最新宫颈癌Hela细胞株培养
《Hela细胞传代培养》课件
细胞数过低
细胞数量太少，可能是由于接 种量太少、营养不足或培养时 间太长等原因导致。可以通过 增加细胞数或更改营养物质来 解决此问题。
将细胞冻存存储，需要在恰当的时机进行复苏。
2 细胞的染色体分析技术
可以使用荧光原位杂交法、karyotyping和CGH等技术来分析细胞的染色体。
3 病毒感染实验技巧
可用于研究病毒的生物学特性、宿主针对病毒的反应等多个方面。
Hela细胞传代培养的应用领域
癌症研究
• 研究癌细胞 • 开发新的抗癌药物 • 探究癌症的发病机制
基因工程
• 研究基因功能 • 进行基因编辑实验 • 疾病的基因诊断和治疗
药物筛选
• 筛选对癌症具有杀伤 力的药物
• 筛选开发新药物的唯 一模型
• 提高药物筛选效率
总结和展望
总结
Hela细胞作为医学研究中最常见的细胞类型 之一，被广泛应用于生命科学领域。
展望
随着技术水平的不断提高，Hela细胞在人类 疾病研究、药物开发等领域的应用前景将广 阔且具有无限潜力。
《Hela细胞传代培养》 PPT课件
欢迎来听我的《Hela细胞传代培养》课程。本课程将会涵盖Hela细胞的来源 和特点，以及传代培养过程、应用领域、实验技巧和常见问题等。
Hela细胞的来源和特点
来源
Hela细胞是从美国Henrietta Lacks的宫颈癌细胞中分离出来的。这些细胞于1951年首次分 离出来，并被广泛应用于医学领域。
特点
Hela细胞具有很高的无限分裂能力和稳定的染色体组成，是许多细胞与分子生物学研究的 理想材料。
应用
这些细胞在癌症、病毒学、基因工程、药物筛选等领域都得到了广泛的应用。
宫颈癌实验报告
一、实验目的1. 掌握宫颈癌细胞株的体外培养方法。
2. 观察宫颈癌细胞在体外培养条件下的生长特点。
3. 通过细胞学观察，了解宫颈癌细胞的形态学特征。
二、实验材料1. 宫颈癌细胞株：Hela细胞2. RPMI-1640细胞培养基3. 胎牛血清4. 0.25%胰蛋白酶5. 75%酒精6. 细胞培养箱7. 显微镜8. 计时器三、实验方法1. 宫颈癌细胞复苏（1）将冻存的宫颈癌细胞株Hela取出，用75%酒精消毒，然后用无菌镊子将细胞接种于培养皿中。
（2）加入适量的RPMI-1640培养基，放入细胞培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
2. 细胞传代（1）当细胞贴壁生长至80%左右时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞。
（2）将消化后的细胞悬液转移至新的培养皿中，加入适量的胎牛血清和RPMI-1640培养基，放入细胞培养箱中培养。
3. 细胞观察（1）取生长良好的细胞，用无菌镊子挑取细胞，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液滴加于载玻片上，室温晾干。
（3）用95%酒精固定细胞，晾干。
（4）用姬姆萨染液染色，晾干。
（5）在显微镜下观察细胞形态学特征。
四、实验结果1. 宫颈癌细胞在体外培养条件下，生长迅速，呈梭形、不规则形或多边形，细胞核较大，核仁明显。
2. 细胞传代过程中，细胞生长良好，细胞密度逐渐增加。
3. 细胞学观察结果显示，宫颈癌细胞呈梭形、不规则形或多边形，细胞核较大，核仁明显，细胞间连接紧密。
五、实验结论1. 成功建立了宫颈癌细胞株Hela的体外培养体系。
2. 宫颈癌细胞在体外培养条件下，生长迅速，细胞形态学特征明显。
3. 本实验为宫颈癌的研究提供了实验材料和方法。
六、实验讨论1. 在细胞培养过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 适当调整培养基成分和培养条件，有利于细胞的生长和传代。
3. 细胞学观察结果表明，宫颈癌细胞在体外培养条件下，具有明显的细胞学特征，为宫颈癌的研究提供了实验依据。
4. 本实验为宫颈癌的体外研究提供了实验材料和方法，为进一步研究宫颈癌的发生、发展及治疗提供了基础。
Hela细胞简介
Hela细胞系（HeLa cell line）是生物学与医学研究中使用的源自一位名叫Henrietta Lacks美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞系。
这名美国妇女在1951年死于该癌症。
为了让Lacks保持匿名，此细胞株原宣称是依「Helen Lane」命名。
海拉细胞系被视为「不死的」（即，不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。
此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。
海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知Lacks本人也未得到她的许可），并用作癌症细胞模型（model cancer cells）研究。
海拉细胞系也被用作研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。
海拉细胞系是被人类乳突状瘤病毒第18型（Human Papillomavirus 18）转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。
已证实海拉细胞系难以控制。
此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物（cell culture），干扰生物学的研究。
污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。
