医学微生物学消毒灭菌、细菌的培养及分布
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
微生物学第三章消毒与灭菌(共60张PPT)
介质的性质
细菌在非水介质中，比水作介质时对热 的抵抗力大
水分、2~4℃石炭酸、油类、干焦空气
不同介质对微生物抗热力的影响
2、低温抑菌法
低温可降低微生物代谢的速度。 大多数微生物对低温有很强的抵抗力 一般的：4-10℃ 淋球菌、脑膜炎球菌、流行感冒杆菌敏感，
伤寒杆菌、白喉杆菌耐低温 冷冻干燥：采用迅速冷冻和抽真空除水。
消毒（Disinfection）：杀灭物体上的病原微生物的方法，
叫消毒。消毒只要求达到消灭传染性的目的，而对非病原微 生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。
防腐(Antisepsis)或抑菌：指阻止或抑制物品上微生物 生长繁殖的方法，微生物不一定死亡。
无菌（asepsis）：指没有活的微生物的状态。
夜培养，残余的芽孢发芽为繁殖体；
第三天：100℃-30分钟，杀死所有微生物。
巴氏消毒法
常用于牛乳及一些饮料
最大限度地消灭病原体，尽可 能少地损害食品的营养物质
•低温维持巴氏消毒法（LTH)： •63～65℃-30分钟； •高温短时间巴氏消毒法(HTST):
•71～72℃-15秒， •超高温巴氏消毒法(UHT): •132℃-1～2秒
•巴氏消毒法
•高压蒸气灭菌法
干热灭菌法
火焰灭菌法
以火焰直接灼烧杀死物 体中的全部微生物的方 法。
灼烧 焚烧
酒精灯
热空气灭菌法
适用于高温下不损坏、 不变质的物品，需在 160℃维持1－2小时，才
能达到杀死所有微生物 及其芽孢、孢子的目的。
干烤箱
湿热灭菌法
煮沸灭菌
100℃，煮沸10～20分钟，可杀死所有细 菌繁殖体，芽孢常需煮沸1－2h才能杀死。
噬菌体（phage）：是指寄生于微生物 （细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及 蓝细菌等）中的病毒。
灭菌_培训课件
正常菌群(normal flora):
正常人的体表和同外界相通的口腔、 鼻咽腔、肠道、泌尿生殖道等腔道中都 寄居着不同种类和数量的微生物。当 人体免疫功能正常时，这些微生物对宿 主无害，有些对人还有利，是为正常微
生物群，通称正常菌群
第七页，共三十七页。
正常菌群对人体的有利作用
生物生长繁殖的方法
第十八页，共三十七页。
(三) 方法— 物理灭菌方法
１. 热
湿
煮沸法
力 灭 菌
热
流通蒸气法
灭 菌
高压蒸气灭菌法
法
间歇灭菌法
巴氏消毒法
干
热 灭 菌
焚烧和烧灼 干烤法
法
第十九页，共三十七页。
(三) 方法— 物理灭菌方法
① 煮沸消毒法：煮沸100℃经5－10 min。主要用于一般外科手术器械、胶管 和注射器等的消毒。
所有外科工作人员都应自觉地遵守这个法则： 一切与伤口或体内组织器官接触的物品必须是无 菌的。
②为防止疾病的传播，对传染病患者的排泄物 和实验废弃的培养物亦须进行灭菌或消毒处理。
第十六页，共三十七页。
（二） 消毒与灭菌的概念
1、灭菌(disinfection) ：杀死物体上所有 微生物的方法，包括病原微生物和非病原 微生物、细菌的繁殖体和芽胞。
(3) 改变细 菌细胞壁或 细胞膜的通 透性，如新 洁尔灭、肥 皂等
第二十九页，共三十七页。
2. 常用消毒剂的种类和用途
名称 石炭酸 来苏儿
乙醇
常用浓度
3%~5% 2％
70%~75%
用
途
器皿、排泄物消毒
皮肤消毒
皮肤、体温表消毒
升 汞 0.05~0.1% 非金属器皿浸泡
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
医学微生物学名词解释总结
