热疗对人肺癌细胞凋亡的影响
高烧癌细胞消失案例
高烧癌细胞消失案例高烧癌细胞消失案例：重要发现为癌症治疗带来新希望近日，一起关于高烧引起癌细胞消失的案例在医学界引起了广泛关注。
这一发现为癌症治疗带来了新的希望。
病例中的患者，一名40岁的女性，被诊断为晚期胃癌，她的体温剧烈升高到40摄氏度以上，引发了医学界的关注。
据病例报告，当患者的高烧首次发作时，她的身体开始出现剧烈的抽搐和大量出汗。
医生怀疑这些异常症状可能与体温的剧烈上升有关。
惊喜的是，在患者的体温恢复正常后，医生们发现她的癌细胞数量竟然大幅减少，甚至有部分消失了。
随后，医生们对患者进行了一系列的检查和观察，以进一步了解高烧可能对癌细胞的影响。
结果表明，高烧似乎能够刺激患者的免疫系统对癌细胞进行有效打击。
研究人员发现，高烧引发了巨噬细胞的活性增强，它们能够主动吞噬和消灭癌细胞。
此外，高烧还能够促进免疫细胞的增殖和活化，使其更加有效地攻击癌细胞。
这一案例的发现引发了医学界对于热疗在癌症治疗中的潜力的关注。
热疗是一种利用高温破坏癌细胞的治疗方法，但此前对于其疗效一直存在争议。
然而，这起案例揭示了高烧对于癌细胞的明显影响，为热疗的研究提供了新的方向。
尽管这一案例的发现令人振奋，但研究人员也指出，高烧可能并非所有癌症患者的治疗选择。
高烧有可能引发严重的副作用，如中枢神经系统的损伤和器官功能紊乱。
因此，研究人员呼吁加强对于热疗的研究，以寻找更为安全有效的方法。
总的来说，这起高烧癌细胞消失的案例为癌症治疗带来了新的希望。
它揭示了高烧对于癌细胞的明显影响，为热疗的研究提供了新的方向。
然而，研究人员仍需进一步探索高烧在癌症治疗中的潜力，并寻找更为安全有效的方法，以将这一发现转化为实际应用的治疗手段。
热处理联合依托泊苷疗法对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响
热处理联合依托泊苷疗法对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响刘 鑫1，汪 伟2，王晓东1，杨 阳3，齐 正41辽宁医学院附属第一医院，辽宁锦州 121001；2辽宁医学院济南军区总医院研究生培养基地，山东济南250031；3郑州大学公共卫生学院，河南郑州 450052；4郑州大学第一附属医院，河南郑州 450052摘要：目的 探讨热处理联合依托泊苷疗法对非小细胞肺癌细胞(A549)增殖及凋亡的影响。
方法 培养非小细胞肺癌A549细胞，随机分为对照组、热处理组、依托泊苷处理组、热处理联合依托泊苷处理组，采用MTT实验检测细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡、RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的mRNA表达水平(以β-actin为对照)。
结果 经体外热处理、依托泊苷及联合处理后非小细胞肺癌细胞存活的细胞减少。
MTT实验显示除48h体外热处理组和对照组无统计学意义外，其余各组与对照组比较吸光度值均降低(P<0.05)。
流式细胞仪检测细胞凋亡显示三组与对照组比较细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)，RT-PCR显示Bcl-2及HSP70的水平明显低于对照组(P<0.01)而Bax的水平明显高于对照组(P<0.01)，且联合处理组凋亡率最高。
结论 热处理、依托泊苷及联合处理均可降低非小细胞肺癌细胞的增殖能力，诱导细胞凋亡。
关键词：非小细胞肺癌；热处理；依托泊苷；凋亡中图分类号：R 734.2 文献标识码：A 文章编号：1005-1139(2012)08-0879-03 DOI：10.3969/j.issn.1005-1139.2012.08.032非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)是肺癌的主要类型，约占80%，5年生存率仅为15%。
由于早期诊断困难，多数发现时已接近中晚期。
综合治疗方案已成为非小细胞肺癌治疗的新方式。
热处理是一种极具发展前景的系统疗法，具有安全性高、不良反应程度低等优势。
《2024年热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》范文
《热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》篇一一、引言随着现代医学的快速发展，癌症的治疗手段日趋多样化，其中热疗作为一种非侵入性的治疗方法，已经得到了广泛的应用和深入研究。
热疗通过对肿瘤细胞进行选择性热处理，从而引发细胞凋亡或坏死，以达到治疗肿瘤的目的。
本文以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验研究热疗对其细胞凋亡的影响，以期为临床治疗提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料人肝癌细胞株Hep-G2细胞、热疗设备、细胞培养基、MTT 试剂、流式细胞仪等。
2. 方法（1）细胞培养：将Hep-G2细胞在适宜的培养条件下进行培养，并观察其生长情况。
