乳酸菌用作口服疫苗表达载体的应用研究进展
乳酸菌用作口服疫苗表达载体的应用研究进展亓秀晔;刘乃芝;程福亮;徐海燕;谷巍【摘要】乳酸菌是人和大多数动物肠道内的常见细菌,被公认为绿色安全级微生物,可以在机体内粘附、定植和复制,益生作用和免疫原性使其成为最有前景的活菌载体.利用基因工程手段插入外源基因制备重组乳酸菌口服疫苗,能够持续刺激机体分泌特异性抗原蛋白,多个基因的插入甚至能达到一免治多病的目的.口服免疫效果优于注射免疫,治疗成本也大大降低.该文论述了乳酸菌活载体疫苗的优势,对乳酸菌表达载体在动物疫病防控及代谢产物调控上的应用等方面的研究进行综述,并对其应用前景进行分析和展望.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2019(038)006【总页数】6页(P18-23)【关键词】乳酸菌;口服疫苗;表达载体;动物疫病【作者】亓秀晔;刘乃芝;程福亮;徐海燕;谷巍【作者单位】山东宝来利来生物工程股份有限公司山东省动物微生态制剂省级重点实验室,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司山东省动物微生态制剂省级重点实验室,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司山东省动物微生态制剂省级重点实验室,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司山东省动物微生态制剂省级重点实验室,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司山东省动物微生态制剂省级重点实验室,山东泰安271000【正文语种】中文【中图分类】TS201.1疫苗是用病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法，制成的用于预防传染病的自动免疫制剂[1]。
作为关乎人民群众健康、公共卫生安全及国家安全的特殊产品，接种疫苗在整个人类社会安全中起着重要作用。
活载体疫苗（live vector vaccine，LVV）是通过分子生物学手段将有效的目的抗原编码基因导入活载体（无或弱毒的细菌或病毒），从而构建重组菌（毒）株，使目的基因随着重组菌（毒）株在宿主体内的增殖而大量表达，从而诱发相应的免疫保护应答，是目前最具发展潜力的新型基因工程疫苗之一[2]。
活载体疫苗可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫，进而激发全身的黏膜免疫，具有特异性强、免疫效果持续稳定、诱导位点专一、免疫方式简单等优点，而且如果载体中同时插入多个不同病原的外源基因，就能实现一免防多病的目的，这都是传统疫苗无法比拟的优势。
乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是在人体、动物、植物和整个自然界中广泛分布的并公认的绿色安全级（generally regarded as safe，GRAS）微生物，是一群能大量发酵碳水化合物并产生乳酸的革兰氏阳性细菌，分属十几个。
LAB主要通过在机体肠道内定植来改善肠道微生态环境，并具有抗肿瘤、抗炎、抗过敏等益生作用及免疫调节等生理功效[3]。
从21世纪初开始，国内外学者就开始致力于对LAB分子生物学及作用机制的研究，以乳球菌（乳球菌、粪链球菌等）、乳杆菌（干酪乳杆菌、植物乳杆菌、拉曼乳杆菌、嗜酸乳杆菌等）和双歧杆菌（长双歧杆菌、金双歧杆菌等）等作为基因工程受体菌，应用基因工程技术有目的、有选择地研制新型微生态制剂，以更好的控制其益生性状和免疫效果[4-5]。
研究表明，像抗原、酶类、细胞因子、抗体、过敏原蛋白等一系列外源蛋白分子均可以在LAB中重组表达[6]。
黏膜免疫的接种方式也是影响免疫效果的关键因素，消化道口服免疫和鼻腔免疫是目前重组乳酸菌疫苗使用最为广泛的黏膜免疫方式，至于两种免疫方式的效果比较目前还没有定论[7-8]，但是两种方式都可以通过胃肠黏膜进行抗原递呈，经不同的免疫通路产生与常规注射类似的免疫反应而产生的副作用远小于后者，动物实验和人体临床实验也验证了基因工程LAB对于多种疾病预防和治疗的有效性。
1 LAB用作口服疫苗活菌载体的优势LAB作为外源基因表达宿主菌，其优越性主要表现在：（1）培养容易，操作方法（如电穿孔法转基因）简便，技术成熟，副作用少，成本低；（2）LAB作为GRAS益生菌，可直接口服，比一些减毒的载体更具有安全性，同时免去了目的蛋白的体外提纯等后续加工处理工序。
