选修一：2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
•(5)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学 从培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学 只筛选出大约 50 个菌落。 A 同学的实验结果产生 的原因可能有______。(填序号) •①由于土样不同 ②由于培养基污染 •③由于操作失误 ④没有设臵对照 •思维导图：
•课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计 数
•课程标准 •测定某种微生物的数量。 •课标解读 •1.利用选择培养基分离细菌。 •2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。
微生物的分离与计数
• • •
1．筛选菌株 (1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对 生存环境 的要求，到相 应的环境中去寻找。 (2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 目的菌株 生长的条件 (包括营养、温度、pH等)，同时抑制 或 阻止 其他微生物生长。
琼脂 尿素 葡萄糖 MgSO4·7H2O Na2HPO4 KH2PO4
15 g 1g 10 g 0.2 g 2.1 g 1.4 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100 mL
•(1)培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于________培养 基。 •
• (2)“ 目 的 菌 ” 生 长 所 需 的 氮 源 和 碳 源 分 别 来 自 培 养 基 中 的 _______和_____，实验需要振荡培养，原因是______________。 •(3) 转为固体培养基时，常采用 ________ 的方法接种，获得单菌 落后继续筛选。 •(4)下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、 试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是 ________；需要消毒的是________。(填序号)
• 3．课题延伸 • 细菌合成的 脲酶 将尿素分解成 氨 ，使培养基的 碱性 增 强。在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂培养细 菌，若指示剂变 红 ，可确定该种细菌能够 分解尿素 。
•[思维激活 2] 分离尿素细菌的培养基为何能起到 选择作用？ •提示 微生物的生长需要氮源，大多数微生物不 能直接利用尿素作氮源，但尿素细菌却可以尿素 作氮源，因此，在以尿素为唯一氮源的培养基中， 唯有能利用尿素的微生物方可生长繁殖，其他微 生物则不能生长繁殖而被淘汰，因而该培养基可 起到筛选尿素细菌的作用。
微生物的分离
• 【例1】 尿素是一种重要的农业肥料，但若不 经过细菌分解，就不能更好地被植物利用。生 活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们 试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作 用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降 解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示， 实验步骤如图所示。请分析回答问题。
• • • •• • •源自2．操作提示 (1)无菌操作 灭菌 ①取土样的用具在使用前都需要 。 火焰 旁称取土壤。并在 火焰 附近将土样倒入锥形 ②应在 瓶中，塞好棉塞。 火焰 ③在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁操作。 (2)做好标记 本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，最好在使 用前就 做好标记 。
•解析 根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物 质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然 后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落， 再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的 水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计 实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌 操作。 •答案 (1)苯酚 A 稀释涂布平板 (2)④的培养基没有加入苯酚 作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源 稀释涂布平板法或平 板划线 以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基 (3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作
•b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30～ 300的平板进行计数。 •③计算公式：每克样品中的菌株数＝ C/V×M ， 其中 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积 /mL， M代表稀释倍数。
特别提醒
进一步鉴别尿素细菌需在培养基中加酚红指示剂，若
此种菌存在，则会变红，原理是分解尿素的细菌能产生脲酶，该 脲酶 酶可催化下列反应：CO(NH2)2＋H2O ― ― → CO2＋2NH3。因产生 NH3使培养基碱性增强，pH升高，使酚红指示剂呈现红色反应。
• 【巩固1】 苯酚是工业生产排放的有毒污染物 质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工 厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的 苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解 利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所 示，①为土壤样品。请回答下列问题。
•(1)② 中 培 养 目 的 菌 株 的 选 择 培 养 基 中 应 加 入 ______ 作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基 ______(A. 影响； B. 不影响 ) 细菌的数量，如果要 测定②中活细菌数量，常采用______法。 •(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长， ④ 与 ⑤ 培 养 基 的 主 要 区 别 在 于 ____________________ ； 使 用 ____________ 法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细 菌 时 进 行 倒 臵 培 养 的 原 因 是 ______________________________________ __________ •______________________________________
•
• • •
•