（2）热疗处理：将Hep-G2细胞分为对照组和实验组，实验组进行不同温度和时间的热疗处理。
（3）细胞凋亡检测：采用MTT法检测细胞活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
（4）数据统计与分析：对实验数据进行统计分析，比较各组细胞凋亡率的差异。
三、实验结果1. 细胞活性检测结果通过MTT法检测细胞活性，结果显示，随着热疗温度和时间的增加，Hep-G2细胞的活性逐渐降低。
实验组细胞的活性明显低于对照组，表明热疗对Hep-G2细胞的生长具有抑制作用。
2. 细胞凋亡检测结果流式细胞仪检测结果显示，热疗处理后，Hep-G2细胞的凋亡率明显增加。
随着热疗温度和时间的增加，细胞凋亡率呈上升趋势。
实验组细胞的凋亡率显著高于对照组，表明热疗能够诱导Hep-G2细胞发生凋亡。
四、讨论本实验以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验研究热疗对其细胞凋亡的影响。
实验结果显示，热疗能够抑制Hep-G2细胞的生长，并诱导其发生凋亡。
这可能与热疗对细胞内相关基因和蛋白的影响有关，从而引发细胞的凋亡机制。
此外，热疗的温度和时间对细胞凋亡的影响也具有重要作用。
适当的热疗温度和时间能够最大限度地发挥热疗的效果，提高肿瘤治疗的疗效。
然而，本实验仍存在一定局限性。
首先，实验仅在体外环境下进行，未能充分考虑体内环境的复杂性。
细胞凋亡调节在肿瘤治疗中的应用
细胞凋亡调节在肿瘤治疗中的应用随着医学技术的发展，肿瘤治疗方式也在不断的更新换代。
其中，以细胞凋亡调节为主的治疗方法越来越受到医学界的关注。
细胞凋亡是人体细胞自行死亡的一种方式，而细胞凋亡调节则是通过控制这种死亡方式达到治疗肿瘤的目的。
一、细胞凋亡机制细胞凋亡是一种合理且必要的生理过程，它在保持机体内环境平衡和维持正常细胞生长发育表现出重要的调控作用。
在正常情况下，机体通过自身调控细胞生命周期，避免某些细胞不断分裂增殖，从而导致疾病。
而在某些病变状态下，机体失去了对细胞的控制，导致某些细胞不间断增殖，形成了肿瘤。
细胞凋亡主要是通过激活caspase酶的方式将细胞内的核酸和蛋白质降解。
在这个过程中，还会利用PARP等核酸酶来降解DNA，从而让损坏或代谢异常的细胞自行死亡并被排除体外。
二、近些年来，细胞凋亡调节在肿瘤治疗中的应用越来越多。
目前，主要的治疗方式包括药物、基因治疗和免疫治疗三种方式。
1、药物治疗药物治疗的原理是通过特定的化学反应或抑制剂作用来干扰肿瘤细胞的DNA修复、结构调节和其他组成成分，从而扰乱肿瘤的生命周期和调整凋亡程序。
目前，常用的药物类别包括Bcl-2蛋白抑制剂、caspase酶抑制剂、核酸酶抑制剂等。
其中，Bcl-2蛋白抑制剂可以抑制细胞凋亡，并激活细胞增殖；caspase酶抑制剂可以抑制caspase酶的激活并阻止细胞凋亡；核酸酶抑制剂可以抑制DNA降解的程度，减少程序性死亡程度。
不过，药物治疗的副作用并不可忽视。
某些药物可能会导致毒性反应，损伤患者的肝、肾、心等器官，抑制正常细胞的生长发育和代谢等。
因此，在使用药物治疗时，一定要严格按照医嘱使用，防止药物的过量用于和副作用发生。
2、基因治疗基因治疗是将特定的DNA或RNA序列导入细胞内，使用固定方式激活或调节凋亡程序。
与药物治疗不同的是，基因治疗更加直接且针对性。
它可以针对某种遗传缺陷或生化途径缺陷，从而调整凋亡程序。
而在基因治疗中，病理基础和重要的药物的基因在mRNA和物理化学参数等的特征，已经成为许多新型细胞目标药物研究中的重要参考点。
清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响
方可能具有抗肿瘤血管形成效应 。 关键 词 清 热 消 积 方 人 肺 腺 癌 细 胞 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞 凋亡
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热疗在肿瘤治疗中的研究进展
含 量低且 有 很 强 的 流 动性 ， 温 热 作 用 明显 。 （ ２ ） 改 变肿 瘤 细胞 骨架 ： 可改变细胞形态、 有 丝 分裂 期 等 ， 因此 可 损 伤 细 胞 骨 架 。 （ ３ ） 抑 制 脱 氧 核 糖 核 酸
性 及细 胞 内 的环 境 有 所 改变 ， 肿瘤 细胞 膜 的胆 固醇
的合成 ； 高热可 以损害细胞 膜 的正常功能 ， 使细胞
膜 的通 透性 发 生 改 变 ， 引 起 蛋 白外 溢 ， 核染 色 质 结 构 发生 改 变 ， 导 致 癌 细 胞 的 死 亡 。Ｖ ｅ ｒ ｔ ｒ ｅ ｅ ｓ等 研
个 热储 器 ， 致 使热 疗 时肿 瘤 部位 温度 高 于 邻 近 正
常组 织 ３～ ５℃ 。这 种选 择性 加热 现象 导致温 度差 ， 保 证 了肿瘤 局 部加 热 到 ４ ０～ ４ ３℃ 时 能大 量 杀 灭肿 瘤 细 胞而 又不 损伤 正 常 组织 细胞 ， 产 生 肿 瘤 选 择性
受损伤 ， 从 而聚集核 内变性 蛋 白， 导致其 他分子 的