第一二章细菌的形态结构与生理1、微生物：（P1）存在于自然界形体微小，数量繁多，肉眼看不见，必须借助与光学显微镜或电子显微镜放大数百倍甚至上万呗，才能观察的一群微小低等生物体。
2、微生物学：（P2）用以研究微生物的分布、形态结构、生命活动（包括生理代谢、生长繁殖）、遗传与变异、在自然界的分布与环境相互作用以及控制他们的一门科学3、医学微生物学：（P3）主要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学症状、对人体感染和致病的机理、特异性诊断方法以及预防和治疗感染性疾病的措施，以控制甚至消灭此类疾病为的目的的一门科学4、代时：细菌分裂倍增的必须时间5、细胞壁：包被于细菌细胞膜外的坚韧而富有弹性的膜状结构6、肽聚糖或粘肽：原核细胞型微生物细胞壁的特有成分，主要由聚糖骨架、四肽侧链及肽链或肽键间交联桥构成7、脂多糖：（P13）LPS 革兰阴性菌细胞壁外膜伸出的特殊结构，即细菌内毒素。
由类脂A、核心多糖和特异多糖3个部分组成8、质粒：（P15）是细菌染色体外的遗传物质，双链闭合环状DNA结构，带有遗传信息，具有自我复制功能。
可使细菌或的某些特定形状，如耐药、毒力等9、荚膜：（P16）某些细菌能分泌粘液状物质包围与细胞壁外，形成一层和菌体界限分明、不易着色的透明圈。
主要由多糖组成，少数细菌为多肽。
其主要功能是抗吞噬，并有抗原性10、鞭毛：（P16）从细菌细胞膜伸出于菌体外的细长弯曲的蛋白丝状物，是细菌的运动器官，见于革兰阴性菌、弧菌和螺菌。
11、菌毛：（P17）是存在于细菌表面，由蛋白质组成的纤细、短而直的毛状结构，只有用电子显微镜才能那个观察，多见于革兰阴性菌12、芽孢：（P18）那个环境条件下，某些革兰阳性菌能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小题，成为内生孢子，简称芽孢13、细菌L型：（P14）即细菌缺陷型。
有些细菌在某些体内外环境及抗生素等作用下，可部分或全部失去细胞壁。
14、磷壁酸：（P12）是由核糖醇或甘油残基经磷酸二酯键互相连接而成的多聚物。
细菌的分布与消毒灭菌带答案
第三章细菌分布与消毒灭菌一、单5选11.杀灭物体上所有微生物的方法称为:A.消毒B.灭菌C.无菌D.防腐E.无菌操作2.杀灭物体上病原微生物的方法称为:A.消毒B.灭菌C.无菌D.防腐E.无菌操作3.微生物学实验过程中防止污染与感染的方法称为:A.消毒B.灭菌C.无菌D.防腐E.无菌操作4.消毒的含义是:A.杀灭物体上所有的微生物B.杀死物体上的病原微生物C.使物体上无活菌存在D.杀死含芽胞的细菌E.抑制微生物生长繁殖5.灭菌的概念是:A.杀灭物体上所有微生物B.杀死物体上的病原微生物C.抑制微生物生长繁殖的方法D.杀死细菌繁殖体E.使物体不含活菌6.防腐的概念是:A.杀灭物体上所有的微生物B.杀死物体上的病原微生物C.使物体上无活菌存在D.杀死含芽胞的细菌E.抑制微生物生长繁殖7.无菌是指:A.杀灭物体上的所有微生物B.杀死物体上的病原微生物C.物体上无活的微生物存在D.杀死含芽胞的细菌E.抑制微生物生长繁殖8.下列哪项可经巴氏消毒法灭活:A.牛奶B.空气C.手术器械D.基础培养基E.物体表面9.巴氏消毒法的温度和时间是:A.100℃ 10分钟B.121℃ 15分钟C.80℃ 10分钟D.62℃ 30分钟E.71.7℃ 30分钟10.高压蒸汽灭菌法的参数为：A.100℃10～20分钟B.121.3℃15～20分钟C.80 ℃ 5～10分钟D.62℃30分钟E.71.7℃15～30分钟11.正常微生物群是指:A.广泛存在于正常人体内脏的微生物群B.存在于正常人体所有腔道的微生物群C.正常时对人体无害也无利的微生物群D.存在于出生前后的正常人群体表的微生物群E.存在于正常人体体表的微生物群12.条件致病微生物的致病条件不包括:A．寄居部位的改变 B．免疫功能降低 C．微生物群分布失调D．长期大量应用广谱抗菌药，正常微生物群被抑制E．