结核病实验室检测新诊断技术2011.4.16
耐药检测基因芯片
基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通 过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断 特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。 结核分枝杆菌耐药检测基因芯片基于rpoB/katG/inhA的基 因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性 （利福平、异烟肼）。
与PCR比较
高
无差异
灵敏度
特异度
211例利福平耐药
99.10%
506例利福平敏感
100%
讨论
该检测方法适用于低收入国家精确诊断肺 结核并能够进行福平耐药筛选的快速检测 方法。 以培养方法作金标准，该方法可以检测出 97%以上的肺结核患者，包括90%的涂阴病 人。 南非有60%-80%的人感染HIV，鉴于合并 HIV+TB阳性出率较低，尤其HIV+TB-， MTB/RIF有较高的检出率。
结核病实验室检测 新诊断技术介绍
省结核病参比实验室 杨丹丹
发光二极管荧光显微镜（LED）方法 液基夹层杯技术 线性探针耐多药检测技术（HAIN） 基因芯片耐多药检测技术（GENECHIP） TB和利福平耐药快速分子鉴定（X-Pert）
一、发光二极管荧光显微镜（LED） 方法
适用范围：痰涂片镜检 所需试剂/仪器： LED显微镜、荧光染色液 中盖项目：淮安市（淮阴区、楚州区） 原理：
Kat基因、inhA基因突变位点有：2个、4个
正确流程
痰液前处理
MIX制备
DNA提取
PCR
杂交
操作步骤
一、痰标本处理 去污染前处理液：氢氧化钠+柠檬酸三钠+N-乙 酰半胱氨酸。 痰标本+等体积去污染前处理液：振荡-离心-静 置-PBS清洗-离心-留取沉淀。 二、DNA提取 处理后痰标本沉淀 ： 95°C孵育-超声裂解-取 上清液用于PCR扩增。 三、扩增产物杂交 PCR产物变性，与探针试条上的标记突变位点杂 交，标记物显色。
适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、TB菌种鉴定。 3、利福平和异烟肼耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。
基因芯片
将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚 丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二 维分子排列。 采用光导原位合成或微量点样等方法。 然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。 通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机 （CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测 分析，从而判断样品中靶分子的数量。 ，
rpoB基因突变位点：13个位点。 katG基因突变位点：2个位点。 /inhA基因突变位点：2个突变位点。
耐药分子诊断的基本原理
操作较复杂。 特异度与灵敏度不高。 基因芯片耐多药检测试剂已获得欧盟体外 诊断试剂证书（CE-IVD）。 中国药品食品监督管理局的医疗器械证书。 可以作为临床耐药结核病临床诊断和治疗 的依据。
MTB/RIF缺ห้องสมุดไป่ตู้：
基层实验室人员培训、温度控制、电力保障、是 否到位。
但是每年一次的仪器校准对于基层实验室是个挑 战，不过已经大量开展能否在基层实验室应用的 验证了。 技术尖端，生产费用较高。尽管基金会试图通过 谈判降低价格和低检测费用，但仍会比显微镜价 格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。
讨论
MTB/RIF优点：简单、安全 标本处理简单，操作方便，检测全自动，2 小时内出结果，机器判读，结果精确，减 少核酸污染。 该检测方法产生的气溶胶无传染性。 对实验室生物安全级别要求较低，可以在 基层开展（从生物安全要求出发），由于 较快速，可以减少诊断延迟，检测更多标 本。
讨论
五、结核和利福平耐药的快速分子 鉴定（x-pert）
适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、利福平耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。 可以在2小时出报告结果。
实验室方法
