植物组织培养 (2)
——得到完整植株的途径
一、植物组织培养的概念
• 植物组织培养：
是指在无菌条件下利用人工培养基对离体的植物器官、 组织、细胞、原生质体等进行的培养。
外植体（explant）：由活体植物体上切取下来的，用于
组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或 原生质体等。
愈伤组织（callus）：原指植物受伤后在伤口表面形成
1978年，Melchers等进行了番茄和马铃薯的体细胞杂交。
1979年，Marton提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方 法进行转化。
1981年，Larkin和Scowcroft引入“体细胞无性系变异（Somaclonal variation）”这一术语。
1982年，Krens等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的DNA，表明 可以用外源DNA对原生质体进行遗传转化。
3、植物组织培养技术的发展（1960年以后）
1960年，Morel利用兰花茎尖培养对兰花进行营养繁殖；
1962年，Murashige和Skoog开发出最著名的Murashige和Skoog培养基 （MS基本培养基），并被后来广泛采用的基本培养基。
1964年，印度人Guha和Maheshwari利用曼陀罗花粉培养获得第一例 单倍体植株。从而开辟了单倍体育种技术。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生 由生长素/腺嘌呤的比例决定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同 年，首次应用微型嫁接技术。
1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。
F G
厥类植物
盆栽及切花植物的繁殖
珍贵树种
无菌苗快速繁殖
无菌苗驯化
组培苗驯化移栽
பைடு நூலகம்
茎、芽和小植株的规模培养
经济植物快速繁殖
（2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗：如草莓、香蕉、
甘蔗、马铃薯、大蒜等。
茎尖培养脱毒
virusfree
tissue
脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养
2、用于植物遗传育种
人工种子（Artificial seed，Synthetic
Seed）：是指植物离体培养产生的胚状体或不 定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳 和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。 作为繁殖材料。
3、根据培养基的类型分为:
（1）固体培养（Solid culture）: 琼脂、卡拉胶等固化。
1955年，Miller等发现了一种促进细胞分裂的植物激素—激动素，后来 发现激动素可用来代替腺嘌呤促进芽的形成，而且其效力比后者高3万 倍。
1957年，Skoog和Miller发现改变细胞分裂素/生长素比例，可以控制根 和芽的发生。
1958年，Maheshwari和Rangaswamy从柑橘胚珠的珠心组织培养中再生 获得体细胞胚；同年，Reinert 和Steward分别从胡萝卜的愈伤组织和细 胞培养中再生得到原胚，为以后的组织培养中器官发生和体细胞胚胎发 生奠定了基础，也为植物细胞全能性理论提供了证据。
3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次 生代谢物质；
根培养:正常根培养， 毛状根培养
4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、 病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。
植物胚胎发生理论研究
生长发育特性研究
矮牵牛茎尖离体培养培养
大蒜根尖培养及植株 再生
微型月季茎段离体培养
叶诱导愈伤组织
台湾百合离体培养
菊花体细胞胚胎发生及植株再生
矮牵牛茎尖离体培养培养
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
非洲紫罗兰叶片培 养
优化培养基
无蔗糖
1%蔗糖
5%蔗糖
无BAP
BAP 0.1mg/l
BAP 5.0mg/l
无NAA
1982年，Zimmermann利用电刺激进行原生质体融合。
1985年，Horsch等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再生 的转化植株。
五、植物组织培养技术的应用 1、优质种苗的快速无性繁殖： （1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖
园艺植物种苗工厂化生产
兰科植物生产
A
E
花烛属植物
B C
• 1902年，德国植物生理学家Haberlandt第一次尝试采用植物组织培养 技术对小野芝麻、风眼兰叶肉组织及万年青属植物的表皮细胞进行培养， 但未能培养成活。 • 1904年，Hanning首次对十字花科的萝卜和辣根的胚培养成功。 • 1922年，Knudson将兰花种子在离体的条件下非共生萌发。同年， Knotte和Robbins对离体根尖进行了培养。Robbins还对豌豆、玉米及棉花 的茎尖进行了培养，只形成一些缺绿的叶和根。 • 1925年，Laibach利用胚培养技术对亚麻的种间杂种胚进行了培养， 并于1929年利用亚麻的胚培养来克服杂交不亲和性。
