培养基模拟灌装试验(20200530132858)
培养基模拟灌装试验方案
培养基模拟灌装试验方案（无菌粉末分装粉针剂）目录1.目的 (3)2.范围 (3)3.验证组织及职责 (3)4.方案说明 (4)5.工艺概述 (4)6.验证前检查 (5)7.验证内容 (6)8.验证周期 (13)9.验证总结、评价与建议 (14)10.验证报告的审核批准 (14)11.验证合格证 (14)1.目的对于无菌生产来说，即使所有与产品无菌性有关的设备部件、容器以及原料都经过有效地灭菌处理，但当这些生产要素在实际工艺条件下组合在一起时，仍有可能因各种原因导致产品被污染。
对于非最终灭菌的无菌生产工艺必须进行培养基灌装来验证。
培养基灌装是用于评估整个无菌工艺过程，用于表明如果严格按照工艺要求生产，产品的无菌性有可靠保证。
2.范围本验证方案适用于无菌粉末分装粉针剂生产线的培养基模拟灌装试验。
3.验证组织及职责3.1验证职责3.2验证方案的培训验证实施前，QA部门对验证相关人员培训，填写《员工培训记录表》。
4.方案说明4.1验证过程中偏差处理的要求执行《偏差管理规程》4.2验证过程中变更的要求执行《变更管理规程》4.3验证过程中记录填写的要求执行《记录管理规程》4.4其他要求5.工艺概述5.1产品：5.1.1性状：白色结晶或结晶性粉末。
5.1.2规格：0.25g/瓶。
5.1.3包装：10ml西林瓶。
5.1.4批量：24000瓶。
5.2胶塞处理：纯化水清洗、硅化、注射用水清洗、灭菌。
（121℃，20分钟）5.3西林瓶处理：纯化水清洗、注射用水清洗、压缩空气吹干、隧道烘箱灭菌。
（灭菌段温度320℃≥5分钟，冷却温度﹤40℃）5.4铝盖干热灭菌。
（180℃，120分钟）5.5无菌药粉通过分装机充填到西林瓶中，盖胶塞、轧铝盖、灯检、贴签、包装。
5.6工艺流程图如下：6.验证前检查6.1人员的确认确认参与验证人员均接受过微生物知识、更无菌衣、无菌操作、培养基模拟灌装试验方案的培训，同时确认参与验证人员的健康体检情况，详见附件1《员工体检和培训确认表》。
培养基模拟灌装试验(07.7.7)
生产环境变更 生产工艺变更 主要设备变更 主要关键岗位生产人员变更 阳性试验变更 阳性试验变更
培养基模拟灌装试验（ 培养基模拟灌装试验（MFT） ） 无菌原料药和无菌制剂（非最终灭菌制剂） 无菌原料药和无菌制剂（非最终灭菌制剂） 生产出现如下情况
培养基模拟灌装试验（ 培养基模拟灌装试验（MFT） ）
（7）人员 ） 更衣? 更衣 消毒? 消毒 操作过程? 操作过程 操作人员? 操作人员? QC人员 人员? 人员 管理人员? 管理人员 其它人员?(如外来参观人员等 如外来参观人员等) 其它人员 如外来参观人员等
A. B. C. D. E. F. G.
四、MFT的前期工作 的前期工作
模拟灌装试验人员的培训 （1）模拟灌装试验人员无菌操作知识培训 ） （2）模拟灌装试验人员无菌检验知识培训 ） （3）模拟灌装装备检修人员的无菌设备维修 ） 知识培训 培训（ （4）模拟灌装试验 ）模拟灌装试验SOP培训（含生产、QC、 培训 含生产、 、 计量、装备） 计量、装备） 培训（ （5）模拟灌装试验 ）模拟灌装试验SOR培训（含生产、 培训 含生产、 QC、计量、装备） 、计量、装备）
培养基模拟灌装试验（ 培养基模拟灌装试验（MFT） ）
结果的分析
对微生物污染的样品应进行鉴别试验， 对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容 至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。 至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。 不成功（染菌） 不成功（染菌）原因 ？（生产 （1）环境？（生产？检验？储存？） ）环境？（生产？检验？储存？） （2）设备？ ）设备？ （3）物料？ ）物料？ （4）转移过程的容器？ ）转移过程的容器？ （5）水？ ） （6）检测 ）检测?