作者单位 ： １ ． 兰州军区兰州总医院， 甘肃 兰州 ７ ３ ０ ０ ５ ０ ； ２ ． 第 四军 医大 学西京医院 ， 陕西 西安 ７ １ ０ ０ ３ ２ 通讯作 者 ： 闰向勇， Ｅ ｍａ ｉ ｌ ： ｙ ａ ｎ ｘ ｉ ａ ｎ ｇ ｙ ｏ ｎ ｇ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
世界 中西医结合杂志 ２ ０ １ ４年第 ９卷第 ２期
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青蒿琥酯联合热疗对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响
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加热对肿瘤细胞微环境的影响及意义
加热对肿瘤细胞微环境的影响及意义王斌;孙小单;刘玉侠;王首寒;程显斌;陈佳祺【摘要】目的探讨加热对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721分泌的细胞因子的影响,以及细胞因子在肿瘤微环境中的作用,为热疗治疗肿瘤提供实验依据.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721至对数生长期,换成无血清培养基,将其放入恒温水浴箱中,42℃恒温加热2 h.将加热后的人肝癌细胞株SMMC-7721放回到37℃,5%CO2的培养箱中进行复温培养,取复温后不同时间(0、24、48、72 h)的人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清进行TNF-α、IL-2、IFN-γ和VEGF等抗肿瘤细胞因子的检测,并与未加热的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞培养上清进行比较.结果复温不同时间的人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清中TNF-α、IL-2和IFN-γ抗肿瘤细胞因子的分泌浓度均较未加热的人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清中上述肿瘤细胞因子的分泌浓度有不同程度的提高,而VEGF的分泌浓度逐渐下降.结论42℃恒温加热2 h可以促进人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清中IL-2、IFN-γ、TNF-α等抗肿瘤细胞因子分泌浓度的增加,减少促进肿瘤生长的细胞因子VEGF的分泌浓度.%Objective To investigate the effect of heating on the cytokines secreted by liver cancer cells SMMC-7721,and to study the effect of these cytokines on cell microenvironment,to provide experimental evidence of hyperther-mia for tumor treatment.Method Human liver cancer cell SMMC-7721 were cultured in vitro to the logarithmic growth phase, and then were replaced with a serum-free medium, placed in constant temperature water bath and heated for 2 hours at 42℃.After heating,the human liver cancer cell line SMMC-7721 were placed to cool down to 37℃,and were cultured again in an incubator with 5% CO2byrewarming,the supernatant of the cultures at various time points after re-warming(0,24,48,72 h)were taken to detect TNF-α,IL-2,IFN-γ,VEGF and other cytokines,and were compared with unheated SMMC-7721 cell culture supernatant.Result After rewarming for different duration,the secretion of cytokines TNF-α,IL-2,and IFN-γ in human cancer cells SMMC-7721 were generally increased as compared with unheated cul-tures,while VEGF secretion gradually decreased.Conclusion Constant heating at 42℃for 2 h can promote the secre-tion of cytokines IL-2,IFN-γ,TNF-α,and other anti-tumor cytokines,while reduce the secretion of VEGF that can pro-mote tumor growth.