LAB在发挥自身益生功能的同时，增强免疫效果，一举多得；（3）重组的LAB可用来表达不同类型的异源蛋白，比如嵌合的或非嵌合的抗原、细胞因子、各种酶等，同时还能将具有多种功能的药物分子串联表达，达到一免治多病的效果[9-11]；（4）可在细胞内表达也可在细胞表面表达和分泌到胞外[12]；（5）LAB对机体黏膜有极强的粘附作用，因此进入消化道、呼吸道、泌尿系统等在黏膜处不断繁殖，持续向机体释放特异性的目的抗原蛋白[13]；（6）具有免疫佐剂作用、固有免疫原性及对胆汁酸的抵抗力，不需要额外地提供外源性抗原刺激动物机体就能发生黏膜免疫和系统免疫[14-15]。
因此，LAB作为基因工程受体菌的应用前景十分广阔。
2 LAB应用于活载体疫苗的研究2.1 LAB载体分类及表达调控元件许多LAB都被发现了质粒的存在，且数量各异，1个或多个。
脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）杂交和核苷酸序列分析证实，小质粒同其他革兰氏阳性菌的线性质粒具有不同程度的同源性，一些LAB复制子宿主范围广泛，质粒间可以进行频繁的横向传递和重组，因而可在其他种类的革兰氏阳性菌及大肠杆菌中穿梭表达；此外，LAB质粒多为滚环复制，质粒分离相对稳定，可在宿主体内持续稳定的表达蛋白，LAB质粒的这些特点有助于其在宿主体内进行基因克隆和蛋白表达，因此，了解LAB的质粒载体系统是研究基因工程乳酸菌的首要步骤。
（1）克隆载体：LAB中研究的第一个克隆载体的构建是在2个广宿主范围的复制子pWV01和pSH71的基础上发展起来的，后又逐渐衍生出许多新的质粒；另外一个广泛应用的复制子是从粪肠球菌中分离出的pAMbeta-1质粒，后又衍生出pIL252和pIL253[16]质粒。
（2）表达载体：根据表达载体启动子类型的不同，LAB表达载体可分为两种类型：诱导型表达载体和组成型表达载体。
目前应用最广泛的诱导型表达系统是乳链菌肽受控的表达（nisin-controlled expression，NICE）系统，是由乳链菌肽nisin控制的食品级高效诱导表达系统，缺点是需要在免疫重组菌株之前提前诱导才会获得高质量的蛋白表达[17]，如ENOUF V等[18]用NICE系统表达产生轮状病毒非结构蛋白4（rNSP4），可产生具有抗原和免疫原特性的rNSP4蛋白，且与病毒蛋白有相同的免疫原特性。
组成型表达系统能够持续稳定的表达目的蛋白，不需要提前诱导，如从LAB中分离的组成型启动子P32、P59和P23己成功地用于pMG76e、PVE5523和pOri23等组成型载体的构建[19]，如JEONG D W等[20]以pMG36e载体为基础，使用来自于植物乳杆菌的半乳糖苷酶基因替代红霉素抗性标记基因，成功的在乳酸乳球菌中构建了分泌性表达载体。
相对而言，乳杆菌的表达载体由于遗传多样性等问题发展较缓慢，常用的乳杆菌的载体有pWV01、pSH71和pAMbeta-1等[21]。
乳杆菌的表达载体同样包括组成型启动子如Ppgm、Pldhl、Ps1pA和诱导型启动子[22]。
2.2 LAB表达载体调控元件的选择性标记LAB表达载体的调控元件即质粒上都带有一个或多个特定的选择性标记基因。
LAB 选择性标记主要分为两类：非食品级标记和食品级标记。
非食品级标记一般为常见的抗性筛选标记基因（如红霉素、氯霉素、卡那霉素和氨苄青霉素等抗性基因），可选择在加有这些抗生素的培养基里进行抗性压力筛选，然而在全人类无抗时代，抗性基因的携带易造成潜在危害。
随着人们对食品安全问题日益重视，众多学者一直致力于高效、无毒副作用的食品级表达载体的研究。
常用的食品级表达载体主要有：糖诱导表达载体、噬菌体Φ31爆发式诱导的表达系载体、乳链球菌素调控表达载体、pH值调控表达载体等，这类表达系统的基因载体、受体及诱导物均为食品安全级，可直接口服免疫。
2.3 LAB表达载体的应用2.3.1 LAB表达载体在动物疫病防控上的应用做好动物疫病防控工作意义重大，关乎全人类健康和福利。
流行性感冒（简称流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，传播速度快，易造成人畜共患病，危害较大。
流感病毒分为甲、乙、丙3种类型，其中甲型流感病毒极易变异，可引起反复流行或大流行，20世纪几次著名的流感大流行均由甲型流感病毒引起[22]。
甲型流感病毒的宿主范围非常广泛，它可以感染禽类、猪、马、狗、海洋生物、哺乳动物和人类等，甲型流感病毒可以分为16种血凝素（hemagglutinin，HA）亚型（H1～H16）以及9种神经氨酸酶（neuraminidase，NA）亚型（N1～N9）[23]，各亚型在宿主之间有一定局限性。
