白芨组织培养实施方案设计

合集下载

白及组织培养育苗技术规程

白及组织培养育苗技术规程

白及组织培养育苗技术规程
1.鲜茎段处理:从白及植株中取出茎段,用消毒剪刀切成长度为1-2cm的小段,去除叶片,用无菌水将茎段表面洗净消毒;
2.琼脂包埋:将洗净消毒的茎段置于琼脂中,深度约为1/2,待琼脂固化后,转移到无菌培养基上;
3.培养基处理:将培养基加热至液态状态,冷却至适宜的温度(通常为25℃左右),加入适当的植物生长调节剂(如NAA、BA等);
4.移植:将琼脂包埋的茎段移植至培养基上,培养瓶密封,置于暗处;
5.培养:将培养瓶放入培养箱中,温度保持在20-25℃,光照强度为1000-2000lx左右,培养时间根据不同材料和培养条件而定。

三、注意事项
1.所有操作要在无菌条件下进行;
2.操作器材要进行高温高压灭菌处理;
3.琼脂及培养基要先进行质量检测,确保无菌、无毒性;
4.培养箱要定期进行消毒和清洁,保持良好的培养环境;
5.注意培养瓶密封,避免细菌和霉菌污染;
6.注意培养条件的控制,如温度、光照等,以促进白及组织的生长和分化。

