瑞氏染液说明书
瑞氏吉姆萨复合染色液
外周血涂片的制作方法1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。
2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。
以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。
其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。
3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量，甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。
但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。
多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。
4、染色：瑞氏-基姆萨双染1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。
将载片平放在玻璃板上准备染色。
2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量）3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。
等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS溶液。
继续染色2到3分钟。
4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。
冲片结束后将载片放到阴凉处风干。
5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。
染色时间约为10分钟。
时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。
5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。
6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。
用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。
在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。
所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
瑞氏染液使用说明
瑞氏染液使用说明货号：G1040规格：50ml/100ml保存：室温避光保存，有效期至少2年。
产品说明：瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇。
伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。
美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。
甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。
后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。
使用方法：本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。
具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。
1、取涂片、自然干燥。
2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。
3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。
4、水洗、吸干、镜检。
5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。
注意事项：1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。
2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。
冲洗时间不能过久，以防脱色。
3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。
4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。
染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。
相关试剂：P210010×多聚赖氨酸G1010姬姆萨染色液G1100伊红染色液G1140苏木素染色液(常规染色)G1120H-E染色试剂盒。
瑞氏染色操作步骤
瑞氏染色操作步骤瑞氏染色是一种常用的细胞染色方法，主要用于观察细胞核形态和染色体结构。
下面将详细介绍瑞氏染色的操作步骤。
一、实验前准备1.1 材料准备瑞氏染色所需的材料有：0.075mol/L KCl、甲醛、乙酸、96%乙醇、苯酚红溶液、甲基绿溶液和天然丝。
1.2 设备准备实验所需的设备有：离心机、恒温水浴器和显微镜等。
二、样品制备2.1 细胞培养首先需要培养好待检测的细胞，使其达到适当生长状态。
在培养过程中，应注意避免污染和过度生长等问题。
2.2 细胞处理将待检测的细胞收集到离心管中，并加入0.075mol/L KCl缓冲液进行离心。
将上清液倒掉，再加入甲醛进行固定处理。
2.3 固定处理将含有甲醛的离心管放置在恒温水浴器中，在37℃下固定处理30分钟，使细胞膜破裂并释放染色体。
2.4 滴定染色将固定后的细胞加入苯酚红溶液，再滴入甲基绿溶液，使染料均匀地覆盖在细胞上。
三、显微镜观察将染好色的细胞片放置在显微镜下进行观察。
可以通过调节显微镜的焦距和光源亮度等参数来获得更清晰的图像。
四、实验注意事项4.1 操作过程中应注意保持无菌环境，避免污染样品。
4.2 在固定处理时，应控制好温度和时间，避免过度固定或过短固定导致样品失真。
4.3 在滴定染色时，应注意均匀地覆盖在细胞上，并避免出现气泡等问题。
总结：瑞氏染色是一种常用的细胞染色方法，其操作步骤包括实验前准备、样品制备、显微镜观察和实验注意事项等方面。
在操作过程中需要注意保持无菌环境、控制好温度和时间、均匀地覆盖染料等问题，以获得更准确的实验结果。
瑞氏-姬姆萨染液使用说明书
4、显微观察：将干燥后的载片被染成红色。
注意事项
1. 染色时间与室温及细胞多少有关。室温低、细胞多则染色时间要长；反之，可减少染色
时间。必要时可增加染液量或延长时间。冲洗前，应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清
楚，核质是否分明。应该在具体实践中摸索合适的时间，特别是在更换染液时。每批染色液，
100mL
/
说明书
1份
1
均需试染，以便掌握染色时间。
2. 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗，否则会使染料沉着在载片上。
3. 冲洗完的载片应立放于支架上，防止剩余水分浸泡而导致脱色。
温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。
储存温度
避光储存于室温。
包装清单
货号
品名
包装
HCY115
瑞氏-姬姆萨染液
2）将瑞氏-吉姆萨染液倒入染缸内，使染液覆盖载片上的细胞。具体染色时间视细胞而定，
一般 3~30min，染色时最好在镜下观察；
3）染色后水洗，先用 PBS 溶液漂洗载片，再用小股水流冲洗，防止将大量的细胞从载片上
冲落下来而影响后续观察。冲片结束后将载片放到阴凉处风干。
3、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。
对胞质和中性颗粒则着色较差。
为兼顾二者之长，选用复合染色法。即瑞氏-吉姆萨染液。
染色步骤
1、涂片并固定：将细胞均匀的涂布于洁净的载玻片上，待其干燥后进行固定。
固定液的选择视具体情况而定，多数细胞可用甲醇固定。甲醇固定：涂片干燥后浸入甲醇内，
固定时间 15-30min。
2、染色：
1）固定后，室温下通风晾干。将载片置于染缸内准备染色；
瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料，血红蛋白，嗜酸性颗粒
瑞氏染液
新离解。 ○缓冲液须保持一定的 pH 使染色稳定，PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8， ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使
