常用蛋白质分子量标准参照物
生物实验常用缓冲液和酶的配制
实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1μg=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g（2）分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml1A260单链DNA=30μg/ml1A260单链RNA=40μg/ml（3）DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66μg1pmol pBR322=2.8μg1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg100pmol分子量50，000蛋白质=5μg100pmol分子量10，000蛋白质=1μg氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿（5）蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA30，000MW蛋白质=810bp DNA50，000MW蛋白质=1.35kb100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物续上表二、常用缓冲液1．分子克隆常用缓冲液2．磷酸缓冲液（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH 值：pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
常见蛋白质分子量参考值
常见蛋白质分子量参考值（单位：dalton）蛋白质分子量肌球蛋白[myosin]甲状腺球蛋白[thyroglobulin]β-半乳糖苷酶[β-galactosidase]副肌球蛋白[paramyosin]磷酸化酶a[phosphorylase a]血清白蛋白[serum albumin]L-氨基酸氧化酶[L-amino acid oxidase]地氧化氢酶[catalase]丙酮酸激活酶[pyruvate kinase]谷氨酸脱氢酶[glutamate dehydrogenase]亮氨酸氨肽酶[glutamae dehydrogenase]γ-球蛋白，H链[γ-globulin, H chain]延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）[fumarase]卵白蛋白[ovalbumin]醇脱氢酶（肝）[alcohol dehydrogenase (liver)]烯醇酶[enolase]醛缩酶[aldolase]肌酸激酶[creatine kinase]220,000 165,000 130,000 100,000 94,000 68,000 63,000 60,000 57,000 53,000 53,000 50,000 49,000 43,000 41,000 41,000 40,000 40,000胃蛋白酶原[pepsinogen]D-氨基酸氧化酶[D-amino acid oxidase]醇脱氢酶（酵母）[alcohol dehydrogenase (yeast)]甘油醛磷酸脱氢酶[dlyceraldehyde phosphate dehydrogenase]原肌球蛋白[tropomyosin]乳酸脱氢酶[lactate dehydrgenase]胃蛋白酶[pepsin]转磷酸核糖基酶[phosphoribosyl transferase]天冬氨酸氨甲酰转移酶，C链[aspertate transcarbamylase, C chain]羧肽酶A[carboxypeptidase A]碳酸酐酶[carbonic anhydrase]枯草杆菌蛋白酶[subtilisin]γ-球蛋白，L链γ-blobulin,L chain[]糜蛋白酶原（胰凝乳蛋白酶原）[chymotrypsinogen胰蛋白酶[trypsin]木瓜蛋白酶（羧甲基）[papain (carboxymethyl)]β-乳球蛋白[β-lactoglobulin]烟草花叶病毒外壳蛋白（TWV外壳蛋白）[TWV coat protein肌红蛋白[myoglobin]天门冬氨酸氨甲酰转移酶，R链[aspartate transcarbamylase, R chain]血红蛋白[h(a)emoglobin]40,000 37,000 37,000 36,000 36,000 36,000 35,000 35,000 34,000 34,000 29,000 27,600 23,500 25,700 23,300 23,00018,400 17,50017,200 17,000Qβ外壳蛋白[Qβ coat protein]溶菌酶[lysozyme]R17外壳蛋白[R17 coat protein]核糖核酸酶[ribonuclease或RNase]细胞色素C[cytochrome C]糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）[chymotrypsin]15,500 15,000 14,300 13,750 13,700 11,700 11,000。