痰标本的前处理：同前方法。 试剂加入去污处理的痰标本中。 室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然 后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相 当于0.7ml未处理痰液或0.5ml已去污处理的痰 液)，检测盒放入检测平台。 MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。
四、结果判读
试剂质控 位点质控
HAIN和目前常规药敏方法比较
比较项目 时间 生物安全级别要求 人员培训 操作简易程度 仪器设备 HAIN 1-2天 较低 2-3天 简单 性价比较高 常规药敏方法 2-3个月 二级实验室 2-3个月 复杂 --
对环境洁净度要求
较高，易出现 假阳性
较高
四、GENECHIP基因芯片耐多药 检测技术
灵敏度 培阳 涂阳培阳 涂阴培阳 检测一份标本 检测两份标本 检测三份标本 检测HIV合并感染 97.60% 99.80% 90.20% 72.50% 85.10% 90.20% 93.90%
特异度 99.20% 98.60% 98.10% -
检测HIVTB 与HAIN比较
98.40% 无差异
无差异
重大专项：泰兴、江阴地区部分实验结果比较
阳性检出率 标本及性状 754份痰标本 脓性痰 非脓性痰 即时痰 夜间痰 液基法 23.50% 47.50% 13.50% 20.48% 25.6% 直涂法 16.80% 40.90% 4.66% 15.06% 17.01%
三、线性探针耐多药检测方法（HAIN）
发光二极管荧光显微镜（LED）
镜下视野
发光二极管荧光显微镜（LED）
不需要加热玻片，步骤简单 视野比普通的显微镜大大2-4倍
• 对数目少的不必使用镜油
• 节省人力时间，时间为普通的 1/4 每天可检查至少 60 个涂
片
• 可帮助早期诊断肺结核 – 即使菌浓度较低 • 杆菌也有很高的灵敏度，与 ZN 相比阳性发现率平均增加
适用范围：痰涂片镜检 十一五国家重大科技专项：泰兴、江阴 厂家：湖南天骑公司 原理：集菌法
流程图 痰标本消化灭活 基片的夹层杯 离心 细菌附着在基片 在夹层杯中 直接染色 取出基片 于载玻片上 镜检 自动阅片计算机报告系统。
所需仪器设备：普通的抗酸染色液、彭氏杯 （专利）、涂片机、KP21型快速干片机、抗 酸杆菌自动阅片计算机报告系统。
适用范围： 1、TB的诊断 2、一线抗结核药物耐药诊断 3、二线抗结核药物耐药的诊断 4、目前，利福平（rpoB基因） 、异烟肼（Kat基 因、inhA基因）耐药的诊断
所需仪器设备：生安柜、超声振荡仪、PCR扩增 仪、可调温振荡仪
原理：基于分子生物学扩增技术。 rpoB基因突变位点有：4个
10%
不需要空调设施 不需要暗室 诊断性能优于标准荧光显微镜 寿命长（~ 15-20,000小时） 荧光染色液有致癌作用，推荐自动染色机。 涂片需避光低温保存。 需加强操作人员的培训和质量控制。
• 成本低廉，价格低于现有的光学显微镜。
适合县、乡级基层实验室使用。
二、液基夹层杯技术
实验室方法
阳性培养物经MPT64抗原检测以确定其是否属于 结核分枝杆菌菌属。 L-J培养基比例法药敏 /MIGT 快速药敏法。 常规的DNA核酸扩增 hain方法检测耐药
实验室方法
试剂分别按2:1和3:1加入未经处理的痰标本 和去污处理的痰标本中。 室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次， 然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含 相当于0.7ml未处理痰液或0.5ml已去污处理 的痰液)，检测盒放入检测平台。 MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病的实验室诊断方法
结核病的实验室诊断方法结核病实验室检查主要有；涂片染色显微镜检查、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、分枝杆菌基因分型、分枝杆菌血清学及核酸扩增检测等。
细菌学检查细菌学检验结果的准确性首先取决于标本的质量。
正确地采集、转送标本，是直接影响检验结果的重要因素和取得准确结果的前提。
各种标本(痰液、血液、伤口分泌物和各种感染组织等)采集时应充分考虑到选择恰当合理的时问，考虑到可能存在的病原菌的性质，按要求采集标本，这样可使标本包含细菌，并为后续检验步骤打下良好的。
合格的痰标本在低倍镜视野里上皮细胞应<10个，白细胞数应>25个。
涂片染色显微镜检查根据我国结核病防治规划的要求，对咳嗽、咳痰>13周或有咯血或血痰的肺结核可疑症状者，应留取3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰)进行痰涂片抗酸染色检查。