使用有关的微生态制剂13.正常微生物群对人体的生理作用不包括:A．生物拮抗 B．营养作用 C．抗炎症作用D．免疫作用 E．抗衰老作用14.大肠杆菌通常寄生于正常人体的:A．皮肤 B．口腔 C．外耳道 D．肠道 E．尿道15.幽门螺杆菌常寄生于人体的部位是：A．胃 B．口腔 C．皮肤 D．外耳道 E．尿道16.因长期大量使用抗生素引起的腹泻属于:A．外源性感染 B．微生物失调 C．交叉感染D．环境污染感染 E．潜伏感染17.治疗微生物群失调症可使用:A．维生素 B．纤维素 C．抗生素 D.类毒素 E.微生物制剂18.*随着年龄的增长，肠道内明显减少的细菌是:A.双岐杆菌 B．乳酸杆菌 C．大肠杆菌 D．葡萄球菌 E．肠球菌19.关于条件致病微生物感染，下列叙述哪项正确:A.为外源性感染B.均为医院内感染 C．近年感染率明显下降D.当机体抵抗力下降时易发生 E．均为菌群失调所致20.水源被细菌污染后，常可引起：A.呼吸道传染病B.消化道传染病 C．伤口化脓性感染D.泌尿道感染 E．厌氧菌感染21.正常人体有正常菌群分布的部位是：A.脑组织B.胃内 C．血液D.心脏 E．体表及外界相通的腔道22.土壤的芽胞菌感染人体的常见途径为：A.消化道B.呼吸道 C．血液D.伤口E.接触23.下列何种不是湿热灭菌法：A．巴氏消毒法 B. 滤过除菌法 C. 煮沸法D. 高压蒸气灭菌法 E．间歇蒸气灭菌法24．火焰灼烧灭菌法适合的对象是：A.培养基B. 接种环C.手术器械D. 敷料E. 一次性注射用具25.下列消毒灭菌法正确的是：A. 接种环——干烤B. 手术器械——漂白粉C. 饮水——过滤除菌D.体温表——煮沸E.敷料包——离压蒸汽灭菌法26．下列有关紫外线描述，哪项不正确：A．穿透力强 B.常用于空气、物品表面消毒C.消毒效果与作用时间有关D.对人体皮肤、眼睛有损失作用E．能干扰细菌DNA复制与转录27．利用紫外线灯杀菌时,紫外线的照射时间为：A. 5minB. 30minC. 60minD.10minE.15min28. 紫外线最强的杀菌波长应为：A.265-266nmB.200-300nmC.136-390nmD.136-260nmE.236-300nm29．一次性医用塑料制品的大量消毒可采用：A．煮沸 B．巴氏消毒法 C．电离辐射D．干热灭菌法 E．高压蒸汽灭菌法30.不属重金属盐类的消毒剂是：A.高锰酸钾B. 氯化汞C. 汞溴红D.硝酸银E. 蛋白银31.乙醇消毒剂常用的浓度是：A．100% B．95% C．75% D．50% E．30%32.乙醇的消毒机制是：A. 干扰染色体的复制和转录B. 改变细胞膜的通透性C. 蛋白质凝固、变形 D .干扰代谢 E.破坏细胞壁33.新生儿预防淋病奈瑟菌性结膜炎可用哪种化学消毒剂：A.0.1%硝酸银B. 1%硝酸银C. 3%过氧化氢D.75%乙醇E.以上不是34.地面、排泄物消毒可采用的是：A. 0.1%高锰酸钾B. 1%硝酸银C. 3%过氧化氢D .75%乙醇 E.生石灰35.含糖类、血清或鸡蛋的培养基灭菌宜采用：A.煮沸法B.流通蒸汽灭菌法C. 间歇蒸汽灭菌法D.高压蒸汽灭菌法E.干烤法36.正常菌群变为条件致病菌的条件中，错误的是：A.机体免疫力下降B.寄居部位改变C. 机体外伤D.饮食不洁E.大剂量使用抗生素37.常用于手术器械灭菌的是：A.高压蒸汽灭菌法B.紫外线照射法C.巴氏消毒法D.滤过除菌法E.干烤法38.影响消毒剂效果的因素中，最不重要的是：A. 消毒剂的使用浓度B. 消毒剂的作用时间C. 微生物的种类与数量D. 湿度E.温度39.根据微生物的危害程度分类埃博拉病毒属于：A. 第一类微生物B. 第二类微生物C.第三类微生物D.第四类微生物E.第五类微生物40.病原微生物实验室分级中安全防护级别最高的是：A. BSL-1B. BSL-2C. BSL-3D. BSL-4E. BSL-5答案：1.B2.A3.E4.B5.A6.E7.C8.A9.D 10.B 11.E 12.E 13.C 14.D 15.A 16.B 17.E 18.A 19.D 20.B 21.E 22.D 23.B 24.B 25.E 26.A 27.C 28.A 29.C 30.A31.C 32.C 33.B 34.E 35.C 36.D 37.A 38.D 39.D 40.D二、填空题1.化学消毒剂杀菌或抑菌的作用机制有、和改变细胞膜的通透性等类型2.常用于饮用水消毒和游泳池水消毒的消毒剂是和。