- 1 -。

白芨栽培方案范文

白芨栽培方案范文

白芨栽培方案范文白芨是一种具有极高经济和药用价值的中药材植物,其栽培具有广阔的市场前景。

为了提高白芨的产量和质量,并确保栽培过程的顺利进行,制定一份科学的白芨栽培方案是非常重要的。

本文将针对白芨的生态要求、种植技术、病虫害防治等方面进行详细的阐述,旨在为农民朋友提供参考。

第一部分:白芨生态要求一、选择适宜的环境白芨喜欢温暖、湿润和光照充足的环境,适宜的生长温度为15℃~25℃,适宜的降水量为800mm~1000mm。

因此,在选择种植地点时,应优先选择阳光充足、排水良好的土壤,尽量避免积水,确保种植场地的通风良好。

二、土壤要求白芨喜欢松软、肥沃的土壤,具有良好的渗透性和保水能力。

栽培前应进行土壤分析,并进行土壤改良。

一般来说,可以适当添加有机肥料,如腐熟的农家肥或腐败的秸秆等,以提高土壤的保水能力和肥力。

第二部分:白芨种植技术一、选种与育苗白芨采用无性繁殖方式进行,可以选择生长茁壮的种苗进行繁育,并尽量选择来自良好生长环境的种苗。

苗期管理可采用覆盖秸秆雪覆盖的方式,以充分保证苗木的生长。

二、整地与播种在整地阶段,应将种植地进行深翻,同时进行细碎,以提供良好的生长环境。

整地后,进行适当的间隔抢培养,以减少杂草的生长。

在播种前,可先进行苗床的铺设,然后将种子均匀撒播在苗床上,最后进行轻微的覆土。

三、育苗期管理苗期管理是保证白芨获得健康生长的重要环节。

在苗期,需保持适宜的温度和湿度,避免温度波动过大或湿度过高,可通过覆盖遮阳网、防风网等方式来调节温湿度。

另外,要注意及时浇水,保持土壤湿润。

四、生长期管理在白芨的生长期,应适时进行疏苗和追肥。

一般在3~4叶期进行疏苗,以便保证每株植株的正常茁壮生长,疏苗后还应及时进行追肥,以提供充分的养分供应。

第三部分:白芨病虫害防治白芨病虫害易受到根腐病、粉瘤病、褐斑病、蚜虫的侵袭。

为了有效防治病虫害,可采取以下措施:一、病害防治1.合理轮作,杜绝连作。

间隔2~3年,以减少病菌的数量和侵染。

白芨组织培养实施方法

白芨组织培养实施方法

白芨组织培养实施方法白芨是一种珍贵的中草药材,具有很高的药用价值。

由于其生长条件苛刻,野生白芨数量逐渐减少,因此,进行白芨组织培养并实施人工繁殖是十分重要的。

下面将介绍一种白芨组织培养的实施方法。

1.材料准备-野生白芨组织:从自然界中采集健康的白芨植株。

-培养基:选择适宜的培养基来提供必需的养分和激素。

常用的培养基有MS培养基、WPM培养基等。

-植物生长调节剂:包括激素和生长素,如乙烯、激动素、生根粉等。

2.组织切割和处理-从野生白芨植株中取得幼嫩的茎尖或幼叶组织,这些组织相对较活跃。

-组织切割时,要确保使用消毒的工具,以避免任何细菌或病毒的传播。

切割后立即将组织放入含有抗生素的无菌培养基中。

3.培养基的制备和调整-根据需要,选择合适的培养基配方。

通常培养基中含有碳源、氮源、激素和其他必需的微量元素。

-调整培养基的pH值和浓度,以适应白芨的生长和发育。

4.培养条件的控制-培养环境的温度:温度是白芨生长的重要因素,一般适宜的培养温度为20-25摄氏度。

-光照条件:白芨是属于半阴性植物,适宜的光照条件是提供适量的光照,但避免过度照射。

-湿度控制:白芨对湿度要求较高,可以在培养箱中增加湿度或使用雾化器提供湿气。

5.组织培养的实施步骤-培养基预处理:将调整好pH值和浓度的培养基加热至约121摄氏度进行灭菌处理。

-组织接种:将切割好的组织块放置在培养基的表面上,避免埋入培养基中。

-培养基的代换:每隔一段时间,需要对培养基进行代换,以提供更多的营养物质和生长调节剂。

-培养条件的监测:每隔一段时间,观察并记录白芨组织的生长情况,包括根的生长率、茎的伸长情况等。

6.植物再生和繁殖-出瓶培养:当白芨组织生长良好时,可以将其移至含有适量生根粉的培养基中进行植株再生和繁殖。

-移栽和生长:当植株生长到一定高度时,可以将其移至含有适宜营养物和水分的基质中进行生长。

可以选择土壤、腐殖质和无菌培养基的混合物作为基质。

总结:白芨组织培养是一种重要的繁殖方法,能够用于保护和增加白芨资源。

白芨组培技术实验设计方案

白芨组培技术实验设计方案
2,4-D
(mg/l)
KT
(mg/l)
IBA
(mg/l)
活性碳
(g/l)
土豆
(g/l)
蔗糖
(g/l)
1
MS
1.0
0.1
30
2
MS
1.00.5Βιβλιοθήκη 303MS
1.0
0.5
1.0
30
4
MS
1.0
0.5
0.5
30
5
1/2MS
1.0
0.1
30
6
1/2MS
0.5
1.0
30
7
1/2MS
1.0
0.5
1.0
30
8
1/2MS
9
1/2MS
0.5
0.3
40
10
1/2MS
0.1
1.0
0.5
2.0
30
11
1/2MS
1.0
1.0
1.0
30
12
1/2MS
1.0
0.5
0.5
0.5
2.0
30
13
1/2MS
0.1
1.0
0.5
0.5
2.0
30
14
1/2MS
0.1
1.0
1.0
0.5
0.5
30
15
1/2MS
0.1
1.0
0.5
75
30
16
1/2MS
30
7
1/2MS
0.5
0.1
30
8
1/2MS
0.5
0.5
30

