的应答特点。 2.理解加强免疫的作用和必要性。
二、实验原理
1. 抗体产生的一般规律 体液免疫应答过程中，B细胞对抗原刺激的应答可 分为两种不同的情况，即在初次接受抗原刺激时， 机体发生初次应答（primary response) ；再次接 受相同抗原刺激，机体产生再次应答（secondary response)或称回忆应答（anamnestic response) 。
2.加强免疫的作用和必要性：
再次答，增加抗体量，增强抗体的亲和 力。
三、材料和试剂
• 试剂：伤寒杆菌O抗原应用液 • 材料：注射器、消毒棉球
四、实验方法
对基础免疫的同一只兔子进行加强免疫， 方法同基础免疫。即用注射器取伤寒杆菌O 抗原应用液1.5ml做静脉注射。
增强免疫力功能试验
增强免疫力功能试验一、实验目的与要求1熟悉动物实验的操作技术与要求；2掌握保健食品增强免疫力功能检验与评价的方法。
二、实验原理1免疫力是人体免疫系统进行自我保护的一种能力，主要的作用之一是指身体抵抗细菌或病毒等感染的能力。
健全的免疫系统主要有三大功能：1)防御功能——保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒以及避免发生疾病；2)稳定清洁功能——不断清除衰老死亡的细胞，保持体内的净化更新；3)监控功能——及时识别和清除染色体畸变或基因突变的细胞，防止肿瘤和癌变的发生。
2机体的免疫力功能包括细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性4个方面，通过检测动物实验后免疫系统的变化来判断样品是否具有增强免疫力的功能。
三、实验仪器与试剂仪器试剂（1）200目筛网（2）24孔培养板（3）96孔培养板（平底）（4）玻片架（5）微量血凝实验板（6）血色素吸管（7）手术器械（8）打孔器（9）计时器（10）二氧化碳培养箱（11）超净工作台（12）恒温水浴（13）离心机（14）酶标仪（15）721型分光光度计（16）显微镜（1）生理盐水（2）丙酮（3）甲醇（4）盐酸（5）异丙醇都氏试剂（碳酸氢钠 1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000mL）（9）Na2CO3（10）RPMI1640培养液（11）小牛血清（12）2巯基乙醇（2ME）（13）青霉素（14）链霉素（15）刀豆蛋白A（ConA）（16）Hank’s液（17）PBS缓冲液（pH7.2~7.4）（18）SA缓冲液（19）琼脂糖（20）印度墨汁（21）SRBC（22）鸡红细胞（23）Y AC-1细胞（24）补体（豚鼠血清）（25）MTT（26）Giemsa染液；（27）乳酸锂或乳酸钠；（28）硝基氯化四氮唑（INT）（29）吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）（30）NAD（31）0.2mol/L的TrisHCl缓冲液（pH8.2）（32）1%NP40或2.5%Triton四、实验方法与步骤1样品处理与给予方式（1）对于水溶性样品，用蒸馏水配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物；对于脂溶性样品，用调和油配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物。
有助于维持健康机体免疫力功能人体试食试验方法
有助于维持健康机体免疫力功能人体试食试验方法1. 目的和范围规定了增强免疫力保健功能人体试食试验方法。
2. 实验前准备2.1产品企业提供资料产品企业标准和起草说明、生产工艺、产品配方及依据、产品标签说明书、产品研发报告。
卫生学检验报告、理化检验报告、毒理学安全性评价报告、动物实验报告。
2.2试验评价方成立工作小组（项目实施方与三甲医院的有关人员），拟定试验方案和进度及试验所需的有关表格（如一般健康情况调查表、膳食调查表、依从性记录表、化验结果报告单），并请有关专家论证，并获伦理道德委员会批准。
2.3 知情同意书的签订2.4 应急处理措施开始试用前要根据受试样品性质，估计试用后可能产生的反应，并提出相应的处理措施。
2.5 试验前的体检2.5.1受试者主观感觉、进食情况、生理指标（血压、心率等症状和体征）、血常规、血生化（转氨酶、血清总蛋白、白蛋白、尿素、肌酐、血脂、血糖等）、物理性检查（胸透、心电图、腹部B超检查）受试者的体力和精神等。
2.5.2 进食情况饮食习惯(规律性、纤维素类食物摄入量等)。
2.5.3 生理指标血压、心率等症状和体征。
2.5.4血液常规检查血红蛋白、血中红细胞计数、白细胞计数，必要时做白细胞分类。
2.5.5 血生化指标转氨酶、血清总蛋白、白蛋白、尿素、肌酐、血脂、血糖等。
2.5.6 物理性检查胸透、心电图、腹部B超检查。
2.5.7 功效性指标2.5.7.1主观指标（参照下文免疫相关健康评分表）2.5.7.2客观指标（选做）3. 受试对象3.1受试者纳入标准3.1.1年龄45-69周岁3.1.1经常感到疲劳3.1.1经常感冒3.1.1伤口容易感染3.1.1胃肠免疫力下降3.1.1精神不振，易昏睡3.1.2 如样品中含有活性益生菌，一个月内未服用过抗生素者3.2 受试者排除标准3.2.1不能经口进食或不能按规定服用该保健食品者3.2.2年龄在70岁以上者，妊娠或哺乳期妇女。