《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验
《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验[目的]1．掌握皮肤消毒方法。
2．掌握标准纸片扩散法(K-B法)的原理、操作方法、结果的判读与解释及其临床意义。
3．掌握纸片扩散法的质量控制方法。
了解空气、水中细菌的检查方法。
4．熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法。
5．熟悉紫外线灭菌方法。
6．了解高压蒸汽灭菌方法一、细菌的分布检查[材料]普通琼脂平板，1％高层琼脂，无菌试管，1毫升无菌吸管，无菌平皿。
[方法]1．空气中的细菌检查取琼脂平板一个，打开皿盖，暴露于空气中10分钟，然后盖好，在平皿底面注明地点、班组，放入37℃温箱内培养24小时后观察结果，计算菌落数，并观察不同的菌落形态。
2．污水和净水中细菌数的检查（1）用无菌试管分别采取自来水和未经净化消毒处理的污水各一管。
取自来水样时，须先将水龙头用酒精灯烧灼灭菌，再将龙头完全开放，放水5分钟，然后用无菌试管以无菌操作采集水样。
（2）用无菌吸管吸取自来水及经适当稀释的污水各1毫升，分别放入两个无菌平皿内。
（3）将已溶化并冷至约45℃（手握琼脂管感觉热而不烫手）的高层琼脂1支，倾注入平皿内，盖好平皿，立即将皿底贴桌面轻轻摇动，使琼脂与水样均匀混合后（但勿溢出于皿外），静置桌面，待琼脂凝固。
（4）标记，皿底向上置于37℃培养24小时，取出观察结果。
比较自来水及污水内生长的菌落数。
3．皮肤及飞沫中的细菌检查材料：普通琼脂平板，血琼脂平板。
方法：（1）皮肤细菌检查取普通琼脂平板一块，用手指轻轻涂抹培养基表面，置37℃温箱中培养24小时，观察结果。
（2）飞沫中的细菌检查取血琼脂平板一个，打开皿盖，将培养基面置于口腔前约10厘米处，用力咳嗽数次，约30秒钟，然后盖上皿盖，置37℃温箱培养24小时，观察结果。
二、外界因素对细菌的影响（一）高压蒸汽灭菌法（示教）[材料] 手提式高压蒸汽灭菌器、电炉等构造：手提式高压蒸汽灭菌器是一双层金属圆桶，外层坚厚，顶端有厚盖，盖边有翅状螺旋，借此紧闭此盖，防止蒸汽外溢。
医学微生物学消毒与灭菌和生物安全
微生物的分布
❖ 1、土壤中的微生物： ❖ 多为非致病菌，少数有致病性。 ❖ 芽孢菌致病；药材霉变。 ❖ 2、水中的微生物： ❖ 主要来自人和动物的排泄物、污物。 ❖ 常引起消化道传染病。 ❖ 3、空气中的微生物： ❖ 来源于人畜呼吸道的飞沫及飘扬的尘埃； ❖ 常引起呼吸道传染病。
Carbolic Steam
uW/cm2
紫外线杀菌车
（二）电离辐射
包括高速电子、X射线、β、和 射线：60Co－
尤其是γ射线穿透力强，不升高温度，对各种细菌均有致死作用
杀菌机理： 细胞中的水分被电离成H+和OH-，这些游 离基是强烈的氧化剂和还原剂，能破坏微 生物的核酸、蛋白质、酶，使微生物死亡
应用范围：
不耐热的一次性医用塑料制品的 消毒， 食品、药品、生物制品的消毒， 不破坏其营养成分
净台（层流工作柜）、无菌病房。
特点 仅能除去细菌，不能去除病毒、支原体、 衣原体和有些L型细菌等。
滤菌器的种类
➢ 薄膜滤菌器：孔径0.22～0.45m时，可 除去细菌；20～100nm时可除去病毒
