茶多酚酒石酸亚铁比色法
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾水解的物质基本上都属茶多酚物质。
根据消耗1ml0.318g/ml的高锰酸钾相等于5.82mg茶多酚的折算系数，可以排序茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500ml白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50ml，冷却后用蒸馏水定容至1000ml，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50ml，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000ml，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml。
3、高锰酸钾标准溶液：称取ar的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水熔化后定容至1000ml。
精确汲取0.630%草酸溶液10ml，放进250ml锥形瓶中（平行3份），重新加入蒸馏水50ml，再重新加入相对密度为1.84的浓硫酸10ml，容器，在70~80℃水浴中保温5分钟，抽出后用高锰酸钾展开电解。
已经开始快几滴，等待红色消失后再几滴第二几滴，以后可以逐渐大力推进，边滴边挥，等待溶液发生淡红色维持1分钟维持不变即为为终点。
排序高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、可供测试液的准备工作：精确称取茶叶切碎样品1g，放到250ml锥形瓶中，重新加入沸蒸馏水80ml，在沸水浴中金属粉末30分钟，然后试液、冲洗，滤液放入100ml容量瓶中，热至室温，最后用蒸馏水定容至100ml，容器。
2、测量：挑200ml蒸馏水放进白瓷皿中，重新加入0.1%靛红溶液5ml，再重新加入可供测试液5ml，停下磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边烘烤边电解，电解速度以1几滴/s为宜，吻合终点时应慢滴。
茶叶生化成分分析方法
茶叶生化成分分析方法1、茶汤制备称取经粉碎过60目筛的样品1.0克，放入250mL锥形瓶中，加入90mL沸水，然后将其置于沸水浴中浸提45min，每10min振荡一次。
浸提完毕后，趁热过滤后，待茶汤冷却至室温后定容至100mL，备用。
2、茶多酚含量测定（酒石酸铁比色法）2.1仪器2.1.1分析天平：感量0.0001g。
2.1.2分光光度仪。
2.2试剂1）酒石酸亚铁溶液称取1.0g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）和5.0g酒石酸钾钠（C14H4O6KNa.4H2O），用水溶解并定容至1L（低温保存有效期10天）。
2）pH7.5磷酸盐缓冲液：①1/15mol/L磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），加水溶解定容至1L。
②1/15mol/L磷酸二氢钾：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）9.08g，加水溶解定容至1L。
取上述1/15mol/L磷酸氢二钠溶液85mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。
2.2测定步骤准确吸取1.0mL茶汤，注入25mL容量瓶中，加入4.0mL蒸馏水、5.0mL酒石酸亚铁溶液，充分混合，再加pH7.5磷酸盐缓冲液至刻度。
用10mm比色杯，在波长540nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。
3、游离氨基酸总量测定（茚三酮比色法）3.1仪器3.1.1分析天平：感量0.0001g。
3.1.2分光光度仪。
3.2试剂1）2%茚三酮溶液称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50mL水和80mg氯化亚锡（分析纯），搅拌均匀。
分次加少量水溶解，放在暗处，静置1昼夜，过滤后加水定容至100mL。
2）pH8.0磷酸盐缓冲液①1/15mol/L磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），加水溶解定容至1L。
②1/15mol/L磷酸二氢钾：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）9.08g，加水溶解定容至1L。
茶多酚的提取
实验名称：普洱茶多酚的提取研究及抗氧化作用的研究姓名：学号：桌号：一.实验目的1. 掌握从茶叶或茶叶的下脚料屮提取茶多酚的方法；2. 学:握用分光光度计测定茶多酚总量的方法；3. 棠握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含帚：二.实验原理产物：茶多酚物理性质：茶多酚在常温下呈浅黄或浅绿色粉末.易溶于温水(40°C — 80°C) 和含水乙醇中；稳定性极强，在pH值4一8、250°C左右的环境中，1.5个小时内均能保持稳定，在三价铁离子下易分解。
1989年被中国食品添加剂协会列入GB2760-89食品添加剂使用标准，1997年列为中成药原料。
茶多酚是茶叶屮多酚类物质的总称，为白色无定形粉末，易溶于水。
茶多酚具有很好的抗氧化活性, 且抗氧化性优于丁基羟基茴香瞇(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)等。
国内外学者对茶多酚进行了急性毒性、亚急性毒性和各种药理试验研究，结果表明茶多酚安全无毒。
茶多酚不仅是一种新型的天然抗氧化剂，还具有明显的抗衰老、消除人体过剩的白由基、去脂诚肥、降低血糖、降低血脂利胆固醇、预防心血管疾病、抑制肿瘤细胞等药理功能，在食品加工、医药、口用化工等领域具有重要的应用化学性质：茶多酚是从茶叶中提取的全天然抗氧化食品, 具有抗氧化能力强，无毒副作用，无异味等特点。
