2012 药物半致死量(有效量)测定
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药物半数有效量(ED50)测定ppt课件
10/18/2018
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3
【材料与方法】
一、实验动物：小白鼠，雌雄各半，18～ 22g。 二、器材与药品：鼠笼×2个、天平×1个、 注射器1ml（或0.25ml）×1支、注射针 头51/2×1个、0.5%苦味酸（一支棉签）、 戊巴比妥钠溶液（浓度为0.40%，0.32%， 0.25.6%，0.2048%，0.1638%，0.1311 ％）。
药物半数有效量(ED50)测定
【实验目的】
1.用小白鼠求戊巴比妥钠的ED50 2.实验示例戊巴比妥钠的LD50以供参考。 3.求其治疗指数。
10/18/2018
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【实验原理】
1.质反应实验中，以对数剂量为横坐标，反应百 分率为纵坐标绘图，形成一条对称的“S”形曲 线。半数有效量（ED50）：50%的实验对象有 效时对应的剂量。半数致死量（LD50）：50% 的实验对象死亡时对应的剂量。 2.测定ED50的方法很多，但仍以改良的寇氏法计 算简便，结果较准确，比较常用。
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8
【思考题】
1.药物剂量对药物作用有什么影响? 2.简述药物的半数有效量、半数致 死量、药物治疗指数及其测定意义
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半数致死量
X
0.30 0.25
1
2
3
4
5
6
7
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9
10
t
t*x
1.59
1.41 1.26 1.12
0.20
0.15 0.10 0.05
0.15 9
0.14 1 0.12 6 0.11
注意事项：
1、准确：称量体重准确、
抽取药液准确、
注射操作准确
2、小鼠捉拿注意熟练掌握，避免抓伤咬伤。
【分析与思考题】
• 1.患者服用司可巴比妥约50g后发生了哪些 不良反应？
【分析与思考题】
• 2.造成这种不良反应的原因是什么？属于那 种不良反应？
【分析与思考题】
• 3. 药物的不良反应主要包括哪些类型？ • 副反应，毒性反应，后遗效应，停药反应，变态反应，
特异质反应等
【分析与思考题】
4. 镇静催眠药司可巴比妥正常给药剂量是每 天睡前0.1g，是比较安全的，那么如何评 价药物的安全性？指标有哪些？
实验步骤：
（4）确定1号鼠：以结果出现质的变化的
鼠为1号鼠，依次为2#、3#……，第10号小 鼠不需要给药。
（5）统计公式： LD50 = log-1（∑C/ ∑ T）
实验步骤：
剂量
（mg/k g)
对数 剂量
注 射 剂 量
ml/k g 0.2 0.17 8
实验结果
组内动 物数
C
D
2.00 1.78
实验 13
药物的安全性评价及半数致 死量的测定
【临床病例】
患者，女，54岁，农民。之前因不易入睡，每天睡前口 服0.1g司可巴比妥帮助入睡。现因吞服司可巴比妥约50g 2h后，被家人送往医院抢救。查体：血压 115/70mmHg, 呼吸浅慢，不规律，意识不清，双侧瞳孔缩小，对光反应 迟钝，压眶无反应，口唇发紫，心音低钝，律齐，心率 100次/min，两肺湿啰音，体检过程中病人突然呼吸骤停， 行气管插管，配合呼吸机人工呼吸，同时正压给氧，大量 温盐水反复洗胃，至洗胃液澄清为止，美解眠150mg, 回 苏灵16mg交替静脉滴注，5%碳酸氢钠注射液250ml静脉 滴注，间断给予20%甘露醇注射液及呋塞米注射液20mg 静注，并予以地塞米松注射液30mg，能量合剂及脑复康、 维生素C等，应用广谱抗生素预防感染。抢救6h后，病人 自主呼吸恢复，住院期间补钾监测尿量，10天后痊愈出院。
2012--药物半数致死量(有效量)测定
【实验方法与步骤】
预试：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax） 死亡的大致剂量范围。给药量：0.2ml/10g体重。
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
➢ 本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
质反应量效关系曲线与 药物安全性的评价
质反应实验中，以对数剂量为横坐标、反应百分率为纵坐标 绘图，形成一条对称的“S”形曲线。
半数有效量（ED50）：50％的实验动物有效时对应的剂量。 半数致死量（LD50）：50％的实验动物死亡时对应的剂量。
药物安全性的评价 治疗指数（TI）= LD50/ED50 安全系数（SF）＝ LD5/ED95 可靠安全系数（CSF）＝ LD1/ED99 三者数值大，说明药物安全性好。
