分离与富集
分析化学中常用的分离和富集方法
分析化学中常用的分离和富集方法1.蒸馏法：蒸馏是根据溶液中各组分的沸点差异来进行分离的方法。
通过加热混合液体使其汽化，然后再冷凝收集汽化物，从而分离不同沸点的组分。
蒸馏法适用于溶液中的挥发性组分富集和纯化。
2.萃取法：萃取是利用两种或多种不相溶液体的亲和性差异将待分析的组分从混合体系中转移到单一溶剂中的分离方法。
常见的有液液萃取和固相萃取。
萃取法适用于挥发性差异较小的物质分离。
3.结晶法：结晶是根据物质在溶液中的溶解度差异来进行分离的方法。
通过逐渐降低溶解度使其中一种或几种溶质结晶出来，从而实现分离和富集。
结晶法适用于固体组分富集和纯化。
4.洗涤法：洗涤是通过溶解或稀释洗涤剂来将带有目标分子的样品与杂质分离的方法。
洗涤法适用于固态、液态和气态混合物中分离和富集。
5.离子交换法：离子交换是通过离子交换树脂的吸附作用来分离和富集组分的方法。
树脂上的离子可与溶液中的离子发生交换，从而实现目标组分的富集。
离子交换法适用于溶液中离子的分离和富集。
6.气相色谱法：气相色谱是一种利用气相色谱柱对待分析物进行分离的方法。
根据化合物在不同固定相上的吸附特性差异进行分离和富集。
气相色谱法适用于气态和挥发性物质的分离和富集。
7.液相色谱法：液相色谱是一种利用液相色谱柱对待分析物进行分离的方法。
根据待分析物在流动相和固定相之间的分配系数差异进行分离和富集。
液相色谱法适用于液态和溶液中的分离和富集。
8.电泳法：电泳是一种利用电场对待分析物进行分离和富集的方法。
根据待分析物在电场中的迁移速度差异来分离和富集。
电泳法适用于溶液中离子和带电粒子的分离和富集。
以上是常见的分离和富集方法，每一种方法在不同场合的适应性和分离效果各有差异。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法。
不同的分析问题可能需要结合多种方法的优势来达到理想的分析结果。
化学中的有机物分离与富集技术
化学中的有机物分离与富集技术有机物是一类重要的化合物，在生命体系中发挥着重要的作用，同时也被广泛用于工业生产。
在化学分析和研究中，有机物的分离与富集技术显得尤为重要。
一、有机物分离技术有机物的分离技术主要包括抽提、蒸馏、结晶、萃取、层析等方法。
1. 抽提抽提法是将物质从混合物中抽出并分离的过程，适用于有机物的分离。
有机物常用的溶剂包括醚、苯、丙酮、甲醇等。
将混合物与溶剂共同加热搅拌，使目标化合物被溶解在溶液中，然后进行分离。
抽提法可以进行分离，但对化学品的性质和相容性会带来一些限制。
2. 蒸馏蒸馏是一种基于化合物熔点和沸点差异的分离技术。
当沸点高的化合物与沸点低的不同化合物混合时，将在不同的温度下沸腾。
利用沸点差异，可以分离出化合物。
蒸馏可用于分离有机物和无机物、分离不同有机化合物以及富集氢气等方面。
3. 结晶结晶法是通过控制化合物的溶解度来分离目标有机物。
在水溶液中加入一定量的溶剂，使得目标化合物的溶解度降低，超出饱和度后溶剂无法继续溶解，就会形成晶体。
结晶可以在物理和化学实验中进行有机物的分离，如有机合成反应物的分离，纯化等。
4. 萃取萃取法是一种基于分配系数的分离技术。
用两种不相容的液体（如水和苯，或水和乙酸乙酯）进行萃取，两相之间存在分配，不同化合物在两相中的分配系数不同。
萃取技术可以进行有机化合物之间的分离，如异构体、同分异构体等有机物的分离。
5. 层析层析法是通过化合物在不同介质中迁移速率差异来进行有机物的分离。
不同介质对不同的化合物有不同的亲和力，因此它们会以不同的速度运动。