与TBE的区别及在凝胶电泳的应用
TAE是Tris-乙酸，缓冲容量小，但是溶解度大，易于储存TBE是Tris-硼酸，缓冲容量大，但是溶解度小，不易长期储存，易产生沉淀TAE与TBE的区别首先要知道 TAE 与 TBE 缓冲溶液的成份如下：50x TAE Buffer (Tris-Acetate-EDTA)242 gm Tris base57.1 ml Acetic acid 100ml0.5M EDTAAdd ddH2O to 1 liter and adjust pH to 8.5.10x TBE Buffer (Tris-Borate-EDTA)108 gm Tris base55 gm Boric acid9.3 gm Na4EDTAAdd ddH2O to 1 liter.The pH is 8.3 and requires no adjustment.它们的分别有下列几点：1. TBE 不能太浓 (它只可有 10 times)，因为 borate 会很容易沉淀，但一般有少许沉淀是不会有太大问题。
2. TBE 的 buffering capacity 比 TAE 高，用 TBE 来跑出来的 gel，分辨率 (resolution) 会比较高。
3. 因为 TBE 有 borate 离子 (ion)，它会影向酵素 (enzyme) 的工作。
因此，若要为分离出的 DNA 进行下一步酵素处理，如 cloning 或 restriction cut 的话，就要切记不要让DNA 碰上 borate ion。
4. TAE的 buffer capacity 比较差，gel 一般比较模糊，但它不会对影向酵素三种缓冲液的配制方法Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：242g Tris 碱57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释10倍。
蛋白的分子量
蛋白的分子量蛋白是构成细胞的重要组成部分，它们在生物体内扮演着多种重要角色。
蛋白的分子量是衡量蛋白大小的一个重要指标，通常以千道尔顿（kDa）为单位表示。
不同的蛋白具有不同的分子量，下面将介绍几种常见蛋白的分子量及其功能。
1. 血红蛋白（Hemoglobin）血红蛋白是一种含铁的蛋白质，其分子量约为64 kDa。
它存在于红细胞中，负责运输氧气到全身各个组织和器官。
血红蛋白分子中的铁离子能够与氧气结合形成氧合血红蛋白，然后在肺部释放氧气，使其被组织细胞吸收和利用。
2. 抗体（Antibody）抗体是一种免疫蛋白，其分子量约为150 kDa。
它由免疫细胞产生，能够识别和结合特定的抗原分子。
抗体在免疫应答中起到关键作用，可以中和病原体，激活免疫细胞，促进宿主对抗病原体的防御。
3. 细胞色素c（Cytochrome c）细胞色素c是一种在呼吸链中发挥作用的蛋白质，其分子量约为12 kDa。
它在线粒体内定位，并参与细胞呼吸过程中的电子传递。
细胞色素c通过在不同氧化还原状态之间转变，将电子从呼吸链的一部分传递到另一部分，从而驱动ATP合成。
4. 胰岛素（Insulin）胰岛素是一种调节血糖水平的激素，其分子量约为5.8 kDa。
它由胰腺的β细胞产生，并在血液中运输到全身各个细胞。
胰岛素通过结合细胞膜上的胰岛素受体，促进葡萄糖的摄取和利用，从而降低血糖浓度。
5. 酶（Enzyme）酶是一种催化化学反应的蛋白质，其分子量各不相同。
酶可以加速生物体内化学反应的速率，但自身并不参与反应，因此可以反复使用。
例如，DNA聚合酶是一种具有分子量约为105 kDa的酶，它在DNA复制过程中起到关键作用，帮助合成新的DNA分子。
蛋白的分子量与其功能密切相关，不同分子量的蛋白在生物体内扮演着不同的角色。
了解蛋白的分子量有助于我们深入理解其结构和功能，进而揭示生命活动的奥秘。
通过研究蛋白的分子量以及其与其他生物分子的相互作用，可以为生物医学研究和药物开发提供重要的基础。
蛋白质大小范围
蛋白质大小范围蛋白质是由氨基酸链组成的生物大分子，是构成生命体的重要组成部分，具有多种功能，包括结构支撑、催化反应、信号传递等。
蛋白质具有非常广泛的大小范围，从几千达尔顿（Da）到数百万达尔顿不等。
下面将详细介绍蛋白质的大小范围。
1. 低分子量蛋白质低分子量蛋白质是指分子量小于10000 Da的蛋白质。
低分子量蛋白质通常具有短氨基酸序列和紧密折叠结构，这使得它们适合在环境中进行快速的反应。
例如，一些小型酶类就属于低分子量蛋白质，如萘乙酰胆碱酯酶（Molecular weight 67200 Da）。
中等分子量蛋白质一般指5000 Da到50000 Da间的蛋白质。
这种蛋白质通常有长氨基酸序列，它们形成的复杂结构可以传递更多的信号和信息。
例如，肌球蛋白的分子量为42000 Da左右。
高分子量蛋白质是指分子量大于50000 Da的蛋白质，通常由数百或数千个氨基酸组成。
这种大型蛋白质的折叠结构非常复杂，具有多种功能。