培养基模拟灌装试验-TSB验证详解
培养基模拟灌装试验-TSB验证详解培养基模拟灌装试验-TSB 验证详解针对TSB培养基，适用玻璃安瓿小容量注射剂产品一、关键点 1、培养基选择:基础培养基和选择性培养基。
本次讲解TSB培养基。
一般为250g一瓶，每30g+1L注射用水配制。
配制注意:注射用水不能热配，培养基不能通入氮气、二氧化碳等。
目的是去除抑菌因素2、生产线选择:3、生产批次选择:详见无菌附录4、容器选择:易观察。
应模拟全部规格，或计划中安排。
容器应选择无色透明5、装量选择:足够微生物生长所需，能充分接触到内壁，采用倒瓶等容器大小和装量应足够微生物生长和便于观察。
一般装量为25~40% 如:5ml安瓿瓶，灌装2ml。
并不一定要模拟某个品种的装量。
6、灌装速度选择:工艺范围内，快速和低速都有不同的模拟意义一般涉及洗灌封联动的问题。
比如安瓿瓶烘干灭菌的时间影响。
7、生产线人员选择:人员参与验证，或计划中安排详见无菌附录8、灌装数量选择:批量及置信区间选择等详见无菌附录 2003验证指南9、培养基试生长试验及培养后阳性对照试验:试生长可参考:分别在30?,35?(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌)和23?,28?(白色念珠菌、黑曲霉)培养 7 天。
应有对照组。
阳性对照:接种浓度均小于100cfu/ml10、菌种选择:中国药典11、培养室选择及热分布:培养环境监控措施证明对于很多企业来说，不可能会建设一个培养室。
一般情况下，都是需要找个房间作培养室。
这就需要培养室检查:23?,28? 与30?,35? 是否能稳定。
这也与培养季节有关。
首先:空间是否合适、是否受认为干扰。
必要时加锁接着:制冷模式，测试最低控温;制热模式，测试最低控温。
最后:选取不同测温点进行检测，以说明热分布均一。
当放入培养瓶开始，应该已经是一个合格环境，并开始登记温湿度。
期间应多次检查，并适当调节。
12、灌装环境监测项目及监测点选择:分二关键部分:1:灌装区域 2:灌装设备所处环境项目:悬浮粒子、浮游菌、沉降菌等，详见无菌附录注意:设备自带的检测项目不能取代验证需要的检测项目。
4、培养基模拟灌装试验
3
法规及相关指南（二）
药品GMP指南•无菌药品：12 无菌工艺模拟试验
PDA technical report NO.22 Process simulation testing for aseptically filled products, 2011
7
培养基模拟灌装流程-方案
培养基的选择
一般原则：选择适合绝大多数微生物生长的 胰蛋白大豆肉汤培养基（TSB）；
2015-06-24 特殊情况：硫乙醇酸流体培养基（FTM）
（1）无菌工艺需要在一个严格无氧环境中进行； （2）环境监测或无菌检查中发现厌氧菌的存在； （3）厌氧环境和FTM促生长的研究。
鉴定
试验
调查
微生物 限度
无菌 检查
溯源
环境 监测
24
45
40 39
35
34
32
30
25
24
菌种统计
20
15 12 10 10
10 7 6
2015-06-24
5
4 33
2222 2
11111 111111 111111 111
0
系列1
藤黄 微球
菌
科式 葡萄 球菌
人葡 萄球
菌
克氏 葡萄 球菌
萎缩 芽孢 杆菌
H
48h
48h
H
20人
20人
M
150-400
视情况 设置
M
16h
16h
12
培养基模拟灌装流程-方案
干扰动作的设计原则： 识别干扰-干扰汇总表 干扰分类：计划性干预和非计划性干预
无菌工艺验证培养基模拟灌装试验(葛均友) 共66页
工艺验证工作主要为培养基灌装验证试验。灌装的批数、批 量与合格标准见表1。
|
批量（瓶）
3000
允许染菌的数量（瓶） 0
4750 ≤1
6300 7760
≤2
≤3
10 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
相关指南文件
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13 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