分子大小也是影响分离能力的因素之一。
层析法可以进行复杂混合物的分离，并可应用于色谱、离子交换层析、凝胶过滤层析等领域。
二、有机物富集技术在分子生物学、食品安全检测、环境监测等领域，有机物富集技术被广泛应用，其中包括前处理、萃取、借助固相萃取技术日益得到广泛使用。
1. 前处理前处理是将待分析样品加以处理使其适于进一步分析的过程。
(4)第四章 分离与富集
其胶团浓度等于CMC。
溶液中的疏水性物质与表面活性剂的疏水基团结合， 被萃取进入表面活性剂相，而亲水性物质仍留在水相中， 再经两相分离，就可将样品中的物质分离出来。
（二）浊点萃取在痕量金属元素分析中的应用
金属元素的浊点萃取的操作步骤简单：样品→加螯 合剂→加表面活性剂→加添加剂→水浴加热至浊点→离 心→冷却→分离。但为了达到定量的分离和高富集率及 后续的检测，其实验条件必须进行优化。 （1）表面活性剂 （2）表面活性剂浓度
离子交换剂可分为无机离子交换剂和有机离子交换 剂，目前广泛应用的是有机离子交换剂，即离子交换树 脂。具体分类如下：
强酸型阳离子交换树脂 R-SO3H 阳离子交换树脂 弱酸型阳离子交换树脂 R-COOH 强碱型阴离子交换树脂 R-N(CH3)3Cl 离子交换树脂 阴离子交换树脂 弱碱型阴离子交换树脂 R-NH2 CH2COOHH 螯合型树脂 R-CH2N CH2COOH
2、阴离子交换树脂
活性基团为碱性集团，常见的有：
强碱性基团，如季铵基－N(CH3)3+X-基团，其中
X-为OH-、Cl-、NO3-等；
弱碱性基团，如伯胺基－NH2、仲胺基＝NH和 叔胺基≡N。 其中强碱性树脂应用较广。
3、螯合型离子交换树脂
活性基团为螯合功能团，如巯基型螯合树 脂就是 将巯基接在天然纤维大分子或树脂的骨 架上而制得的， 螯合型离子交换树脂具有良好 的选择性吸附能力。 应用较广，例如： 测定天然水中K+、Na+、Ca2+、Mg2+、SO42-、Cl-等 组分，可取数升水样，分别流过阳、阴离子交换柱，再 用几十至一百毫升稀盐酸溶液洗脱阳离子，用稀氨液洗
分配比D是指溶质A在有机相中各种存在形 式的总浓度(CA)有与在水相中各种存在形式的总 浓度(CA)水之比：
分析化学中的分离与富集方法
分析化学中的分离与富集方法
1.蒸馏法：根据不同物质的沸点差异进行分离和富集。
常用的蒸馏方
法有常压蒸馏、减压蒸馏、水蒸气蒸馏等。
2.萃取法：利用两种或多种溶剂相互不溶的特性，将目标物质从混合
物中转移到溶剂中，从而达到分离和富集的目的。
典型的例子有固-液萃
取和液-液萃取。
3.变温结晶法：根据不同物质溶解度随温度变化的规律，通过调节温
度使目标物质结晶，从而将其与其他组分分离。
4.气相色谱法：利用物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，以
气态物质的流动为介质，将目标物质从混合物中分离并富集。
1.沉淀法：通过在混合物中加入沉淀剂，使得目标物质与沉淀剂反应
生成不溶性沉淀，从而分离富集目标物质。
这种方法常用于分离金属离子。
2.化学还原法：通过还原剂将目标物质转化为不溶性化合物，从而使
其与混合物分离。
例如，将有机污染物还原为不溶性沉淀。
3.化学萃取法：利用目标物质与萃取剂之间的化学反应进行分离。
例如，萃取剂选择性地与目标物质发生络合反应，形成可溶性络合物，从而
将其与其他组分分离。
4.吸附分离法：通过吸附剂对目标物质的选择性吸附将其从混合物中
分离。
主要有固相萃取、层析和磁性吸附等方法。
以上仅是分析化学中常用的一些分离与富集方法，实际应用中还有很