【巩固2】 分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是 • ( )。 ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡 萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ 解析 土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解 生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中只加尿素， 分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要 用固体培养基；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要 加葡萄糖作为碳源。 答案 C
• 1．土壤中分解尿素的细菌的分离 • (1)分离的原理 • ①土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因 为它们体内能合成脲酶。这种物质在把尿素分 解成无机物的过程中起催化作用。 • ②实验室中微生物筛选的原理：人为提供有 利于目的菌株生长的条件 ( 包括营养、温度、 pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 • ③分离分解尿素的细菌的培养基中的氮源只 有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能 在上面生长。
• 1．选择培养基的制作方法 • (1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加 入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性， 在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微 生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中 加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但 不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌 分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制 细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和 霉菌。
•(2)间接计数法(活菌计数法) •①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面 生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活 菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品 中大约含有多少活菌。 •②操作 •a．设臵重复组：同一稀释度下，至少涂布3个平 板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 分析结果时，需考虑重复组的结果是否一致，结 果明显不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
•(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境 中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而 不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微 生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法 生存。
•2．结果分析与评价
内容
有无杂菌污 染的判断
现象
对照的培养皿中无菌 落生长
结论
未被杂菌污染
培养物中菌落数偏高
•(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的 目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微 生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存； 培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存， 而自养微生物可利用空气中的 CO2 制造有机物生 存。 •(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物： 如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的 微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存， 从而分离出能消除石油污染的微生物。
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【巩固3】 用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设臵的对照是 ( )。 A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基 解析 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落 数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基作为对 照。对照遵循的是单一变量原则，所以与选择培养基一样接种、培养。 答案 C
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• • •
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(3)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物 生长，同时 抑制 和 阻止 其他种类微生物生长的培养基，称 作选择培养基。 2．统计菌落数目 稀释涂布平板 (1)常用方法： 法。 (2)统计依据：当样品的 稀释度 足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 活菌 。通过统计 平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。 30～300 (3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在 的平板， 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 计数公式为 。
•(2)尿素细菌分离与计数的实验流程： •土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→ 观察并记录结果→细菌计数
• 2．统计菌落数目的方法 • (1)显微镜直接计数法 • ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数 板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物 数量。 • ②方法：用计数板计数。 • ③缺点：不能区分死菌与活菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离计数实
验操作与评价
• • • •
1．实验设计 (1)土壤取样 细菌 ①土壤微生物大约70%～90%是 。 ②细菌适宜在酸碱度 接近中性 的 潮湿 土壤中生长， 绝大多数分布在距地表 3～8 cm 的土壤层。
