环境空气中尼古丁的高效液相色谱测定方法

第29卷第1期实验与检验医学Vol.29No.12011年2月EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINEFeb.2011·论著·目前，国内外尼古丁的测定方法[1-3]有很多种，例如可以采用LC-MS 、LC-MS-MS [4]、GC-MS [5]的方法，但由于这些方法中仪器较昂贵，仪器保有量很低，无法在基层单位推广。

由于用高效液相色谱检测尼古丁的方法具有灵敏度高，重现性好，且仪器易普及的特点，适用于实验室推广使用。

因为本方法不仅可以监测环境空气中尼古丁的浓度，还可以测定人体生物样品如尿液[6]、唾液[7]和头发[8]中的尼古丁含量，从而可以比较准确地评价人群的暴露水平，为制订科学的控烟措施及评价控烟效果提供技术支持。

材料与方法1方法原理环境中气态尼古丁采用被动式采样器采样，采样后将4%NaHSO 4-5%甘油溶液浸渍的玻璃纤维滤膜经氢氧化钠洗脱和正庚烷萃取，在萃取液中加盐酸混匀，用氮吹仪吹至近干，用1ml 流动相定容。

使用C18反相色谱柱分离，紫外检测器检测，检测波长为260nm ，以保留时间定性，以峰面积定量。

2实验仪器、材料和试剂2.1实验仪器和材料LC-20A 型高效液相色谱仪，快速混匀器，超声波清洗器，TTL-DC Ⅱ型氮吹仪，玻璃纤维滤膜(d=42mm)，被动式采样壳体(由中环境空气中尼古丁的高效液相色谱测定方法刘小玲，周鸿，于晖，谭洪涛(江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)摘要：目的建立高效液相色谱(HPLC)测定环境空气中尼古丁的方法。

方法样品通过反相C18柱(150×4.6mm)分离，采用磷酸二氢钾-乙腈溶液为流动相(流速为1ml/min ，采用等度洗脱)，通过紫外检测器检测(波长为260nm)。

结果该方法标准曲线的相关系数为0.99993，工作曲线的相关系数为0.9995，检出限为4.03×10-3μg/ml ，测定下限为3.12×10-2μg/ml ，对低、中、高3浓度尼古丁加标回收率为87.4%、88.5%、90.8%，对低、中、高3浓度尼古丁测定的相对标准偏差分别为0.88%、0.52%、1.1%，对低、中、高3浓度尼古丁的解吸率测定分别为92.3%、94.3%、94.6%，以及采样器中样品稳定性实验，表明11d 内样品均稳定。

结论该方法灵敏度高，重现性好，操作简便，仪器易普及。

关键词：高效液相色谱；环境空气中尼古丁；检测中图分类号R122.1+1文献标识码A 文章编号1674-1129(2011)01-0015-03Determination of nicotine in the ambient air by high performance liquid chromatography LIU Xiaoling,ZHOU Hong,YU Hui,et al.Center of Disease Control and Prevention of Jiangxi province,Nanchang 330029,China[Abstract]Objective To establish high performance liquid chromatographic (HPLC)assay for the deter －mination of nicotine in the air.Methods The sample was separated by reversed-phase C18column (150×4.6mm)using the potassium dihydrogen phosphate-acetonitrile solution as mobile phase (with flow velocity of 1ml/min,used isocratic elution),and detected by ultraviolet array detector at 260nm.Results The correlation coefficient of the standard curve was 0.99993,and the working curve was 0.9995.Limit of detection was 4.03×10-3μg/ml and limit of quantification was 3.12×10-2μg/ml for nicotine.For the spiked samples of the low,medium and high con －centration of nicotine,the recoveries were 87.4%,88.5%and 90.8%,the relative standard deviations were 0.88%,0.52%and 1.1%and the desorption rates were 92.3%,94.3%and 94.6%,respectively.Nicotine test in －dicated stable in 11days with determining the sample stability.Conclusions This method is of high sensitivity,better RSD and simple operation,and the instrument can be easily popularized.[Key words]High-performance liquid chromatographic;Nicotine in air;Detection基金项目：国家科技支撑计划，课题编号：2008AI56B07作者简介：刘小玲，女，1961年11月出生，江西玉山县人，副主任技师，毕业于江西大学化学系，从事卫生检验，主攻理化检验。

doi:10.3969/j.issn.1674-1129.2010.01.00615··第29卷第1期实验与检验医学Vol.29No.1 2011年2月EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE Feb.2011疾控提供)，10μl和50μl微型注射器，1.5ml样品瓶2.3实验试剂尼古丁(标准品)，磷酸二氢钾(分析纯)，磷酸(分析纯)，盐酸(分析纯)，乙腈(色谱纯)，庚烷磺酸钠(色谱纯)，正庚烷(色谱纯)，甘油(分析纯)，氢氧化钠(分析纯)。