2、多产品简化试验思路
一条灌装线生产多个产品时， 根据下列因素可被划分为不 同的类型组
灌装工艺 不同的容器、密封方式
由此选出两个或更多个在下列方面能涵盖所有其它相关产品 的产品：
容器的大小、开放或密封的设计 灌装线的速度和干预
|
冻干, 贮存容器的形式、转移的方式
PDA 关于培养基模拟灌装的技术报告
– PDA Technical Repo ort No. 28, Process Bulk Pharmaceutical Chem micals, Revised Supplement 2019
– PDA Technical Repo ort No.22 2019, Process SimulationfoT| esting or Aseptically Filled Products ）
人人员员卫操生作 环文境件监体系控
物料质量
4|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基模拟灌装试验
培养基模拟灌装试验---使用培养基作为药品的替代 品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行 验证。
– 培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在 所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际 产品中更容易
培养基模拟灌装实验试卷答案
培养基模拟灌装实验方案考试卷一、填空题（5分/题，共50分）1. 本次培养基模拟灌装实验为新改建的洁净厂房内实施，为培养基模拟试验的首次验证，因此通过连续三批模拟灌装实验及结果有限性的评价，确认结果的重现性。
2. 对无菌灌装区的设备台面及可能接触到的表面进行无菌程度的检查，其合格标准为：灌装机设备台面微生物数量＜3个，设备输送带＜5个。
3. 培养基模拟灌装过程中对操作人员的无菌服、五指手套、口罩等部位微生物数量进行检测, 其合格标准为：五指手套微生物数量＜3个，一个操作人员双臂、前胸微生物总数＜5个，口罩微生物数量＜3个。
4. 粉针剂无菌分装间应控制合适的温度及相对湿度，其合格标准为：房间温度：20-22 ℃，相对湿度：45-50%。
5. 模拟分装过程：采用先灌装乳糖、再注入液体培养基的方式，其阳性对照样品为枯草芽孢杆菌和白色念珠菌。
6. 微生物培养条件：将全部样品在适宜的温度下培养14天，先在较低的温度（23-28℃）培养7天，然后在较高的温度下(30-35℃)培养7天，在第三天和第七天之间至少观察培养基样品的微生物的生长情况，通过最后一天的观察，确认有无微生物生长。
7. 对于培养基/乳糖样品的培养结果，若发现污染应明确记录瓶号、瓶数，同时应检查胶塞、铝盖的密封情况；若有破损应记录并检查其破损原因。
对于被污染的样品进行鉴别试验，至少包括菌落数、细胞形态学记革兰染色特性等。
8. 试验结果与评价：评价无菌模拟灌装实验结果的主要指标就是污染水平，不管实验的数量有多少，其结果污染瓶均要为零，如果连续三批实验结果均出现1瓶，应进行再次实验，培养结果如出现2瓶以上，应停止生产，进行污染调查。
9. 对于已投入使用的粉针剂生产线，每年至少进行2次培养基模拟灌装实验，其生产线的每一位员工至少每年参加一次成功的培养基模拟灌装实验。
10. 当生产设备、设施、操作人员的结构、操作方法发生变动时，必须进行培养基模拟灌装实验，已确认其变动没有对该生产线的无菌保证产生影响。
培养基模拟灌装试验方案
培养基模拟灌装试验方案（无菌粉末分装粉针剂）目录1.目的 (3)2.范围 (3)3.验证组织及职责 (3)4.方案说明 (4)5.工艺概述 (4)6.验证前检查 (5)7.验证内容 (6)8.验证周期 (13)9.验证总结、评价与建议 (14)10.验证报告的审核批准 (14)11.验证合格证 (14)1.目的对于无菌生产来说，即使所有与产品无菌性有关的设备部件、容器以及原料都经过有效地灭菌处理，但当这些生产要素在实际工艺条件下组合在一起时，仍有可能因各种原因导致产品被污染。
