[生物学]多糖提取纯化以及结构解析
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖指的是一类能够具有生物活性的多糖，包括多糖酶、多肽激素、天然药物等，其在食品、医药、生物技术等领域中具有广泛的应用前景。
活性多糖在自然界中的分布较广泛，如水稻、蘑菇、芦笋等植物、真菌和动物的体内都含有活性多糖，因此研究活性多糖的提取、纯化和结构解析具有重要的科学意义和实用价值。
活性多糖的提取首先需要采用合适的提取方法。
传统的提取方法包括水提取、醇提取、强酸提取等。
其中，水提取是一种常见且简单的提取方法，主要适用于含有大量水溶性多糖的样品。
醇提取则是一种基于脂肪溶解性的提取方法，可以提取多种多糖和蛋白质。
而强酸提取则适用于提取极为难溶于水和醇的多糖，如纤维素等。
但是，传统提取方法具有提取率低、残留物较多、有害物质残留等缺陷。
因此，越来越多的研究者开始探索新的提取方法，如微波辅助提取、超声波辅助提取、离子液体提取、水热法提取等。
这些新方法具有提取效率高、提取时间短、对样品损伤小等优点，受到了广泛关注。
提取后的多糖需要进行纯化，以获得高度纯净的多糖。
传统的多糖纯化方法包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、逆流色谱等。
离子交换色谱是一种常见的多糖纯化方法，可以在水相介质中对多糖进行分离。
凝胶过滤色谱则可以根据多糖的分子大小对其进行分离。
逆流色谱则是一种复杂的分离方法，可以根据多糖分子的电荷性、水热稳定性、分子大小等进行分离。
除此之外，近年来也出现了一些新的多糖分离方法，如纳米滤膜膜分离、超声波辅助离子交换色谱等。
这些新方法具有优异的分离效率和速度，可以大大提高多糖的纯度。
结构解析是了解多糖生物学性质的重要手段，可以揭示多糖的化学组成、分子结构和生物学功能等信息。
常见的多糖结构解析方法包括质谱分析、核磁共振谱学、X射线晶体学等。
质谱分析是一种常用的结构解析方法，它可以利用质谱仪对多糖的分子量、通式、碳水化合物分析等进行分析。
核磁共振谱学则是利用核磁共振技术对多糖的分子结构、连接、取代以及3D构型等进行研究。
多糖的分离纯化及性质表征
（3）超高压
超高压提取 也称超高冷等静压提取，是指在常温下用100～1000 MPa的流 体静压力作用于提取溶剂和原料的混合液上，并在预定压力 下保持一段时间，使原料细胞内外压力达到平衡后迅速卸压 ，由于细胞内外渗透压力忽然增大，其结构发生变化使得原 料内的有效成分能够穿过细胞的各种膜而转移到细胞外的提 取液中，达到提取多糖有效成分的目的。
（2） 酸提法
为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提 取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下 难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多 糖沉淀析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到 的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中 糖苷键的断裂，因此，只在一些特定的多糖提取中占有优势 。且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
5. 整个过程保持凝胶上方有水
原料 前处理 提取 滤渣 过滤或离心
滤液
醇沉 沉淀 脱蛋白 脱色 透析 柱层析
多糖
四、多糖的纯度鉴定
多糖纯度鉴定方法 超速离心法、电泳法、比旋光度法及凝胶色谱法。
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度，同时在不同的乙醇中 有不同的溶解度。在一定浓度的乙醇中，分子量大的 较分子量小的溶解度小。因此，不同浓度的醇中得到 的多糖沉淀的比旋度相同，则证明该多糖为均一组分。
（2）超声波辅助提取法