合作种植白芨实施方案

合作种植白芨实施方案

合作种植白芨实施方案白芨,又名黄芪,是一种重要的中草药材,具有很高的药用价值。

随着人们对中草药材需求的增加,白芨的种植也成为了一项有前景的产业。

为了更好地推动白芨的种植,实现合作共赢,我们特制定了以下合作种植白芨的实施方案。

一、确定种植基地。

首先,需要确定合适的种植基地。

白芨喜欢温暖湿润的气候,因此选择气候适宜的地区进行种植是非常重要的。

同时,基地的土壤质量也需要符合白芨的生长要求,有机质含量高、排水性好的土壤是白芨生长的理想选择。

二、选用优质种苗。

在种植白芨时,选用优质的种苗至关重要。

优质的种苗能够保证植株的生长健壮,产量和质量都会得到提高。

因此,我们需要与专业的种苗供应商合作,选用高品质的白芨种苗,确保种植的顺利进行。

三、科学施肥管理。

科学的施肥管理是保证白芨生长的关键。

在种植过程中,需要根据土壤的养分状况和植株的生长需求,科学施用有机肥、矿质肥等,合理调配养分,保证植株的生长和发育。

四、科学灌溉技术。

白芨对水分的需求较大,因此科学的灌溉技术也是种植过程中需要重点关注的问题。

合理安排灌溉水量和频次,确保植株生长所需的水分,避免因缺水或过湿导致的生长不良和病虫害发生。

五、病虫害防治。

在白芨的种植过程中,病虫害是常常出现的问题。

因此,科学的病虫害防治措施是非常重要的。

可以采用生物防治、药剂防治等方法,及时发现并有效控制病虫害的发生,保证植株的健康生长。

六、采摘和加工。

白芨的采摘和加工是种植的最后环节。

在白芨成熟后,需要及时进行采摘,并进行初步的加工处理,保证产品的质量和口感。

同时,为了提高产品的附加值,可以进行进一步的深加工,生产白芨颗粒、白芨片等系列产品,满足市场需求。

七、市场推广。

在白芨种植的同时,也需要进行市场推广工作。

通过建立品牌形象、开展宣传推广、拓展销售渠道等方式,将白芨产品推向市场,提高产品的知名度和竞争力,实现良好的经济效益。

总结。

通过以上实施方案的合作种植,可以保证白芨的生长和产量,提高产品的质量和市场竞争力,实现合作种植的共赢局面。

白芨种植实施方案

白芨种植实施方案

白芨种植实施方案一、前言白芨,学名Pseudostellaria heterophylla,是一种重要的中药材,具有滋阴润肺、益气安神的功效,因此备受青睐。

本文旨在介绍白芨的种植实施方案,帮助种植者更好地了解白芨的种植技术,提高种植效率和产量。

二、选址选择合适的种植地点是白芨种植的第一步。

白芨适宜生长在温暖湿润、光照充足的环境中,因此在选址时应选择海拔800-1500米,年均气温10-20摄氏度,年降水量1000-1500毫米的地区。

土壤以疏松肥沃、排水良好的壤土为宜。

三、土壤处理在选址确定后,需要对土壤进行处理。

首先进行土壤翻耕,破碎土壤团块,保持土壤松散透气。

然后进行基础施肥,施入腐熟有机肥,提高土壤肥力。

接着进行中耕,除去杂草和杂菌,保持土壤的整洁。

四、播种管理白芨的播种时间一般在春季3月下旬至4月上旬,或秋季9月下旬至10月上旬。

在播种前,需要对种子进行处理,可采用浸种、热水处理等方法,促进种子的发芽。

播种密度一般为每亩10-15千克,播后覆土厚度以种子直径的2-3倍为宜。

五、田间管理白芨的田间管理主要包括及时浇水、松土除草、施肥等工作。

在生长期间,要保持土壤湿润,但要避免积水。

同时要及时松土除草,保持良好的通风透光条件。

施肥方面,可在生长初期追施氮、磷、钾肥料,促进植株生长。

六、病虫害防治白芨的病虫害防治是种植过程中的重要环节。

常见的病害有白粉病、霜霉病等,常见的虫害有蚜虫、蝗虫等。

在防治病虫害时,可以采用农药喷洒、病虫害防治剂等方法,及时发现并处理病虫害。

七、收获加工一般来说,白芨的生长周期为1年左右,生长到植株地上部分枯黄时可进行收获。

收获后,需要对白芨进行加工处理,包括晾晒、烘干等环节,以保证其质量和保存。

八、结语通过对白芨种植实施方案的介绍,相信大家对白芨的种植技术有了更深入的了解。

在实际种植过程中,需要根据当地的气候土壤条件进行调整和改进,不断提高种植技术,以获得更好的产量和品质。

白芨的组培育苗方法与设计方案

白芨的组培育苗方法与设计方案

本技术介绍了一种白芨的组培育苗方法,①种子的采收;②种子的处理,先将白芨种子置于乙烯溶液中浸泡25~30h,接着将白芨种子转入消毒液中继续浸泡20~30min,最后将白芨种子用无菌水清洗后,置于0.1~0.2wt%的升汞中,振荡灭菌5~10min,再用无菌水清洗5遍以上;③增殖培养:将白芨种子接种到增殖培养基中培养得到一代白芨苗;④继代培养:将一代白芨苗分株后的单苗接种到继代培养基中得到二代白芨苗;⑤驯化培养:将二代白芨苗在自然光照下炼苗5~7天,接着将二代白芨苗从培养瓶中取出,用清水洗净根部后,置入培养室内的驯化基质中进行培养。