据说有相当数目的体外细胞系（in vitro cell lines）其实就是海拉细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的海拉细胞系污染物取代了。
有学者认为此细胞系是一新的物种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。
在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。
科学研究史在Hela出现之前，科学家已经实现了某些动物细胞的人工培养，但尚未成功培养人类细胞；人类细胞由于分裂次数有限，难以实现长期留存。
肿瘤细胞HeLa以其顽强的生命力和繁殖力成为科学家获得的第一个人类细胞系。
据估计，全世界用于研究而繁育的Hela细胞的总数目已经远远超过了Lacks女士本人所有的细胞数，甚至有人认为可以将HeLa细胞看做一个新的物种。
截至2009年，全世界已经有超过60000篇科学论文是基于对HeLa细胞的研究，并且这一数字还以每月300篇的速度不断增长着。
Hela细胞的传代培养
利用Hela细胞进行药物筛选和毒性测试，评估药物对肿瘤细胞的抑 制作用和安全性。
肿瘤免疫治疗研究
利用Hela细胞研究肿瘤免疫应答机制，为肿瘤免疫治疗提供新的策 略和靶点。
基因治疗与细胞治疗
利用Hela细胞作为载体或靶细胞，开展基因治疗和细胞治疗的研究， 为遗传性疾病和肿瘤等疾病的治疗提供新途径。
Hela细胞的传代培养
目录
• 引言 • Hela细胞的传代培养过程 • Hela细胞传代培养的注意事项 • Hela细胞传代培养的应用 • 未来展望
01 引言
背景介绍
01
Hela细胞，也称为海拉细胞，是 一种源自子宫颈癌的细胞系，是 医学和生物学研究中广泛使用的 细胞模型。
02
Hela细胞的传代培养是维持其生 长和活性的重要手段，对于研究 癌症、病毒、药物筛选等领域具 有重要意义。
记录细胞生长曲线
通过绘制细胞生长曲线，了解细胞的生长规律和倍增时间。
观察异常情况
如发现细胞出现死亡、变形、颜色变化等异常情况，应及时采取 措施处理。
04 Hela细胞传代培养的应用
生物学研究
细胞生物学
Hela细胞是研究细胞增殖、分化、凋亡等基本生物学过程的良好模型，有助于深入了 解细胞生命活动的机制。
细胞培养环境的维持
温度
细胞生长需要稳定的温度环境，一般维持在37°C。
湿度
湿度过高会导致细菌滋生，湿度过低则会导致细胞干燥。
气体环境
细胞培养瓶内的气体环境需保持95%空气(细胞代谢必需的)和5% 的${CO}_{2}($维持培养基的酸碱度)。
细胞的观察与记录
观察细胞的生长状态
通过显微镜观察细胞的形态、密度和生长速度，判断细胞的生长 状态。
超声破坏载紫杉醇微泡对宫颈癌细胞株HeLa的抑制增殖及诱导凋亡作用
一
６ ９２
中 国 超声 医学 杂 志 ２ ０ ０ ８年
第２ ４卷第 ８期
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超 声 破坏 载 紫杉 醇微 泡 宫 细胞 株 Ｈｅ 对 颈癌 Ｌａ的抑 制 增殖 及 诱导 凋 亡 作用
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பைடு நூலகம்
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王 娜 熊正 爱 王 志 刚 伍 星
摘 要
目的 探 讨 超 声破 坏 载 紫杉 醇微 泡后 对 宫 颈 癌 Ｈｅ ａ细胞 株 的增 殖 抑制 及 凋 亡诱 导作 用 。 Ｌ
方 法 体 外 培 养 宫 颈癌 细胞 ，将 细 胞 分 为 ５ ，即 紫 杉 醇 组 ，紫 杉 醇 联 合 超 声 辐 照组 ，载 紫 杉 醇 微 泡 联 合 超 声 辐 照 组 ，载 紫 组 杉 醇 微 泡组 及 空 白对 照 组 。 ＭＴＴ 法 观 察 超 声破 坏 载 紫 杉 醇微 泡 后 在 不 同 时 间 对 细 胞 的 生 长 抑 制 情 况 ， 射 电 镜 观 察 细 胞 的 凋 亡 诱 透
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iNOS抑制剂1400W对宫颈癌HeLa细胞株生长的抑制作用
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ｗ 联 合 ｉ ￣ 明显 增 加 宫 颈 癌 Ｈｅ ａ细 胞 凋 亡 率 ， 且 较 单 独 使 用 顺 铂 时 作 用 更 显 著 。顺 铂 联 合 ｉ Ｓ抑 制 剂 抗 ｌＡ ｛ ｌ Ｌ 并 ＮＯ
Hela-EGFP稳转细胞株说明书
干冰运输细胞： 1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化
过程。待细胞冻存液完全融化后，用 70%乙醇消毒细胞 冻存管外壁。 2、 室温 200g 离心 5 分钟收集细胞。吸去上清。 3、 用 1ml 培养基重悬细胞。 4、 将细胞接种到 6mm 培养皿或 25cm 培养瓶中，补加 5ml 培养基，37℃ 5%CO2 培养。
细胞冻存： 1、 将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶和冻存液温浴到 37℃。 2、 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。 3、 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，
重悬细胞。 4、 室温 200g 离心 10 分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，