多其他方法，如超临界流体萃取、电分离、膜分离等。
在实际的分析过程
中，要根据混合物的性质和目标物质的特点选择合适的方法，并合理优化条件，以提高分离效果和分析结果的准确性。
分析化学_分析化学中常用的分离和富集方法
分析化学_分析化学中常用的分离和富集方法分析化学是研究物质的组成、结构和性质的一门学科。
在分析化学中，为了检测和测定分析对象中微量或痕量的目标物质，常常需要使用分离和富集方法，以提高目标物质的检测灵敏度。
1.搅拌萃取：搅拌萃取是一种常见的分离和富集方法。
通过将样品与其中一种有机溶剂反复搅拌混合，使目标物质从水相转移到有机相中，从而实现分离和富集。
该方法适用于目标物质在水相和有机相之间有较大的分配系数差异的情况。
2.相间萃取：相间萃取是指根据目标物质在两相中的分配差异进行分离和富集的方法。
常见的相间萃取方法包括液液萃取、固相微萃取和液相萃取等。
相间萃取通常需要将样品与萃取剂反复摇匀并分离两相，以实现目标物质的富集。
3.固相萃取：固相萃取是指使用固定在固相萃取柱或固相萃取膜上的吸附剂来对目标物质进行分离和富集的方法。
固相萃取方法具有操作简单、富集效果好、适用范围广等优点，常用于分析化学中的前处理过程。
4.蒸馏：蒸馏是指通过加热使液体汽化，然后冷凝收集汽化液体的方法。
蒸馏可以实现液体的分离和富集，适用于目标物质在样品中的浓度较低且需高度富集的情况。
5.色谱分离：色谱分离是一种基于目标物质在不同相之间的分配差异进行分离的方法。
常用的色谱分离方法包括气相色谱、液相色谱、固相色谱等。
色谱分离方法具有分辨率高、重复性好、操作简便等优点，广泛应用于分析化学中。
6.气相萃取：气相萃取是指利用气相萃取装置将目标物质从固体、液体或气体中分离和富集的方法。
气相萃取主要通过溶剂的蒸发和再冷凝，将目标物质从样品中富集到溶剂中，然后通过蒸发或其他方法将溶剂去除，得到目标物质。
7.凝胶电泳：凝胶电泳是一种基于目标物质的电荷、大小或形状差异进行分离和富集的方法。
常见的凝胶电泳方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳等。
凝胶电泳方法具有分辨率高、富集效果好等优点，适用于复杂样品的分析。
总之，分析化学中常用的分离和富集方法有搅拌萃取、相间萃取、固相萃取、蒸馏、色谱分离、气相萃取和凝胶电泳等。
化学分离与富集方法-1_ 分离与富集概论概论
在分离科学中，由于实验的目的不同，对分离的要求及采用的技术亦不相 同。
如以测定物质的结构和性质为目的分离方法，主要是为了得到纯的待
测物质，通常注重样品的“纯度”，而不一定要求分离过程的高效率、高精 度。
这里用一种“假设的状态”，是因为从理论上讲，把一个混合物组分进行完 全的分离是不可能的。所谓的已被分离的化合物或组分实际上并没有完全的分 开。即使是 99．9999％的纯硅，也意味着含有 0.0001％的其它组分。
分离过程 大致有两种情况，即：
组 分 离： 把性质相似的组分一起分离； 单一分离： 把某—组分以纯物质形式分离。
第二节 分离富集在分析化学中的作用
随着科学技术的发展，现代分析化学的分析对象越来越复杂，待测组分 含量越来越低，在地球和宇宙科学、环境科学、生命科学、材料科学以及医 学和考古学中，经常要求检测到 ug/g、ng/g、pg/g，甚至更低含量的组分。
目前虽然有许多灵敏度和选择性很高的仪器分析方法，但在分析实践中， 常常由于存在基体效应以及其它各种干扰而难以得到准确的结果．因此分离富 集仍然是分析方法中不可缺少的重要环节。
