高效液相色谱法常见故障排除
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法 液相色谱常见问题解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法液相色谱常见问题解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪紧要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统构成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的紧要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，假如在使用过程中不依照正确操作的话，就简单导致一些问题。
其中常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
1.柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
压力过高：这是高效液相在使用中常见的问题，指的是压力蓦地上升，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应当分段进行检查。
（1）.首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充分液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，假如液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
假如液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；（2）.打开Purge阀，使流动相不经过柱子，假如压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
假如压力降至100PSI （6.7 Bar）以下，过滤白头正常，在检查；（3）.把色谱柱出口端取下，假如压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：假如是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
假如是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，假如柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很简单造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱仪常见故障及解决方法
高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。
2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。
二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。
解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。
2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。
解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。
三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。
四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。
解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。
解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
高效液相色谱仪故障及排除方法
高效液相色谱仪故障排除指南
高效液相色谱仪故障排除指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，可以广泛应用于药物分析、环境检测、食品科学等领域。
然而，在使用过程中，不可避免地会出现一些故障情况。
本文将介绍一些常见的HPLC故障，并提供相应的排除方法。
一、进样器故障1. 进样器漏液若观察到进样口出现漏液现象，首先可以检查密封件是否完好，如若密封件损坏应及时更换。
若密封件完好，还可以检查进样器盖上是否存在污垢，若有，则可清洗并重新安装。
2. 进样器堵塞如果在进样过程中发现进样器堵塞，可以先使用无机溶液进行冲洗，以清除可能存在的样品残留物。
如果仍然无法解决堵塞问题，可以采取拆卸进样器进行彻底清洗的方法。
二、柱温箱故障1. 温度控制不稳定若柱温箱的温度控制不稳定，可能会导致分离信号的漂移，影响分析结果的准确性。