一些著名的高分子量蛋白质包括细胞骨架蛋白质（Molecular weight >1 million Da）、胶原蛋白（Molecular weight 300,000-400,000 Da）和人血清白蛋白（Molecular weight 66,000 Da）。
超大分子量蛋白质一般指分子量超过数百万Da以上的大分子。
这些蛋白质通常是在细胞膜上定位，可以通过跨越膜通道来形成复杂的跨膜结构。
例如，巨大的病毒鞭毛蛋白（Molecular weight > 20 million Da）就属于超大分子量蛋白质范畴。
总之，蛋白质具有非常广泛的分子量范围，从几千到数百万达尔顿的不等。
不同分子量的蛋白质具有不同的生物学功能，构建了整个生物的复杂结构。
因此，对于生物学研究来说，掌握蛋白质不同分子量范围的特点和生物学功能是非常重要的。
蛋白质的标准数据是多少
蛋白质的标准数据是多少
首先，蛋白质的标准数据包括其化学结构。
蛋白质是由氨基酸组成的，不同种类的蛋白质含有不同数量和种类的氨基酸。
一般来说，蛋白质的分子量在10,000到1,000,000之间，而其氨基酸残基的数量则在50到2,000之间。
此外，蛋白质的结构可以分为原生结构、二级结构、三级结构和四级结构，这些结构对蛋白质的功能起着决定性的作用。
其次，蛋白质的标准数据还包括其组成和含量。
人体内的蛋白质主要包括20种氨基酸，其中有9种是人体无法自行合成的必需氨基酸。
蛋白质的含量在不同的组织和器官中有所差异，肌肉、皮肤、头发等含有较高的蛋白质，而脂肪组织、骨骼等含量较低。
此外，不同种类的食物中也含有不同的蛋白质，例如动物性食物中的蛋白质含量较高，而植物性食物中的蛋白质含量较低。
再次，蛋白质的标准数据还涉及到其功能。
蛋白质在生物体内有多种功能，包括结构支持、酶催化、免疫防御、运输传导等。
不同的蛋白质具有不同的功能，这些功能对于维持生物体的正常生理活动至关重要。
例如，酶是一类重要的蛋白质，它可以催化生物体内的化学反应，是生命活动得以进行的关键。
综上所述，蛋白质的标准数据是一个综合性的概念，涉及到其化学结构、组成和含量、功能等多个方面。
对于科研工作者来说，准确了解蛋白质的标准数据对于开展相关研究具有重要意义；对于医学工作者来说，了解蛋白质的标准数据可以帮助他们更好地指导临床实践；对于普通大众来说，了解蛋白质的标准数据可以帮助他们更科学地进行膳食搭配，保持健康生活方式。
因此，深入了解蛋白质的标准数据，对于个人和社会都具有重要的意义。
蛋白质分子量标准(宽)
●保存条件
制品原液可在-20℃下长期保存，制品的 20 倍稀释液 可在-20℃下保存 2～3 个月，制品的原液和制品的 20 倍稀释液都应避免多次反复冻融。
●制品中的各种蛋白质种类
蛋白种类
肌球蛋白 β 半乳糖苷酶 磷酸酶 b 牛血清蛋白 卵清蛋白 碳酸苷酶 胰蛋白酶抑制剂 溶菌酶 抑肽酶
来源
猪 大肠杆菌 兔子肌肉
3. 均匀混合后，100℃加热处理 5 分钟，然后取 5 μl 进行 5～20％的聚丙烯酰胺凝胶电泳（for SDS-PAGE mini gel）。
4. 5~20%聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳、12%聚丙烯酰 胺凝胶电泳后，经考马斯亮蓝 R-250 染色后的结 果如下。
KDa 200
116 97.2 66.4
蛋白质分子量标准（宽）
Protein Molecular Weight Marker (Broad)
使用说明书
TaKaRa Code：D532A
●浓 度：18 μg/μl
●制品内容（约 200 次量）
Protein MW Marker（Broad） 50 μl
5×Loading Buffer
1000 μl
KDa 210106 97.2 66.4
44.3
44.3
29.0
29.0 20.1
20.1
14.3
14.3
6.5
6.5
5~20%
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
12%
V2010.04
●使用方法
1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT 5×Loading Buffer
* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2 μl 20 μl
常用蛋白质分子量标准参照物(精)
十、常用蛋白质分子量标准参照物十一、层析法常用数据表及性质（一）离子交换纤维素*：英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如DE-1，为长纤维性，长度1000微米。
还有DE-11，纤维性，50～250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。
注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.（三）琼脂糖凝胶的技术数据十二、常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。