超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生 物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中； 空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有 利于有效成分的溶出； 热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的， 可使被提取成分的生物活性尽量保持不变。
《多糖结构解析》课件
质谱技术
通过电离多糖分子并测量其质量 ，可以获得多糖的分子量和组成 信息。
核磁共振技术
通过测量多糖分子中氢原子或其 他原子周围的磁场，可以解析多 糖的精细结构。
生物技术分析法
凝集素结合法
利用凝集素与多糖的特异 性结合，分离纯化多糖， 并进行结构分析。
抗体技术
利用抗体与多糖的特异性 结合，进行多糖的定性和 定量分析。
THANKS
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亲和色谱法
利用多糖分子与配体之间的特 异性亲和力，将多糖分离纯化
出来。
分离纯化过程中的注意事项
注意温度和pH值
在提取和分离纯化过程中，要控制好温度和pH值 ，以保证多糖的稳定性和活性。
避免长时间高温
长时间高温会导致多糖的结构发生变化，影响其 生物活性和稳定性。
注意防止污染
在分离纯化过程中，要避免污染，如微生物、杂 质等，以保证多糖的纯度和质量。
03
多糖的结构解析方法
化学分析法
01
02
03
酸水解
在酸的作用下，将多糖水 解成单糖，然后进行衍生 化反应，通过气相色谱或 液相色谱进行分析。
碱水解
在碱的作用下，使多糖水 解成寡糖和单糖，同样需 要进行衍生化反应，再进 行色谱分析。
酶解
利用特异性酶将多糖水解 成特定结构的片段，再进 行分析。
物理分析法
食品工业
食品添加剂
01
多糖可作为增稠剂、稳定剂、口感改善剂等用于食品加工中，
提高食品品质和稳定性。
功能性食品
02
利用多糖的生理活性，开发具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖等功
能的食品。
食品包装材料
03
多糖可制成可食用的食品包装材料，具有良好的阻隔性能和环
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此，测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖是一类具有生物活性的多糖物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性。
近年来，随着人们对健康和营养素需求的增加，活性多糖的研究受到了广泛关注。
活性多糖的提取、纯化及结构解析是这一领域的关键研究内容，不仅有助于深入了解其生物活性及作用机制，还为其在医药、保健品等领域的应用提供了重要的科学依据。
本文将对活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展进行综述，以期对该领域的研究工作有所帮助。
一、活性多糖的提取方法活性多糖广泛存在于天然食材中，如真菌、植物、海洋生物等，因而其提取方法有多种选择。
一般来说，活性多糖的提取方法可分为物理法、化学法和生物法三大类。
物理法是指通过物理手段将活性多糖从食材中提取出来，如破碎、离心、过滤等。
常用的物理法提取活性多糖的方法有超声波提取法、微波提取法、高压萃取法等。
这些方法操作简单、提取效率高，但对提取条件要求严格，且可能会影响活性多糖的生物活性。
生物法是指利用微生物或酶类从食材中提取活性多糖，如发酵法、酶解法等。
这些方法能够实现对活性多糖的选择性提取，但操作复杂，成本较高。
活性多糖的纯化是将提取得到的多糖进行进一步分离和提纯，以获得高纯度的活性多糖。
常用的活性多糖纯化方法包括凝胶过滤、离子交换、凝胶电泳、超滤等。
凝胶过滤是一种通过多孔凝胶对多糖进行分子大小分离的方法，其具有操作简单、纯化效果好的特点。
离子交换是利用固定离子对多糖进行分离的方法，通过调整离子交换柱的 pH、离子浓度等条件，可以实现对多糖的高效分离。
凝胶电泳是利用电场对多糖进行分离的方法，通过多糖在电场中的迁移速度差异，实现对多糖的分离。
超滤是通过使用不同大小的孔径滤膜将多糖和杂质进行分离的方法，具有选择性好、操作简单的特点。
活性多糖的结构解析是对其组成单元、链结构、分支结构等进行分析和解释的过程，主要包括理化方法、光谱方法、质谱方法等。