本技术容易操作、成本低,既能提高增殖系数及生根率,又能缩短培养周期、提高组培苗的质量。

技术要求1.一种白芨的组培育苗方法,其特征在于:包括以下步骤:①种子的采收:采收成熟的白芨种子,用手轻轻搓除果皮后,再采用重力法将干瘪的种子除去后得到合格的白芨种子;②种子的处理,先将步骤①得到的白芨种子置于乙烯溶液中浸泡25~30h,接着将白芨种子转入消毒液中继续浸泡20~30min,所述消毒液由以下重量份的原料组成:甘草酸1~2份、石榴皮提取物2~3份、鱼腥草提取物0.8~1.5份、乳化剂3~5份、酵母菌0.2~0.5份和无菌水150~200份,之后再将白芨种子从消毒液中滤出,并置于纱布中,在湿度为30~50%的条件下静置放置30~40h,最后将白芨种子用无菌水清洗后,置于0.1~0.2wt%的升汞中,振荡灭菌5~10min,再用无菌水清洗5遍以上;③增殖培养:向组培瓶中盛放5~6cm厚的增殖培养基,所述增殖培养基包括硝酸钙0.5~0.6g、18~25mg/L蔗糖、3~6g/L植物凝胶、2~3g/L WPM粉末、黄秋葵汁0.1~0.2g/L和1~1.2mg/L激素ZT,高温灭菌后将经步骤②处理的白芨种子接种到增殖培养基中,并密闭组培瓶,于温度为22~25℃、湿度为40~50%、光照为6000~7000LX的条件下培养至白芨种子长出芽孢,种苗长至2~3cm,培养得到一代白芨苗;④继代培养: 向另外一组组培瓶中盛放5~6cm厚的继代培养基,所述继代培养基包括硝酸钙0.5~0.6g、18~25mg/L蔗糖、3~6g/L植物凝胶、2~3g/L WPM粉末、黄秋葵汁0.1~0.2g/L和1~1.2mg/L激素ZT,高温灭菌后同时将经步骤③培养得到的一代白芨苗从增殖培养基中剥离后分隔成单苗,并将单苗的部分叶片或全部叶片切除,接着将单苗用无菌水冲洗后,再将单苗接种到另一组组培瓶中的继代培养基中,密闭组培瓶后于温度为24~28℃、湿度为45~55%、光照为6500~8000LX的条件下培养至单苗增长至原来的3~5倍,苗高至6~8cm后得到二代白芨苗;⑤驯化培养:将装有二代白芨苗的培养瓶转至自然光照下炼苗5~7天,接着将二代白芨苗从培养瓶中取出,用清水洗净根部后,将二代白芨苗分株后置入培养室内的驯化基质中进行培养,培养室内的温度控制在24~28℃、湿度控制在60~70%、遮光率控制在70%以上。