即时痰为病人就诊时咳出的痰液：清晨痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前1天晚睡前咳出的痰液。
留取的痰液标本常规涂片后，进行要尔－尼尔逊氏染色法(ziehl-Neelen)染色。
分枝杆菌分离培养结核分枝杆菌是兼性需氧菌，最适生长温度为37℃，最适pH为6.5～7.2。
分枝杆菌分离培养检查法，是结核病确诊最可靠的方法。
是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验以及其他生物学研究的。
当前，我国普遍采用改良L-J(改良罗氏)培养基来分离培养结核分枝杆菌。
通常情况下，当每1ml标本中微生物含量达102～3CFU(菌落形成单位)时，即可培养阳性。
分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养仪(MIGT、BacT/A1err、ESP)，通过测定细菌生长代谢检测分枝杆菌生长情况的方法。
在进行分枝杆菌快速培养检查时，标本接种前的祛污染处理，必须严格按照系统说明书中给定的方法进行。
孵育检测过程中系统报告阳性时，相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检，发现抗酸菌后方可发出阳性报告。
分枝杆菌药物敏感性试验分枝杆菌药物敏感性试验对于结核病人合理的药物选择、合适的药物剂量以及针对耐药病人的预防控制具有积极的作用。
结核病实验室诊断技术
细胞免疫学技术：T-SPOT.TB（Oxford Immunotec公司）
新型诊断技术产品比较
企业
美国 Cepheid
方法
GeneXpert
产品特点
同时检测MTBC和判断利福平耐药； 快速；简便；安全
比利时 Innogenetics
德国 Hain Lifescience
线性探针杂交法 （INNO-LIPA）
目前诊断方法回顾
细菌学检测方法 ： 涂片、常规培养、快培 其他辅助检查方法：皮试、结核抗体
目前诊断方法的局限性
涂片的缺点： 敏感性低；
特异性差；
无法区别死菌与活菌 培养的缺点： 耗时久，一般需4~8周； 阳性率低，约30%~50%；特异性差， 无法区别MTB与NTM
皮试的缺点： 敏感性低特异性差
抗体检测缺点：敏感性低特异性差
GenoType MTBDR and MTBDRplus；INNOLiPA Rif.TB Frane; LW Scientific; Zeiss 诊断结核感染及对利福 平和异烟肼药物敏感性 诊断结核患者
自动化检测和MDR筛 选实验（2010年）
Cepheid GeneXpert
诊断结核感染及对利福 平的耐药性
总结
目前结核病的实验室诊断主要依赖于常规的结核病 实验室诊断方法，可应用的方法有限，不能满足临 床需要。 新的实验诊断技术可弥补传统方法的不足，提高诊 断的灵敏度和特异性，但各有缺点或不足，难以完 全满足临床检测需求，因此，新型结核杆菌诊断技
术及产品的研发势在必行。
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 DNA微阵列芯片法 商品 检测目的
生物结核分枝杆菌耐 诊断结核感染及对利 药基因检测试剂盒 福平和异烟肼的药物 敏感性 T-SPOT.TB; QFT 诊断结核感染
结核病实验室诊断新技术
敏 感 性 和 特 异 性 最 好 。Ｐ Ｒ检 测 较 病 理 检 查 Ｃ
３ ．％ ， 易 误 诊 为 其 它 疾 病 ， 诊 率 高 达 ３６ 极 误
维普资讯
哮 喘与肺部 疾病 杂志 ２０ ０２年 第 １～２期
应在淋 巴结结核诊 断中的应用 ） 中介绍［ ： 在 ］
７ 标 本 中 ， 病 理 诊 断 证 实 为 淋 巴结 结 核 ３例 经
者４ ７例 。 用 Ｐ Ｒ法 检 测 Ｔ Ｃ Ｂ—Ｄ Ａ 阳 性 者 Ｎ
４ ８例 ， 中 ２例 为假 阳性 （ 结 核 病 ） 另 有 １ 其 非 ； 例为 假 阴性 。 其 中 淋 巴 结 结 核 组 ３ ５例 标 本 仍 病 理诊 断 与 Ｐ Ｒ检 测 结 果 完 全 一 致 ； 诊 Ｃ 疑 淋 巴 结结 核 组 ２ ｌ例 中 病 理 诊 断 １ ２例 阳性 ，
维普资讯
哮喘与肺部疾病杂志 ２０ 年第 １ ？ ０２ 一 期
结 核 病 实 验 室诊 断 新 技 术
天津市肺科 医院 秦 超
按 照 传 统 习惯 ， 规 细 菌 学 涂 片 和 培 养 常 法 虽 阳性 率 各 异 但 临床 已将 “ 阳” 为诊 断 菌 作 病 的重 要 参 考 依 据 。但 由 于 这些 检 测 手 段 本 身 存 在 一 些 缺 点 ， 涂 片法 特 异 性 差 ， 结 核 如 非 分 支杆 菌 （ ｙ 或 其 他 细 菌 、 子 等 抗 酸 染 Ｍ（Ｉ Ｔ） 孢 色 亦 为 阳 性 ， 灵 敏 度 低 ， Ｈ 痰 液 中 含 且 每 ｌ ｌ ５０ ０ ０条 以 上 才 能 检 出 。培 养 法 虽 有 检 出 ｌ ０