理化方法是指利用多糖的理化性质对其结构进行解析的方法，如比旋光度、旋光分散度、比表面积、分子大小等。
《锁阳多糖提取纯化、结构解析及生物活性研究》范文
《锁阳多糖提取纯化、结构解析及生物活性研究》篇一一、引言近年来，天然药物研究已经成为全球药物研究的热点之一。
锁阳，作为中医药领域一种常见的传统草药，因其独特的药用价值受到了广泛的关注。
其含有多种有效成分，如多糖、生物碱等，具有抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力等多种生物活性。
本文以锁阳多糖为研究对象，进行其提取纯化、结构解析及生物活性的研究。
二、材料与方法（一）材料1. 锁阳原料2. 实验仪器3. 试剂及耗材（二）方法1. 锁阳多糖的提取2. 锁阳多糖的纯化3. 锁阳多糖的结构解析4. 生物活性实验三、实验结果（一）锁阳多糖的提取与纯化通过优化提取条件，我们成功地从锁阳中提取出多糖。
经过一系列的纯化步骤，包括去蛋白、脱色、透析等，得到了较为纯净的锁阳多糖。
通过紫外-可见光谱、红外光谱等手段对提取的锁阳多糖进行初步的定性分析，发现其具有多糖的特征吸收峰。
（二）锁阳多糖的结构解析利用现代分析技术，如核磁共振（NMR）、质谱（MS）等手段，对锁阳多糖的结构进行了解析。
结果表明，锁阳多糖主要由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有特定的糖苷键连接方式。
通过比对文献报道，我们推测出锁阳多糖可能的结构模型。
（三）生物活性研究1. 抗氧化活性：通过DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验等手段，发现锁阳多糖具有较好的抗氧化活性。
2. 抗肿瘤活性：通过细胞实验，发现锁阳多糖对癌细胞具有一定的抑制作用，且对正常细胞无明显的毒性作用。
3. 提高免疫力：通过动物实验，发现锁阳多糖能够显著提高机体的免疫力。
四、讨论通过对锁阳多糖的提取纯化、结构解析及生物活性的研究，我们得出以下结论：1. 通过优化提取条件，成功地从锁阳中提取出多糖，并经过纯化得到较为纯净的锁阳多糖。
2. 通过现代分析技术，解析了锁阳多糖的结构，发现其由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有特定的糖苷键连接方式。
3. 锁阳多糖具有较好的抗氧化、抗肿瘤和提高免疫力的生物活性，为进一步开发利用锁阳提供了理论依据。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
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凝胶柱色谱原理
除此之外，还有膜分离技术、超滤膜术等也应用于多 糖的分离纯化
2012.10.31
常用的脱色方法
对于植物来源的多糖，可能含有酚型化合物而颜色较深，对其进行脱 色可使其应用范围更加广泛。常用的脱色方法有:离子交换法、氧化法、 金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、活性炭等)。
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三氯乙酸法(滴加3%三氯醋酸) 酶法 等电点沉淀法
2012.10.31
糖类介绍
多糖提取
多糖纯化
多糖纯化
多糖结构分析
由于提取液还含有多种组分的多糖混合物，因此需 要进一步纯化
（1）沉淀法（分级沉淀） （2）盐析法 （3）季铵盐沉淀法 （4）纤维素柱色谱法（吸附+分配） （5）离子交换色谱法 （6）凝胶柱色谱法 （7）制备区域电泳法 （8）金属配合物法
全甲基化甲醇解：
2012.10.31
苷键构型的确定
酶水解 转化糖酶--------水解β-果糖苷键 麦芽糖酶--------水解α-葡萄糖苷键 杏仁苷酶--------水解β-葡萄糖苷键,专属性较低 纤维素酶--------水解β-葡萄糖苷键 NMR谱法测定 利用端基质子的偶合常数
利用α-苷键和β-苷键的端基碳的化学位移差别 利用2D-NMR谱
H HO
H
OH H OH
H
OH
多羟基醛；多羟基酮；多羟基醛或多羟
基酮的衍生物。 OH
OH
O
HO
H
H