对该保健食品不耐受或过敏者3.2.3主诉不清者3.2.4严重职业病等重症患者3.2.5合并心、脑、肝、肾和造血系统等严重疾病及精神病患者3.2.6未按规定服用该保健食品者，资料不全影响疗效或安全性判断者3.2.7短期内服用与该保健食品作用有关的食物或药物，影响结果判断4试验设计及分组要求采用自身对照设计。
高考生物总复习 基础知识 314 免疫调节 实验 免疫功能相关实验探究 新人教版必修3
实验免疫功能相关实验探究[要点突破]1．免疫功能的实验研究方法(1)证明胸腺与特异性免疫的关系：切除小鼠的胸腺，细胞免疫全丧失，同时由于失去了T 细胞产生淋巴因子的作用，从而使得体液免疫能力也大大降低。
(2)器官移植：同一个体中不存在免疫排斥，不同个体之间存在免疫排斥。
(3)证明抗体具有专一性①对实验动物(大小、年龄、生长状况相同)同时注射某流感疫苗；②一段时间后，再分别注射不同种的流感病毒，观察其患病情况。
(4)证明血清抗体有治疗作用(以抗破伤风疾病为例)①从破伤风患者体内获取血清；②选取各方面相同的小鼠等量分成a、b两组；③a组注射血清后再注射破伤风毒素，b组只注射破伤风毒素；④观察两组小鼠生活状况。
2．免疫系统的组成、功能实验探究举例为了研究免疫系统的组成和免疫细胞的起源、分化和作用，科学家们做了大量的卓有成效的实验，举例如下：[典例透析]【典例】(2012·全国)回答下列问题。
(1)大多数病毒进入人体内经过__________细胞的摄取和处理，使抗原决定簇暴露于抗原的表面，并将抗原呈递给________细胞，刺激其分泌__________。
(2)人体接种甲型H1N1流感疫苗后，一段时间内当甲型H1N1流感病毒侵染机体时，不易患病，其主要原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________。
(3)一种病毒含有________(填“1种”或“2种”)核酸。
(4)某研究生认为某植物的提取液对甲型H 1N 1流感病毒有抑制作用，他以猪为研究材料设计了下面的实验进行证明。
实验步骤：①选择一只健康的猪，让猪感染甲型H 1N 1流感病毒。
②在喂养猪的饲料中加入一定量的该植物提取液，观察猪是否出现患病症状。
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实验三十四增强免疫力功能试验一、实验目的与要求1 熟悉动物实验的操作技术与要求；2 掌握保健食品增强免疫力功能检验与评价的方法。
二、实验原理1 免疫力是人体免疫系统进行自我保护的一种能力，主要的作用之一是指身体抵抗细菌或病毒等感染的能力。
健全的免疫系统主要有三大功能：（1）防御功能——保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒以及避免发生疾病；（2）稳定清洁功能——不断清除衰老死亡的细胞，保持体内的净化更新；（3）监控功能——及时识别和清除染色体畸变或基因突变的细胞，防止肿瘤和癌变的发生。
2 机体的免疫力功能包括细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性4个方面，通过检测动物实验后免疫系统的变化来判断样品是否具有增强免疫力的功能。
三、实验仪器与试剂1 仪器（1） 200目筛网；（2） 24孔培养板；（3） 96孔培养板（平底）；（4）玻片架；（5）微量血凝实验板；（6）血色素吸管；（7）手术器械；（8）打孔器；（9）计时器；（10）二氧化碳培养箱；（11）超净工作台；（12）恒温水浴；（13）离心机；（14）酶标仪；（15） 721型分光光度计；（16）显微镜。
2 试剂（1）生理盐水；（2）丙酮；（3）甲醇；（4）盐酸；（5）异丙醇；（6） DNFB；（7）麻油；（8）硫化钡；（9） Na2CO3；（10） RPMI1640细胞培养液；（11）小牛血清；（12） 2巯基乙醇（2ME）；（13）青霉素；（14）链霉素；（15）刀豆蛋白A（ConA）；（16） Hank s液；（17） PBS缓冲液（pH7.2~7.4）；（18） SA缓冲液；（19）琼脂糖；（20）印度墨汁；（21） SRBC；（22）鸡红细胞；（23） YAC1细胞；（24）补体（豚鼠血清）；（25） MTT；（26） Giemsa染液；（27）乳酸锂或乳酸钠；（28）硝基氯化四氮唑（INT）；（29）吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）；（30） NAD；（31） 0.2mol/L的TrisHCl缓冲液（pH8.2）；（32） 1%NP40或2.5%Triton。
四、实验方法与步骤1 样品处理与给予方式（1）对于水溶性样品，用蒸馏水配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物；对于脂溶性样品，用调和油配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物。
（2）受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、加入饮水或掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品中的非功效成分的含量。