pH 恒定。 缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）： 配方 1 ： 配方 2： 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至 1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。 姬姆萨（Giemsa's stain；天青-伊红）染色 1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2 号合成的。 2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制： 姬姆萨染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（AR） 33ml 或 500ml 甘油（AR） 33ml 或 500ml ●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56℃水温箱内，90～120 分 钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越 长越好。 ●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液 1ml，加 DDH2O10ml 混匀。即可使用。 染色步骤 （1）先用甲醇固定 2～3 分钟。 （2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液 15～30 分钟。 （3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。 染液鉴定 瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取 1 滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取 1 滴染液加 1 滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH 是 否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。 混合染色 瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色： ●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识 别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 ●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗 粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。 ●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。 染色步骤： 1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖； 2. 稍等片刻再加姬姆萨染液 2-3 滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)； 3. 稍等 1-2 分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液 形成表面张力而终止染色液加入； 4. 染色 30-40 分钟； 5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少 3 分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。
2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。
将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。
染液配好后放于室温下，一周后即可使用。
新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。
久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。
染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。
2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。
2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。
配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。
3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。
4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。
显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。
白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。
细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。
瑞氏染色
www.bestbio.coቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ.cn
-1-
电话：400-676-6191 邮箱：bestbio@
传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
相关产品：
产品 苏木素染色液 伊红染色液 中性红染色液 台盼蓝染色液 DAPI 染色液 糖元染色试剂盒 过氧化物酶染色试剂盒 血管通透性测试染色试剂盒
-2-
电话：400-676-6191 邮箱：bestbio@
传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品号 403001 403002 403003 403004 403005 403097 403098 403099
产品 TRAP 染色试剂盒 Masson 染色试剂盒 革兰氏染色试剂盒 瑞氏染色试剂盒 姬姆萨染色试剂盒 亚甲基蓝染色试剂盒 碱性磷酸酶染色试剂盒 酸性磷酸酶染色试剂盒
产品说明书
产品号 403022 403023 403091 403092 403093 403094 403095 403096
结果分析： 细菌染成蓝色；细胞核呈蓝色；血红蛋白、嗜酸性颗粒染成粉红色；淋巴细胞胞浆、嗜 碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝色；组织细胞的细胞质呈红色；完全成熟的红细胞呈粉红色。
注意事项： 1、 推片方法：取全血 3ul 左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片 30 度角，置于血 滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再均匀沿载玻片平 面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。 2、 涂片时不要太厚也不要太薄。 3、 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血 膜易脱落。 4、 染色过深或过浅应调整染色时间。 5、 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用 75%乙醇脱色 3-5 秒。 6、 染色液可重复使用。
瑞氏染液
3.pH的影响 （pH6.4～pH6.8）
细胞各种成分均属蛋白质，因蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，医.学教.育网整.中性颗粒偏粗，呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致细胞染色呈色异常，形态难以识别，甚至错定，否则细胞在染色过程中容易脱落。
（2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以医.学教.育网整.防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。
（3）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。
瑞氏染色法是临床上最常用的染色方法。
1.瑞氏染料
由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。亚甲蓝（又名美蓝）为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝，有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青）。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形态。
2.染色原理
既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
北京索莱宝科技有限公司
瑞氏染液说明书
货号：G1040
规格：50mL/100mL
保存：室温避光保存，有效期至少2年。
产品说明：
瑞氏染料是由碱性染料美蓝（methylene blue）和酸性染料伊红（Eosin Y）组成的复合染料，溶于甲醇。
伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。
美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。
甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。
后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。
使用方法：
本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。
具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。
1、取涂片、自然干燥。
2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。
3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。
4、水洗、吸干、镜检。
5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。
注意事项：
1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。
2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。
冲洗时间不能过久，以防脱色。
3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。
4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。
染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。
第1页共1页。