OH
H
OH
OH
2012.10.31
Content
糖类分布 糖we类lc广om泛e 分to布us于e t生he物se体Po中we，rP可oin以t t分em为p单lat糖es,、N低ew聚Co糖n和ten多t d糖es。ign,
10 years experience
目前已发现不少糖类及其衍生物具有药用价值，尤其在抗 凝、降血脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面都具有 很广泛的应用。
2012.10.31
糖的分类
单糖 寡糖
多糖 复合糖 衍生糖
2012.10.31
•凡不能被水解为更小分子的糖称。 • 如：核糖、葡萄糖
•凡能被水解成少数（2—10个）单糖分子的糖称~。 • 如：蔗糖 葡萄糖+果糖
常用交换剂为阳离子或阴离子交换纤维素。 阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。 中性多糖与硼酸络合后可增加酸性，可被阳离子交换纤维素吸附 酸性基团多的吸附力强，对于线性分子，分子量大的比小的吸附力强，直链 分子比支链分子易吸附
2012.10.31
分子筛原理，按照分子量的大小不同进行分离。 常用葡聚糖凝胶（sephadex G）
2012.10.31
多糖结构分析
物理分析法
IR NMR MS，GC一MS
谢谢大家！
汇报人：周函钰
2012.10.31
它就与季铵与盐酸或其性碱多形糖成形不成溶性不配溶合性物沉沉淀淀，，又使由其于分多离糖。分子酸性越强、
相对分子质量越大越易沉淀出来，这样控制 季铵盐浓度即可以分理出不同
的酸性多糖常十用六季烷氨基盐吡有啶十。六烷基三甲胺溴化物及其氢氧化物和 提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可沉淀分离中性
多糖。
2012.10.31
• 凡能被水解成多个单糖分子的糖称~。 • 如：淀粉 n葡萄糖 •与非糖物质结合的糖。 • 如：糖脂、糖蛋白(蛋白聚糖)、糖核苷酸等。
•糖的衍生物。 •如：糖醇、糖酸、糖胺、糖苷等
2012.10.31
糖类介绍
多糖提取
多糖提取
多糖纯化
多糖结构分析
单糖、低聚糖 常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得到不同极性的化合物。
脱脂多→糖去杂→浓缩→再次去杂→脱色 →浓缩 →冷却 →结晶（→进一步纯化） 常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。
（植物体内苷常与水解酶共存，所以要杀酶或抑制酶的活性。）
2012.10.31
热水提 稀碱提
2012.10.31
多糖提取 粗多糖
物理辅助提取
微波提取 超临界流体萃取
超声提取
热水提取
对于易溶于温水、难溶于冷水和乙醇的多糖采用这种方法。材料需要先 用冷水浸过，再用热水提取，必要时可加热至80～90℃，搅拌提取， 提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白，离心除去杂蛋白的清液，透 析后用乙醇沉淀即得到多糖。
纤维素柱色谱原理 它利用的是不同多糖浓度乙醇中溶解性不同，先用4倍V的乙醇将多糖 混合液沉淀在惰性的多孔纤维素柱上，再用不同浓度的乙醇洗脱，使不 同多糖分离开来。
2012.10.31
离子交换色谱原理 多糖分子带有电荷，可以 与离子交换剂中的离子或基团结合，亲和力随 多糖结构与电离性的不同而不同，一般随分子中酸性基团的增加而增强， 支链多糖比支链的更易吸附，然后用不同浓度的盐溶液进行洗脱。
①有机溶剂分离法 利用不同浓度的乙醇依次沉淀不同的黏多糖。 ②季铵化合物沉淀法 其含有酸性基团，与表面活性剂形成季铵配合物，然后用不同 盐离子浓度解离。 ③离子交换层析法 用阴离子交换剂交换吸附，再用NaCl溶液进行梯度洗脱
2012.10.31
2012.10.31
糖类介绍
多糖提取
多糖结构分析
多糖纯化
(FAB-MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)等方法来获得分子离子蜂，尤其是ESI-MS及 FAB-MS两种质谱法更是目前测定苷类分子量常用的方法。
2012.10.31
组成苷的苷元和单糖的鉴定
