多糖的提取分离方法
多糖的提取方法

多糖的提取方法植物和动物体内含有丰富的多糖,在医药、食品、化妆品等领域有着重要的应用价值。
为了充分利用这些多糖资源,科学家们一直在探索各种多糖的提取方法。
本文将介绍几种常用的多糖提取方法,包括热水提取法、酶解法、酸碱法、超声波法和微波法。
一、热水提取法热水提取法是一种简单且常用的多糖提取方法。
首先,将植物或动物材料粉碎成粉末状,然后用适量的热水浸泡一段时间。
随后,将浸泡液过滤,得到的滤液中含有多糖。
最后,通过浓缩、沉淀和干燥等步骤,得到多糖提取物。
二、酶解法酶解法是利用特定的酶对植物或动物材料中的多糖进行水解的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的酶液浸泡一段时间,酶液中的酶能够降解多糖。
随后,将酶解液经过滤、浓缩和沉淀等步骤,得到多糖提取物。
三、酸碱法酸碱法是利用酸或碱对植物或动物材料中的多糖进行提取的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的酸或碱溶液浸泡一段时间。
酸或碱的作用能够将多糖与其他成分分离。
随后,通过中和、过滤、浓缩和沉淀等步骤,得到多糖提取物。
四、超声波法超声波法是利用超声波的机械作用对植物或动物材料进行提取的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后,将材料置于超声波设备中,超声波的振动能够促进多糖的释放。
最后,通过过滤、浓缩和干燥等步骤,得到多糖提取物。
五、微波法微波法是利用微波辐射对植物或动物材料进行提取的方法。
首先,将材料粉碎成粉末状,然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后,将材料置于微波设备中,微波辐射能够加速多糖的释放。
最后,通过过滤、浓缩和干燥等步骤,得到多糖提取物。
在多糖的提取过程中,需要注意以下几点:首先,选择合适的提取方法,根据不同的多糖类型和材料特性进行选择;其次,控制提取条件,如温度、时间、酶的浓度等,以保证提取效果;最后,采用适当的分离和纯化方法,以得到纯度较高的多糖提取物。
多糖的提取方法多种多样,每种方法都有其适用的场景。
多糖各种提取方法

一、植物多糖的提取1溶剂提取法1.1水提法水对植物组织的穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质,沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出,有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1.2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势,目前报道的并不多。
而且即使有优势,在操作上还应严格控制酸度,因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾,为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样,碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1.4生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶1.5超声提取法超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的空化作用对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。
食品中多糖的提取与应用

食品中多糖的提取与应用食品是人类生活中不可或缺的一部分,而其中的多糖则成为了近年来备受关注的研究领域。
多糖是一种复杂的碳水化合物,广泛存在于植物和动物的组织中。
它们由若干个单糖组成,具有重要的营养和生物活性,因此在食品科学中应用广泛。
本文将探讨食品中多糖的提取方法和其在食品中的应用。
一、多糖的提取方法多糖的提取方法主要包括物理法、化学法和生物法。
物理法常用的有水煮提取法、超声波辅助法和微波辅助法。
水煮提取法是最常见的方法,通过将原料用水煮沸,使多糖溶于水中,再通过离心等分离手段得到多糖。
超声波和微波辅助法则是利用超声波或微波的物理效应,提高多糖的溶出率和提取效率。
化学法包括酸碱法和酶解法。
酸碱法常用的是酸提法和碱提法。
酸提法是用酸性介质将多糖从原料中释放出来,再通过中和或沉淀,得到多糖。
碱提法则是利用碱性介质将多糖从原料中提取出来。
酶解法则是使用特定的酶将多糖分解成较小的分子,然后通过过滤或离心得到目标多糖。
生物法是利用生物活性物质提取多糖,常用的有微生物发酵和超滤法。
微生物发酵是利用具有多糖分解能力的微生物对原料进行发酵,然后通过离心等手段得到多糖。
超滤法则是将发酵液经过超滤膜的过滤,使多糖留在膜上,得到纯净的多糖。
二、多糖在食品中的应用多糖在食品中的应用非常广泛,不仅可以作为增稠剂和稳定剂,还可以作为保湿剂、增甜剂和抗氧化剂等。
首先,多糖作为增稠剂和稳定剂,可以改善食品的质感,使其呈现出良好的流动性和黏稠度。
比如,将多糖添加到果冻中,可以增加果冻的黏稠度,使得果冻更加具有弹性和口感。
其次,多糖还可以作为保湿剂,可以保持食品的水分含量,延长食品的保鲜期。
例如,将多糖添加到面包中,可以提高面包的柔软度和保湿性,让面包更加美味。
另外,多糖还可以作为增甜剂来替代传统的糖类。
多糖相比于单糖,具有较低的热量和更稳定的甜味,因此成为了替代糖类的理想选择。
例如,在制作低糖饼干时,可以使用多糖来替代一部分糖类,降低热量含量,同时保持饼干的甜味。
多糖提取提取工艺