其中猪流感（swine influenza，SI）的病原是猪流感病毒（swine influenza virus，SIV），属于正粘病毒科、流感病毒属、A型流感病毒[24]。
目前没有正规的SI的疫苗，预防困难，从分子方面着手是有效的措施。
M2e是SI基质蛋白M2胞外域的保守序列，包含24个氨基酸，M2e蛋白被认为可刺激机体产生免疫反应来应对多种流感病毒亚型的保护性抗原[25]。
王倩[26]将植物乳酸菌NC8作为外源蛋白的递送载体，将SIV主要保护性抗原M2e蛋白基因与小鼠的免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）的Fc受体片段基因融合在一起，成功制备了含有pSIP409-3M2e-Fc的重组乳酸菌口服疫苗，并发现重组口服疫苗对小鼠有显著的免疫效果（P＜0.05）。
NS1蛋白是SIV基因组中唯一的非结构蛋白，保守性较高，具有可以加快病毒复制，扰乱宿主免疫系统的作用，并且由于其结构的独特性可以用来到区分感染动物和免疫动物。
YANG WT等[27]通过将NS1基因与穿梭载体相连构建重组质粒pSIP409-pgsA-NS1并导入植物乳酸菌NC8，成功构建了新型功能乳酸菌口服疫苗，此款口服疫苗能提高感染SI病毒小鼠的存活率，对甲型流感病毒（H1N1）型SIV有一定的保护作用。
这为SI的防治提供了有力证据。
禽流感（avian influenza，AI）的病原是禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）。
目前常用的防控AI有效的途径是疫苗，但由于AIV抗原容易变异易导致疫苗防控存在局限性，影响了疫苗的免疫效果。
HA是AIV的血凝素，具有强烈的抗原性，HA2在AIV的各个亚型之间是相对保守的，是制备通用型疫苗的候选抗原。
YOON A W等[28]进一步利用pgs A蛋白将HPV-16衣壳蛋白L2于干酪乳杆菌（L.casei）表面进行展示，证实该菌株除了能介导机体产生全面的免疫应答以外还能对多种其他亚型的乳头瘤状病毒产生交叉中和反应。
食品级乳酸菌表达系统研究进展
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生 物 技 术 通 讯 Ｌ Ｔ ＥＲ Ｎ Ｉ ＴＥ ＮＯＬ Ｅ Ｔ Ｓ Ｉ Ｂ Ｏ ＣＨ ＯＧＹ ｖ ｌ ８ Ｎｏ一 一 ｒ，２ ０ Ｈ ｏ Ｏ２ Ｍａ ０ ７ － １ ． ・ ． ，
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文 章编 号 ：０ ９ ０ ０ （０ ７０ — ３ ５ ０ １０ — ０ ２２０ ）２ ０ ４ — ３
［ 键 词 ］ 乳 酸 菌 ； 品 级 ； 菌 疫苗 ； 因表 达 ； 关 食 活 基 表达 系统
［ 圈分 类 号 ］ Ｑ ８ 中 ７
［ 献标识码］ Ａ 文
Ａｄｖ ｎ ｅ ｎ Ｅｘ ｅ ｓｏ Ｓ ｓ ｅ ｓ ｏ ｃ ｉ ｉ ｃ ｅ ｉ ａ ｃ ｓ ｉ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｙ ｔ ｍ ｆ ｒ Ｌａ ｔｃ Ａｃ ｄ Ｂａ ｔ ｒａ
乳 酸 菌 （ ｃｉ ａｉ ｂ ｃ ｒ ，ＡＢ 是 一 类 能 利用 碳 水 化 合 物 １ ｔ ｃｄ ａｔ ａ Ｌ ） ａ ｃ ｅ ｉ 产 生 乳 酸 的 革 兰 阳性 菌 的 通 称 ｆ 包 括 乳 杆 菌 属 、 球 菌 属 等 至 Ｉ １ ， 乳 少２ ３个 属 。 作 为 重 要 的 益 生 菌 ， 酸 菌 已被 广 泛 地 应 用 于 食 乳 品 、饮 料 和 微 生 态 制 剂 等行 业 中 ，被 公认 为是 安 全 的 （ｅｅａ ｙ ｇｎｒ ｌ ｌ ｒｇｒｅ ｓｓｆ， Ｒ Ｓ 食 品级 微 生 物＿ ｅａｄｄ ａ ａ Ｇ Ａ ） ｅ １ 】 。乳 酸 菌 产 生 的一 些 酶 、 抗 微 生物 多肽 能 使 食物 美 味 可 Ｅ且 长久 保 持 ｌ 。乳 酸杆 菌 通 过 重 建肠 道 菌 群 平 衡 ，有利 于人 类 及 某 些 动物 宿 主恢 复 并 提 高 健 康
乳杆菌及其代谢物抗宫颈癌机制及其应用的研究进展
乳杆菌及其代谢物抗宫颈癌机制及其应用的研究进展[摘要]宫颈癌作为第四大恶性妇科肿瘤，有关宫颈癌的研究一直是妇科肿瘤的研究热点。
其发病与HPV病毒的感染和阴道微生态紊乱具有相关性。