的一团薄壁细胞；在组织培养中，是指在人工培养基上由 外植体形成的一团无序生长的具有旺盛分裂能力的薄壁细 胞。
二、植物组织培养的类型
按培养材料分为：
愈伤组织培养 器 官培养
悬浮细胞培养
最为常见的组织培养 胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶 花和幼果的部分组织的培养 游离单细胞培养
细胞团培养
茎尖分生组织培养 原生质体培养
1971年，Takebe等获得第一例原生质体培养的再生植株。
1972年，Carlson等利用原生质体融合在两个烟草属中进行种间杂交。
1974年，Murashige等利用细胞分裂素诱导茎尖侧芽分枝。Zaenen和 Larebeke分别发现土壤农杆菌（Agribacterium）中的根瘤诱导的主要 成分是Ti质粒。
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取 液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植 物生长发育的控制起重要作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层 诱导形成的愈伤组织连续生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细 胞培养也得到了类似的结果。
构，即同时形成一个有苗端和根端的双极性结构，而发育 成再生植株的途径。
魔芋胚状体
胚状体发生途径
外植体
脱分化
愈伤组织
再分化
胚状体
再生植株
愈伤组织器官发生途径
小 麦
植物组织培养再生植株的途径
四、植物组织培养技术的发展历史
•
• 1、 早期探索阶段 （1930年以前）
• 1893年，Schwann和Scheiden提出细胞学说及植物细胞全能性理论。
（2）半液半固体培养(Semisolid Culture)：固液双层。
（3）液体培养(Liquid Culture)：震荡、旋转或静置培 养。
固体培养： 液体培养
三、植物组织培养技术的理论基础
植物细胞的全能性(Plant cellular totipotency）
从理论上讲，植物体的每个生活细胞都具有该 植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条件 下，具有发育成完整植株的潜在能力。
脱分化
器官发生途径
外植体
愈伤组织 不定芽 不定根
再分化
再生植株
直接器官发生
间接器官发生
通过器官发生形成再生植株大体上有三种方式:
• 第一种方式是先芽后根; • 第二种方式为先根后芽; • 第三种方式是在愈伤组织的不同部位形成
芽和根，再通过维管组织的联系形成完整 植株。
2.体细胞胚胎发生途径（胚状体发生途径）： 是指在愈伤组织中产生出一些与种子中的胚相似的结
包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生 单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救杂 种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行体 细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选； 用于植物基因转移操作等。
种质资源的离体保存
体细胞无性系变异筛选
花粉、花药培养产生单倍体植株
幼胚拯救克服远缘杂交障碍
用于基因工程技术创造植物新种质。
6 植物组织培养实验二PPT课件
谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
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2、无菌操作要注意：每次操作前， 将双手用酒精棉球擦拭消毒；镊 子、解剖剪刀等金属工具用火焰 烧过灭菌，冷却后方可使用；尽 量减少无菌三角瓶或培养皿在空 气中的暴露时间；所有无菌操作 尽量快速完成，并要求在酒精灯 附近进行。
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3、请先在自然条件下练习外植体解剖， 分割成0.5cm2左右的小块（段），经操 作熟练，检查无误后，再进行无菌解 剖分割及接种，以减少植物材料染菌 或失水死亡的机率。
欢迎同学们进入奇幻的植物组织培养实验世界
1
植物组织培养实验Ⅱ——— 外植体取材﹑表面消毒与接种
实验目的 实验原理、基本知识 实验用品、材料 实验要求 实验内容 、方法 实验报告——作业 下一次实验预告
2
一、实验目的
1、掌握无菌操作技术，加深对无菌操作的了
解；
2、掌握常规的植物细胞组织培养技术，达到 能独立操作的能力
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7、打开三角瓶——铝箔纸的拿法
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8、瓶口在火焰上烧过
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9、铝箔纸的放法
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10、镊出黄瓜苗
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11、镊出黄瓜苗