白芨组培技术实验设计方案

白芨组培技术实验设计方案

白芨组培技术实验设计方案白芨(Bletilla striata)是一种重要的中药材,具有抗菌、消炎、镇痛等药理作用。

然而,野生的白芨种群逐渐减少,且只在东亚特定地区分布,因此研究白芨的组培技术以进行大规模的人工繁殖具有重要意义。

为了建立高效的白芨组培技术,我们设计了以下实验方案。

实验一:不同白芨幼苗处理的影响1.实验目的:研究不同处理对白芨幼苗生长和增殖的影响。

2.实验材料和方法:-材料:白芨种子、MS培养基、激素溶液(IAA、BA)。

-方法:-步骤1:将白芨种子进行表面消毒,接种于含有IAA和BA的MS培养基上。

-步骤2:设置不同处理组:A组为不加激素,B组为加入适量IAA,C 组为加入适量BA,D组为既加入IAA又加入BA。

-步骤3:观察每组幼苗的生长状况、增殖情况和根系形态。

实验二:不同营养盐浓度对白芨幼苗生长的影响1.实验目的:研究不同营养盐浓度对白芨幼苗生长和发育的影响。

2.实验材料和方法:-材料:白芨幼苗、不同浓度的MS培养基。

-方法:-步骤1:将白芨幼苗移栽至含有不同浓度的MS培养基中,分别设置低浓度组、中等浓度组和高浓度组。

-步骤2:观察不同浓度组幼苗的生长状况、根系形态和叶片数目,测定幼苗的鲜重和干重。

实验三:不同光照条件对白芨幼苗生长的影响1.实验目的:研究不同光照条件对白芨幼苗生长和形态发育的影响。

2.实验材料和方法:-材料:白芨幼苗、灯光设备。

-方法:-步骤1:将白芨幼苗置于光照条件下,分别设置不同光照组:全光照、半阴影和全阴影。

-步骤2:观察幼苗的生长状况、根系形态和叶片数目,测定幼苗的鲜重和干重。

同时测定叶绿素含量和光合速率。

实验四:不同激素处理对白芨愈伤组织诱导的影响1.实验目的:研究不同激素处理对白芨愈伤组织诱导效果的影响。

2.实验材料和方法:-材料:白芨愈伤组织,不同激素溶液。

-方法:-步骤1:将白芨愈伤组织置于不同激素溶液中,分别设置IAA处理组、BA处理组和未处理对照组。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

白及组织培养实施方案一、白及简介白及为兰科白及属多年生草本植物,又名甘根、连及草、地螺丝、羊角七、皲口药、利知子、刀口药、鱼眼兰等。

分布在中国、日本以及缅甸北部,主产于贵州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陕西等地。

其味苦、甘、涩,性凉,归肺、胃、肝经。

以块茎供药用,能收敛止血,消肿生肌;治肺结核咳血,支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。

外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症。

块茎含黏液质和淀粉等,可作糊料,在生物医药、保健食品、纺织印染、特种涂料和日用化工等方面有巨大的商业利用价值。

又因白及为地生兰的一种,花开艳丽,被作为庭院、居室及园林景观绿化苗木大量应用。

白及一般生于海拔110——3200m的山野、山谷较潮湿处或林下半遮阴地带,喜温暖、稍阴湿的环境,耐阴性强,忌强光直射,需排水良好、富含腐殖质的砂质土壤,稍耐寒,冬季可在地下越冬。

白及能产生大量的种子(每个蒴果10~30万粒),但这些种子没有胚乳,自然萌发率极低,繁殖困难,但白及胚的薄壁细胞贮存大量的蛋白质、油脂和碳水化合物,可作为种子萌发的营养成分,因此白及种子在保湿的情况下可以萌发,是兰科植物中种子易萌发的类型。

传统的白及繁殖方法大多以分株为主,即将块茎分成小块种植,但繁殖系数低,大面积发展对种源消耗大,不宜推广且难以满足市场需求。

采用白及组织培养可在短时间内大量获取种苗,且成本相对较低,是提高白及产量的强有力措施。

目前,国内研究资料报道的白及组织培养方法各异,所采用的外植体各不相同,且培养基及其中所加的植物生长调节剂种类和规格也千差万别。

二、白及组织培养技术路线参照植物组织组织培养获得再生植株的方式,可通过4种途径获得白及再生植株:一是由愈伤组织形成不定芽再生植株;二是愈伤组织产生胚状体而再生植株;三是由侧芽或顶芽再生植株;四是由茎尖产生原球茎而再生植株。

4种方式各有利弊,传统认为采用侧芽或顶芽发育途径获得的后代性状较稳定,但因为白及原球茎带有大量共生菌,组培过程中容易出现污染。

结合卢氏当地实际,探索采用白及无菌播种的技术路线,通过不同浓度和培方的培养基实现白及组织培养的最佳技术路线,建立白及快繁体系。

白及组织培养完整的技术路线如下:经过试验优化后的技术路线为:白及→种子(采集优质种源蒴果)→表面消毒→无菌播种(MS培养基等)→原球茎(分化诱导)→白及小苗(分株、扩繁)→壮苗生根(炼苗)→完整小植株→炼苗20-25天→移栽→白及三、实验准备:种子:白及的蒴果中有大量的种子,并且蒴果的消毒较方便,污染率低。

另一方面用种子作为外植体操作较容易,并且组培过程中萌发率高,培养的幼苗生长较为迅速,因此,种子作为外植体应用比较广泛,大部分的组培研究都选用种子。

本实验选取卢氏本地优质白及(Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.)蒴果,采收时间为8月下旬至9月中旬,此时间段胚龄大约为第8周至第22周。