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原创1：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌 的重要手段。
合作探究系列课件
2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、课题背景
尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。
只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用
CO(NH2)2 + H2O 细菌脲酶
CO2 +2NH3
二、研究思路
（一）筛选菌株
提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？
解决问题的思路 —寻找耐高温环境；
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
（二）统计菌落数目
1、活体计数法（稀释涂布平板）
（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果
一般用菌落数表示。 每克样品中的菌株数=（C/V)× M
为什么？
C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。
2、显微镜直接计数
如何对细菌进行计数？
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的 培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。 1、A同学筛选出150个菌落。 2、B同学筛选出50个菌落。 B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而 导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误， 但也拿不出能令人信服的证据。 请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。
稀释涂布平板→统计菌落数 （2）原理：
1个菌落→1个活菌 （3）统计原则
①选 30∼300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值
为什么 ？
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应 稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为 21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？
人教版生物选修1：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 教案2
土壤中分解尿素的确细菌的分离和计数
教学目标
1. 掌握细菌的分离和计数的方法。
2. 科学探索能力。
3. 理论联系实际能力。
4. 科学性（素养）、耐性、协作精神的培养。
教学重难点
1．掌握选择培养基配制的方法。
2．利用稀释涂布平板计数的方法。
教学方法
1．课内外结合的办法。
2．启发与讲述相结合。
教学过程
第一课时
环节教师活动学生活动设计意图
讲授新课
选择培养基。
讨论，理解，记忆。
注意与鉴定培养基的区别。
统计菌落数目的方
法：
1．稀释涂布平板法。
2．显微镜直接计数
法。
计数方法的比较。
实验原则：
1．对照。
2．单一变量。
3．等量。
了解实验通用原则。
第二课时
环节教师活动学生活动设计意图
实验取样
↓
稀释
↓
涂平板
↓
培养
↓
计数
通过阅读教材，了
解实验流程。
分组讨论，获取实验
思路，由组长上交方案。
第三课时
环节教师活动学生活动设计意图
实验评价提供交流平台，设计
提出实验中可能出现的错
误操作。
分组讨论，实验得
失。
理论联系实际过程中
注意纠错。
教学反思
由于存在实验操作的不足，此实验有些组不能成功，另外由于牵涉到实验室和教室的共同使用对于某些班级来说不是很理想的教学方式。
2-2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
三、结果分析与评价
• 将接种的培养基和未接种的培养基都放在 37度恒温箱，培养12h和24h,观察并记录结 果。
四、课题延伸：菌种的保存
1.临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后置 于4℃冰箱保存。
2.长期保存： 甘油管藏法
尿素分子的立体结构
1、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌 也能分解尿素。 2、课题目的 一、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 二、统计每克土壤样品中尿素细菌的数目
（二）统计菌落数目 • 显微镜直接计数法
• 稀释涂布平板法（活菌计数法）
1、显微镜பைடு நூலகம்接计数法
1mm
每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2， 盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所 以计数室的容积为0.1mm3。 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设 五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个 大方格中的总菌数是多少? 5A 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3） 5AB×104
实验步骤
2.制备培养基
制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个 选择培养基，准备好无菌试管和移液管。
注：每个稀释度下需要3个选择培养基 （平行重复原则），1个牛肉膏蛋白胨培养 基。选用稀释倍数为103~107的稀释液。
为什么分离不同的微生物 要采用不同的稀释度？测定土 壤中细菌的总量和测定土壤中 能分解尿素的细菌的数量，选 用的稀释范围相同吗？
一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养
基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的
菌落特征。菌落形状、大小、隆起程度和颜色
• 将接种的培养基和未接种的培养基都放在 37度恒温箱，培养12h和24h,观察并记录结 果。
四、课题延伸：菌种的保存
1.临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后置 于4℃冰箱保存。
2.长期保存： 甘油管藏法
尿素分子的立体结构
1、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌 也能分解尿素。 2、课题目的 一、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 二、统计每克土壤样品中尿素细菌的数目
（二）统计菌落数目 • 显微镜直接计数法
• 稀释涂布平板法（活菌计数法）
1、显微镜பைடு நூலகம்接计数法
1mm
每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2， 盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所 以计数室的容积为0.1mm3。 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设 五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个 大方格中的总菌数是多少? 5A 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3） 5AB×104
