多糖各种提取方法
多糖的提取方法

多糖的提取方法植物和动物体内含有丰富的多糖,在医药、食品、化妆品等领域有着重要的应用价值。
为了充分利用这些多糖资源,科学家们一直在探索各种多糖的提取方法。
本文将介绍几种常用的多糖提取方法,包括热水提取法、酶解法、酸碱法、超声波法和微波法。
一、热水提取法热水提取法是一种简单且常用的多糖提取方法。
首先,将植物或动物材料粉碎成粉末状,然后用适量的热水浸泡一段时间。
随后,将浸泡液过滤,得到的滤液中含有多糖。
最后,通过浓缩、沉淀和干燥等步骤,得到多糖提取物。
二、酶解法酶解法是利用特定的酶对植物或动物材料中的多糖进行水解的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的酶液浸泡一段时间,酶液中的酶能够降解多糖。
随后,将酶解液经过滤、浓缩和沉淀等步骤,得到多糖提取物。
三、酸碱法酸碱法是利用酸或碱对植物或动物材料中的多糖进行提取的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的酸或碱溶液浸泡一段时间。
酸或碱的作用能够将多糖与其他成分分离。
随后,通过中和、过滤、浓缩和沉淀等步骤,得到多糖提取物。
四、超声波法超声波法是利用超声波的机械作用对植物或动物材料进行提取的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后,将材料置于超声波设备中,超声波的振动能够促进多糖的释放。
最后,通过过滤、浓缩和干燥等步骤,得到多糖提取物。
五、微波法微波法是利用微波辐射对植物或动物材料进行提取的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后,将材料置于微波设备中,微波辐射能够加速多糖的释放。
最后,通过过滤、浓缩和干燥等步骤,得到多糖提取物。
在多糖的提取过程中,需要注意以下几点:首先,选择合适的提取方法,根据不同的多糖类型和材料特性进行选择;其次,控制提取条件,如温度、时间、酶的浓度等,以保证提取效果;最后,采用适当的分离和纯化方法,以得到纯度较高的多糖提取物。
多糖的提取方法多种多样,每种方法都有其适用的场景。
多糖各种提取方法

一、植物多糖的提取1溶剂提取法1.1水提法水对植物组织的穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质,沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出,有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1.2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势,目前报道的并不多。
而且即使有优势,在操作上还应严格控制酸度,因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾,为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样,碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1.4生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶1.5超声提取法超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的空化作用对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。
食品中多糖的提取与应用

食品中多糖的提取与应用食品是人类生活中不可或缺的一部分,而其中的多糖则成为了近年来备受关注的研究领域。
多糖是一种复杂的碳水化合物,广泛存在于植物和动物的组织中。
它们由若干个单糖组成,具有重要的营养和生物活性,因此在食品科学中应用广泛。
本文将探讨食品中多糖的提取方法和其在食品中的应用。
一、多糖的提取方法多糖的提取方法主要包括物理法、化学法和生物法。
物理法常用的有水煮提取法、超声波辅助法和微波辅助法。
水煮提取法是最常见的方法,通过将原料用水煮沸,使多糖溶于水中,再通过离心等分离手段得到多糖。
超声波和微波辅助法则是利用超声波或微波的物理效应,提高多糖的溶出率和提取效率。
化学法包括酸碱法和酶解法。
酸碱法常用的是酸提法和碱提法。
酸提法是用酸性介质将多糖从原料中释放出来,再通过中和或沉淀,得到多糖。
碱提法则是利用碱性介质将多糖从原料中提取出来。
酶解法则是使用特定的酶将多糖分解成较小的分子,然后通过过滤或离心得到目标多糖。
生物法是利用生物活性物质提取多糖,常用的有微生物发酵和超滤法。
微生物发酵是利用具有多糖分解能力的微生物对原料进行发酵,然后通过离心等手段得到多糖。
超滤法则是将发酵液经过超滤膜的过滤,使多糖留在膜上,得到纯净的多糖。
二、多糖在食品中的应用多糖在食品中的应用非常广泛,不仅可以作为增稠剂和稳定剂,还可以作为保湿剂、增甜剂和抗氧化剂等。
首先,多糖作为增稠剂和稳定剂,可以改善食品的质感,使其呈现出良好的流动性和黏稠度。
比如,将多糖添加到果冻中,可以增加果冻的黏稠度,使得果冻更加具有弹性和口感。
其次,多糖还可以作为保湿剂,可以保持食品的水分含量,延长食品的保鲜期。
例如,将多糖添加到面包中,可以提高面包的柔软度和保湿性,让面包更加美味。
另外,多糖还可以作为增甜剂来替代传统的糖类。
多糖相比于单糖,具有较低的热量和更稳定的甜味,因此成为了替代糖类的理想选择。
例如,在制作低糖饼干时,可以使用多糖来替代一部分糖类,降低热量含量,同时保持饼干的甜味。
植物多糖的分离纯化