Na2Ac·3H2O分子量 = 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。
7．磷酸盐缓冲液Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
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十、常用蛋白质分子量标准参照物
十一、层析法常用数据表及性质
（一）离子交换纤维素
*：英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如DE-1，为长纤维性，长度1000微米。
还有DE-11，纤维性，50～250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。
注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.
（三）琼脂糖凝胶的技术数据
十二、常用缓冲溶液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）
甘氨酸分子量= 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）
邻苯二甲酸氢钾分子量= 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
Na2HPO4分子量= 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液
或浓盐酸调节，冰箱保存。
柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。
Na2Ac·3H2O分子量= 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。
7．磷酸盐缓冲液
Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 156.03，0.2 mol/L溶液为31.21克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，1/15M溶液为11.876克/升。
KH2PO4分子量= 136.09，1/15M溶液为9.078克/升。
8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升
10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫
三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OH
C
HOCH2 NH2
分子量=121.14;
0.1M 溶液为12.114克/升。
Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
硼砂Na 2B 4O 7·H 2O,分子量=381.43;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
硼砂Na 2B 4O 7·10H 2O,分子量=381.43;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。
硼砂 易
失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
甘氨酸分子量=75.07;0.2M 溶液含15.01克/升。
13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根）
X 毫升0.05M 硼砂+Y 毫升0.2NNaOH 加水稀释至200毫升
硼砂Na 2B 4O 7·10H 2O,分子量=381.43;0.05M 溶液为19.07克/升。
14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ）
2+2+Na 2CO
2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。
N 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。
十四、硫酸铵饱和度的常用表
①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
r为离心机头的半径（角头），或离心管中轴底部内壁到离心机转轴中心的距离（甩平头），单位为厘米。
rpm为离心机每分钟的转速。
RCF为相对离心力，以地心引力即重力加速度的倍数来表示，一般用g(或数字×g)表示。
附图11是由下述公式计算而来的：
RCF = 1.119 × 10-5× r × (rpm)2
将离心机转数换算为离心力时，首先，在r标尺上取已知的半径和rpm标尺上取已知的离心机转数，然后，将这两点间划一条直线，在图中间RCF标尺上的交叉点即为相应离心力数值。
注意，若已知转数值处于rpm标尺的右边，则应读取RCF标尺右边的数值。
同样，转数值处于rpm标尺左边，则读取RCF标尺左边的数值。