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12、放入培养皿中
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13 、
黄 瓜
幼 苗 形 态
生 长 点
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——
14、剪取茎段
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15、剪好的外植体
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16、黄瓜切块的接种
植物组织离体培养2
植物组织离体培养-组织培养实验室的建立(2)摘要：组织培养实验室实际上就是从组培材料进到合格商品苗出的生产线，实验室的各个分区单元就是生产车间，各个分区单元就是按组培体系建立的要求顺序排列的。
实验室是一个无菌系统，是一个光、温、湿、气可控系统，这都是建立组培体系的必要保证系统。
无论实验室的性质和规模如何，实验室设臵的基本原则是：科学、节能、减排、低耗、高效、经济和实用。
组织培养实验室布局的总体要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察、适合于生产技术路线。
关键词：基本实验室、辅助实验室、温室、组培室通用仪器设备、组培室药品试剂、学校组培室、家庭组培室、企业组培室、常用设备仪器组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。
规模化生产的组织培养实验室应建在交通方便的地方，便于培养物料和产品的运送。
实验室的建设均需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费和实验性质。
设计组织培养实验室时，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。
实验室的大小取决于工作的目的和规模。
以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计时，应按组织培养程序来没计，避免环节倒排，引起日后工作混乱。
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。
要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
组织培养实验室实际上就是从组培材料进到合格商品苗出的生产线，实验室的各个分区单元就是生产车间，各个分区单元就是按组培体系建立的要求顺序排列的。
实验室是一个无菌系统，是一个光、温、湿、气可控系统，这都是建立组培体系的必要保证系统。
无论实验室的性质和规模如何，实验室设臵的基本原则是：科学、节能、减排、低耗、高效、经济和实用。
第二章(2)植物组织培养操作技术
第二章(2)植物组织培养操作技术1 灭菌用物理或化学方法，杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体，即所有生命的物质全部杀死。
2 灭菌方法2.1培养基灭菌一般高压湿热灭菌，某些激素、维生素采用过滤灭菌。
2.2玻璃器皿灭菌干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h；湿热灭菌：121℃, 20～40min。
接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
2.3接种工具灭菌用前干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h；用前湿热灭菌：121℃, 20～30min。
接种前用酒精棉球擦试，浸入95%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
2.4实验服、口罩、滤纸灭菌湿热灭菌：121℃,20～30min。
实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。
2.5接种室灭菌紫外灯照射(接种室、超净台、接种箱)：波长260nm，距离小于1.2m，20～30min。
臭氧灭菌机：1～2h；熏蒸灭菌：5～8ml/m3甲醛+5g/ m3高锰酸钾；冰醋酸；1～3%高锰酸钾或3%来苏儿。
接种台喷雾消毒：75%酒精。
2.6接种材料灭菌灭菌步骤：①流水冲洗或洗衣粉漂洗②用化学灭菌剂浸润灭菌，最好加吐温-80等表面活性剂(灭菌液的0.5%)，一般70%酒精30S，0.1～1%升汞5～8 min。
③无菌水冲洗3～5次。
2.7物体表面灭菌2.7.1灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌2.7.2范围：桌面、墙面、双手、材料表面2.7.3消毒剂：70%酒精；1～2%来苏水；0.25～1%新洁尔灭；洗衣粉；吐温-802.8培养室灭菌新建培养室用前一定要彻底熏蒸1次。
隔2～5天用洗衣粉水或来苏水拖地1次，用高锰酸钾擦架1次。
3无菌操作3.1作好接种前准备3.1.1接种室的灭菌3.1.2超净工作台的灭菌3.1.2.1 开风机前将紫外灯打开30min以上3.1.2.2 之后开风机15min3.1.2.3 用95%酒精洗工作台面3.1.3接种器皿、用具的灭菌用具先用95%酒精浸泡，后于酒精灯外焰灼烧。
植物组织培养综合实验2
通过满天星等的茎尖培养获 得完整的幼苗，学会茎尖组培快 繁的基本原理和操作技术。
实验原理
植物组织培养的原理: 植物细胞的全能性.