【期刊名称】《癌症进展》【年(卷),期】2017(015)010【总页数】4页(P1150-1152,1208)【关键词】热疗;肝癌细胞;细胞因子;肿瘤微环境【作者】王斌;孙小单;刘玉侠;王首寒;程显斌;陈佳祺【作者单位】吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012;吉林省肿瘤医院妇瘤二科,长春130012;吉林省肿瘤防治研究所临床分子生物学研究室,长春130012;吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012;吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012;吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012【正文语种】中文【中图分类】R735.7热疗是近年来发展起来的无创伤的肿瘤治疗方法。
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·论著·热疗对人肺癌细胞凋亡的影响蒋东 李芳 葛锦峰 郑世营【摘要】 目的 探讨热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长与凋亡的影响。
方法 ＭＴＴ法检测热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长的抑制作用；流式细胞术观察热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞周期和凋亡的影响；ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因ｐ５３及Ｃａｓｅｐａｓｅ－３的表达。
结果 热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞的生长均有抑制作用。
热疗可以明显改变人肺癌Ａ５４９细胞生长周期的分布，Ｇ０／Ｇ１期细胞明显减少；但对人肺癌Ｈ１２９９细胞生长周期的分布影响不大。
热疗能使Ａ５４９细胞ｐ５３蛋白的表达明显增强，但不能诱导Ｈ１２９９细胞ｐ５３蛋白的表达。
热疗能同时诱导Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达的增强，并且以Ａ５４９细胞的表达尤为明显。
结论 热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用，可以增加细胞凋亡。
ｐ５３基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。
【关键词】 热疗；肺癌细胞；ｐ５３基因；凋亡【中图分类号】 Ｒ７３４ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 ０２５３－３６８５（２０１２）１５－１７３７－０３Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ＪＩＡＮＧ Ｄｏｎｇ，ＬＩ Ｆａｎｇ，ＧＥ Ｊｉｎｆｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｕｒｇｕｒｙ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｏｃｈｏｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５００６，ＣＨＩＮＡ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎＡ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＭＴＴ，ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＦＡＣＳ，ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＴ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓｏｆ ｐ５３ａｎｄ Ｃａｓｐａｓｅ－３．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｃｈａｎｇｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎ Ｇ０／Ｇ１ｐｈａｓｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｃｈ ｏｆ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｎｏｔ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ｉｎ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｉｎ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ－３ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｂｏｔｈ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｈａｓｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｉｒｃｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｗｈｉｃｈ ｐ５３ｇｅｎｅ ｍａｙ ｔａｋｅ ａ ｒｏｌｅ．【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ；Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ；ｐ５３ｇｅｎｅ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１２，３８（１５）：１７３７－１７３９．］ 基金项目：江苏省社会发展重大课题资助项目（ＢＳ２００５０４７）作者单位：２１５００６ 江苏省，苏州大学附属第一医院心胸外科（蒋东、葛锦峰、郑世营）；苏州大学基础医学与生命科学学院人体解剖与组织胚胎系（李芳）通讯作者：郑世营 Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｚｈｅｎｇ８８＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 近年来肿瘤热疗已成为继手术、化疗、放疗、生物治疗之后的对肿瘤的第五类有效治疗手段。
肺癌目前的发病率和死亡率在我国男性中较高，约６５％的肺癌患者确诊时已属晚期，失去手术机会，因而包括热疗在内的综合治疗在晚期肺癌的治疗中占有重要的地位。
本研究以我们培养的Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞为实验对象，主要观察不同温度加热处理对ｐ５３表达情况不同的两种肺癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响，探讨热疗促肺癌细胞凋亡的机制。
材料与方法一、材料人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞株由苏州大学分子生物实验室提供。
ＲＰＭＩ１６４０培养基（Ｇｉｂｃｏ），小牛血清（杭州四季青），逆转录试剂盒、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（立陶宛Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司），引物由南京金思特科技有限公司合成。
二、方法１．细胞培养 人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞常规在含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，３７．０℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，待细胞生长汇合达８５％时，用０．２５％胰酶消化，按１∶３传代。
实验时选取对数生长期细胞。
·７３７１·江苏医药２０１２年８月第３８卷第１５期 Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１２，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．１５２．加温实验 实验分为两组。
对照组：将Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞装入离心管，３７℃水浴放置１ｈ；实验组：将Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞装入离心管，分别于４０℃、４２℃、４４℃水浴中加热１ｈ。
３．ＭＴＴ法检测细胞生长 将上述处理的肺癌细胞分别制成５×１０５／ｍｌ单细胞悬液，接种于９６孔板，每孔１００μｌ。
培养４８ｈ后，加ＭＴＴ １００μｌ后继续孵育４ｈ，每孔加１００μｌ ＳＤＳ－ＨＣｌ终止反应。
于３７℃存放过夜，测Ａ５７０值。
抑制率＝（１－实验组平均Ａ值／阴性对照组平均Ａ值）×１００％。
４．流式细胞术检测细胞周期及凋亡 将上述肺癌细胞离心后，新鲜培养液打匀继续３７℃、５％ＣＯ２培养２４ｈ，收集细胞，ＰＢＳ清洗两次后７０％乙醇固定，送检测细胞周期。