实验步骤
2.制备培养基
制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个 选择培养基，准备好无菌试管和移液管。
注：每个稀释度下需要3个选择培养基 （平行重复原则），1个牛肉膏蛋白胨培养 基。选用稀释倍数为103~107的稀释液。
为什么分离不同的微生物 要采用不同的稀释度？测定土 壤中细菌的总量和测定土壤中 能分解尿素的细菌的数量，选 用的稀释范围相同吗？
一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养
基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的
菌落特征。菌落形状、大小、隆起程度和颜色
高二生物-选修1-2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
崂山一中2011—2012学年度第二学期高二生物（理科）专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课型：新授课撰稿人：兰春叶审稿：姜文新、马千里2012.02.17使用【学习任务】1.研究培养基对微生物的选择作用；2.测定微生物数量的操作过程。
【预习内容】利用课前时间，通过阅读教材，自主完成下列内容，并初步记忆和巩固。
为课堂学习奠定基础。
1．尿素是一种重要的氮肥，在什么情况下才能被植物利用？写出尿素分解的反应式2.科学家能从热泉中筛选出耐热菌的原因是什么？3.什么是选择培养基？4.在统计菌落数目时常用的方法有____________________、__________________________等。
5、稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当___________________时，培养基上的一个标准菌落来源于___________________________。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在___________的平板进行计数。
6．设置对照的目的是:_________________________________________________________________ 7．对照实验是指除_____________外，其他条件都______的实验。
满足该条件的称为_______组，未满足该条件的称为_______组。
8．土壤微生物主要分布在距地表_______cm近____性的______土壤中，约____________为细菌。
9．分离不同的微生物采用不同的稀释倍数，其中细菌为_____________倍，放线菌为__________倍，真菌为_____________倍。
培养不同微生物需要不同温度，其中细菌一般在___________培养，放线菌一般在___________培养，霉菌一般在____________培养。
10．在一定条件下同种微生物表现出稳定的菌落特征，有哪些？___________________________。
2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件 新人教版选修1
四、实验案例
土壤中某样品细菌的分离与计数
实验的具体操作步骤如下: 实验的具体操作步骤如下: 1.土壤取样 1.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。 从肥沃、湿润的土壤中取样。先 铲去表层土3 cm左右 再取样， 左右， 铲去表层土3 cm左右，再取样，将 样品装入事先准备好的信封中。 样品装入事先准备好的信封中。
专题2 专题2 微生物的培养与应用
【课题目标】 课题目标】
研究培养基对微生物的选择作用， 研究培养基对微生物的选择作用，进行微 生物数量的测定。 生物数量的测定。
【研究对象】 研究对象】
土壤中能分解尿素的细菌
【达到目的】 达到目的】
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ） （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 ） 样的细菌
（三）设置对照
A同学的结果与其他同学不同，可能 同学的结果与其他同学不同， 的解释有两种。 的解释有两种。 一是由于土样不同； 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 二是由于培养基污染或操作失误。 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。
实验方案有两种
计算公式：
每克样品中的菌落数= 每克样品中的菌落数=（某一稀释度下平板上生长的平均菌落 涂布平板所用稀释液体积） 数／涂布平板所用稀释液体积）×稀释倍数
2、显微镜直接计数法
（1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细 胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品 中微生物数量。 （2）方法：用计数板计数。计数板是特制的 载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为 1mm2 0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个 （或16个）中格，每个中格再被分成16个 （或25个）小格，每个计数室都由400个小格 组成。
生物选修Ⅰ人教新课标2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件(16张)
但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同，但是A同学没有设计 对照，拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照，帮助A同学排除上 述两个可能影响因素吗？
方案1：其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学 一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培 养基的配制有问题。
㈢设置对照
1.目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
2.实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学 从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在 同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学认为A同学结果有问 题，可能是A同学培养基被杂菌污染，或者培养基混入其他含氮物质， 导致其他杂菌生长。
3.选择培养基
本课题使用的培养基
KH2PO4
1.4g
NaHPO4
2.1g
问题1：该培养基的配方中，为微生物的生 长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
MgSO4 .7H2O 0.2g
葡萄糖
10.0g
尿素
1.0g
问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？ 为什么？
能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作 为氮源而生存。