茎尖离体快繁技术
植物的茎尖和腋芽在适宜的培养基上，在合 适的激素条件下，其生长点分化形成大量芽并 能形成良好的苗。苗经诱导可长出根而形成完 整的植株，这就是茎尖组培快繁。此技术已广 泛用来繁育那些不能形成种子进行繁殖或难以 繁育的花卉杂交品种或其它具有重要经济价值 的植物，由于病毒一般不侵入生长点细胞，因 此，这种方法也广泛用来脱病毒获取脱毒苗。
室实 验
选材：材料类型、大小，年龄与发育状况等 修剪：去除较老和脏的叶片，尽量减小体积，减少污染 清洗：自来水冲洗，2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗
无 菌 间 室培 养
灭菌：75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水
冲洗3-5次。
无菌修剪：用无菌镊子和剪刀进一步去除多余的叶片，
依据需要切割成相应大小的茎段（带2-3个叶片）。
接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个
材料/瓶
培养：25 ℃，光照培养
观察记录：污染，生长状况，分枝
实验结果与分析
培养过程请进行下列观察和记录:
1、污染情况：内生菌污染？外源菌污染？ 2、茎尖诱导情况，分枝状况，诱导率。 3、幼苗生长状况：弱小？健壮？玻璃化？
褐化？
理论基础
利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、 腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离 体培养。在短期内获得大量遗传性一致的个体 的方法（技术）称离体无性繁殖，由于这种方 式得到的植株群体来自一个单株（或一个单 芽），它们的遗传组成相同，这些株群可称单 株无性系或单芽无性系。 优越性：
植物组织培养
（3）肌醇 又叫环己六醇，在糖类的相互转 化中起重要作用。 使用浓度：一般为lOOmg／L。 作用：适当使用肌醇，能促进愈 伤组织的生长以及胚状体和芽的形 成。对组织和细胞的繁殖、分化有 促进作用，对细胞壁的形成也有作 用。
（4）氨基酸 (almino acide） 作用：蛋白质的组成部分，也是一种有机氮化 合物。是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、 谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等 半胱氨酸及多种氨基酸的混合物（水解酪蛋白、水 解乳蛋白）等。
（11）再分化 经脱分化的组织或细胞在一定 的培养条件下可又转变为各种 不同细胞类型的能力。 （12） 分化培养 经过脱分化阶段的外植体（形 成愈伤组织），转移到另一培 养基上分化出芽（或小球茎） 或胚时，则称为分化培养，所 用的培养基为分化培养基。
（13） 增殖培养 已分化芽、小球茎或无性幼胚再继续进行增殖，即
1. 培养条件可人为控制，周年生产
植物组织培养中的植物材料完全是在人为提供的 培养基及小气候环境下生长的，摆脱了大自然中 四季、昼夜气温频繁变化及灾害性气候等外界不 利因素的影响，且条件均一、对植物生长极为有 利。因此植物组织培养不受气候和季节的限制， 可周年进行生产。
2. 生长周期短，繁殖速度快
植物组织培养可根据不同植物、不同器官、不同 组织的不同要求而提供不同的培养条件，满足其 快速生长的要求，缩短培养周期。一般20~30d就 完成一个繁殖周期.每一繁殖周期可增殖几倍到几 十倍,甚至上百倍,植物材料以几何级数增加。
3. 管理方便，可实现工厂化生产
植物组织培养是在人为的提供一定温度、光照、 湿度、营养和植物生长调节剂等条件下进行的， 不受自然界中病、虫、杂草等有害生物危害，生 产微型化、精细化、高度集约化，重复性强，便 于标准化管理和自动化控制，真正实现了种苗的 工厂化生产。与田间栽培、盆栽等相比，省去了 中耕除草、浇水施肥、病虫防治等一系列繁杂劳 动，可大大节省人力、物力及田间种植所需要的 土地。
植物组织培养步骤2
植物组织培养一．实验原理根据植物细胞具有全能性，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。
再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。
二．实验药品及仪器试剂：氯化钙(CaCL2.2H2O) 硫酸亚铁 (FeSO4 .7H2 O) 硝酸钾(KNO3)硫酸铜(CuSO4 .5H2 O) 硫酸镁(MgSO4.7H2O) 氯化( CoCL2 .6H2 O)硫酸铵(NH4NO3 ) 甘氨酸磷酸二氢钾(KH2PO4) 盐酸硫胺素硫酸锰(MnSO4.4H2O) 盐酸吡哆素硫酸锌(ZnSO4.7H2O) 烟酸硼酸(H3BO3) 肌醇碘化钾(KI) 蔗糖钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 琼脂乙二胺四乙酸二钠盐Na2-EDTA.2H2O仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，烧杯，量筒，培养皿，棉线，超净工作台，分析天平，长镊子，容量瓶，移液管。
三．实验步骤1.培养基的配方：化合物数量化合物数量氯化钙(CaCL2.2H2O) 440 硫酸亚铁 27.80(FeSO4 .7H2 O)硝酸钾(KNO3) 1900 硫酸铜 0.025(CuSO4 .5H2 O)硫酸镁(MgSO4.7H2O) 370 氯化钴 0.025( CoCL2 .6H2 O)硫酸铵(NH4NO3 ) 1650 甘氨酸 2磷酸二氢钾(KH2PO4) 170 盐酸硫胺素 0.1硫酸锰(MnSO4.4H2O) 22.3 盐酸吡哆素 0.5硫酸锌(ZnSO4.7H2O) 8.6 烟酸 0.5硼酸(H3BO3) 6.2 肌醇 100碘化钾(KI) 0.83 蔗糖 30000钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 0.25 琼脂 10000乙二胺四乙酸二钠盐 37.25 氢离子浓度 1.585微摩/升(Na2-EDTA.2H2O) (PH5.8)按上述配方制作培养基2.培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 培养瓶中，每瓶约15 mL 。