乳酸杆菌是阴道微生态中主导菌群，可通过微生态机制维持正常的阴道微生态。
此外，在宫颈癌的治疗方面，乳酸杆菌也能通过调节宫颈癌细胞生物学行为以及触发免疫反应抑制宫颈癌的发展。
研究表明，相较于手术和放化疗，利用乳酸杆菌制剂治疗宫颈癌，其副作用小，易于管理，对护理要求小。
利用其微生态特性开发治疗性疫苗诱导粘膜免疫也是重要的研究趋势。
故本文对乳酸杆菌及其代谢物抗宫颈癌机制进行综述，并总结乳酸杆菌制剂在宫颈癌治疗方面的主要应用，为宫颈癌的治疗提供新思路。
[关键词]宫颈癌；乳酸杆菌；微生态；治疗性疫苗[中图分类号]R711.74Research Progress on the Mechanism and Application of Lactobacillus and Its Metabolites Against Cervical CancerLIU Xia1（1.Dalian Medical University, Dalian Liaoning 116044, China）[Abstract] Cervical cancer is the fourth malignant gynecological tumor. The research on cervical cancer is the research hotspot of gynecological tumors. Its pathogenesis is related to HPV virus infection and vaginal microecological disorder. Lactobacillus is the dominant flora in vaginal microecology, which can maintain normal vaginal microecology through microecological mechanism. In addition,in the treatment of cervical cancer, lactobacillus can also inhibit the development of cervical cancer by regulating the biological behavior of cervical cancer cells and triggering immune response. Research shows that compared with surgery and radiotherapy and chemotherapy, the use of Lactobacillus preparation in the treatment of cervical cancer has less side effects, easy management and less nursing requirements. Using its micro ecological characteristics to develop therapeutic vaccines to induce mucosal immunity is also an important research trend. Therefore, this paper reviews the anticervical cancer mechanism of Lactobacillus and its metabolites, and summarizes the main application of Lactobacillus preparation in the treatment of cervical cancer, so as to provide new ideas for the treatment of cervical cancer.[Keywords]cervical cancer; lactobacillus; microecology; therapeutic vaccine1 引言由国际癌症研究机构公布的GLOBOCAN可知，2018 年全球估计有569 847 例宫颈癌新确诊病例，其中311 365 例死于宫颈恶性肿瘤，其发病率和死亡率均排在妇科恶性肿瘤的第四位[1]，故宫颈癌的防治显得尤为重要宫颈癌的发生与HPV感染、气候条件、环境和饮食习惯等有关[2, 3]。
乳酸菌的研究进展
乳酸菌的研究进展
广东省佛山市三水区乐平镇动物防疫检疫站 叶 红 曾 敏