计算公式： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所 用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。
【例2】：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细 菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落 数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值 163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题， 错在哪？
方案1：其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学 一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培 养基的配制有问题。
㈢设置对照
1.目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
2.实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学 从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在 同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学认为A同学结果有问 题，可能是A同学培养基被杂菌污染，或者培养基混入其他含氮物质， 导致其他杂菌生长。
3.选择培养基
本课题使用的培养基
KH2PO4
1.4g
NaHPO4
2.1g
问题1：该培养基的配方中，为微生物的生 长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
MgSO4 .7H2O 0.2g
葡萄糖
10.0g
尿素
1.0g
问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？ 为什么？
能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作 为氮源而生存。
计算公式： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所 用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。
【例2】：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细 菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落 数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值 163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题， 错在哪？
选1 2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
氢元素、氧元素
不能，因为表中的、牛肉膏蛋白胨可以为微生 物的生存提供氮源，所以不能分离尿素分解菌
思考2：下面的培养基中给细菌提供了什么 营养物质？能分离出分解尿素的细菌吗？
KH2P Na2HPO MgSO4•7
O4
4
H2O
蛋白 胨
葡萄 糖
尿素
琼脂
1.4 g 2.1g 0.2g 1.0g 10.0g 1.0g 15.0g
应以尿素为唯一的氮源的培养基上，才能筛选 出尿素分解菌
2、实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括 营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。
3、选择培养基
人为提供有利于目的菌株生长的条件 (包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止 其他微生物生长的培养基，称为选择培养基。
目的
保证获得菌落数在 30～300之间、适
于计数的平板
思考：分离不同的微生物为什么要采 用不同的稀释度？
二、实验过程设计
5、培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。 细菌： 30～37℃培养1～2d； 放线菌：25～28℃培养5～7d； 霉菌： 25～28℃培养3～4d。
◆在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选 取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培 养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
3、样品梯度稀释
思考：怎么做到无菌操作？
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火 焰旁进行。
二、实验过程设计
3、样品梯度稀释 思考：怎么增加实验的可信度？
设置：重复试验 和 空白对照实验
二、实验过程设计
4、样品梯度稀释 分离不同的微生物采用不同的稀释度。
细菌 放线菌
不能，因为表中的、牛肉膏蛋白胨可以为微生 物的生存提供氮源，所以不能分离尿素分解菌
思考2：下面的培养基中给细菌提供了什么 营养物质？能分离出分解尿素的细菌吗？
KH2P Na2HPO MgSO4•7
O4
4
H2O
蛋白 胨
葡萄 糖
尿素
琼脂
1.4 g 2.1g 0.2g 1.0g 10.0g 1.0g 15.0g
应以尿素为唯一的氮源的培养基上，才能筛选 出尿素分解菌
2、实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括 营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。
3、选择培养基
人为提供有利于目的菌株生长的条件 (包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止 其他微生物生长的培养基，称为选择培养基。
目的
保证获得菌落数在 30～300之间、适
于计数的平板
思考：分离不同的微生物为什么要采 用不同的稀释度？
二、实验过程设计
5、培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。 细菌： 30～37℃培养1～2d； 放线菌：25～28℃培养5～7d； 霉菌： 25～28℃培养3～4d。
◆在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选 取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培 养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
3、样品梯度稀释
思考：怎么做到无菌操作？
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火 焰旁进行。
二、实验过程设计
3、样品梯度稀释 思考：怎么增加实验的可信度？
设置：重复试验 和 空白对照实验
二、实验过程设计
4、样品梯度稀释 分离不同的微生物采用不同的稀释度。
细菌 放线菌
2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(课件)高二下学期生物人教版选修1
实例：耐高温DNA聚合酶的寻找
家公1园为99的什6年一么，个T美热a国p泉细微中菌生发物能现学耐从家高高布温温鲁的的克Ta热于q 细泉在菌美中，国被并黄筛分石选离国出 到来耐呢高？温这的对Ta我q D们N寻A聚找合目酶的的菌。株有何启示？
5
(一)筛选菌株
实验室中如何筛选我们想要的微生物呢？