对于非最终灭菌的无菌生产工艺必须进行培养基灌装来验证。
培养基灌装是用于评估整个无菌工艺过程，用于表明如果严格按照工艺要求生产，产品的无菌性有可靠保证。
2.范围本验证方案适用于无菌粉末分装粉针剂生产线的培养基模拟灌装试验。
3.验证组织及职责3.1验证职责3.2验证方案的培训验证实施前，QA部门对验证相关人员培训，填写《员工培训记录表》。
4.方案说明4.1验证过程中偏差处理的要求执行《偏差管理规程》4.2验证过程中变更的要求执行《变更管理规程》4.3验证过程中记录填写的要求执行《记录管理规程》4.4其他要求5.工艺概述5.1产品：5.1.1性状：白色结晶或结晶性粉末。
5.1.2规格：0.25g/瓶。
5.1.3包装：10ml西林瓶。
5.1.4批量：24000瓶。
5.2胶塞处理：纯化水清洗、硅化、注射用水清洗、灭菌。
（121℃，20分钟）5.3西林瓶处理：纯化水清洗、注射用水清洗、压缩空气吹干、隧道烘箱灭菌。
（灭菌段温度320℃≥5分钟，冷却温度﹤40℃）5.4铝盖干热灭菌。
（180℃，120分钟）5.5无菌药粉通过分装机充填到西林瓶中，盖胶塞、轧铝盖、灯检、贴签、包装。
5.6工艺流程图如下：6.验证前检查6.1人员的确认确认参与验证人员均接受过微生物知识、更无菌衣、无菌操作、培养基模拟灌装试验方案的培训，同时确认参与验证人员的健康体检情况，详见附件1《员工体检和培训确认表》。
粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验
粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验摘要】目的为确保粉针无菌分装生产过程对产品不产生污染，保证粉针生产药品质量。
方法先注入液体培养基，再以无菌甘露醇干燥粉为替代物，模拟分装于注射剂瓶，盖胶塞，轧铝盖。
分装样品先后在30～35℃与20～25℃下培养7d，并作阴性、阳性对照。
结果无菌灌装环境及操作人员表面微生物检查合格, 阴性、阳性对照成立, 试验样品微生物未检出。
结论无菌粉针灌装过程中，经培训的操作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以确保无菌。
【关键词】粉针剂无菌工艺验证培养基灌装试验无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素。
无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法和规程进行。
产品的无菌或其它质量特性绝不能依赖于任何形式的最终处理或成品检验。
培养基模拟灌装试验——使用培养基作为药品的替代品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。
培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际产品中更容易。
能全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品的能力。
而且也是各国药品法规要求的基本内容。
1 验证准备工作1.1所有的相关设备及其工艺均应事先通过确认或验证, 如洁净生产区环境须通过静态验证 (空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均应符合相应的规定)，操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训, 生产主要设备 ( 如分装机等)以及与生产相关的其它辅助工艺 ( 如淋洗、湿热灭菌、干热灭菌去热原、除菌过滤等)，均须通过确认或验证。
1.2甘露醇粉末无菌的处理[1]事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kGy），并进行无菌性、抑菌性和溶解度的测试。
在甘露醇粉末的抑菌性试验中，每天观察微生物生长情况，全部样品对照品试管中均有明显的微生物生长，说明甘露醇对枯草杆菌和白色念珠菌均无抑制作用。