多糖提取提取工艺
糖提取工艺主要分为细胞壁破碎、酶解、凝固、分离、纯化等步骤。
1、细胞壁破破:细胞壁破碎是糖提取工艺中的第一步,主要是利用
机械方法,如研磨、搅拌等方式,对细胞壁或是植物细胞进行破坏,使其
内含的糖分被释放出来。
2、酶解:酶解是糖提取工艺中的第二步,主要是利用植物内含酶作用,将细胞糖解为葡萄糖或果糖。
3、凝固:凝固是糖提取工艺中的第三步,通过加热蒸馏,使水分蒸发,提取的糖浓缩,形成糖液浆,去除有害物质。
4、分离:分离是糖提取工艺中的第四步,主要是通过沉淀、浓缩、
萃取、膏化等方法,将有用糖组分从糖液浆中提取出来,去除杂质。
5、纯化:纯化是糖提取工艺中的最后一步,通过适当的方式,使糖
组分更加纯净,除去微量的杂质。
多糖的提纯化技术

多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法:以水为溶剂,可采用热水浸提或冷水浸提(植物多糖多采用热水浸提,可直接或离心去除杂质),由于多糖不溶于乙醇,可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法:有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解,可用盐酸或乙酸处理后,再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构,一般较少使用。
(3) 碱提法:一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定,可提高多糖的提取率,一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解,而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖提取分离的原理和方法

多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离是指从植物、海洋生物、微生物等来源中提取和分离多糖类化合物的过程。
其原理主要基于多糖的化学性质和溶解性特点。
多糖提取分离的方法主要有以下几种:
1. 溶剂提取法:利用有机溶剂(如水、醇类、醚类等)将多糖提取出来。
这种方法适用于多糖相对溶解性较好的样品。
2. 酶解法:利用特定酶解剂酶解样品中与多糖相结合的其他物质,使多糖分离出来。
常用的酶解剂有蛋白酶、纤维素酶等。
3. 离子交换层析法:利用树脂的阳离子或阴离子交换功能将多糖从样品中分离出来。
这种方法适用于多糖具有不同电荷性质的样品。
4. 等温沉淀法:通过调节多糖样品中的溶液温度和离子浓度,使多糖形成胶体,并在一定条件下沉淀。
常用的方法有醇法、果胶酸盐法等。
5. 凝胶过滤法:利用凝胶材料的孔隙大小将多糖与其他物质分离。
常用的凝胶材料有琼脂、琼脂糖等。
补充说明:以上提到的方法只是多糖提取分离的常用方法之一,实际操作中还可
以根据样品特点选择合适的提取和分离方法。
多糖的提取与分离工艺研究

多糖的提取与分离工艺研究多糖是一类重要的生物大分子,广泛存在于自然界的动植物体内。
它们具有重要的生理活性和药理作用,因此在医学、食品和化妆品等领域有着广泛的应用前景。
多糖的提取与分离工艺对于保证多糖的纯度和活性至关重要。
本文将探讨多糖提取与分离工艺的研究进展,并介绍不同的提取与分离方法。
一、多糖的提取方法目前,常见的多糖提取方法主要有热水提取法、酶解法、超声波辅助提取法和微波辅助提取法等。
热水提取法是最常用且简便的方法之一。
它适用于被提取物质相对稳定的情况。
该方法的原理是通过加热水溶液来促进多糖的溶解并进行提取。
热水提取法操作简单、成本低,但由于温度和时间的控制不当,可能导致多糖的降解。
酶解法是利用特定酶解酶对底物进行酶解来提取多糖。
该方法选择合适的酶解酶,可以针对性地提取想要的多糖。
但该方法相对复杂,需要较长的酶解时间,且酶解酶的价格较高,增加了成本。
超声波辅助提取法采用超声波振荡的能量,通过气泡的超声效应破碎细胞壁,使多糖从细胞内释放出来。
这种方法具有提取效率高、时间短等优点,但由于超声波对样品的温升和溶剂蒸发等影响,需要合理控制实验条件以保证提取效果。
微波辅助提取法是指利用微波辐射加热来提取多糖。
微波可以迅速加热和脱溶,减少了提取时间,并提高了多糖的产率。
但该方法对设备要求较高,且需要控制微波加热的功率和时间,以避免多糖的热解。
二、多糖的分离方法在多糖提取后,为了得到纯度较高的多糖,需要进行分离和纯化。
常用的多糖分离方法包括离子交换色谱、凝胶色谱、高速离心、膜过滤等。
离子交换色谱法利用离子交换基质将多糖分子吸附于基质,通过调节洗脱溶液中的离子浓度和pH值来控制多糖的吸附和解吸。
离子交换色谱法分离效果好,纯度高,但操作复杂,且需要大量的洗脱溶液和时间。
凝胶色谱法是利用凝胶颗粒对多糖进行筛选分离的方法。
多糖在凝胶柱中被颗粒孔隙捕获,大分子的多糖被速度较快地排除,而小分子的多糖则通过凝胶柱逐渐洗脱出来。
多糖的提取分离方法