实验二 植物组织培养2-愈伤组织的诱导
中国海洋大学实验报告2015 年 4 月23 日姓名###云年级BBB专业UUUUUU学号HHHHHHHHHHHH课程细胞工程学实验题目植物愈伤组织诱导实验一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理；2、掌握植物组织接种培养的整个无菌操作的过程；3、熟悉超净工作台的使用。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
超净工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备。
三、实验仪器试剂1、仪器：镊子、解剖刀、烧杯、酒精灯、试剂瓶、含有培养基的培养瓶、培养皿、金属盘、记号笔2、用品：胡萝卜、75%酒精、10%次氯酸钠、无菌水四、实验步骤：（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用准备好的自来水冲洗后,用酒精棉擦拭取材部位表面, 于70%酒精中浸沾数秒钟。
（3）将材料放入已灭菌的100ml试剂瓶中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用准备的无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于平板内，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm 厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。
（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。
植物组织培养试卷及答案4套
《植物组织培养》试题(一)一、填空题(每空1分,共20分，)1、一般培养室控制的温度是________，培养基常选用的pH值是________。
2、在组织培养中，培养基常用____________法灭菌，不耐热物质用_________法灭菌。
3、非洲菊的叶片_______,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用________法繁殖。
4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了____培养基，其特点是__________浓度较高，且为较稳定的_______________。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历 ______、____和＿＿＿期。
6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时________，比值低时_______________。
7、脱毒苗培养的常用两种方法是_______和__________。
8、菊花在生产实践中常用 _______法繁殖，在组织培养可用______作为外植体进行培养。
9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而提高产量和质量。
二、判断题（每题2分,共10分，）（）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。
（）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。
（）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程称为脱分化。
（）4、MS0培养基是没有激素的培养基。
（）5、受精卵和体细胞都具有全能性。
三、名词解释（每题2分，共10分）1、细胞全能性2、灭菌3、玻璃化现象4、指示植物5、驯化四、选择题（每题1分,共10分）（）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶A 纤维素酶B 半纤维素酶C果胶酶D淀粉酶（）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素A：维生素B2 、B：维生素B1 、C：维生素B6、 D：维生素C（）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。
A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径C 胚状体发育途径D 花粉均等分裂途径（）4、下列哪种激素不属于生长素类①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA（）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式A“胚性”生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化（）6、适于花粉培养的最佳时期是＿＿A双核期B单核期C多核期D无核期（）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A 硫酸镁B 硫酸亚铁C硫酸锌 D 硫酸铜（）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂（）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③（）10、和组织培养相似的代名词是A 克隆B有性生殖C孤雌生殖 D 单性生殖五、简答题（共50分）1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分)2、述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)3、什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)4、尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？