离子沉淀法提取普洱茶多酚1.原理普洱茶是以云南省一定区域内的云南大叶种晒青毛茶为原料，经过后发酵加工成的散茶和紧压茶，其外形色泽褐红内质汤色红浓明亮，香气独特陈香，滋味醇厚回甘，叶底褐红⑴.普洱茶具有降血糖、降血脂、杀死癌细胞、抗突变、防癌等功能［2］・其中具有药理作用的主要成分是茶多酚、茶多糖等.茶多酚有降血糖、延缓衰老、抑制动脉粥样硬化、防癌抗癌等作用［3］；主题为黄烷醇(儿茶素)类，儿茶素占60-80%o类物质茶多酚乂称茶糅或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。
酒石酸亚铁法测定茶多酚
酒石酸亚铁法测定茶多酚酒石酸亚铁法测定茶多酚一、实验目的：1.熟悉分光光度计的使用2.掌握酒石酸亚铁法测定茶多酚的实验二、实验原理：在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。
茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。
三、实验试剂：3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。
3.2 PH7.5磷酸缓冲溶液：3.2.1 1/15M磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。
3.2.2 1/15M磷酸氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾15ml混合均匀。
四、仪器及用具：4.1分光光度计4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径600~1000um的筛子。
五、实验步骤：1 预处理。
粉碎干茶叶:将采集来的茶叶洗净、晾干,烘干,最后粉碎。
粉碎的目的是与液体的接触面增大,使提取率增高。
由于试验条件的限制,用剪刀代替粉碎机,将干茶叶剪碎,并且用研钵研细。
干茶叶量为50. 00g。
2 提取。
在众多的提取方法中,选用了溶剂提取法,具体过程是称取经过预处理的干茶叶末30.00g,加250mL 90℃接近沸水中搅拌浸提,过滤,先后用250mL的乙酸乙酯萃取两次。
合并两次有机相再用无水硫酸钠干燥,减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂得黄色粉末状多酚。
称量为0.2945g提取率为0.98%。
3 茶多酚标准溶液的配制：称取纯品0.2500g加水溶解定容至250mL混匀,即为每毫升含1mg纯品的标准溶液(mg/mL) 。
4 茶多酚标准曲线的绘制：分别吸取茶多酚标准溶0.0ml、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL 于5个50mL容量瓶中,各加水至10m再加酒石酸亚铁10mL,加入7.5的磷酸缓冲液至刻度,混匀后用1㎝比色皿,以空白作参比,于540nm处测定吸光度(A) ,绘制出标准曲线5.试液的制备：（1）称取3g（准确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。
实验四茶叶中茶多酚含量的测定
实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作二、原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为 1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
酒石酸亚铁法测定茶多酚
方法一：酒石酸亚铁法测定茶多酚1.适用范围：茶叶、茶粉及其制品，茶饮料等。
2.原理：在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。
茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。
3.试剂：所用试剂应为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。
3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。
3.2 PH7.5磷酸缓冲溶液：3.2.1 1/15M磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。
3.2.2 1/15M磷酸氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾15ml混合均匀。
4.仪器及用具：4.1分光光度计4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径600~1000um的筛子。
5.操作步骤：5.1茶叶：5.1.1试样的制备：（紧压茶以外的各类茶）先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分。
如果水分含量太高，不能磨到2.2所规定的细度，必须将样品预先干燥（烘箱不超过100℃为宜）。
待试样冷却后（置干燥器内），再进行磨碎。
5.1.2试液的制备：（1）称取3g（准确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。
（2）加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min。
若水浴无振动装置则每隔10min 摇动一次。
（3）浸提完毕后，冷却后（自然冷却或于自来水流下冷却）将样液转移到500ml容量瓶内，并定容至刻度。
（4）定容后立即常压过滤，弃去初滤液（5ml以上），收集滤液备用。
（所用滤纸为杭州新华纸业有限公司，双圈牌，定量，慢速滤纸）。