植物多糖的分离纯化一、植物多糖的提取1 溶剂提取法1.1 水提法水对植物组织的穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质,沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出,有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1.2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势,目前报道的并不多。
而且即使有优势,在操作上还应严格控制酸度,因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾,为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样,碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1.4 生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶等。
1.5 超声提取法超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。
多糖提取方案(7月)

多糖提取方案方案一:热水侵提法材料5g→以1:10v加蒸馏水90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀重复三次→合并上清浓缩(抽滤,蒸发)→sevag去蛋白(正丁醇:氯仿=4:1,sevag:滤液=1:5,分液漏斗中反复进行,直到分界面处无白色混悬)→8000r/min离心10min→上清浓缩(抽滤,蒸发)→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案二:水提醇沉法材料5g→加10ML 85%乙醇回流2h(一次)→以1:10v加蒸馏水90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀(重复3次)→合并上清浓缩(抽滤,蒸发)→以1:5v加95%乙醇,4℃,静置24h→8000r/min离心→沉淀分别用无水乙醇,丙酮,乙醚抽洗(重复3次)→sevag去蛋白(正丁醇:氯仿=4:1,sevag:滤液=1:5,分液漏斗中反复进行,直到分界面处无白色混悬)→8000r/min离心10min→上清浓缩(抽滤,蒸发)→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案三:酶+热水侵提材料5g→以1:10v加蒸馏水,调节pH=6.0→加入1%复合酶,50℃水浴1h→90℃回流4h →8000r/min,10min离心→沉淀(重复3次)→合并上清浓缩(抽滤,蒸发)→sevag去蛋白(正丁醇:氯仿=4:1,sevag:滤液=1:5,分液漏斗中反复进行,直到分界面处无白色混悬)→8000r/min离心10min→上清浓缩(抽滤,蒸发)→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案四:微波辅助法材料5g→以1:10v加蒸馏水→微波低火,3min→90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀(重复3次)→合并上清浓缩(抽滤,蒸发)→sevag去蛋白(正丁醇:氯仿=4:1,sevag:滤液=1:5,分液漏斗中反复进行,直到分界面处无白色混悬)→8000r/min离心10min→上清浓缩(抽滤,蒸发)→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案五:超声波辅助法材料5g→以1:10v加蒸馏水→超声波600w,20min→90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀(重复3次)→合并上清浓缩(抽滤,蒸发)→sevag去蛋白(正丁醇:氯仿=4:1,sevag:滤液=1:5,分液漏斗中反复进行,直到分界面处无白色混悬)→8000r/min离心10min→上清浓缩(抽滤,蒸发)→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案六:高浓度酸预处理法20mg材料→加2ml,90%的甲酸溶液,混匀,→100℃沸水浴2h→旋转蒸发3次以除去甲酸→加6mol./L盐酸10ml,真空封管,置于80℃,水浴2.5h→调pH至中性6.5-7.0→用磷酸缓冲液(pH=7.0)定容50ml方案七:碱提取法材料5g→以1:10v加0.5mol/lNaOH水溶液→4℃中提取,离心取上清→用36%乙酸中和地白的胶状沉淀→用水洗涤得到多糖→浓缩(抽滤,蒸发)→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案八:盐提+水提+碱提+酸提材料5g→乙酸乙酯,丙酮索氏提取4h,去脂→1:10v,0.9%NaCl水溶液过夜→均浆,离心,重复3次,该上清为PC1→残渣于高压锅中120℃热水提30min,重复3次→上清过DEAE-Sephadex(A-50),柱,分别用磷酸缓冲液和1mol/Lnacl水溶液淋洗多糖PC2和酸性多糖PC2-A→0.5mol/lNaOH水溶液于4℃从以上残渣中提取上清,用36%乙酸中和地白的胶状沉淀→用水洗涤得到多糖PC3→残渣用88%甲酸提取后用水沉淀得到多糖PC4→分别测多糖的含量。
多糖的提纯化技术

多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法:以水为溶剂,可采用热水浸提或冷水浸提(植物多糖多采用热水浸提,可直接或离心去除杂质),由于多糖不溶于乙醇,可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法:有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解,可用盐酸或乙酸处理后,再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构,一般较少使用。
(3) 碱提法:一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定,可提高多糖的提取率,一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解,而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖提取分离的原理和方法