1、多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理。
动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1.1溶剂法1.1.1水提醇沉法水提醇沉法就是提取多糖最常用的一种方法。
多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置 5 h,多糖的质量分数与得率均较高。
影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
1.1.2酸提法为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H+的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1.1.3碱提法多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味与色泽。
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1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1.1溶剂法1.1.1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5 h,多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
1.1.2酸提法为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H+的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1.1.3碱提法多糖在碱性溶液中稳定,碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味和色泽。
1.1.4超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。
超临界流体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态,这种流体兼有液体和气体的特点,密度大,粘稠度小,有极高的溶解,渗透到提取材料的基质中,发挥非常有效的萃取功能。
而且这种溶解能力随着压力的升高而增大,提取结束后,再通过减压将其释放出来,具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。
由于CO2的超临界条件(TC=304.6 ℃,Tp=7.38 MPa)容易达到,常用于超临界萃取的溶剂,在压力为8~40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物,在加入改性剂后则可溶解极性化物。
该法的缺点是设备复杂,运行成本高,提取范围有限。
1.2酶解法1.2.1单一酶解法单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖,从而提高提取率的生物技术。
其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。
蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用,使其结构变得松散;蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解,降低它们对原料的结合力,有利于多糖的浸出。
1.2.2复合酶解法复合酶解法采用一定比例的果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶,主要利用纤维素酶和果胶酶水解纤维素和果胶,使植物组织细胞的细胞壁破裂,释放细胞壁内的活性多糖,多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH 值有直接的关系。
酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。
此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。
1.3物理强化法1.3.1微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质,到达被萃取物料的内部,能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升,细胞内部压力超过细胞壁承受力,细胞破裂,细胞内有效成分流出,在较低的温度下溶解于萃取媒质,通过进一步过滤和分离,获得萃取物料。
微波辅助提取多糖和其他的萃取方法比较,微波萃取效率高,操作简单,且不会引入杂质,多糖纯度高,能耗小,操作费用低,符合环境保护要求,是很好的多糖提取方法。
1.3.2超声波辅助提取法超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。
机械效应可增大介质的运动速度及穿透力,能有效的破碎生物细胞和组织,从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中;空化效应使整个生物体破裂,整个破裂过程在瞬间完成,有利于有效成分的溶出;热效应增大了有效成分的溶解速度,这种热效应是瞬间的,可使被提取成分的生物活性尽量保持不变;此外,许多次级效应也能促进提取材料中有效成分的溶解,提高了提取率。
超声波提取与水煮法醇沉法相比,萃取充分,提取时间短;与浸泡法相比,提取率高。
1.3.3高压脉冲法高压脉冲法是对两电极间的流态物料反复施加高电压的短脉冲(典型为20~80 kV/cm)进行处理,作用机理有多种假说,如细胞膜穿孔效应、电磁机制模型、粘弹极性形成模型、电解产物效应、臭氧效应等,研究最多的是细胞膜穿孔效应。
动物、植物、微生物的细胞,在外加电场作用下,产生横跨膜电位,绝缘的生物膜由于电场形成了微孔,通透性发生变化,当整个膜电位达到极限值(约为1 V)时,膜破裂,膜结构变成无序状态,形成细孔,渗透能力增强。
电位差达到临界点,细胞破裂。