样品组成的复杂性和剖析要求的多样性，决定了剖析过程的复杂性。对于
各种复杂体系进行综合分析的程序通常包括三个重要部分：
① 将复杂体系中的各组分逐一分离、纯化及纯组分的制备过程。 分离后得到的各个组分的纯度鉴定是非常重要的实验程序，只有纯
度足够好的样品，提供的各种结构分析数据才是可信和有价值的。对 样品的纯度未经鉴定就匆匆进行各种波谱分析，可能给出一些互相矛
当分离的目的是测定物质中某成分的含量时，则要求分离方法应具有 高分离效率、高回收率和高精度等。对组分的纯度要求，一般以不干扰定 量分析为标准。此外，由于分离的对象、规模各不相同，采用的方法、操 作程序等彼此可能有很大的差别。
分析化学中常用的分离和富集方法
分析化学中常⽤的分离和富集⽅法第8章分析化学中常⽤的分离和富集⽅法8.1 概述分离和富集是定量分析化学的重要组成部分。
当分析对象中的共存物质对测定有⼲扰时，如果采⽤控制反应条件、掩蔽等⽅法仍不能消除其⼲扰时，就要将其分离，然后测定；当待测组分含量低、测定⽅法灵敏度不⾜够⾼时，就要先将微量待测组分富集，然后测定。
分离过程往往也是富集过程。
对分离的要求是分离必须完全，即⼲扰组分减少到不再⼲扰的程度；⽽被测组分在分离过程中的损失要⼩⾄可忽略不计的程度。
被测组分在分离过程中的损失，可⽤回收率来衡量。
1. 回收率（R ）其定义为：%100?==分离前待测组分的质量分离后待测组分的质量R对质量分数为1%以上的待测组分，⼀般要求R >99.9%；对质量分数为0.01%~1%的待测组分，要求R >99%；质量分数⼩于0.01%的痕量组分要求R 为90%~95%。
例1. 含有钴与镍离⼦的混合溶液中，钴与镍的质量均为20.0mg ，⽤离⼦交换法分离钴镍后，溶液中余下的钴为0.20mg ，⽽镍为19.0mg,钴镍的回收率分别为多少？解：%0.10.2020.0 %,0.950.200.19Co Ni ====R R2. 分离因⼦S A/B分离因⼦S B/A 等于⼲扰组分B 的回收率与待测组分A 的回收率的⽐，可⽤来表⽰⼲扰组分B 与待测组分A 的分离程度。
%100/?=A B A B R R SB 的回收率越低，A 的回收率越⾼，分离因⼦越⼩，则A 与B 之间的分离就越完全，⼲扰消除越彻底。
8.2 沉淀分离法沉淀分离法是⼀种经典的分离⽅法，它是利⽤沉淀反应选择性地沉淀某些离⼦，⽽与可溶性的离⼦分离。
沉淀分离法的主要依据是溶度积原理。
沉淀分离法的主要类型如下表。
8.2.1常量组分的沉淀分离1. 氢氧化物沉淀分离⼤多数⾦属离⼦都能⽣成氢氧化物沉淀，各种氢氧化物沉淀的溶解度有很⼤的差别。
因此可以通过控制酸度，改变溶液中的[OH-]，以达到选择沉淀分离的⽬的。
第11章分析化学中常用的分离和富集方法
2024/8/2
4
d 共沸蒸馏
例如无水乙醇的制备，水和乙醇形成共沸物((95％乙醇)，b.p.=78.15℃ 加入苯形成另一共沸物(苯74％，乙醇18.5％,水7.5%) b.p.=65℃ 在65℃蒸馏, 除去水, 在68℃苯和乙醇形成共沸物(苯67.6％,乙醇32.4％) 在68℃蒸馏直到温度升高，在78.5℃能获得纯乙醇。
2024/8/2
14
如果用Vo (mL) 溶剂萃取含有mo (g) 溶质A的Vw (mL)试液， 一次萃取后，水相中剩余m1(g)的溶质A，进入有机相的溶 质A为(mo-m1) (g), 此时分配比为：
D=
cAo cAw
=
(mo-m1)/Vo m1/Vw
m1=mo[Vw/(DVo + Vw)] 萃取两次后，水相中剩余物质A为m2(g) m2=mo[Vw/(DVo + Vw)]2 …