(6分)5、移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)6、接种室有哪些技术要求？(6分)7、用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)《植物组织培养》试题 (二)一、填空题(每空1分,共20分)1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定_____稳定剂，其作用是_______________。
植物组织培养第2章培养基及其配制
植物组织培养第2章培养基及其配制培养基及其配制目的要求：1、了解几种常用培养基的特点；2、掌握培养基的主要成分及其作用；3、掌握培养基的配制方法。
培养基(culture medium) :---是植物组织培养的重要基质。
(土壤+自养条件) ---不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。
因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。
一、培养基的种类最早的培养基: 是Sacks(1680)和Knop(1681),根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液.常用的培养基及特点如下：(1) MS培养基1962年，Murashige和Skoog,培养烟草细胞。
特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸盐含量较其他培养基为高；应用广泛―基本培养基。
(2) B5培养基1968年，Gamborg等，培养大豆根细胞。
特点：含有较低的铵，对有些植物的生长有抑制作用；适宜于双子叶植物特别是木本植物。
(3) White培养基1943年，White,培养番茄根尖。
特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
(4)N6培养基1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培养。
特点：成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高。
在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。
(5) KM―8P培养基1974年，原生质体培养。
特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。
二、培养基的成分水、无机盐、有机物、天然复合物、植物激素、培养体的支持材料、抗生素、活性炭等。
(一)水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中不可缺少的物质。
配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。
植物组织培养第二章
（三）Байду номын сангаас细胞胚胎发生的基因表达机理（略）
二、植物体细胞胚胎发生途径
（一）体细胞胚胎发生的方式 由外植体诱导体细胞胚胎发生的途径有两种： 直接途径和间接途径。 直接途径：从外植体某些部位的胚性细胞直接 诱导分化出体细胞胚胎。这种“胚性细胞”是在胚 胎发生之前就已决定了的。 间接途径：外植体先脱分化形成愈伤组织， 在从愈伤组织的某些细胞，即重新决定为胚性细胞 的细胞分化出体细胞胚胎，多数体细胞胚胎的形成 是通过间接途径产生的。
植物愈伤组织的培养
愈伤组织培养是指将母体植株上的各个部分切下，形成 外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长 和发育的一门技术。 一般情况下，植物组织均能诱发形成愈伤组织，由外植 体形成愈伤组织，标志着植物离体培养的开始。
差异：（1） 受精卵的全能性最高 （2） 受精卵分化 后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。 潜在全能性的原因：基因表达的选择性
科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一 定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就 可能表现出全能性，发育成完整的植株。 人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培养。
三、植物体细胞胚胎发生的极性和生理隔离
体细胞胚胎具有两个明显特点： 1、双极性 2、与母体组织或外植体的维管束系统无直接联系，处于较为 孤立的状态，即存在生理隔离。
（一）体细胞胚胎发生的极性
单个胚性细胞与合子胚一样，具有明显的极性，第一次 分裂多为不均等分裂，顶细胞继续分裂形成多细胞原胚，基 细胞进行少数几次分裂形成胚柄。 （二）体细胞胚胎发生的生理隔离
第二章
植物组织培养的基本原理
植物细胞全能性理论是植物组织培养的核 心理论。 离体细胞具有生命的特征属性，在全能性的 基础上，提供合适的营养和环境条件，离体细 胞经历脱分化和再分化过程