如增加记录起效和维持时间，翻正反射消失的深度 可获得对量效关系和个体差异的更深刻认识。
Bliss法计算软件界面
Bliss法运算图形结果输出
Bliss法运算数据结果输出
【注意事项】
1. 本实验为定量药物效价测定，要求较高的 精确性，在实验过程中要求实验者做到尽可 能的精确程度。
2. 为了减少误差，需严格控制除药物剂量外 的所有非处理因素，如最好由一人给药。
实验的观察指标：
ＬＤ50：规定的观察时间内记录动物的死亡 数为指标，记录并统计动物的死亡率。 ＥＤ50：以翻正反射消失作为判断动物睡眠 的指标。把受试小白鼠轻轻地置于仰卧位， 如果在半分钟内不能翻正，即认为小白鼠处 于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生率。
【实验试剂与器材】
小鼠罩 重量称 注射器（1.0ml）及针头 戊巴比妥钠 苦味酸（标记动物号用）
药理实验课件药物半数有效量(ED50)的测定课件
A
B
C
D
E
1
2
3
4
5
5
1
2
3
4
4
5
1
2
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1
2
2
3
4
5
1
#
方法和步骤
小鼠随机分成 5 组，每组10只、雌雄各半
戊巴比妥钠 (腹腔注射, 0.2ml/10g) 20、25、31、39、49 (mg/kg) 以翻正反射消失 (15S) 为入睡指标，记录给 药15分钟后各组睡眠鼠数。
Bliss法计算：ED50、ED5、ED95
#
半数有效量（50％ effective dose，ED50） 半数致死量（50％ lethal dose，LD50 ） 治疗指数（therapeutic index，TI）= LD50/ED50 安全系数（safety factor，SF）＝ LD5/ED95 可靠安全系数（certain safety factor，CSF）＝ LD1/ED99
灌胃
2只 生理盐水（0.1ml/10g，ig） 15min后 2只 阿司匹林（0.1ml/10g，ig）
0.6% 醋酸溶液 （ 0.1ml/10g，ip）
观察15min内各组小鼠 出现的扭体次数
腹腔注射
#
组别 动物数（n） 发生反应动物数(%) 小鼠出现的扭体次数 （15min内）
12 22
汇总各组实验结果，记于上表内，并依照下列公式计算药物镇痛百分 率和抑制百分率。
• 使各组样本的条件尽量一致，消除或减小组间 人为的误差，从而使处理因素产生的效应更加 客观
#
对照原则
对照就是要设立参照物
药物LD50和ED50的测定
严格把控质量关，让生产更加有保障 。2020年12月 上午12时14分20.12.2100:14D ecember 21, 2020
重规矩，严要求，少危险。2020年12月21日 星期一12时14分53秒00:14:5321 December 2020
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。上 午12时14分53秒上午12时14分00:14:5320.12.21
踏实肯干，努力奋斗。2020年12月21 日上午1 2时14 分20.12. 2120.1 2.21
追求至善凭技术开拓市场，凭管理增 创效益 ，凭服 务树立 形象。2020年12月21日星期 一上午12时14分53秒00:14:5320.12.21
严格把控质量关，让生产更加有保障 。2020年12月 上午12时14分20.12.2100:14D ecember 21, 2020
不可麻痹大意，要防微杜渐。20.12.2120.12.2100:14:5300:14:53December 21, 2020
加强自身建设，增强个人的休养。2020年12月21日 上午12时14分20.12.2120.12.21
追求卓越，让自己更好，向上而生。2020年12月21日星期 一上午12时14分53秒00:14:5320.12.21
实验7.11 药物LD50和ED50的测定
【目的】
通过测定戊巴比妥钠的LD50和ED50来评价其安全性。
【原理】
1. 戊巴比妥钠为镇静催眠药，随着剂量加大，相继出现 镇静、催眠、抗惊厥、麻醉、死亡。
2. 药物效应和药物剂量的关系称量效关系，从不同角度 观察，有量反应和质反应之分。
量反应：特定反应程度与剂量的关系，如血压的升高、 血糖的降低等。
盐酸普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项， 再进入半数有效量选项。
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关 数据。
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
【注意事项】
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物 毒性大小的指标?