磷酸盐沉淀
稀酸中，锆、铪、钍、铋；弱酸中, 铁、铝、铀(IV)、 铬(III)等
2024/8/2
8
有机沉淀剂
草酸: 沉淀Ca, Sr, Ba, RE, Th
铜铁试剂(N-亚硝基苯基羟铵): 强酸中沉淀Cu,Fe,Zr,Ti,Ce.Th,V,Nb,Ta等，微酸中沉 淀Al,Zn,Co,Mn,Be,Th,Ga,In,Tl等。主要用于1:9的硫 酸介质中沉淀Fe(III),Ti(IV),V(V)等与Al,Cr,Co,Ni分离
CH CH2
+
CH CH2
n
CH CH2 CHSO3HCH2 CH CH2 CH CH2 CH CH2
CH CH2
SO3H
CH
SO3H
n
高分子聚合物，具有网状结构，稳定性好。在网状结构
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人胎盘组织造血干/祖细胞的分离富集【摘要】为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞（HSPC）的标化流程，采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液，用羟乙基淀粉（6% HES）法从中分离出单个核细胞（MNC），再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+ 3个细胞亚群，用流式细胞术对各阶段分选细胞进行表型分析并计算分选细胞的富集度和回收率。
结果表明：机械法加胶原酶消化法制备的人胎盘组织单个细胞悬液中单个核细胞（MNC）数达（12.30±3.51）×108，与脐血初始样品所含的MNC数（8.86±5.38）×108 比较差异无统计学意义，而其CD34＋细胞所占百分率［（3.93±2.31）%］则明显高于脐血［（0.44±0.29）％］。
胎盘组织单个细胞悬液经6% HES分离后MNC和CD34＋细胞的回收率分别为（45.3±11.7）％和（51.1±9.8）%；MNC经免疫磁珠分选后，其CD34＋细胞的纯度和回收率分别为（73.4±14.1）％和（52.7±11.7）%。
结论：本实验所建立的"机械法加胶原酶消化法-HES分离MNC-MACS分选目标细胞"的分离纯化方法可从胎盘组织获得高丰度、高富集度、高活性的HSPC，为进一步研究胎盘HSPC提供了比较经济、效果较好的分离富集方案。
【关键词】CD34抗原；造血干细胞；胎盘；免疫磁珠细胞分选；脐血【材料和方法】造血干/祖细胞（hematopoietic stem/ progenitor cells，HSPC）存在于人骨髓、动员的外周血和脐血等组织中。
新近，有学者提出人胎盘组织中含有比脐血更为丰富的造血干细胞；人胎盘组织中CD34+ HSPC的百分率是脐血的8.8倍，并且人胎盘组织中免疫细胞成分较少，极有希望成为今后HSPC 的新来源。
从人胎盘组织分离出高活性、高丰度的HSPC是对其进行相关生物学特性等研究的前提，目前尚无有关人胎盘组织HSPC分离的优化方案可循。
本研究旨在建立从胎盘组织中分离、纯化HSPC的标化流程，为今后人胎盘组织HSPC的深入研究打下良好的基础。
主要试剂胶原酶（collagenase Ⅳ）、羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch，HES）为Sigma公司产品。
RPMI 1640、新生牛血清（FCS）购自于Gibco公司。
荧光标记单克隆抗体CD38-FITC、CD34-PE及CD34绝对计数试剂盒为Becton Dickinson公司产品。