多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离是指从植物、海洋生物、微生物等来源中提取和分离多糖类化合物的过程。
其原理主要基于多糖的化学性质和溶解性特点。
多糖提取分离的方法主要有以下几种:
1. 溶剂提取法:利用有机溶剂(如水、醇类、醚类等)将多糖提取出来。
这种方法适用于多糖相对溶解性较好的样品。
2. 酶解法:利用特定酶解剂酶解样品中与多糖相结合的其他物质,使多糖分离出来。
常用的酶解剂有蛋白酶、纤维素酶等。
3. 离子交换层析法:利用树脂的阳离子或阴离子交换功能将多糖从样品中分离出来。
这种方法适用于多糖具有不同电荷性质的样品。
4. 等温沉淀法:通过调节多糖样品中的溶液温度和离子浓度,使多糖形成胶体,并在一定条件下沉淀。
常用的方法有醇法、果胶酸盐法等。
5. 凝胶过滤法:利用凝胶材料的孔隙大小将多糖与其他物质分离。
常用的凝胶材料有琼脂、琼脂糖等。
补充说明:以上提到的方法只是多糖提取分离的常用方法之一,实际操作中还可
以根据样品特点选择合适的提取和分离方法。
1.多糖的提取方法

1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,,多糖提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
1.1.2酸提法为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态,这种流体兼有液体和气体的特点,密度大,粘稠度小,有极高的溶解,渗透到提取材料的基质中,发挥非常有效的萃取功能。
而且这种溶解能力随着压力的升高而增大,提取结束后,再通过减压将其释放出来,具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。
由于CO2的超临界条件(TC=304.6℃,Tp=7.38MPa)容易达到,常用于超临界萃取的溶剂,在压力为8~40MPa时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物,在加入改性剂后则可溶解极性化物。
壁内的活性多糖,多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH值有直接的关系。
酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。
此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。
1.3物理强化法1.3.1微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质,到达被萃取物料的内部,能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升,细胞内部压力超过细胞壁承受力,细胞破裂,细胞内有效成分流出,在较低的温度下溶解于萃取媒质,通过进一步过滤和分离,获得萃取物料。
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一、植物多糖的提取
1 溶剂提取法
1.1 水提法
水对植物组织的穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质,沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出,有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1.2酸碱提法
有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势,目前报道的并不多。
而且即使有优势,在操作上还应严格控制酸度,因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾,为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样,碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与
酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1.4 生物酶提取法
酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶等。
1.5 超声提取法
超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。
另外,超声波的热效应使水温基本在57℃,对原料有水浴作用。
超声波提取与传统的提取方法相比,有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
超声提取的影响因素有:超声时间、超声频率(一般低频中提取效率高,但也有例外)、料液比和温度等。
1.6 微波提取
微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波,微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部,由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
微波技术应用于植物细胞破壁,有效地提高了收率。
具有穿透力强、选择性高、加
热效率高等特点。
影响微波浸提的主要因素为浸提时间、样品和提取溶剂的含水量,溶剂的介电常数和电导率(介电常数和电导率的溶剂对微波的吸收较好)、微波功率等。
但是由于微波泄漏对操作者影响很大,因而对设备的要求较高,这对微波的研究及应用带来了一定的困难。
二、植物多糖的分离纯化
在多糖提取物中,常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质,必须分别除去.一般是先脱除非多糖组分,再对多糖组分进行分级.