2.多糖的分离纯化2.1 除蛋白2.1.1Sevage 法根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点,用V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或4∶1,混合物剧烈振摇20~30 min,蛋白质变性生成凝胶,离心分离,分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。
此种只能除去少量蛋白质,效率不高,须反复多次,多糖有损失。
但此方法比较温和,在避免多糖降解上效果较好,如配合加入一些蛋白质水解酶,用Sevage 法效果更佳。
此法不能除去脂蛋白,因为脂蛋白溶于氯仿。
2.1.2三氟三氯乙烷法将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合,低温搅拌10 min 左右,离心分离得上层水层,水层继续用上述方法反复处理几次,得无蛋白质的多糖溶液,此法效率较Seavg 法高,但溶剂沸点低,易挥发,不宜大量应用。
2.1.3三氯乙酸法三氯乙酸是一种有机酸,使多糖提取液中的蛋白质与有机酸作用而变性沉淀。
该法是在多糖水提液中滴加5 %~10 %与多糖水提取液等体积的三氯乙酸,混匀静置过夜,离心除去胶状沉淀,重复以上的操作直至溶液不再继续混浊为止,得无蛋白质的多糖。
三氯乙酸浓度越大,除蛋白质效果越好,但对多糖的影响也越大,可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用,使多糖降解,而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强。
植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质,也可先用蛋白水解酶,使样品中的蛋白质部分降解后再用Sevag 法效果更好;微生物多糖去除蛋白常采用Sevag 法、三氟三氯乙烷法;也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白。
2.2多糖的分离主要有分级沉淀、季铵盐沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离、膜分离、透析、电渗析等,目前大多采用DEAE-凝胶或其他各种不同类型的凝胶柱层析以及离子交换色谱法。
2.2.1分级沉淀法大多数活性多糖可溶于水,3 个碳以下的多糖还可溶于乙醇,随着聚合度的增大,多糖在乙醇中的溶解度逐渐降低。
根据这一性质可在多糖的浓缩水溶液中分批加入乙醇,使乙醇的体积浓度逐渐增加到50,100,200,900 mL/L,从而使不同聚合度的多糖分别沉淀析出。
2.2.2色谱分离法常用两种色谱分离方法:一是凝胶柱色谱法,二是离子交换色谱法。
2.2.3膜分离法膜分离技术(membrane separation technology,MST)是一种高效分离技术,分离过程以选择透过性膜作为分离介质,通过在膜两侧施加某种推动力(压力差、化学位差、电位差等),使原料液中组分有选择性的通过膜。
目前应用较多的是超滤和微滤技术。
3多糖的分析鉴定3.1含量的测定测定方法:硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe 法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、HPLC 法、凝胶电泳法、亲和电泳法、连续流动分析法检测法[44]、次亚碘酸盐定量法、蒽酮-硫酸法(总糖)、DNS 法(还原法)、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等。
每种方法只对某些多糖的测量效果好。
比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法和电泳法等可同时用于多糖的定性定量分析。
3.2纯度鉴定多糖是高分子化合物,其纯品微观上是不均一的,通常所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分。
多糖纯度鉴定的常用方法:超离心、高压电泳、凝胶层析、HLPC 法等。
现在应用较多的是HLPC 法,旋光度测定也是纯度测定的一种方法。
3.3分子量的测定多糖分子量的测定是研究多糖性质的一项重要工作。
常用方法:渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC 法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC 法、MALDI-TOF-MS 法。
3.4结构测定3.4.1多糖一级结构测定多糖的一级结构分析,主要是分析组成多糖的单糖类型、数目、连接方式及苷建构型。
常用化学法和仪器分析法。
多糖组分与分子比例测定法:部分酸解法、完全酶解法、色谱法;吡喃、呋喃环形式结构的分析:红外光谱;连接次序:选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振;α-β-异头异构体:糖苷酶水解、核磁共振;羟基被取代情况:甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、Smith 降解法和测硫酸基法(terho 法)、核磁共振、质谱法;糖链、肽链连接方式:单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应;多糖结构的分析方法很多,迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构的分析。
仪器分析与化学方法相结合是常用的多糖结构测定方法。
3.4.2多糖高级结构测定目前研究多糖的二级结构常用的手段是NMR 技术,如2D-NMR,13C 谱,通用的方法是将现代NMR 技术与理论计算相结合通过一定的理论计算筛选构象,主要的理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算。
圆二色谱法(CD)也可用于糖的构象分析,近年来,以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活动的规律已达到前所未有的深度和广度,多糖作为一类重要的生物活性大分子其结构的研究势必推动对多糖的认识向深层次发展。