5.2茶粉：茶粉试液的制备：称取一定量的样品，用沸蒸馏水450ml冲泡，冷却后用蒸馏水稀释定容至500ml。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL 的高锰酸钾相当于 5.82mg 茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL ，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80 'C烘箱或水浴中加热磺化4〜6h，用蒸馏水定容至1000mL ，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸 6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中(平行3份)，加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80 C水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g,放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶多酚总量的测定
结果计算
测试效果
pH对测定结果有影响，在pH6.24时连位羟基和铁起 反应，而邻位几乎不起反应；在pH6.8和8.1时，连 位羟基变化不大，颜色的加深是由邻位羟基引起的。 低于pH7.0，酒石酸铁和索伦逊缓冲液会形成乳状 混浊液干扰比色结果。
酒石酸铁主要与茶多酚中的邻位羟基和连位羟基功 能团呈色，而对间位羟基和单羟基不呈色，而且与 连位羟基呈色能力比与邻位羟基呈色强3倍。由于 不同种类茶叶的多酚组成不完全相同，对酒石酸铁 的显色强度也有差异。
pH7.5的索伦逊缓冲液：
pH7.5的索伦逊缓冲液
先配制以下两种溶液
（1） 1/15M的Na2HPO4溶液：称取Na2HPO4.2H2O 11.876 克，加水溶解并稀释至1 L。 （2） 1/15M的KH2PO4溶液：称取经110℃ 烘干2 h 的KH2PO4 9.078克，加水溶解并稀释至1 L。
取溶液（1）85 ml和溶液（2）15 ml混匀，
主要仪器
分光光度计，恒温水浴，分析天平。
测定方法
茶汤制备：准确称取磨碎试样3 克，加450 毫升沸 水，在沸水浴中浸提 45分钟，每隔10 分钟摇瓶一 次，过滤。洗涤残渣，滤液合并于500毫升容量瓶 中，冷却后加水定容至刻度，摇匀。 测定：准确吸取茶汤1 毫升，注入25 毫升容量瓶 中，加水4 毫升、酒石酸铁溶液5 毫升，用缓冲溶 液定容至刻度，混匀。用10 mm比色皿，以试剂 空白作参比，于波长 540 nm处测吸光度，根据经 验系数求得茶汤中茶多酚含量。
茶多酚总量的测定
─酒石酸铁比色法
制作人：汪小钢
实验目的
茶多酚是茶叶中多元酚类物质的总称，具有苦 涩味，对茶叶的品质有非常重要的影响。此外， 药理学试验表明，茶多酚对心血管疾病、癌症 等具有一定的防治效果。因此，检测茶叶中多 酚类物质总量对评价茶叶的品质具有非常重要 的作用。
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多酚类物质的提取与含量测定
一、实验原理
酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。
测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器
材料：茶叶；
仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；
试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；
（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取Na2HPO4·12H2O和NaH2PO4·12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。
三、操作步骤
（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用
# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
（二）样品总多酚的提取
准确称取磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL。
（二）样品多酚提取液的多酚总量测定
吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。
同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用比色皿在540nm波长处测定吸光度。
4.3 测定步骤
试液的制备按GB 8305-87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
4.3.2 测定准确吸取上述(4.3.1)试液1mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液(3.1)5mL,充分混合,再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。
四、计算
7.826—吸光度为1.00时,茶多酚含量的经验值(mg/mL)。
# 如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和相应公式，求得样品中茶多酚的含量。
计算方法和公式茶叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示,按下式计算:
A×1.957×2 L1
茶多酚(％)＝——————×—————×100
100 L2×M×m
式中: L1--试液的总量,mL; L2--测定时的用液量,mL; M--试样的质量,g; m--试样干物质含量百分率,％； A--试样的吸光度; 10mm比色杯,当吸光度等于0.50时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
如果符合重复性(5.2)的要求,则取两次测定的算术平均值作为结果。
5.2 重复性同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过。
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