2.1 除蛋白
除蛋白质时一般选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂来处理,如酚、三氯乙酸、鞣酸等。
但必须处理时间短,温度低,避免多糖降解。
Sevage法(氯仿:戊醇/丁醇=4:1)和三氟三氯乙烷法在避免降解上有较好效果但要达到除尽游离蛋白质的目的仍需反复处理。
如能加入蛋白质水解酶,使蛋白质大分子进行一定程度的降解,再用Sevage法处理,一般效果更好。
为了避免使用有机溶剂也可采用反复冻融的方法除蛋白,将多糖液浓缩后,一20℃室温反复冻融7~8次,离心除去蛋白质。
另外,蛋白质在等电点时溶解度最小,用氢氧化钙饱和液调pH10~pH11可除去偏碱性的蛋白质,然后再用硫酸调pH5~pH6,可除去偏酸性的蛋白质。
冻融和等电点沉淀除蛋白质操作简单,但多糖液里往往有低浓度的蛋白质残留,应与其它方法结合使用。
2.2 脱色
植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深,可用吸附剂(纤维素、硅藻土、活性炭等)、离子交换柱(DEAE一纤维素)、氧化剂(H2O2)等脱除。
活性炭比表面积大,吸附能力强,在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了0.1%左右的活性炭,煮沸后滤过即完成了脱色操作。
此法成本低廉,适合工业化生产。
2.3 除小分子杂质
小分子杂质如低聚寡糖的残留往往影响多糖的生物活性,需要进一步脱除,提高纯度。
传统的方法是透析法,该法操作简单、技术成熟,但周期长,往往需要2一3天,常温下操作有可能造成多糖的霉变,必要时需加入少量防腐剂或需在低温条件下进行。
随着膜分离技术的发展,纤维滤器透析法已经发展起来了,它利用不同孔径的膜使大小不同的分子分级,这种方式可缩短生产周期,而且条件温和,无疑是多糖脱除杂质的一条新途径。
2.4 多糖的分级纯化
采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物,分级的方法可达到纯化的目的.可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等),也可按分子所带基团的性质分级.
2.4.1按溶解性不同分离
2.4.1.1分步沉淀法
分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质,从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀.
2.4.1.2 盐析法
盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
常用的盐析剂有氯化钠、氯化钾、硫酸铵等,其中以硫酸铵最佳。
2.4.2 按电离性质不同分离
2.4.2.1季胺盐沉淀法
季胺氢氧化物是一类乳化剂,能与酸性多糖形成不溶性化合物季铵络合物,此络合物在低离子强度的水溶液中不溶解而产生沉淀。
若提高多糖液pH值或加入硼砂缓冲液,也可使中性多糖沉淀分离。
常用季铵盐有十六烷基三甲基季铵盐的溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。
2.4.3 柱层析法
2.4.
3.1凝胶柱层析法
凝胶柱层析法常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(Sepharose),以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂,从而使不同大小的多糖分子得到分离纯化,但不适宜粘多糖的分离。
2.4.
3.2纤维素阴离子交换剂柱层析法
纤维素阴离子交换剂柱层析法常用的交换剂为DEAE一纤维素和ECTEOLA一纤维素,分类硼砂型和碱型两种,洗脱剂可用不同浓度碱溶液、硼砂溶液、盐溶液,其优点可吸附杂质、纯化多糖,并适用于分离各种酸性、中性多糖和粘多糖。
如百合多糖、北沙参多糖、太子参多糖等。
2.4.
3.3 活性炭柱层析法
活性炭吸附量大、效率高,是分离水溶性物质的常用吸附剂。
柱层析时活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀释剂,以增加溶液的流速。
糖溶液上柱后先用水洗脱无机盐、单糖等再依次增加乙醇浓度进行洗脱。
2.4.
3.4 离子交换柱层析和普通凝胶柱层析联用法
有些植物的多糖成分复杂,除中性多糖外,还含有糖醛酸等,因此往往两种不同性质的色谱柱联用才能得到单一多糖组分。
2.4.
3.5 三种层析柱联用
采用离子交换葡聚糖凝胶柱、丙烯葡聚糖凝胶柱和葡聚糖凝胶柱三者联用,即先进行DEAE—SephadexA柱层析,用蒸馏水洗脱。
水洗组分进一步用SephacrylS 柱层析,得到主要组分再用SephadexG一100柱层析,有时会有较高的得率。
三、多糖的纯度鉴定
经过分级纯化的多糖在测定结构前须进行纯度鉴定.而且多糖的纯度不能用通常化合物的纯度标准来衡量,因为即便是多糖纯品,其微观也并不均一,仅代表相似链长的多糖分子的平均分布,通常所谓的多糖纯品也只是一定相对分子质量范围的多糖的均一组分.目前常用于多糖纯度的鉴定方法有:高效液相、凝胶层析法、电泳法、色谱法、旋光度法等.
四、常见问题
多糖制备过程中蛋白质的脱除是目前分离纯化多糖的难点。
Sevag法需要消耗大量的有机溶剂,且操作烦琐;三氟三氯乙烷的沸点较低(bp56℃)易挥发,不宜大量应用;三氯乙酸可引起多糖的降解,从而影响其生理活性;酶价格昂贵,不适合工业化生产。
可以借鉴其它蛋白质脱除的方法,例如用天然澄清剂能简化提取工艺,提高多糖纯度。
脱色也是多糖提取纯化过程中面临的一个难题。
活性炭会吸附多糖而造成多糖的损失;H2O2氧化脱色容易引起有些多糖的降解
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