免疫磁珠细胞分选试剂盒购自Miltenyi Biotec公司。
胎盘与脐血的收集收集足月分娩的人胎盘，同时采集同一胎盘的肝素抗凝脐血，HBsAg(-)，共5份。
胎盘和脐血均于6小时内进入分选程序。
胎盘组织单个细胞样品的制备多点剪取胎盘全层组织约80 g，用Hank液反复漂洗，尽量除尽胎盘组织中的残留血液，将其剪碎，再用Hank液漂洗3次。
加入0.025％胶原酶消化20分钟，用不锈钢网过滤，细胞滤液260×g离心5分钟，细胞沉淀用100 ml RPMI 1640悬浮混匀。
人胎盘组织单个核细胞（MNC）的分离胎盘组织单个细胞悬液按4∶1的比例加入6%羟乙基淀粉（6% HES），混匀, 22℃下静置45分钟至红细胞完全沉降。
吸取富含单个核细胞的上层液，按1∶3的比例加入Hank 液，400×g 离心8分钟。
弃上清，沉淀物用2 ml 含15% FCS的RPMI 1640悬浮，再按1∶3的比例加入RBC 裂解液，作用5分钟。
260×g离心5分钟，细胞沉淀物用含15% FCS的RPMI 1640洗涤、悬浮，经350目尼龙膜过滤。
镜下计数MNC细胞，台盼蓝染色观察细胞活力（细胞活力应>90%）。
MNC细胞样品进行FCM分析，并作为磁式分选的起始样品。
脐血按1∶1的比例加入Hank稀释后，同上述6% HES法分选MNC。
CD34＋细胞及其亚群的免疫磁珠分选按照免疫磁珠细胞分选试剂盒推荐的分选策略，分选胎盘和脐血MNC为CD34+和CD34-细胞组分，进而再将CD34+细胞组分分选为CD34+CD38+、CD34+CD38- 2个细胞亚群。
细胞样品的流式细胞术分析调整待测样品细胞浓度到1×106/ml，于含20 μl相应荧光标记单克隆抗体（CD34-PE、CD38-FITC）的上样管内加入100 μl细胞悬液，混匀，室温避光静置20分钟。
每管加入2 ml RBC裂解液，混匀，室温静置10分钟，180×g 离心5分钟，弃上清，重新悬浮细胞。
每管加入2 ml含0.1％NaN3 的PBS,混匀，180×g离心5分钟，弃上清，再悬浮细胞；每管加入0.5 ml 1％的多聚甲醛，混匀，2-8℃避光放置，逐一上机分析。
绝对计数则将细胞样品置于含微球的TruCOUNT管，其样品制备方法按试剂盒（ProCOUNTTM Progenitor Enumeration Kit）说明进行。
采用Cell Quest软件对标记样品进行检测分析。
单个核细胞和CD34+细胞绝对计数用ProCOUNT软件采集（每管采集2×104个细胞）和分析。
MNC及CD34+细胞的回收率和富集度按下面公式计算：CD34+(MNC)细胞回收率（%）=［分离产物的总细胞数×产物的CD34+（MNC）细胞纯度/起始标本CD34+（MNC）细胞总数］×100%CD34+(MNC)细胞的富集度（%）=［分离产物中CD34+（MNC）细胞数/分离产物的总细胞数］×100%统计学分析实验数据采用统计软件SPSS for Windows 10.0进行处理。
如方差齐，采用t检验对各组样本之间进行两两比较；如方差不齐，则采用t' 检验。
【结果】胎盘组织MNC数及CD34+细胞百分率结果见附表。
单个胎盘和单份脐血所含MNC数差异无统计学意义(P>0.05)，而CD34＋细胞所占的百分率两者比较有显著性差异（P<0.001），前者为后者的8.9倍。
HES分选MNC及CD34＋细胞的回收率胎盘组织单个细胞悬液和脐血经6% HES分离后MNC 的回收率分别为（45.3±11.7）％和（52.2±12.1）％，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。