C母 D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体 重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg
C母
D 等容注射量
C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml
每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml
【实验材料】
实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各半，
实验前禁食12h,不禁水。
实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电 子秤、注射器、小鼠笼。
实验药品：盐酸普鲁卡因 （Procaine hydrochloride）
【实验步骤】
预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:
盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
戊巴比妥钠半数有效量的测量
戊巴比妥钠半数有效量（ED50）的测定一、实验目的1、测定戊巴比妥钠腹腔注射对小鼠催眠作用的ED50值。
2、实验示例戊巴比妥钠的LD50以供参考。
3、求其治疗指数。
二、实验材料1、实验动物：小鼠60只2、器材：鼠笼(2个)、天平、注射器(1ml）、棉签(1支)3、药品：戊巴比妥钠溶液(浓度为0.400%、0.320%、0.256%、0.205%、0.164%、0.131%)，0.5%苦味酸溶液三、实验方法和步骤1.预试0%及100%估计有效量分别为13.1mg/kg，40mg/kg，在此范围内测定ED50。
2.按等比级数（0.8）分成6个剂量组（mg/kg），分别为：40；32；25.6；20.5；16.4；13.1。
3.取小鼠60只，随机分为6组，每组10只，将每只小鼠分别称重，每组分别腹腔注射以上不同剂量戊巴比妥钠，药液容量均为0.1ml/10g。
4.以翻正反射消失作为入睡指标，记录给药15分钟后，各组出现催眠反应的鼠数。
5.计算ED50（ED50=log-1[Xm- i(Σp-0.5)]）四、实验结果不同剂量戊巴比妥钠对小鼠的催眠作用1 40.0 1.6020 10 10 100 1.00 17.52 32.0 1.5051 10 10 100 1.00 17.53 25.6 1.4082 10 9 90 0.90 17.54 20.5 1.3113 10 7 70 0.70 17.55 16.4 1.2144 10 3 30 0.30 17.56 13.1 1.1175 10 3 30 0.30 17.5ED50=17.5治疗指数=6.857五、实验讨论：1、药物剂量对药物作用有什么影响给药剂量不同对药物作用有影响，甚至发生药物性质的改变。
当药物的剂量增加时，药物的效应也增加，但这一效应的增加不是无限制的，当增加到一定程度时，药物的效应恒定在一定水平，而当药物剂量过大时，可致中毒或死亡。
药物半数致死量(有效量)测定_图文
实验设计三大原则：随机、重复、对照
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄 、体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动 物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲 劳程度等）得到随机安排。
作业：
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出：
治疗指数 TI ＝ LD50/ED50 ＝ 安全指数 SI ＝ LD5/ED95 ＝
40
LD50 /ED50
20
0
ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
分工合作，统一计算
分组及给药
取小鼠50只（ 18～22克 ）， 雌雄各半， 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重，标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50 ）测 定时是否要设对照组，应视药物性质等情 况而定。
必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考！
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠 。
实施：规范操作，观察计时；
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄 、体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动 物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲 劳程度等）得到随机安排。
作业：
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出：
治疗指数 TI ＝ LD50/ED50 ＝ 安全指数 SI ＝ LD5/ED95 ＝
40
LD50 /ED50
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ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
分工合作，统一计算
分组及给药