［摘 要］ 乳酸菌是应用最早、 最广泛的饲用微生态制剂， 具有多种益生作用。本文从乳酸菌的粘附、 活性物质、 免疫赋活作用、 抗肿 降低胆固醇和降血压作用进行综述， 为开发新型绿色的饲用乳酸菌奠定扎实的基础。 瘤作用、 ［关键词］ 乳酸菌 活性物质 可溶性肽 1. 竞争性排斥病原菌的粘附 乳酸菌能与肠粘膜上皮细胞结合，占据有害菌肠粘膜上皮细胞结 从人体分离的嗜酸乳杆 合位点， 对有害菌起屏障作用。Conway [1]报道， 菌 (L. acidophilus ADH)对人的回肠上皮细胞和猪的回肠上皮细胞都具 有较好的粘附性，且粘附率显著高于从乳制品中分离的保加利亚乳杆 菌(L. bulgaricus)和嗜热链球菌(S. thermophilus)， 对猪的结肠和盲肠上皮 细胞的粘附率也以嗜酸乳杆菌最高， 嗜热链球菌显著低于两株乳杆菌。 Conway 同时还指出实验中的乳酸菌的粘附都是非特异性的 。Gopal 报 道三株饲用微生态制剂菌株， 鼠李糖乳杆菌 (L. rhamnosus DR20)， 嗜酸 乳杆菌(L. acidophilus HN017)和乳酸双歧杆菌(B. lactisDR10)对人肠道上 皮细胞系 HT- 29， Caco- 2 和 HT29- MTX 有极强的粘附力，而且三株乳 H7 对肠细胞的侵袭能力和细胞结合能力 。 酸菌都能降低 E.coli O157： Pascual 发现用浓度为 l05C
重组乳酸乳球菌的应用进展
第 ４卷第 ４期 ２ ０ １ ３年 ４月
黑 龙 江科 学
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重 组 乳 酸 乳 球 菌 的应 用 进 展
曲晓军 ， 沙长青 ， 李思 明 ， 孙建华 ， 于 冲 ， 夏海华 ， 王金英
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｌ ｌ ￣ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｏ ｆ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ， ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ ｌ ｙ ｒ ｅ ｇ ａ ｒ ｄ ｓ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｆ ｏ ｏ ｄ ｇ ｒ ａ ｄ ｅ ｍｉ ｃ ｒ ｏｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｓ ａ ｆ ｅ ｔ ｙ ， ｗ ｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ ｆ ｏ ｏ ｄ ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｙ ． Ｉ ｎ ｒ ｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｙ ｅ ａ ｒ ｓ ， ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ｎｔ ａ Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｓ ｈ ａ ｓ ｂ ｅ ｃ ｏ ｍｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｒｃ ａ ｈ ｆ ｏ ｃ ｕ ｓ ｏ ｆ ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ， ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ｅ ． Ｔ ｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ｉ ｎ ｔ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｒｅ ｇ ｓ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ印 ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｎ ｔ Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｃ ｃｃ ｏ ｌ ｌ ￣ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ａ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｍｕ ｃ ｏ ｓ ａ ｌ ｉ ｍｍｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ， ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｅ ｒ ｏ ｆ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ａ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ ｃ ｙ ｔ ｏ ｋ ｉ ｎ ｅ ｓ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ：Ｒ ｅ ｃ ｏ ｂ ｉ ｍ ｎ ｎｔ ａ Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｓ ； ｍｕ ｃ ｏ ｓ ａ ｉ ｍｍｕ ｎ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ； ｅ ｙ ｔ ｏ ｋ ｉ ｎ ｅ； ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ
乳酸杆菌表达系统的研究进展
乳酸杆菌表达系统的研究进展丁轲程安春(四川农业大学动物科技学院四川雅安625014)乳酸杆菌是一种常见的益生菌，它的应用已有几百年的历史，是一种公认的具有GRAS(Generally Regarded As Safe)有益微生物。
该菌广泛存在于人、动物和植物中，可以产生多种物质，如短链脂肪酸、过氧化氢、细菌素、蛋白质和各种酶类等。
尤其重要的是它是人和动物肠道中最重要的优势菌群之一，对于机体的代谢、免疫调节等方面起着极其重要的作用。
但随着基因工程技术的发展日趋完善，人们已不再满足于乳酸杆菌自身固有的功能，特别是当前由于疫苗免疫和菌(毒)株的残留毒力之间的矛盾，促使人们寻求能良好表达外源抗原且安全的疫苗载体候选菌株，乳酸杆菌便自然成为最佳选择菌株之一，因此近年来在疫苗载体的研究中日益受到重视，但其研究却远远落后于病原微生物。
现就这一方面作一综述。
1 乳酸杆菌表达载体的优点乳酸杆菌作为表达载体有许多独特的优势，这主要是因为乳酸杆菌是人和动物体内最优势的益生菌株之一，许多研究都表明它的有无和多寡都对机体有着至关重要的影响，以它为表达系统有其它菌株不可比拟的优点，主要表现在以下方面：①乳酸杆菌是至今发现的唯一没有致病性的一个种；②它在人和动物体内占绝对优势，以它为表达系统，较其它菌株更易达到较高的表达量；③若选择非抗性标记，则该表达系统中的菌体、选择性标记、诱导物均为食品级，为生产绿色安全的食品提供了可能；④乳酸杆菌菌体本身就对机体有益生作用，其分泌多种物质更是机体必不可少的，若再在其载体上克隆入外源基因，这样就可集菌体、自泌物质和外源蛋白于一体；⑤乳酸杆菌对机体粘膜有极强的粘附作用，因此构建的乳酸杆菌基因工程菌就可在粘膜处不断繁殖，持续向机体释放目的蛋白；⑥乳酸杆菌可直接口服，能够耐受胃液中的强酸和小肠上段的胆盐，这样就免去了目的蛋白的体外提纯等后加工。
2 乳酸杆菌质粒1976年Chassy[1]首先发现乳酸杆菌中存在质粒，质粒在不同的乳酸杆菌中分布不均，Vescovo等[2]对159株乳酸杆菌进行质粒抽提，发现L. reuteri、L. helveticus 和L. acidophilus 含质粒的比率较高，分别为63%、27%和20%，L. casei仅有4%的菌株含有质粒，L.plantarum、L. brevis 和L. coryniformis没有发现质粒。
乳酸菌重组人碱性成纤维生长因子表达载体的构建及鉴定