收集细胞，调整待测细胞浓度为２×１０６／ｍｌ，２００μｌ细胞悬液加１ｍｌ冷ＰＢＳ，１０００ｒ／ｍｉｎ ４℃离心１０ｍｉｎ，弃上清液，重复两遍，将细胞重悬于２００μｌ标记缓冲液，加１０μｌ ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ，混匀，避光室温反应１５ｍｉｎ，再加３００μｌ标记缓冲液，立刻上机检测。
５．ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ５３及半胱天冬氨酸蛋白酶３（Ｃａｓｐａｓｅ－３）的表达 按Ｔｒｉｚｏｌ说明书常规提取处理后人肺癌Ａ５４９，Ｈ１２９９细胞株总ＲＮＡ，按ＲＴ－ＰＣＲ一步法试剂盒说明书操作。
Ｃａｓｐａｓｅ－３上游引物序列：５′－ＣＴＣＧＧＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＧ－ＴＣＧＡＴＧ－３′，下游引物序列：５′－ＧＧＴＴＡＡＣ－ＣＣＧＧＧＴＡＡＧＡＡＴＧＴＧＣＡ－３′；ｐ５３上游引物序列：５′－ＧＣＴＡＣＧＧＴＴＴＣＣＧＴＣＴＧＧＧＣＴＴＣＴ－３′，下游引物序列：５′－ＧＡＧＴＧＡＧＧＴＣＧＧＴＧＧＡＣＴ－ＴＣＡＧＧＴ－３′。
反应条件：９４℃、５ｍｉｎ预变性，然后进行下列循环：９４℃、４５ｓ，５８℃、４５ｓ，７２℃、１ｍｉｎ，共３０个循环，最后７２℃下延伸１０ｍｉｎ。
以ＧＡＰＤＨ为内参照。
ＰＣＲ反应产物置１％琼脂糖凝胶电泳。
三、统计学处理使用ＳＰＳＳ １３．０统计软件，计量数据用均数±标准差（珚ｘ±ｓ）表示，组间均数比较采用方差分析，组间两两比较采用ｑ检验，率的比较采用卡方检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
结果一、ＭＴＴ法检测加热对Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞的抑制率与３７℃时比较，Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞分别在加热至４０℃、４２℃、４４℃后，两株细胞的Ａ５７０值明显降低，抑制率明显升高（Ｐ＜０．０５）。
与４０℃、４２℃时比较，两株细胞在加热至４４℃后，Ａ５７０值明显降低，抑制率明显升高（Ｐ＜０．０５）。
加热温度越高抑制程度越强（表１）。
表１ 加热后肺癌细胞的Ａ５７０值和抑制率（珚ｘ±ｓ，ｎ＝４）温度（℃）Ａ５４９细胞Ａ５７０值抑制率（％）Ｈ１２９９细胞Ａ５７０值抑制率（％）３７℃０．４４５±０．０２４ ０ ０．４５０±０．０２３ ０４０℃０．３１６±０．０３６ａ２９．０ａ０．３７３±０．０２１ａ１７．１ａ４２℃０．２３３±０．０１８ａ４７．６ａ０．３０５±０．０１９ａ３２．３ａ４４℃０．０９６±０．０２５ａｂ ７８．４ａｂ ０．１３８±０．０１７ａｂ ６９．３ａｂ 与３７℃比较，ａＰ＜０．０５ 与４０℃、４２℃比较，ｂ Ｐ＜０．０５二、流式细胞仪检测加热对肺癌细胞周期和调亡率的影响与３７℃时比较，Ａ５４９细胞在加热至４０℃、４２℃、４４℃后，Ｇ１期细胞减少，Ｓ期细胞增多，细胞调亡率明显增加（Ｐ＜０．０５）；与４０℃、４４℃时比较，加热至４２℃时细胞调亡率最高（Ｐ＜０．０５）（表２）。
与３７℃时比较，Ｈ１２９９细胞加热至４０℃、４２℃、４４℃后，细胞周期比例变化不明显，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），但细胞调亡率明显增加（Ｐ＜０．０５）；与４０℃、４４℃时比较，在细胞加热至４２℃时，其凋亡率最高（Ｐ＜０．０５）（表３）。
表２ 加热后Ａ５４９细胞的周期及凋亡率变化（珚ｘ±ｓ，ｎ＝４）温度Ｇ０／Ｇ１（％）Ｓ（％）Ｇ２／Ｍ（％）凋亡率（％）３７℃６７．８４２±１．４６３ ２０．３９３±１．５６４ １１．７６８±２．８７３ ０．５０５±０．１０９４０℃６２．１７３±１．３２４ａ２６．８９４±０．９６７ａ１０．９３３±１．３１７ ５．８１２±１．３５６ａ４２℃５２．８７１±０．５３９ａｂ ３０．０９６±０．７８６ａｂ １７．０３２±０．２７３ａ１４．２４９±０．４９９ａｂ４４℃５４．９８３±１．２１７ａ２７．７３０±０．７６４ａ１７．２８７±０．４６３ａ１０．３１５±１．１６２ａ 与３７℃比较，ａＰ＜０．０５ 与４０℃、４４℃比较，ｂ Ｐ＜０．０５表３ 加热后Ｈ１２９９细胞的周期及凋亡率变化（珚ｘ±ｓ，ｎ＝４）温度Ｇ０／Ｇ１（％）Ｓ（％）Ｇ２／Ｍ（％）凋亡率（％）３７℃６４．１９６±１．３２４ ２４．５８４±２．３５７ １１．２２０±１．６７０ ０．５９３±０．２４７４０℃６４．７４３±０．９７９ ２５．１７６±１．６８７ １０．０８１±２．６３３ ４．９１８±１．３２６ａ４２℃６２．９８５±２．３６４ ２５．３７９±１．５５９ １１．６３６±２．０３３ １０．４５４±０．４７３ａｂ４４℃６３．６２３±１．６５７ ２５．７６４±２．０４７ １０．６１３±１．６７５ ９．２８５±０．３２１ａ 与３７℃比较，ａＰ＜０．０５ 与４０℃、４４℃比较，ｂ Ｐ＜０．０５三、ＰＴ－ＰＣＲ检测加热对肺癌细胞ｐ５３及Ｃａｓｐａｓｅ－３表达的影响Ａ５４９细胞在加热处理后，ｐ５３蛋白表达明显增强，并且以在４２℃加热时其表达最强。