3样品采集3.1尼古丁吸收液的配置准确称量20.0g NaH-SO4和25.0g甘油，用纯水定容于500ml，配制成4% NaHSO4-5%甘油的尼古丁吸收液。

3.2滤膜制备选择合格滤膜，对光检查无针孔或折缝；将玻璃纤维滤膜在马弗炉中450℃烘烤2h，放入干燥器中冷却至室温；从干燥器中取出玻璃纤维滤膜，用尼古丁吸收液浸渍0.5h后，取出置于干燥器中晾干备用。

3.3采样器安装被动式采样器由壳体、挡风层和吸收层组成。

壳体包括前盖、压环、托板和底座，挡风层为核孔滤膜和涤纶纱网，吸收层为浸渍尼古丁吸收液的玻璃纤维滤膜。

安装好采样器后，放入铝箔袋中，封口。

4实验分析步骤4.1流动相的制备准确称取1.09g磷酸二氢钾，用超纯水溶解至接近于1L，用磷酸调节pH值为3，定容至1L，准确加入0.0082g庚烷磺酸钠，混匀，通过0.45μm过滤膜过滤，制得的磷酸二氢钾溶液与乙腈比例为9∶1混匀。

4.2色谱条件色谱柱为Vp-C18柱(150×4.6mm)，柱温为25℃，SPD检测器，检测波长为260nm，流动相流速为1ml/min。

4.3标准溶液制备准确称取10.1mg(99%的尼古丁)于10ml容量瓶中，加入流动相定容，超声3min，配成1.0μg/μl的尼古丁(Ⅰ)液，取(Ⅰ)液1ml于10ml 容量瓶中，用流动相定容，得0.1μg/μl的尼古丁(Ⅱ)液。

4.4尼古丁标准曲线的制备分别移取尼古丁(Ⅱ)液5μl、10μl准确加入1ml流动相，混匀，得0.5μg/ml、1μg/ml。

又分别移取尼古丁(Ⅰ)液2μl、4μl、8μl、16μl准确加入1ml流动相，混匀，得2μg/ ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml标准系列，得到尼古丁的标准系列分别进样5μl进行分析，各点进样3次，各点对应峰面积取平均值，以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标,绘制峰面积和浓度的标准曲线。

4.5尼古丁工作曲线的制备分别移取尼古丁(Ⅱ)液5μl、10μl，移取尼古丁(Ⅰ)液2μl、4μl、8μl、16μl置于制备好的玻璃纤维滤膜上，分别放于10ml 比色管中，各加入5.0ml1.5mol/L的NaOH和准确加入2.0ml正庚烷充分混匀后在恒温65℃超声30min，取出于漩涡混匀器上，混匀3min，取正庚烷层(1.8ml)，加10μl盐酸，65℃超声混匀3min，漩涡2min，氮吹近干，用1ml流动相定容，65℃水浴超声3min漩涡2min彻底解析出尼古丁。

分别进样5μl 进行分析，各点进样3次，各点对应峰面积取平均值，以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制峰面积和浓度的工作曲线。

4.6样品处理将样品取回后，取出内装的玻璃纤维滤膜，置于10.0ml比色管中，各加入5.0ml 1.5mol/LNaOH和准确加入2.0ml正庚烷充分混匀后在恒温65℃超声30min，取出于漩涡混匀器上，混匀3min，取正庚烷层(1.8ml)，加10μl盐酸65℃超声混匀3min，漩涡2min，氮吹近干，用1ml流动相定容，65℃水浴超声3min漩涡2min彻底解析出尼古丁。

进样5μl测定，根据尼古丁工作曲线的回归方程计算膜上的尼古丁含量。

采样放置某办公室4d，取回采样器测定样品结果。

结果1尼古丁标准曲线做得的曲线线性方程为y=0.0001932x-0.03952，线性相关系数γ=0.99993。

2尼古丁工作曲线做得的曲线线性方程为y=6.36×10-4x－0.1492，线性相关系数γ=0.99953检出限及测定下限连续测定10次空白浓度的溶液，计算响应值的表1标准曲线尼古丁浓度/μg/ml峰面积0.51.02.04.08.0162614501710674.821525.141900.382689图1标准曲线16··平均值和标准差，以3倍标准差所对应的待测物浓度为检出限，以10倍标准差所对应的待测物浓度为测定下限。

10次测定结果见表3。