这时，可以首先检查温度控制仪是否设置正确，如有必要，可以重新设置。
另外，也可以检查柱温箱是否存在漏气现象，若存在，应及时修复。
2. 柱温箱泄漏柱温箱泄漏可能会导致温度失控，因而影响分析结果。
检测到泄漏时，应首先检查柱温箱的密封性能，如有必要，可以更换密封圈，确保密封良好。
三、流动相泵故障1. 流量不稳定如果在使用流动相泵时，发现流量不稳定，可能是由于空气进入了系统，导致气泡形成。
这时，可以检查胶管连接是否松动，以及胶管中是否有积气现象。
如果检查后仍然无法解决问题，可以考虑更换胶管或检修流动相泵。
2. 压力异常如果HPLC系统在运行过程中压力异常，可能是由于流动相泵的压力传感器出现问题。
此时，应检查压力传感器是否损坏，如有必要，可以进行维修或更换。
四、检测器故障1. 检测器信号异常如果在分析过程中，检测器的信号异常，可能是由于光源出现故障导致。
这时，可以检查光源是否正常工作，如有必要，可以更换光源。
另外，也可以尝试调整检测器的增益或灵敏度，以改善信号异常问题。
液相色谱法常见故障排出指南 液相色谱维护和修理保养
液相色谱法常见故障排出指南液相色谱维护和修理保养高效液相色谱（ HPLC）广泛应用于医药卫生、食品安全、环境化学等各个领域。
在使用过程中难免会碰到各种各样的问题，从而影响正常工作，如何快速发觉故障、排出故障，并做好防备维护措施及其紧要，本文列举了常见故障的排出及解决方法，仅供大家参考。
故障排出原则在仪器序列运行过程中发生故障时按发觉故障、停止仪器序列运行、故障信息登记、确认故障来源、解除故障、故障维护和修理登记、做好防备维护措施等步骤进行故障排查及解除故障，在故障排出过程中可遵奉并服从以下原则：原则一：从简单因素入手；原则二：一次只变化一个因素，利于确认因素与问题之间的关系；原则三：记录仪器正常状态的参数及异常状态信息，完整的记录是故障排出的关键步骤；原则四：做好防备措施，加强仪器操作培训，正确的、良好的操作习惯是降低仪器故障率的首要条件。
常见故障排出1、压力高压力偏高或超过压力上限一般是由方法问题、误操作、系统堵塞、压力传感器故障等问题引起。
方法问题：在方法建立时柱温、流速等参数建立不当，当使用小粒径色谱柱或背压大的色谱柱时，可降低流速或上升柱温（如35～40℃），以降低系统压力，该问题多发生在建立方法时。
误操作：当压力高于平常压力时首先检查柱温是否设置错误、流动相溶剂是否使用错误（如错将甲醇用成了粘度高的乙腈）、色谱柱是否拿错等误操作。
系统堵塞：排出方法问题及误操作后，排查是否系统堵塞，进行分段排查，可依次松开管路接头，从HPLC出口端开始，向上游泵逐个检查，这是发觉堵塞部位简单的方法，确定堵塞部位后可进行直接更换或超声清洗或反冲（如六通阀、进样针、针座、管路等部位），如超声清洗或反冲无效则需更换，经排查是保护柱或色谱柱堵塞时按相关方法冲洗。
压力传感器故障：上述排查后未发觉压力高原因，则需要更换压力传感器，联系仪器客服咨询。
2、压力低压力偏低或无压力一般是由误操作、漏夜、泵不输液等问题引起。
高效液相色谱中常见故障排除
高效液相色谱中常见故障排除1. 流动相储罐①脱气：脱去流动相中的溶解气体是非常必要的，特别是在梯度洗脱用水和其它极性溶剂做流动相时，脱气更为重要。
A：为了防止在检测其中产生气泡；B：为了减少流动相和固定相可能发生的反应，除去流动相中的氧也是很必要的。
方法：以吹入惰性气体为最有效方法。
超声脱气，脱气后要密闭，防止比例改变和溶氧。
②过滤：防止滤头堵塞。
尤其是缓冲液容易出现沉淀和生菌，要及时过滤。
③使用高纯试剂：A：水，水中的杂质的影响在进行痕量的梯度洗脱时尤为明显，一些水中的杂质积累于色谱柱的头部，当洗脱剂强度增大时它们流出色谱柱，形成鬼峰。
一般要用蒸馏并进行离子交换的纯水，还要贮存在加盖的玻璃瓶中。
B：溶剂,溶剂中如含有紫外吸收的微量杂质就能使噪音增大，溶剂的紫外吸收节止波长增大50-100nm。
一般来讲，等度分析对流动相纯度的要求要低一些。
2. 泵①精密度：液相精密度变差是由于泵的某些故障所引起的，泵的单向阀无规则地泄露所引起的输出液体流量不稳。
泵噪音：是由活塞的正常运动和单向阀的工作所引起的。
漂移：(长周期的测量精度)指在较长时间里，泵流量的连续变化的情况，往往是由于室温的变化而引起的输出量的变化。
②超压：泵最大输出是40-50MPa，一般设定在25MPa以下为了保护色谱柱。
超压时采用逐级拆除法检查堵塞部位，如果是色谱柱堵塞问题，无解决方法时可以考虑增加输出上限。
③泵室内有气泡：分析型液相泵室不超过400ul，气泡可以从排气阀顺利排出。
如果排不净A：检查储液瓶流动相脱气；B：流动相滤头。
④柱塞杆折断：为实验中严重事故，表现为不泵液。
多为缓冲盐流动相直接与高纯度有机溶剂混合出现结晶所致。
缓冲盐对液相系统腐蚀性大，如果停止流动也易在色谱柱结晶，造成柱结构发生改变，因此要避免在不做分析的时候液相系统中有缓冲液，及时用水冲洗系统20ml以上。
3. 检测器①噪声：没有溶质通过输出信号的变化。
A：泵的脉动等仪器因素，当噪声和流速成比例是一定来源于分离系统。
高效液相色谱常见故障及解决方案
清洗柱或更换柱 清洗六通阀 清晰检测器
管路污染
冲洗
流动相中含有稳定剂 或稳定剂变化
使用无防腐溶剂