并调节浓度至大约 1×10^6 个细胞/ml。分装到细胞冻 存管。 5、 将细胞冻存管放入程序降温盒，‐80℃过夜。 6、 将冻存的细胞转入液氮中。
5、 第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续 培养。
6、 细胞生长后及时消化传代，尽早冻存 1~2 支。
细胞传代： 1、 传代前将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶温浴到 37℃。 2、 吸去细胞培养液。 3、 用 PBS 漂洗一次。 4、 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀
覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱 中，37 摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分 开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。 5、 加入 5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。 6、 按 1:3 到 1:5 接种细胞。
培养基：DMEM 高糖培养基+10%胎牛血清 消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO 培养条件：37℃，5% CO2
211025964_褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa_细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
生物技术进展 2023 年 第 13 卷 第 2 期 311 ~ 317Current Biotechnology ISSN 2095‑2341研究论文Articles褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡及侵袭的影响沈云燕 ， 邱琦*苏州大学附属第二医院门诊办公室，江苏 苏州 215004摘要：探究了褪黑素（melatonin ， MLT ）联合顺铂（cisplatin ， DDP ）对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。
体外培养宫颈癌HeLa 细胞，利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium ， MTT)法测定MLT 、DDP 及其联合使用对宫颈癌HeLa 细胞增殖的影响；将HeLa 细胞分为对照组、褪黑素组、顺铂组和联合组；其中褪黑素组采用2.5 mmol ·L -1的褪黑素处理细胞；顺铂组采用5 μg ·mL -1的顺铂处理细胞；联合组采用2.5 mmol ·L -1的褪黑素+5 μg ·mL -1的顺铂联合处理。
采用克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验和Transwell 小室实验分别检测各组HeLa 细胞的增殖、凋亡、侵袭情况，蛋白质印迹法检测Ki -67、PCNA 、Bcl -2、Bax 、N 钙粘蛋白（N -cadherin ）、E 钙粘蛋白（E -cadherin ）和波形蛋白（Vimentin ）蛋白表达情况。
MTT 结果显示MLT 、DDP 可以显著抑制宫颈癌HeLa 细胞的增殖（P <0.05)，且随着使用浓度的升高抑制率显著升高；相比单独使用MLT 、DDP ，联合使用MLT 和DDP 可以显著升高对HeLa 细胞增殖的抑制率（P <0.05)。
相比对照组，褪黑素组和顺铂组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率以及Ki67、PCNA 、Bcl -2、E -cadherin 蛋白相对表达水平均降低（P <0.05），细胞凋亡率和蛋白Bax 、N -cadherin 、Vimentin 相对表达水平升高（P <0.05）。
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宫颈癌H e l a细胞株
培养
本科学生综合性
实验报告
姓名：学号：
学院：专业、班级：
实验课程
指导教师及职称
开课学期至学年上学期
云南师范大学教务处编印
胰酶溶液，并加入适量培养液终止消化，吹打分散。
细胞计数：取5ul细胞悬浮液加入等量台盼蓝染液，混匀后用血球计数板计算细胞的成活率。
如果样本成活率高，无污染即可用于传代。
(计数结果：4.5×106个/ml)。
将细胞分装至新鲜的培养液中，使细胞的最终数量调节至1×105～3×105个/mL。
置于37℃二氧化碳培养箱中继续培养。
具体操作：
每两个小组共用一个培养瓶配制100ml的生长培养基
每人取10ml培养基到自己的细胞培养瓶内
向细胞培养瓶内接种400ul的HeLa细胞株原液
放入二氧化碳培养箱，旋松瓶盖
根据细胞的数量看细胞瓶是否平放或直立放置
（四）、死活细胞的鉴别
将细胞悬液充分混匀后取20ul放入干净的离心管中，加入等体积的0.4%的台盼蓝染液混合，放置2min。
取一干净的血球计数板，盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。
注意滴液勿有气泡，也不能太多（约10ul），否则会使盖片浮起而是细胞计数不准。
低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。
找出计数板上的方格，计算四角大格内总的细胞数，压着大格线者只计左侧或上方，不计右侧或下方。
五、实验结果分析与讨论：
六、参考文献：。