乳酸菌重组人碱性成纤维生长因子表达载体的构建及鉴定蒋永洪;陈科全;陈学清【摘要】[Abstract] Objective To explore a new way for the oral treatment of inflammatory bowel disease by constructing the recombinant human basic fibroblast protein expression vector. Methods The Ptuf promoter, pePN terminator, USP45 and bFGF were spliced by fusion PCR technology. The full-length constructed cDNA fragment was cloned into pBlueScript vector, as well as the pTRKH2 vector after identification. Results DNA sequencing and double enzyme digestion results showed that the expression vector pTR-bFGF was successful-l y constructed. Conclusion The pTR-bFGF plasmid laid a foundation for expression of bFGF in lactobacillus and oral treatment of inflammatory bowel disease.%目的构建乳酸菌重组人碱性成纤维蛋白表达载体，为口服治疗炎症性肠病探索新途径。
方法利用融合PCR技术，将Ptuf启动子及pePN终止子与USP45-bFGF融合，构建全长片段后克隆于pbluescript载体中，经验证后亚克隆于pTRKH2载体中。
细菌载体技术研究进展
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乳酸乳球菌表达系统的研究进展_王永刚
图 1 NICE 系统蛋白表达示意图
2 乳酸乳球菌表达系统的应用
乳酸乳球菌是肠道内的常见菌种， 其作为一种食 品级的安全微生物已越来越受到科研工作者的青睐。 目前对乳酸乳球菌应用最多的是食品工业和医药行 业。 2.1 L. lactis 表达系统应用于食品工业
目前， 构建乳酸菌乳球菌食品级载体-受体系统， 寻找一些在乳酸乳球菌中的克隆和表达中有价值的基 因已成为乳酸菌分子遗传学研究的趋势并在食品研究 和生产领域具有重大意义。 乳酸菌食品级高效表达系 统 （NICE） 是 现 阶 段 应 用 最 广 的 高 效 诱 导 表 达 系 统 ， 由 于 NICE 系 统 的 诱 导 剂 、 宿 主 菌 和 载 体 都 是 安 全 的 食品级的， 其应用前景相当广阔。 如若在该系统中加 入诱导物乳链菌肽后诱导率可达 1 000 倍以上 。 ［12-13］ 因 此， 在可控蛋白的生产中该系统是首选表达系统， 同 时在生产表达时该系统具有良好的安全性， 所以可用
植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建
ShiYan YanJiu植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建王 雪，尚晓敏，李桂玲,刘 琼*吉林工程技术师范学院食品工程学院，吉林长春 130052摘 要：乳酸菌宿主对表达载体的启动子具有高度的选择性，本研究利用PCR技术扩增嗜酸乳杆菌表面蛋白SlpA 基因启动子，以诱导型表达载体pSIP409为基本框架删除其诱导型启动子，采用能快速连接的无缝克隆技术将SlpA 基因启动子连接到gusA基因上游，获得重组质粒409SlpA电转化至植物乳杆菌NC8中，Western Blot定性测定的gusA表达情况，同时利用MRS-X-gluC培养基特异性显色反应来鉴定阳性重组子表达gusA的活性，为利用该启动子表达外源蛋白研制新型基因工程微生态制剂奠定基础。
关键词：嗜酸乳杆菌；启动子；组成型表达载体；Construction of constitutive Expression Vector Base on SlpA GenePromoter and the Function AnalysisWang Xue, Shang Xiao-min，Li Gui-ling，Liu Qiong*College of Food Engineering Jilin Engineering Normal University, Changchun, Jilin, 130052Abstract: Lactobacillus hosts have a high selectivity for the promoter of the expression vector. In this study, the promoter of the SlpA gene from Lactobacillus acidophilus was amplified