器材:高压灭菌锅、超净工作台、电子分析天平(精度为千分之一)、电磁炉、接种消毒器、高效能培养架、医用小推车、日光灯、加湿器、紫外灯、晾瓶架、酸度计(或PH试纸)、试管、容量瓶、胶头滴管、试剂瓶、烧杯、试管架、量筒、玻璃漏斗、移液管、三角瓶、广口培养瓶、称量纸、毛刷、洗耳球、塑料筐、无菌脱脂棉、无菌滤纸、酒精灯、喷壶、橡胶手套、医用白大褂、紫外灯、镊子、接种针、剪刀、解剖刀、器械架、接种托盘等。

(1)通用器械①烧杯:用来盛放、溶解化学药剂等。

常用的规格有50 mL、100mL、250mL、500mL、1000mL。

②烘箱:用来烘干器械。

③恒温水浴:用来溶解琼脂等物质。

④玻璃搅拌棒:用来配制培养基。

⑤洗耳球:用来辅助吸取、转移少量液体。

⑥冰箱:用来贮存化学药剂、植物材料等。

⑦牛角勺:用来转移化学药剂。

⑧玻璃漏斗:用来过滤溶液。

⑨剪刀:用来修剪外植体或剪切嫩茎。

⑩器械架:在无菌操作期间用来放置灭菌的器械。

(2)各种盛具①搪瓷浅盘:用来承载各种器械容器。

②塑料盆:用于清洗培养容器。

③铁丝筐:用来盛放灭菌容器等物品。

④纯水水桶:用来存放去离子水或蒸馏水。

常用的规格有10L、20L。

⑤塑料桶:用来存放洗涤溶液、废弃溶液。

⑥各种规格的磨砂玻璃瓶:用来盛放培养母液,以及各种植物生长物质。

(3)计量器械①量筒:用来量取一定体积的液体。

常用的规格有25mL、50mL、100mL、500mL、1000mL。

②容量瓶:用来配制标准溶液。

常用的规格有50mL、100mL、500mL、1000mL。

③大肚移液管:用来吸取定量溶液。

常用的规格有1mL、5mL、10mL。

④刻度移液管:用来吸取定量植物生长物质溶液。

常用的规格有1mL、5mL、10mL (或可用移液器替换) 。

⑤移液管架:用来放置、固定移液管。

⑥酸度计:用来检测培养基的pH。

⑦药物天平:用来称取配制培养基的药品。

⑧分析天平:用来称取少量有化学试剂,进行化学分析。

(4)灭菌器械①磨砂口玻璃瓶:用来对植物材料进行表面灭菌。

②酒精灯:用来进行接种器材的表面灭菌。

③细菌过滤器:用来过滤不能进行高温灭菌的试剂溶液。

④无菌滤纸:用来汲取器材、植物材料表面的水分。

⑤无菌脱脂棉:用来进行器械、植物材料表面的灭菌处理。

⑥高压灭菌锅:对培养基、接种器材进行灭菌处理。

⑦紫外线灭菌灯:用来对接种室、培养室、操作室等工作环境进行灭菌处理。

(5)接种器械①超净工作台:用来过滤通过接种工作台面的空气,以便进行无菌操作。

②小型喷雾器:装载灭菌药液,来给超净工作台等处喷雾灭菌。

③钝头镊子:在接种操作、继代培养时移取植物材料。

④尖头镊子:用来分离植物材料。

⑤解剖刀:用来切割植物材料。

⑥接种针:用来转移细胞团、愈伤组织。

(6)培养器械①试管:用来作为外植体的培养容器。

常用的规格有2cm×15cm、3cm×15cm。

②培养皿:用来作为外植体的培养容器。

常用的规格有直径9cm、12cm。

③锥形瓶:即三角烧瓶,主要作为培养器材,常用的规格有50mL、100mL。

④铝箔:用于培养容器封口。

⑤橡皮筋:用来束紧培养容器的封口材料。

⑥空调:用来调节操作间、培养室的温度。

药剂:硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钾(KNO3)、氯化钙(CaCl2)、硫酸镁(MgSO4•7H2O)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、碘化钾(KI)、硼酸(H3BO3)、硫酸锰(MnSO4•5H2O)、硫酸锌(ZnSO4•7H2O)、钼酸钠(Na2MoO4)、硫酸铜(CuSO4•5H2O)、氯化钴(CoCl2•6H2O)、乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA•2H2O)、硫酸亚铁(Fe SO4•7H2O)、甘氨酸(C2H5NO2)、肌醇(C6H12O6)、烟酸(VB5)、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、腺嘌呤(AD)、赤霉酸(CA3)、蔗糖、琼脂环境:采用组培快繁技术进行白及的工厂化生产,包括外植体的筛选及获取、外植体灭菌诱导培养、无菌材料繁殖、继代扩繁、单株生根、出瓶炼苗、移栽等工艺程序。