一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，糖类的PC常用的展开剂大多为含 水的溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，经显色 后用薄层扫描法求得各种糖的分子比。
2012.10.31
糖链连接顺序的确定
1.部分水解法： 将糖链水解成较小片段（低聚糖），然后分析片段推断糖链的结构。
2.质谱法 根据质谱中的裂解规律和裂解碎片推测糖链的连接顺序。
3.NMR和2D-NMR法。
2012.10.31
总结
化学分析法
酸水解、过碘酸及其盐的 氧化、甲基化、Smith降 解、碱降解、酶水解、免 疫化学技术
纯化方法
2012.10.31
沉淀原理 由于不同相对分子质量的多糖在不同浓度的低级醇或低级酮中溶解性不 同，可以逐步提高溶液中醇或酮的浓度以使不同组分的多糖依相对分子 质量由大到小的顺序沉淀，最终达到分离的目的。
（为了多糖的稳定，一般在PH7时进行，酸性多糖在PH2-4时 进行)
2012.10.31
用GC或HPLC对单糖定性定量，GC常以甘露醇或肌醇为内 作为对照品。
苷分子量-苷元分子量，求出糖的数目
标，用已知单糖
NMR谱，也可以有效地鉴定苷分子中糖的种类。 氢谱中端基质子信号数(5ppm左右)， 碳谱中端基碳信号的数目(90-112ppm)。
2012.10.31
苷元和糖之间连接位置的确定
13C-NMR：苷化位移规律，将苷和苷元的碳谱相比较。 成苷后，α-C约+8ppm,β-C约-4ppm 二维核磁共振谱(如HMQC COSY及HMBC谱)等技术广泛用于确定连糖位置。
2012.10.31
糖与糖的连接位置的确定
全甲基化物进行甲醇解，分析其甲醇解产物。 甲基化法虽然不能解决多糖中单糖的连接顺序，但它对于阐明单糖的连接方式(键构型)、重复结构中某种单
糖的数目、末端糖的性质以及分支点的位置等非常有用。
2012.10.31
采用的方法通常是将这些甲基化的单糖进行了TLC鉴定，并与标准品对照。近来亦有用GC-MS联用仪对其进 行鉴定的报道。
稀碱提取
适合用此方法的多糖主要是不溶性胶类，用冷水浸润红0.5mol/L NaOH提取，提取液用酸中和后浓缩，再加乙醇沉淀即得到多糖。 甘露聚糖、半乳糖等利用此法可得到相当纯的物质。
2012.10.31
除杂
2012.10.31
Hale Waihona Puke Sevag法(用氯仿:丁醇 5:1混合) 三氟三氯乙烷法(多糖溶液:三氟三氯乙烷1:1)
盐析法原理原理 利用不同多糖与金属离子成盐后在水溶液中的特异性沉淀作用，用硫酸 铵、乙酸钾、氯化钾等盐析剂，将不同的多糖逐步析出。
金属配合物法原理： 利用不同多糖能与金属离子形成配合物而沉淀下来，
使用多种配位剂沉淀多糖。
2012.10.31
季铵盐沉淀原理 长链季铵盐是碱性表面活性剂，酸性多糖在溶液中以聚阴离子形式存在，
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多
糖
的
种
类
：
1）均一多糖(同多糖)：由一种单糖缩合而成。
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不均一多糖(杂多糖)：由不同类型单糖缩合而成
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一：分子量及分子式的确定 质谱分析测定分子量和分子式。 苷类化合物一般极性较大，无挥发性，遇热气化时易于分解，采用电子
轰击质谱(EI—MS)常常不能获得分子离子峰。 现多采用化学电离质谱(CI-MS)、场解吸质谱(FD-MS)、快原子轰击质谱
一般情况下，尽量避免用活性炭处理，因活性炭会吸附多糖，造成 多糖损失。
2012.10.31
黏多糖（又叫酸性黏多糖）是一类广泛存在于动物体内的含糖醛酸 和氨基糖残基的复合多糖，这是一类较有发展潜力的新型生化药物 或生物制品。 提取：
黏多糖大多与蛋白质共价结合，首先常用酶降解部分蛋白或用 碱使多糖-蛋白质间的键断裂，促进提取时的溶解。然后用普通蛋 白沉淀法沉淀蛋白。 2）分离：
多糖提取、纯化及结构分析文献总结
汇报人：周函钰
2012.10.31
2012.10.31
糖类介绍 多糖提取 多糖纯化 多糖结构分析
2012.10.31
糖类介绍