取小鼠50只（ 18～22克 ）， 雌雄各半， 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重，标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50 ）测 定时是否要设对照组，应视药物性质等情 况而定。
必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考！
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠 。
实施：规范操作，观察计时；
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
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测出药物的ＥＤ50或ＬＤ50及相关参数， 认识生物个体差异及评价急性毒性大小的 方法。
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
2、熟悉动物实验常用的随机分组和实验 方法。
3、掌握Bliss 法等半数致死量或半数有 效量的计算方法。
【实验原理】
半数致死量（50％Lethal dose，简写为ＬＤ50） 是指能够导致50%实验对象死亡的药物剂量。
10080Leabharlann 思考：何意？何用？60
1 . LD50 /ED50的本质
2 . 治疗指数（TI）=
40
LD50 /ED50
20
0
ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
number responding
100
cumulative frequency distribution
50
frequency distribution
预实验结果
40mg/kg 组：(0.2 ml/10g )腹腔注射给药
5～15分钟内，出现翻正反射消失(睡眠)；
实验分组、记录和统计
不同剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠的影响
剂量
实验鼠数 睡眠鼠数 反应百分率 ED50
（mg/kg）
（％） （mg/kg）
50
10
40
10
32
10
25.6
10
21.8
戊巴比妥钠为镇静催眠药，随着剂量加大，相 继出现镇静、催眠、抗惊厥、麻醉、死亡。
最
小
有
无效量
效
量
常用量
最 小 中 中致 毒 毒死 量 量量
量效关系与相关概念的示意图
最
剂
小
量
有
效
无效量 量
常用量
最
小
极中
量
毒 量
中 毒 量
致 死 量
无效
效 应
治疗作用 安全范围
毒 死亡 性 作 用
质反应量效关系曲线
反应百分率
每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠。 实施：规范操作，观察计时；
分工合作，统一计算
分组及给药
取小鼠50只（ 18～22克 ）， 雌雄各半， 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重，标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50 ）测 定时是否要设对照组，应视药物性质等情 况而定。
3. 动物种类、体重范围、给药途径、实验观 察时间等因素对ＬＤ50及ＥＤ50的测定结果 都有影响，在报告结果时都应加以注明。
【注意事项】
国际对动物实验的3Rs原则：
即取代(Replacement)、精致(Refinement)和简约 (Reduction)，要求生命科学研究应采取其他手段代替动 物实验、改进实验方法、减少动物数量和痛苦，以符合 道德方面的考量。
实验的观察指标：
ＬＤ50：规定的观察时间内记录动物的死亡 数为指标，记录并统计动物的死亡率。
ＥＤ50：以翻正反射消失作为判断动物睡眠 的指标。把受试小白鼠轻轻地置于仰卧位， 如果在半分钟内不能翻正，即认为小白鼠处 于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生率。
【实验试剂与器材】
小鼠罩 重量称 注射器（1.0ml）及针头 戊巴比妥钠 苦味酸（标记动物号用）
10
如增加记录起效和维持时间，翻正反射消失的深度 可获得对量效关系和个体差异的更深刻认识。
Bliss法计算软件界面
Bliss法运算图形结果输出
Bliss法运算数据结果输出
【注意事项】
1. 本实验为定量药物效价测定，要求较高的 精确性，在实验过程中要求实验者做到尽可 能的精确程度。
2. 为了减少误差，需严格控制除药物剂量外 的所有非处理因素，如最好由一人给药。
药物半数致死量（有效量）测定
Determination of 50% lethal (effective) dose of sodium pentobarbital
中山大学 中山医学院 林明栋
【实验目的】
应用随机、重复、对照的实验设计原则， 进行设计及测定药物的质反应的量效关系。
掌握测定药物半数有效量（ＥＤ50）和/或 半数致死量（ＬＤ50）的方法、原理、实 验步骤、计算过程及意义 。
必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考！
观察与记录
记录观察时间内实验动物的症状、死亡 （或有效）时间。
整个实验应记录的事项： 日期、药物名称、 批号及制药单位、配药的溶剂、药液浓度、 给药途径、给药容积及给药剂量、动物名 称、性别及体重、实验时室温、给药时间、 中毒症状及出现的时间、死亡表现及时间、 各组死亡率、计算所得的ＬＤ50 （或ＥＤ 50 ）。
实验报告点评：
谢谢！
如需联系，请发信息到： yltbbs@ 博客： /yltbbs
微博： /yltbbs /sumslin
【实验方法与步骤】
预试：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax） 死亡的大致剂量范围。给药量：0.2ml/10g体重。