➢ 玻璃滤菌器 ➢ 石棉滤菌器 ➢ 素陶瓷滤菌器
滤过除菌法的常用器具
滤菌器
六. 渗透压
主要用于防腐
相互比较
灭菌与消毒的比较：杀菌更彻底。 消毒与防腐的比较：浓度和时间。 无菌：本身无菌或灭菌处理。 无菌操作：保持着原生态的环境。
第一节 物理消毒灭菌法
❖ 一热力消毒灭菌法
干热灭菌法 湿热灭菌法
❖ 二 干燥和低温抑菌法
❖ 三辐射杀菌法
❖ 四超声波杀菌法
❖ 五 滤过除菌法——用物理阻留 方法除去细菌。
第二节 化学消毒灭菌法 用于防腐、消毒甚至灭菌的化学药物称 为化学消毒剂。只能外用或用于环境的消毒。
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用一只无菌滴管取自来水滴于普通平板上1-2滴，然后用接 种环以四区划线的方法划开。
再用一只无菌滴管取池水滴于普通平板上1-2滴，同上操作。 （建议采取接种环接种２－３环）
将上述平板置于37℃孵箱中，倒置培养18-24h后观察结果。
项目
菌落数
菌落种类
自来水
池水
土壤中细菌的检查
实验材料：
土壤（纸包）、无菌滴管１只，无菌生理盐水 庖肉培养基(1) ，普通平板(1)
实验内容
细菌在环境中的分布情况
空气中细菌的检查
实验室空气 超净台空气
水中细菌的检查
自来水 池水
土壤中细菌的检查
细菌在人体中的分布情况
手 咽喉
每组所需的实验材料
（4人/组）
空气中细菌的检查
实验室空气
普通平板1块
超净台空气
普通平板1块
水中细菌的检查
自来水
无菌试管，无菌滴管，普通平板各1个
医学微生物学实验
Experiment of Medical Microbiology
天津医科大学基础医学院
医学微生物学教研室
实验一
抑制或杀灭微生物的理化因素、 细菌的分布
抑制或杀灭微生物的理化因素
主要内容
掌握常用术语 熟悉消毒灭菌的方法 掌握影响消毒灭菌效果的因素
常用术语
消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原
的方法。
常用术语
无菌（asepsis）：不存在任何活菌。 无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。 净化: 能显著减少或破坏一定空间中微生物数量和生物
活性的方法。
消毒灭菌方法
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
池水
池水试管，无菌滴管，普通平板各1个
土壤中细菌的检查
普通平板1块，庖肉培养基1支
土壤纸包，无菌生理盐水，无菌滴管
手
普通平板1块
咽喉
血平板1块
空气中细菌的检查
实验材料及方法：
普通琼脂平板 2块/组 取一块平板，底部做好标记，于实验室空气中暴露
10min后，把皿盖盖好。 取另一块平板，底部做好标记，于已消毒的超净台中
湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：
①湿热情况下菌体蛋白容易凝固变性;
②湿热穿透力比干热大； ③湿热的蒸汽具有潜热，水由气态变为液态时放出潜热，可迅 速提高被灭菌物体的温度。
辐射杀菌法
•紫外线 （240~300 nm，265-266 nm） 原理：作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个T共价结合 形成二聚体，干扰DNA的复制和转录，导致细菌的变异和 死亡。
化学消毒剂的杀菌机制： ①使菌体蛋白变性：如酚、醇、醛类、重金属盐类等。 ②损伤细菌细胞膜：如酚、脂溶剂、表面活性剂等， ③干扰细菌酶系统和代谢：如氧化剂、重金属盐类等。
适度适量使用，消毒时间不能过长！
生物学消毒灭菌法
抗生素 细菌素 噬菌体 中草药
临床治疗 为微生物代谢产物，破坏同源性细菌。 感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒。