• 加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长
以尿素为唯一氮源的培养基
8
(二)统计菌落数目
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计
算一定容积里样品中微生物的数量。
（不能区分死菌和活菌） 9
2、稀释涂布平板法（活菌计数法） 在稀释度足够高时
一个菌落
一个活菌
① 选 30~300 个菌落的平板统计。
两位同学用稀释涂布平板法，测定同一土 壤样品中的细菌数。请对两位同学的操作及结 果进行评价！
• 不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物
6
请你根据这一思路，分析旁栏中ห้องสมุดไป่ตู้课 题将用到的培养基配方，回答问题：
KH2PO4
1.4g
Na2HPO4
2.1g
MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂
0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至 1000mL
7
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。
② 每个稀释度取3个平板取其平均值。
10
每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M
例、某同学在稀释倍数为106的培养基上测得 平板上的菌落数的平均值是234，那么，那么每毫 升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体 积为0.1 mL） （ ）
选修一2.2：土壤中分解尿素的微生物的分离和计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
自主学习
一、课题背景
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)2 + H2O 脲酶
2NH3 + CO2
常见的分解尿素的微生物
种类最多。
4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中
加入（ C ）
A.较多的氮源物质
B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物
D.高浓度食盐
谢谢聆听
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚
合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、
M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因
素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，
2、土壤取样（P23）：
土壤是“微生物的天然培养基” 。70∼90％是细 菌。微生物主要生活在富含有机质的表层土壤（距地 表约3∼8cm）。
取样时要铲去表层土
3、培养基： 选择培养基 尿素应是唯一的氮源、为固体培养基
合作探究
注：每个稀释度下需要3个选择培养基，
1个牛肉膏蛋白胨培养基。 设置重复实验
芽孢杆菌 小球菌 假单胞杆菌 克氏杆菌 棒状杆菌 某些真菌 放线菌 等等
自主学习 二、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一 研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
自主学习
一、课题背景
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)2 + H2O 脲酶
2NH3 + CO2
常见的分解尿素的微生物
种类最多。
4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中
加入（ C ）
A.较多的氮源物质
B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物
D.高浓度食盐
谢谢聆听
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚
合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、
M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因
素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，
2、土壤取样（P23）：
土壤是“微生物的天然培养基” 。70∼90％是细 菌。微生物主要生活在富含有机质的表层土壤（距地 表约3∼8cm）。
取样时要铲去表层土
3、培养基： 选择培养基 尿素应是唯一的氮源、为固体培养基
合作探究
注：每个稀释度下需要3个选择培养基，
1个牛肉膏蛋白胨培养基。 设置重复实验
芽孢杆菌 小球菌 假单胞杆菌 克氏杆菌 棒状杆菌 某些真菌 放线菌 等等
自主学习 二、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一 研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
人教版高中生物选修一2-2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt同步课件
验操作与评价
1．实验设计 (1)土壤取样 ①土壤微生物大约70%～90%是 细菌 。
②细菌适宜在酸碱度接近中性 的 潮湿 土壤中生长，绝大多
数分布在距地表 3～8 cm 的土壤层。
(2)样品处理
样品的 稀释程度 直接影响平板上生长的 菌落数目，选用一定稀释 范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300 之间，便于计数。 (3)微生物的培养与观察 将培养基平板放置于 30～37 ℃ 温室中培养1～2d，每隔 24h 统计
(5) 在进行分离分解尿素的细菌的实验时， A同学从培养基上筛选
出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的
实验结果产生的原因可能有______。(填序号) ①由于土样不同 ③由于操作失误 思维导图： ②由于培养基污染 ④没有设置对照
深度剖析
(1)培养基中加入尿素的目的是筛选尿素细菌。
( ①加尿素 糖 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 )。 ⑤加葡萄
⑥不加葡萄糖
⑦加硝酸盐
⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦
解析
土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生
成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中只加尿素， 分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物 要用固体培养基；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物， 需要加葡萄糖作为碳源。
实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌
操作。 答案 (1)苯酚 A 稀释涂布平板 (2)④的培养基没有加入苯酚 稀释涂布平板法或平
作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源 板划线
以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作