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
【讨论思考】
1．ED50或LD50测定的原理是什么？ 2．测定ED50或LD50有何意义？ 3．为什么以前测定ED50或LD50时各组剂量常
按等比级数安排？ 4．药物的ED50或LD50测定，新药审批规定采
用什么计算方法？为什么？
新药研究规定用Bliss 法
Bliss法又称正规机率单位法或ＬＤ50正规法。 Bliss法通过将反应率转化为机率单位，并进行作业 校正、加权直线回归、逐步逼近，是目前计算ＬＤ 50 最精确的方法。
质反应量效关系曲线与 药物安全性的评价
质反应实验中，以对数剂量为横坐标、反应百分率为纵坐标 绘图，形成一条对称的“S”形曲线。
半数有效量（ED50）：50％的实验动物有效时对应的剂量。 半数致死量（LD50）：50％的实验动物死亡时对应的剂量。
药物安全性的评价 治疗指数（TI）= LD50/ED50 安全系数（SF）＝ LD5/ED95 可靠安全系数（CSF）＝ LD1/ED99 三者数值大，说明药物安全性好。
实验设计三大原则：随机、重复、对照
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄、 体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动物 分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲劳 程度等）得到随机安排。
作业：
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出：
治疗指数 TI ＝ LD50/ED50 ＝ 安全指数 SI ＝ LD5/ED95 ＝
ＬＤ50 /ＥＤ50为半数致死量与半数有效量 的比值（倍数）称为治疗指数（therapeutic index，TI）。
治疗指数与安全范围
一般而言，治疗指数(TI)是表示药物安全性的 指标。该数值越大，表明有效剂量与致死剂 量 (或中毒剂量)间距离愈大，愈安全，但只 适用于治疗效应和致死效应的量效曲线相互 平行的药物，对于两种量效曲线不平行(斜率 不同)的药物，还应参考安全范围（margin of safety，MS），即ED95与LD5之间的距离或 安全指数SI(SI= LD5／ED95)来评价药物的安 全性。
0
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concentration (mg/L)
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
曲线中实验动物数有50％出现阳性结果 （反应）所需的剂量，如以死亡为指标称 为半数致死量，如以某种效应的有或无则 为半数有效量（50％Effective dose，ＥＤ 50）表示。
使用Bliss法有许多优点，如剂量设计不必按几何级 数，各组动物数不必相等，最大剂量组死亡率不必 为100％， 最小剂量组死亡率不必为0。但计算过程 复杂， 过去难以推广，现可用计算机程序运算。目 前，计算急性毒性实验的半数致死量的软件很多， 计算结果精确、简便实用，计算输出结果精细和作 图。
实验报告点评：
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
2、熟悉动物实验常用的随机分组和实验 方法。
3、掌握Bliss 法等半数致死量或半数有 效量的计算方法。
【实验原理】
半数致死量（50％Lethal dose，简写为ＬＤ50） 是指能够导致50%实验对象死亡的药物剂量。
10080Leabharlann 思考：何意？何用？60
1 . LD50 /ED50的本质
2 . 治疗指数（TI）=
40
LD50 /ED50
20
0
ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
number responding
100
cumulative frequency distribution
50
frequency distribution
预实验结果
40mg/kg 组：(0.2 ml/10g )腹腔注射给药
5～15分钟内，出现翻正反射消失(睡眠)；
实验分组、记录和统计
不同剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠的影响
剂量
实验鼠数 睡眠鼠数 反应百分率 ED50
（mg/kg）
（％） （mg/kg）
50
10
40
10
32
10
25.6
10
21.8
戊巴比妥钠为镇静催眠药，随着剂量加大，相 继出现镇静、催眠、抗惊厥、麻醉、死亡。
最
小
有
无效量
效
量
常用量
最 小 中 中致 毒 毒死 量 量量
量效关系与相关概念的示意图
最
剂
小
量
有
效
无效量 量
常用量
最
小
极中
量
毒 量
中 毒 量
致 死 量
无效
效 应
治疗作用 安全范围
毒 死亡 性 作 用
质反应量效关系曲线
反应百分率
每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠。 实施：规范操作，观察计时；
分工合作，统一计算
分组及给药
取小鼠50只（ 18～22克 ）， 雌雄各半， 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重，标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50 ）测 定时是否要设对照组，应视药物性质等情 况而定。
3. 动物种类、体重范围、给药途径、实验观 察时间等因素对ＬＤ50及ＥＤ50的测定结果 都有影响，在报告结果时都应加以注明。
【注意事项】
国际对动物实验的3Rs原则：