Ｐ Ｒ法 检 出 １ 例 阳性 。 以上 结 果 表 明 Ｐ Ｒ Ｃ １ Ｃ
结核病实验室诊断技术PPT课件
结核病实验室诊断技术
医者人之司命，如大将提兵，必谋定而后战。
开始啦！请将手机调成静音，如有疑问可以随时打断我！
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结核病 — 全球的公共健康问题（2018报告）
全球范围内，结核病是导致死亡的十大原因之一，每年有数百万人患上结核病。2017年， HIV阴性人群中，结核病导致约157万人死亡;而且在HIV阳性人群中，也有30万人死于结核。 2017年，估计有1000万人新感染结核:中国估计有88.9万人新感染结核。
• 菌株是革兰氏阳性菌，很难被染色，有 些甚至不能被染色，细胞壁含60%脂质， 一般用萋尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法
• 棒状，无运动能力，专性需氧 • 生长缓慢 • 每16-20小时分裂一代，需4-6周才能长成
菌落。 由于结核分枝杆菌的遗传特性决定其生长
周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵 敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素 较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发 展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。
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抗原MPT-64
耐多药 泛耐药
细菌学检查
• 结核病人的细菌学检查不8 仅是发现传染源的主 要途径和手段，也是结核病确诊和制订化疗方 案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。
• 涂片法 抗酸染色 荧光染色 液基夹层杯
• 培养法 改良罗氏培养 液体培养（BD960)
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细菌学检查-涂片法
抗酸染色
总体而言，90%的结核患者是成年人(≥15岁);9%同时伴随HIV感染(其中有72%是在非洲); 三分之二的结核患者来自8个国家:印度(27%)、中国(9%)、印度尼西亚(8%)、菲律宾(6%)、 巴基斯坦(5%)、尼日利亚(4%)、孟加拉国(4%)和南非(3%)。全球病例中只有6%出现在欧洲 地区(3%)和美洲地区(3%)。
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
结核病实验室检测新诊断技术
HAIN和目前常规药敏方法比较
比较项目 时间
生物安全级别要求 人员培训
操作简易程度 仪器设备
HAIN 1-2天 较低 2-3天 简单 性价比较高
常规药敏方法 2-3个月
二级实验室 2-3个月 复杂 --
对环境洁净度要求
较高，易出现 假阳性
较高
四、GENECHIP基因芯片耐多药 检测技术
适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、TB菌种鉴定。 3、利福平和异烟肼耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。
，
耐药检测基因芯片
基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通 过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断 特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。
结核分枝杆菌耐药检测基因芯片基于rpoB/katG/inhA的基 因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性 （利福平、异烟肼）。
发光二极管荧光显微镜（LED）
镜下视野
发光二极管荧光显微镜（LED）
不需要加热玻片，步骤简单 视野比普通的显微镜大大2-4倍 • 对数目少的不必使用镜油 • 节省人力时间，时间为普通的1/4每天可检查至少60个涂
片 • 可帮助早期诊断肺结核 – 即使菌浓度较低 • 杆菌也有很高的灵敏度，与ZN相比阳性发现率平均增加
适用范围：痰涂片镜检 十一五国家重大科技专项：泰兴、江阴 厂家：湖南天骑公司 原理：集菌法