（3）对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。
如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量。
如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。
调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。
（4）液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。
一般可选择60~70℃减压进行浓缩。
浓缩的倍数依具体实验要求而定。
（5）对于以冲泡形式饮用的受试样品（如袋泡剂），可使用该受试样品的水提取物进行功能实验，提取的方式应与产品推荐饮用的方式相同。
如产品无特殊推荐饮用方式，则采用下述提取的条件：常压，温度80~90℃，时间30~60min，水量为受试样品体积的10倍以上，提取2次，将其合并浓缩至所需浓度。
（6）必须经口给予受试样品，首选灌胃。
如无法灌胃则加入饮水或掺入饲料中，计算受试样品的给予量。
（7）以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。
2 动物实验（1）动物选择：推荐用近交系小鼠，20g±2g，单一性别，每组10~15只。
（2）剂量分组：实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设阳性对照组。
（3）样品给予时间：所有试验动物均食用全价营养配合饲料，动物自由摄食、摄水。
给予受试物的灌胃体积为20ml/（kg·Bw）。
受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天，免疫模型动物实验可适当延长。
3 指标检测（1） ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）①试剂配制a 完全培养液： RPMI1640培养液过滤除菌，用前加入10%小牛血清，1%谷氨酰胺（200mmol/L），青霉素（100U/ml），链霉素（100μg/L）及5×10-5mol/L的2巯基乙醇，用无菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH调pH至7.0~7.2，即完全培养液。
b ConA液：用双蒸水配制成100μg/ml的溶液，过滤除菌，在低温冰箱（-20℃）中保存。
c 无菌Hank s液：用前以3.5%的无菌NaHCO3调pH7.2~7.4。
d MTT液：将5mg MTT溶于1ml pH7.2的PBS中，现配现用。
e 酸性异丙醇溶液： 96ml异丙醇中加入4ml 1mol/L的HCl，临用前配制。
②脾细胞悬液制备：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank s液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。
经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，用Hank s液洗2次，每次离心10min（1000r/min）。
然后将细胞悬浮于1ml完全培养液中，用台酚蓝染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为3×106个/ml。
③淋巴细胞增殖反应：将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μl ConA 液（相当于7.5μg/ml），另一孔作为对照，置5% CO2，37℃ CO2孵箱中培养72h。
培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，继续培养4h。
培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。
然后分装到96孔培养板中，每个孔分装3~6孔作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。
也可将溶解液直接移入2ml比色杯中，721型分光光度计上在波长570nm测定OD值。
（2）二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应（耳肿胀法）① DNFB溶液的配制： DNFB溶液应新鲜配制，称取DNFB 50mg，置清洁干燥小瓶中，将预先配好的5ml丙酮麻油溶液（丙酮∶麻油=1∶1）倒入小瓶，盖好瓶塞并用胶布密封。
混匀后，用250μl注射器通过瓶盖取用。
②致敏：每鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛，范围约3cm×3cm、用DNFB溶液50μl均匀涂抹致敏。
③ DTH的产生与测定： 5天后，用DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击。
攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳。
用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。
（3）抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）① SRBC：绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。
②制备补体：采集豚鼠血，分离出血清（至少5只豚鼠的混合血清），将1ml压积SRBC 加入5ml豚鼠血清中，4℃冰箱放置30min，经常振荡，离心取上清，分装，-70℃保存。
用时以SA液按1∶8~15稀释。
③玻片涂膜：在清洁玻片上刷上一薄层琼脂糖（0.5g琼脂糖加双蒸水至100ml，加热溶解），待干后放片盒可长期保存备用。
④免疫动物：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心（2000r/min）10min，计数细胞，每只鼠经腹腔或静脉注射SRBC 5×107~2×108个。
也可将压积SRBC用生理盐水配成2%（V/V）的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml。
⑤脾细胞悬液制备：将SRBC免疫4~5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有Hanks液的小平皿内，轻轻撕碎脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，离心（1000r/min）10min，用Hank s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5ml RPMI1640培养液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×106个/ml。
也可将细胞悬浮在8ml Hank s液，测定脾空斑形成数。
⑥空斑的测定：将表层培养基（1g琼脂糖加双蒸水至100ml）加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2~7.4、2倍浓度的Hank s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 10%SRBC（V/V，用SA液配制），20μl脾细胞悬液（5×106个/ml）或25μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1~1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体（1∶8）加到玻片架凹槽内，继续温育1~1.5h后，计数溶血空斑数。
（4）血清溶血素的测定（血凝法）① SRBC：绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。
②免疫动物及血清分离：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心（2000r/min）10min。
将压积SRBC用生理盐水配成2%（V/V）的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫。
4~5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。
③凝集反应：用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔100μl，再加入100μl 0.5%（V/V）的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。
血清凝集程度一般分为5级（0~Ⅳ）记录，按下式计算抗体积数，受试样品组的抗体积数显著高于对照组的抗体水平，可判定该项实验结果阳性。
抗体水平＝（S1+2S2+3S3…+nSn）式中1、2、3…n代表对倍稀释的指数，S代表凝集程度的级别，抗体积数越大，表示血清抗体越高。
0级：红细胞全部下沉，集中在孔底部形成致密的圆点状，四周液体清晰。
Ⅰ级：红细胞大部分沉积在孔底成圆点状，四周有少量凝集的红细胞。
Ⅱ级：凝集的红细胞在孔底形成薄层，中心可以明显见到一个疏松的红点。
Ⅲ级：凝集的红细胞均匀地铺散在孔底成一薄层，中心隐约可见一个小红点。
Ⅳ级：凝集的红细胞均匀地铺散在孔底成一薄层，凝块有时成卷折状。
（5）小鼠碳廓清实验①溶液配制a 注射用墨汁：将印度墨汁原液用生理盐水稀释3~4倍。
b Na2CO3溶液取0.1g Na2CO3，加蒸馏水至100ml。
②注射墨汁：称体重，从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁，按每10g体重0.1ml计算。
待墨汁注入，立即计时。
③测定：注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到2ml 0.1% Na2CO3溶液中。