by PCR, and the expression vector pSIP409 was used as the base frame to remove its inducible promoter. The promoter of the SlpA gene was ligated upstream of thegusAgene by Seamless Assembly Cloning technology and the recombinant plasmid 409SlpA was transformed into Lactobacillus plantarumNC8 by electrotransformation. The positive colony was screened by MRS-X-gluC medium and the specific colony was screened, and the complex steps of detecting the activity of expressed proteins were avoided. This study lays the foundation for further application of SlpA gene constitutive promoter. Keywords: Lactobacillus acidophilus; promoter; constitutive expression vector乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一群革兰氏阳性、能够发酵碳水化合物、以乳酸为主要代谢产物的各类细菌统称，是人与大多数动物肠道内常见优势菌群。
细菌样颗粒-乳酸菌表面展示技术在黏膜疫苗中的应用
综述与专论1152023.12·0 引言疫苗在动物抵抗传染病中发挥重要作用，其作用效果也被世界所认可，但不同类型的疫苗其功效也有差别。
目前，大多数疫苗接种是肌肉注射、皮下注射或皮内注射。
这些传统的注射疫苗方法需要训练有素的人员，这存在一定的安全风险（如针头事故、针头重复使用、伤口感染等）。
在这种情况下，黏膜疫苗这种使用无需针头的疫苗接种方法能够克服这些障碍[1]。
细菌样颗粒（bacterium-like particle ，BLP ）其可以应用于黏膜疫苗和黏膜佐剂的开发。
它是来源于食品级细菌乳酸乳球菌的无生命球形颗粒。
通过简单的热酸预处理，乳酸乳球菌的所有细胞成分，除肽聚糖（PGN ）外壳保持完整，其余都被降解，导致其维持细菌的形状和大小，因此名为细菌样颗粒（B L P ）。
乳酸乳球菌是一种无害的革兰氏阳性细菌，通常用于食品工业，它已被美国食品和药物管理局（FDA ）公认为安全（GRAS ）状态[2]。
在过去20多年中，揭示乳酸菌在生物医学上新的潜在应用，包括作为佐剂、免疫刺激剂或治疗性药物传递系统等。
乳酸菌可以通过粘膜途径进行免疫，还可提高对以粘膜为主要进入途径的病原收稿日期：2023-09-13作者简介：乔海英（2000-），女，汉族，吉林吉林人，硕士，研究方向：兽医学。
*通信作者简介：张鹏举（1976-），男，汉族，吉林长春人，博士，副研究员，研究方向：预防兽医学。
乔海英，李梦曼，胡念之，等．细菌样颗粒-乳酸菌表面展示技术在黏膜疫苗中的应用[J]．现代畜牧科技，2023，103（12）：115-118． doi ：10.19369/ki.2095-9737.2023.12.030． QIAO Haiying ，LI Mengman ，HU Nianzhi ，et al ．Application of Bacterial-like Particles-surface Display Technology of Lactic Acid Bacteria in Mucosal Vaccine[J]．Modern Animal Husbandry Science & Technology ，2023，103（12）：115-118．细菌样颗粒-乳酸菌表面展示技术在黏膜疫苗中的应用乔海英1，李梦曼2，胡念之1，谭成成1，王伟霞1，孙丽敏1，李信涛1，张鹏举1*（1. 吉林省农业科学院畜牧兽医研究所，吉林 长春 130000；2. 吉林省农业科学院科技交流合作处，吉林 长春 130000）摘要：细菌样颗粒（Bacterium-like particles ，BLP ）是一种无生命的球形颗粒，直径为1～2 μm ，主要由肽聚糖（PGN ）外表面组成。