流程图
痰标本消化灭活 基片的夹层杯
离心 细菌附着在基片
在夹层杯中
直接染色 取出基片
于载玻片上
镜检 自动阅片计算机报告系统。
所需仪器设备：普通的抗酸染色液、彭氏杯 （专利）、涂片机、KP21型快速干片机、抗 酸杆菌自动阅片计算机报告系统。
结核病诊断技术
第2章实验室检验技术结核病实验室检查，特别是细菌学检查是结核病确诊和治疗的主要依据。
结核病细菌学检验主要包括4项基本技术，即涂片染色镜检、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定。
检验人员应依据临床医师检验申请要求并结合实验室的设备和技术条件，负责对标本进行检验，及时、准确地填写检验报告。
近年来，国内、外研究者在分子生物学、分子微生物学及免疫学领域建立了若干快速、敏感、特异的检测新技术，为可疑结核病患者的早期诊断与合理治疗带来了新的希望。
列入“规范”的结核杆菌临床基因扩增(PCR)检验技术、分枝杆菌快速培养及药物敏感性试验技术、免疫学检测技术，因有多种试剂盒(试剂)及分析仪器可供选择，目前尚难制定统一的技术操作规范，故暂定为辅助操作技术。
具备开展这些技术项目条件的实验室(或检验科)，须经有关主管部门批准后，严格按照相应技术所附的说明书与操作规程实施。
鉴于结核病实验室检查，特别是细菌学检查在结核病控制工作中的重要性，为保障相应检查项目结果的可靠性，要求相应的检查项目必须由经过培训并考核合格的专职人员完成，且开展相应检查的实验室应具备安全操作设施，制定实验室内部质量控制措施，同时接受专业结核病实验室的质量控制督导和培训。
第一节结核茵检验实验室安全操作规则结核病细菌学实验室必须具有与其服务级别相应的装备，其原则是能满足该级别实验室的需要，使实验室工作人员得到充分的防护，并避免造成环境污染。
1．实验室应有合理布局及合适的单向(外排)通风体系。
2．实验室应配备相应的防护设备，以保护工作人员的安全和实验工作的顺利进行。
分离培养、药物敏感性测定、菌种鉴定试验等操作应设有生物安全操作柜或接种间和通风橱等。
3．实验室工作人员应按正确方式进行技术操作，穿戴隔离衣、口罩和帽子等。
4．实验室所有带毒废弃物应灭菌及无害化处理。
5．建立清洁消毒制度，限制非工作人员进入室内，禁止在实验室饮食和吸烟等。
6．进行下列操作时应严格按照技术操作规范，防止产生细菌气溶胶：①涂片制作；②培养液的倾倒和转移；③高速混合含菌液体；④滴加、接种培养物；⑤吸管稀释和混合菌悬液；⑥取样器和振荡器的使用；⑦细菌细胞超声粉碎；⑧感染动物实验等。
肺结核诊断新技术
目前IGRA检测成本偏高，不适用于人群筛查。试验结果在一定程度上受到T 细胞水平及活性的影响，对于免疫抑制或者免疫缺陷者可能会结果不准确。虽然有资料表明对于 HIV 感染、血液病、恶性肿瘤、矽肺以及慢性肾衰者，预防性治疗 TB 潜伏感染的常用方法是 IGRA， 但对于其中严重的免疫抑制者， IGRA 的诊断价值会降低。对于中国人群来说， IGRA 并不能显示出明显超过 TST 的优势。 MTB 核酸扩增检测 (NAA) :是近年来 TB 诊断领域中最有突破的，检测手段日趋成熟。部分新型的核酸检测技术 (如分子线性探针检测) 得到了 WHO 的认可和推荐，可用于 TB 的诊断和耐药检测。理论上 NAA 敏感性很好，即使标本中只有极低拷贝数的细菌也能检出，一般 24h 之内即可取得检验结果，并且在生物安全级别上要求相对较低，还可以通过检测异烟肼和利福平的常见耐药基因位点，从而筛查出耐药 MTB。
前言
早期准确诊断是结核病 (TB) 患者得以及时治疗的关键。 目前的 TB 诊断水平仍然薄弱。据世界卫生组织 (WHO) 估算， 2012 年的 860 万新发 TB 患者中，仅登记了 570 万，还有 217.5 万 (25.3%) 未被发现 (漏诊)。 提高诊断技术则是发现患者，减少误诊、漏诊的核心。
二、生化检测
2.2 LDH 是一种糖酵解酶，几乎存在于机体所有组织细胞的胞质内。对 TB 的诊断来说， LDH 可用于区别渗出性积液与漏出性积液，胸 (腹) 腔积液 LDH 与血清 LDH 比值 ≥0.6， LDH 浓度 >200U/L 倾向渗出液。结核性胸 (腹) 腔积液的 LDH 浓度一般 >200U/L， 与癌性胸 (腹) 腔积液 LDH 浓度变化无特征性差， 存在于肺、肾、脑、小肠、胎盘等组织的血管内皮细胞或上皮细胞及血浆。对 TB 的诊断来说，血清 ACE 的检测主要用于 TB 与结节病的鉴别，后者血清 ACE 浓度升高多见。结核性胸腔积液 ACE 浓度一般不升高，胸腔积液 ACE 与血清 ACE 比值 ≥1 更倾向结核性积液，而恶性积液的比值多 <1。
结核病的实验室诊断
灵敏度
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