即取代(Replacement)、精致(Refinement)和简约 (Reduction)，要求生命科学研究应采取其他手段代替动 物实验、改进实验方法、减少动物数量和痛苦，以符合 道德方面的考量。
实验的观察指标：
ＬＤ50：规定的观察时间内记录动物的死亡 数为指标，记录并统计动物的死亡率。
ＥＤ50：以翻正反射消失作为判断动物睡眠 的指标。把受试小白鼠轻轻地置于仰卧位， 如果在半分钟内不能翻正，即认为小白鼠处 于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生率。
【实验试剂与器材】
小鼠罩 重量称 注射器（1.0ml）及针头 戊巴比妥钠 苦味酸（标记动物号用）
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如增加记录起效和维持时间，翻正反射消失的深度 可获得对量效关系和个体差异的更深刻认识。
Bliss法计算软件界面
Bliss法运算图形结果输出
Bliss法运算数据结果输出
【注意事项】
1. 本实验为定量药物效价测定，要求较高的 精确性，在实验过程中要求实验者做到尽可 能的精确程度。
2. 为了减少误差，需严格控制除药物剂量外 的所有非处理因素，如最好由一人给药。
药物半数致死量（有效量）测定
Determination of 50% lethal (effective) dose of sodium pentobarbital
中山大学 中山医学院 林明栋
【实验目的】
应用随机、重复、对照的实验设计原则， 进行设计及测定药物的质反应的量效关系。
掌握测定药物半数有效量（ＥＤ50）和/或 半数致死量（ＬＤ50）的方法、原理、实 验步骤、计算过程及意义 。
必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考！
观察与记录
记录观察时间内实验动物的症状、死亡 （或有效）时间。
整个实验应记录的事项： 日期、药物名称、 批号及制药单位、配药的溶剂、药液浓度、 给药途径、给药容积及给药剂量、动物名 称、性别及体重、实验时室温、给药时间、 中毒症状及出现的时间、死亡表现及时间、 各组死亡率、计算所得的ＬＤ50 （或ＥＤ 50 ）。
实验报告点评：
谢谢！
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微博： /yltbbs /sumslin
【实验方法与步骤】
预试：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax） 死亡的大致剂量范围。给药量：0.2ml/10g体重。
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
【讨论思考】
1．ED50或LD50测定的原理是什么？ 2．测定ED50或LD50有何意义？ 3．为什么以前测定ED50或LD50时各组剂量常
按等比级数安排？ 4．药物的ED50或LD50测定，新药审批规定采
用什么计算方法？为什么？
新药研究规定用Bliss 法
Bliss法又称正规机率单位法或ＬＤ50正规法。 Bliss法通过将反应率转化为机率单位，并进行作业 校正、加权直线回归、逐步逼近，是目前计算ＬＤ 50 最精确的方法。
质反应量效关系曲线与 药物安全性的评价
质反应实验中，以对数剂量为横坐标、反应百分率为纵坐标 绘图，形成一条对称的“S”形曲线。
半数有效量（ED50）：50％的实验动物有效时对应的剂量。 半数致死量（LD50）：50％的实验动物死亡时对应的剂量。
药物安全性的评价 治疗指数（TI）= LD50/ED50 安全系数（SF）＝ LD5/ED95 可靠安全系数（CSF）＝ LD1/ED99 三者数值大，说明药物安全性好。
实验设计三大原则：随机、重复、对照
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄、 体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动物 分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲劳 程度等）得到随机安排。
作业：
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出：
治疗指数 TI ＝ LD50/ED50 ＝ 安全指数 SI ＝ LD5/ED95 ＝
ＬＤ50 /ＥＤ50为半数致死量与半数有效量 的比值（倍数）称为治疗指数（therapeutic index，TI）。
治疗指数与安全范围
一般而言，治疗指数(TI)是表示药物安全性的 指标。该数值越大，表明有效剂量与致死剂 量 (或中毒剂量)间距离愈大，愈安全，但只 适用于治疗效应和致死效应的量效曲线相互 平行的药物，对于两种量效曲线不平行(斜率 不同)的药物，还应参考安全范围（margin of safety，MS），即ED95与LD5之间的距离或 安全指数SI(SI= LD5／ED95)来评价药物的安 全性。
0
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concentration (mg/L)
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
曲线中实验动物数有50％出现阳性结果 （反应）所需的剂量，如以死亡为指标称 为半数致死量，如以某种效应的有或无则 为半数有效量（50％Effective dose，ＥＤ 50）表示。
使用Bliss法有许多优点，如剂量设计不必按几何级 数，各组动物数不必相等，最大剂量组死亡率不必 为100％， 最小剂量组死亡率不必为0。但计算过程 复杂， 过去难以推广，现可用计算机程序运算。目 前，计算急性毒性实验的半数致死量的软件很多， 计算结果精确、简便实用，计算输出结果精细和作 图。
实验报告点评：