实验方法：
取少量土壤接种于庖肉培养基中，80℃水浴20min（杀灭 无芽孢细菌）。
取少量土壤置于无菌生理盐水中，制成混悬液，然后用无 菌滴管吸取1-2滴于普通平板上，四区划线。
37℃孵箱中培养过夜后，观察结果并记录（有/无，生长情况）。
项目 琼脂平板 庖肉培养基
菌落数
菌落种类
手指细菌的检查
生物学消毒灭菌法
热力灭菌法
干热灭菌法
焚烧
烧灼
干烤
红外线
湿热灭菌法
• 巴氏消毒法： 61.1~62.8℃ 30min 或 71.7 ℃ 15~30s
• 煮沸法
• 流动蒸汽消毒法 （常压蒸汽消毒法）
• 间歇蒸汽灭菌法
• 高压蒸气灭菌法：103.4KPa 121.3 ℃作用15-20min
可以杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物
特点：
①穿透力比较差。普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外 线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。
②紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。
•电离辐射 ：β和γ射线 •微波：1-1000 nm的电磁波
紫外线杀菌原理
滤过除菌法： 不能除去病毒和支原体 干燥与低温抑菌法
滤器
Dry ice, -80℃
微生物并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。
灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的
方法（杀灭包括芽胞、病毒和真菌在内的所有病原微生物， 非病原微生物）。
抑菌（bacteriostasis）：抑制人体内部或外部细菌
生长繁殖的方法。
防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细菌生长繁殖
（403房间）暴露10min，把皿盖盖好后取出。 平板于37℃倒置培养，18-24h观察结果，并记录。
项目 实验室空气 超净台空气
菌落数
菌落种类
水中细菌的检查
实验材料：
无菌试管，无菌滴管，普通平板 （2个/组）
实验方法：
酒精灯火焰灼烧自来水管口1min，然后打开水龙头放水 2min，用无菌试管以无菌操作取自来来水标本3毒剂的性质、浓度与作用时间 70%乙醇 微生物的种类、物理状态与数量 温度 随温度升高而加快 酸碱度 最适 有机物 有机物可消耗消毒剂，降低消毒剂浓度
细菌的分布
实验背景及要点
自然界中微生物的分布相当广泛 实验要点
掌握无菌操作 认识微生物的分布 理解消毒灭菌的作用
-196℃
化学消毒灭菌法
消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。 防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。
根据杀菌能力不同，分三大类 高效消毒剂：杀灭包括芽胞在内的所有微生物 含氯的消毒剂、过氧乙酸，环氧乙烷、甲醛 中效消毒剂：杀灭细菌繁殖体，但不能杀灭芽胞 碘酒和碘伏，乙醇 低效消毒剂：杀灭多数细菌繁殖体，不能杀灭芽胞杆菌 高锰酸钾，洗必泰
咽喉中细菌的检查
实验材料与方法： 血平板1块
取血平板，打开盖，在距离培养基5-10cm的地方对着 琼脂表面使劲咳嗽3-5次，然后盖好盖。
实验材料与方法： 普通平板1块
取一块平板，在底部划一直线，分成两部分，标记 “消毒前”和“消毒后”
消毒前部分：直接用手指涂摸2-3次
消毒后部分：换另一手指，碘酒擦拭，酒精脱碘， 然后再涂摸，操作完成后盖好盖。
37℃孵箱中，倒置培养18-24h后观察结果。
项目 手消毒后 手消毒前
菌落数
菌落种类