药理学论文

二级学院药科学院

专业药学

班级药学11（2）班姓名刘星明

学号1103501226 指导老师杨智承

2013年12月

中枢神经药物的帅选及LD50的测定

目的：从未知药物中，通过观察动物的药物反应，筛选出具有中枢神经兴奋惊厥作用的目标药物，并测定其LD50，以评定药物的在效性及安全性。方法：随机捉取3只小鼠，分别注射三种药物，根据小鼠的反应对待测的3种药物做出鉴别和筛选，并从中选取本组药物——中枢兴奋药进行后续实验，初筛选出中枢神经兴奋药并探索0%最大无效量（LD0）和100%最小有效量（LD100）。结果：预实验中，确定我们组兴奋药的最小剂量Dmin=258.6mg/ml 和最大剂量Dmax=326.1mg/ml ；根据正式实验得到的数据经计算，得出我们组受试药品的LD50=357.2146 mg/kg

实验器材

仪器：天平、注射器、针头、烧杯、移液管

药品：中枢药物兴奋药、抑制药、生理盐水

动物：小白鼠

实验方法

预实验

⑴药物的鉴别

随机捉取3只小鼠，称重，按0.1ml/10g 的剂量分别注射三种药物，再根据小鼠的反应对这3种药物做出鉴别，并从中选取中枢兴奋药进行正式实验. ⑵药物LD 0及LD 100测定

捉取18只小鼠，随机分成6组，每组3只，称重，编号，记录数据.以中枢兴奋药的临床反应——40min 内的存活量为指标，分别对原药（75mg/ml)进行一定浓度稀释（稀释倍数分别为2倍，2.3倍，2.5倍，2.9倍，3倍，5倍)，然后分别对同组小鼠腹腔注射稀释药剂（0.1ml/10g ），观察并记录每组小鼠的反应及死亡数。再根据实验结果，计算受试药物的最小剂量Dmin 和最大剂量Dmax 。 正式实验

随机抽取40只小鼠，随机分成5组，每组8只，称重，标记，记录数据。再根据预实验得到的Dmin 和Dmax 计算每组剂量。设正式实验剂量组数为n ，剂量公比为r ，则1max min /-=n D D r ，因此各组的剂量为Dmax ·r k-1 ，k 为第几组，按此式算出各组所需的剂量进行药液的配制。

原药物溶液的浓度为：75mg/mL ，根据预实验得出的浓度范围计算各组剂量，对原溶液进行稀释，再给各种动物进行腹腔注射相应剂量的药液（0.1mL/10g ），观察并记录给药后40min 内小鼠反应情况（是否死亡）。最后进行数据整理，并

按照规定的方法计算LD50，及其95%的可信限。

实验结果

预实验

⑴药物的筛选

第一只小鼠注射药物后出现强直、惊厥、死亡，说明此药物是中枢兴奋药；第二只小鼠注射药物后出现蜷缩、镇静、翻正反射消失、死亡，说明此药物是中枢抑制药；第三只小鼠注射药物后无明显变化，说明三号药物是生理盐水。

⑵药物LD0及LD100测定

表1 小鼠腹腔注射兴奋药预实验结果

组别剂量（mg/kg）总小鼠数(只) 死亡动物(只) 死亡率（%）

1 150mg/kg 3 0 0

2 375mg/kg

3 3 100

3 250mg/kg 3 0 0

4 300mg/kg 3 2 66.7

5 326.1mg/kg 3 3 100

6 258.5mg/kg 3 0 0

由上图可知受试药物的最小剂量Dmin=258.5mg/ml 和最大剂量Dmax=326.1mg/ml

正式实验— —lD 50的测定

将40只小鼠分为五组，n=5，剂量公比为r ， 则 95.02.382/3.311/41max min ===-n D D r 各组的剂量为：

第一组：311.3mg/kg

第二组：311.3mg/kg/0.95=327.7mg/kg 第三组：327.7mg/kg/0.95=344.9mg/kg 第四组：344.9mg/kg/0.95=363.1mg/kg 第五组：363.1mg/kg/0.95=382.2mg/kg 分别对小鼠进行给药后得出实验结果（如表2）所示：

表2 小鼠腹腔注射兴奋药实验结果

组别

剂量 （mg/kg ）

总小鼠数

死亡动物 (只)

死亡率 （%）

剂量对数 (X)

概率单位

(只) (Y)

1 311.3 8 1 12.5 2.493 3.850

2 327.7 8 2 25.0 2.515 4.330

3 344.9 8 3 37.5 2.538 4.680

4 363.1 8 4 50.0 2.560 5.000

5 382.2 8

6 75.0 2.582 5.670

回归方程为：Y=-44.3918+19.3471X；（r=0.9913）

a=0.01时，查得的r为：0.9590

（其中Y的概率单位加5后的值，X为剂量的对数logx）

所以LD50=357.2146 mg/kg

置信系数a=0.05时的置信区间为：350.2495≤LD50≤364.3182,0.0086

讨论

1 预实验中，注射了中枢兴奋性药的小鼠表现为强直，惊厥，死亡，主要是因为兴奋药能使小鼠中枢神经系统功能增加，从而出现亢奋，但剂量过大，超出安全用量范围就会导致小鼠死亡；注射了中枢抑制药的小鼠出现蜷缩、镇静、翻正反射消失、死亡，主要是因为抑制药能使小鼠中枢神经系统功能抑制，使其出现乏力、昏睡、知觉消失等现象，而同样因为药剂剂量大，会使小鼠中枢极端抑制，从而使呼吸减慢变浅甚至死亡；注射生理盐水的小鼠无临床表现，主要因为生理盐水对小鼠的神经系统无影响。

2由于预实验和正式试验中的中枢兴奋药浓度有些出入，所以在选取预实验中最大剂量注射时小鼠只有两只死亡，则本组就在接下来的实验保持r不变,分别加大或减少剂量来测量LD50。而且在正式试验过程中，小鼠腹腔注射后20分钟左右的时间内一般都会出现强直、惊厥、死亡，有部分还出现咬舌的现象。死后出现肌肉僵直，全身僵硬，身体卷曲的状态，此为兴奋药的特点。

3由于实验的小鼠间个体差异比较大，为避免个体差异对实验结果造成影响。

本次实验严格遵循重复和随机的原则对小白鼠进行了分配。而且我们原定于将50只小白鼠分为6组，每组8只，从而增加实验结果的可靠性。本实验全部采用腹腔注射的形式进行给药，是由于腹膜面积大、密布血管和淋巴管，有操作方便、药效作用时间短、速度快等优点。

4药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布。以对数剂量为横坐标、累加死亡率作为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率不容易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变动时，其死亡率变动最明显，也最灵敏，在技术上也最