由于组培苗生产从进瓶到出瓶都是在无菌条件下完成,所以离不开一个无菌环境,但实验室的规模大小需依据生产规模来确定。

组培实验室具体设计包括:1、准备室:(1)进行药品、器具和实验材料的保存、消毒以及培养基的配制、灭菌、分装等。

(2)器具的洗涤、干燥、消毒、储藏。

(3)生理生化指标的测定等。

2、接种室:进行材料的接种,内置超净工作台,加装紫外线灯灭菌。

外设缓冲间放置拖鞋、工作服、工作帽等。

3、培养室:开展白及幼苗的无菌生长提供场所,室内需要有培养架及控制温度、湿度、光照的各种设备。

四、实验流程1.准备阶段查阅相关文献,结合实际制订白及组织培养实施方案,根据实验方案配制实验所需的消毒剂和各类母液,确定不同培养阶段培养基配方。

MS培养基与其它培养基的基本成分相比,硝酸盐、钾和铵的含量高,有较高的无机盐浓度,无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。

MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,是目前普遍使用的培养基。

白及组培选取的培养基即为MS培养基。

配制培养基可分为以下几步:(1)制备母液为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量,应该将培养基中的各种成分,按原量10倍、100倍或1000倍称量,配成母液。

这样,每次配制培养基时,取其总量的1/10、1/100、1/1000,加以稀释,即成培养液。

MS培养基主要包含5种主要成分:大量元素:大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。

制备时,按表中排列的顺序,以其10倍的用量,分别称出并进行溶解,以后按顺序混在一起,最后加蒸馏水,使其总量达到1L,此即大量元素母液。

微量元素:因用量少,为称量方便和精确起见,应配成100倍或1000倍的母液。

配制时,每种化合物的量加大100倍或1000倍,逐次溶解并混在一起,制成微量元素母液。

铁盐:铁盐要单独配制。

由硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)5.57g和乙二胺四乙酸二钠(Na—EDTA)7.45g溶于1L水中配成。

每配1L培养基,加铁盐5mL。

有机物质:主要指氨基酸和维生素类物质。

它们都是分别称量,分别配成所需的浓度(0.1~1.0 mg/mL),用时按培养基配方中要求的量分别加入。

植物激素:最常用的有生长素和细胞分裂素。

这类物质使用浓度很低,一般为0.01~10 mg/L。

可按用量的100倍或1000倍配制母液,配制时要单个称量,分别贮藏。

配制植物生长素时,应先按要求浓度称好药品,置于小烧杯或容量瓶中,用1 mol/L氢氧化钠溶解,再加蒸馏水稀释至所需浓度。

配制细胞分裂素时,应先用少量1mol/L的盐酸溶解,然后加蒸馏水至所需量。

以上各种混合液(母液)或单独配制药品,均应放入冰箱中保存,以免变质、长霉。

至于蔗糖、琼脂等,可按配方中要求,随称随用。

(2)配制培养基的具体操作①根据配方要求,用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量,放入同一烧杯中,并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。

②将①中称好的琼脂加蒸馏水300~400mL,加热并不断搅拌,直至煮沸溶解呈透明状,再停止加热。

③将①中所取的各种物质(包括蔗糖),加入煮好的琼脂中,再加水至L,搅拌均匀,配成培养基。

④用1 mol/L的氢氧化钠或盐酸,滴入③中的培养基里,每次只滴几滴,滴后搅拌均匀,并用PH试纸(或酸度计)测其PH值,直到将培养基的PH值调到5.8-6.0。

⑤将配好的培养基,分装到组培瓶中,盖好瓶盖并做好标记,瓶中培养基的量约为20-25mL。

培养基的成分比较复杂,为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉,可以准备一份配制培养基的成分单,将培养基的全部成分和用量填写清楚。

相关文档
最新文档