CD34＋细胞的回收率分别为（51.1±9.8）％和（60 3±12.3）％，两者无显著性差异(P>0.05)。
免疫磁珠分选（MACS）CD34＋细胞的富集度和回收率如附图所示，胎盘和脐血MNC经MACS分选后CD34＋细胞组分的富集度分别为（73.4±14.1）％和（78.5±12.0）％，CD34＋细胞回收率分别为（52.7±11 7）％和（61.9±5.8）％。
胎盘和脐血比较，细胞纯度和回收率均无显著性差异（P>0.05）。
【讨论】胎盘HSPC的分离富集涉及系统的质量控制，其质控环节包括制备高密度、高活力的单个细胞悬液，制备高丰度、高活力的MNC及高富集度的HSPC及其亚群。
其中任何一个质控环节都影响后续实验结果的评价。
从胎盘组织中分离富集HSPC的第一个关键环节是制备高密度、高活力的单个核细胞样品，这对评价其HSPC丰度、表型特征和相关的生物学特性至关重要。
然而，目前尚无有关人胎盘单个核细胞样品制备的优化方案可循。
本研究采用机械法加酶法分离获得了高丰度的单个核细胞初始细胞样品，说明机械分离加胶原酶消化法适用胎盘单个核细胞样品的制备。
但是，本实验中所采用的机械分离法只适合小样品制备，若要在短时间内获得整个胎盘的单个核细胞样品，则需要设计制造高通量的机械细胞分离机。
从胎盘单个核细胞悬液中进一步富集高丰度的MNC是进行后续实验的第二个关键步骤。
脐血中MNC 的分离方法主要有Ficoll（密度为1.077）密度梯度离心和6% HES分离法两种［7，8］，而有关胎盘组织MNC的分离方法未见报道。
本实验采用HES分离法，用于胎盘组织悬液MNC的分离，获得了满意的效果。
我们在实验过程中，用脐血样品比较了Ficoll和HES的分离效果，前者分离MNC 的回收率为18.83-28.25%，与文献一致，但远低于HES法。
本研究结果显示，胎盘组织细胞悬液经HES分离后，其MNC、CD34＋细胞的回收率与脐血相比，均无明显差别。
此结果说明HES分离法可从胎盘单个核细胞样品获得较高丰度的MNC，并且CD34+细胞的回收率较高。
尽管HES分离后，MNC组分中仍含有少量的RBC，但可通过适量的RBC 裂解液除去，且不影响其目标细胞的活性和生物学特征。
此外，HES分离法比Ficoll分离简便、省时，也更为经济。
MACS 已成为普遍采用的细胞分选方法，特点是分选效率高，分选速度远高于流式细胞仪，且无流式细胞仪分选前的烦琐准备，其主要不足之处是所分选细胞的纯度不及流式细胞仪。
本研究采用MACS法分选胎盘MNC中的CD34+CD38-、CD34+CD38+ 2个HSPC亚群，获得了较好的分选效果，CD34＋细胞组分的富集度为（73.4±14.14）%。
另外，用350目尼龙膜过滤样品一次作为样品上柱分离的预处理，以除去可能存在的细胞团，这有利于提高样品的过柱速度和分选效果。
综上所述，本实验所建立的"机械法加胶原酶消化法－HES分离MNC－MACS分选目标细胞"的分离富集方法，可从胎盘组织获得高丰度、高富集度、高活性的HSPC，为进一步研究胎盘HSPC提供了较好的分离富集方案。
【参考文献】1 周胜利,宋剑秋,旭日. 胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞. 中国实验血液学杂志, 2002; 10:142-1472 陈代雄,方宁, 刘祖林等. 人胎盘造血干/祖细胞及淋巴细胞亚群表型的研究. 中华血液学杂志, 2004;25:175-178。