8.保留时间变 化
现象
保留时 间不重 复
判断
系统不问或未达 到平衡
室温波动大
柱被污染 溶剂配比不合适 进样体积太大或 样品浓度太高
故障排除
分析之前应有足够的时间 使系统平衡 使用柱温箱、将系统置于 恒温、空气对流小的环境 冲洗柱或更换柱 调节溶剂配比
检测器内有气泡
用甲醇或其他强极性的溶剂 冲洗流通池
用强极性的溶剂清洗系统
清洗检测器，在检测器后面 安装背景压力调节器
检测器灯能量不足
更换灯
12.规则基线 噪音
现象
规则基 线噪音
判断
故障排除
流动相、检测 器或泵内有气 泡
流动相脱气，冲洗系统除去检 测器或泵内的空气
室温不稳
稳定环境温度。使用柱温箱、 将系统置于恒温、空气对流小 的环境
鬼
洗脱物
峰
注射器脏
故障排除
用标准品对照、检查样品处理过程， 换新样品
增加分析时间或梯度洗脱、提高流 速、如问题仍存在，两次进样间用 强溶剂冲洗色谱柱
清洗注射器、冲洗进样口
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
色谱图 出现鬼 峰
柱被污染 六通阀污染 检测器污染
峰变 宽
环境温度变化 漏夜
使用柱温箱 检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完 全分离的物质的峰
选择其它色谱条件以改善分 离效果
检测器时间常数太大
使用较小的时间常数
4.峰分叉
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高效液相色谱法常见故障排除
所长办公室文毅
日前，本人参加了高效液相色谱维修、维护及常见故障排除的培训班，现将培训内容总结如下，希望对大家的实际工作有所帮助！
一、检测器常见故障排除
1、基线噪声
·检测池窗口污染：用强溶剂冲洗检测池；卸下检测池，拆开清洗或更换池窗石英片。
·样品池中有气泡：突然加大流量赶出气泡；在检测池出口端加一反压（0.2-0.3MPa）连一个0.3mm×1～2m的不锈钢管，以增大池内压（增加压力不要过大，防止检测池石英片碎裂）。
·检测器或数据采集系统接地不良：拆去原来的接地线，重新连接。
·检测器光源故障：检查氘灯或钨灯设定状态；检查灯使用时间、灯能量、开启次数；更换氘灯或钨灯。
·液体泄露：拧紧或更换连接件。
·很小的气泡通过检测池：流动相要仔细脱气；加大检测池的背压；系统检漏；有微粒通过检测池，清洗检测池；检查色谱柱出口筛板。
2、基线漂移
·检测池窗口污染：同基线噪声描述。
·色谱柱污染或固定相流失：更换色谱柱或使用保护柱。
·检测器温度变化：系统恒温。
·光源故障：更换氘灯或钨灯。
·原先的流动相没有完全除去。
·溶剂储液瓶污染：清洗溶剂瓶，用新流动相平衡系统。
·强吸附组分从色谱柱中洗脱：在下一次分离之前用强洗脱能力的溶剂冲洗色谱柱；使用溶剂梯度。
3、工作站上出现大的尖峰
·检测池内有气泡通过：溶剂脱气并彻底冲洗系统；检查连接系统是否漏液。
·记录仪或检测器接地不良：消除噪声来源；确保良好接地。
·样品溶解不彻底。
4、负峰
·检测器输出信号的极性相反。
·样品的吸收小于流动相，流动相不纯。
·样品溶剂干扰。
·示差折光检测器中样品的折射率较低。
·进样中带入气泡。
5、鬼峰或假峰
·进样阀或注射器污染
·样品溶剂与流动相不同
·样品中有空气
·流动相中杂质引起
·在线过滤器或过滤沉子污染
·溶剂储液瓶污染
6、工作站不回零
⑴记录仪或工作站信号阶梯式上升
·检测器的输出范围设定不当：重新设定检测器的输出范围。
·记录仪或检测器接地不良：确保良好接地。
·吸收过大，平头峰
⑵记录仪、积分仪或色谱工作站在零点不平衡
·工作站故障。
·样品池中有空气：增大流量冲洗色谱系统除去气泡；在检测器出口处加一个背压；流动相脱气。
·从样品池出来的光能量严重减弱：检查光路，清除堵塞物；清洗检测池或更换池窗。
·光源故障：更换氘灯或钨灯。
·检测器与色谱工作站之间的电路接触不良。
·色谱柱固定相流失严重：更换色谱柱。
·原先的流动相污染：彻底冲洗系统流动相
·吸收太强：改变检测波长。
7、随泵运动出现噪声
⑴基线随着泵的往复出现噪音：仪器处于强空气中或流动相脉动改变
仪器放置位置：放在合适的环境中。
·用一调节阀或阻尼器以减少泵的脉动。
⑵随着泵的往复出现尖刺
·检测池中有气泡。
·卸下检测池的入口管与色谱柱的接头，用注射器将甲醇从出口管端推进，
以除去气泡。
二、色谱柱系统故障排除
1、色谱柱在使用过程中易出现的问题及解决的方法
⑴谱峰分叉：首先应判断柱头是否有柱头塌陷?
·柱头塌陷：流动相含盐时，冲洗系统要用20%的甲醇／水，不要用纯水冲柱，修补色谱柱。
·柱外死体积：检查进样阀→色谱柱→检测器的管路连接有无死体积，更换密封环(刃环)。
·柱头填料污染：严格过滤流动相和样品，修补色谱柱。
·进样阀密封问题：检修进样阀。
·样品分解
·色谱柱填充不实：重新填充固定相。
·色谱柱受到强烈振动：修复或更换。
⑵柱压过高：不要认为压力高就是色谱柱的问题，首先判断是否是色谱系统管路阻塞
判断方法：分段检查泵→在线过滤器→进样阀→色谱柱→检测器→排液管。
·在线过滤器阻塞：溶剂过滤不好或密封圈磨损，用30%硝酸超声在线过滤器，再用水超声。
·进样阀定量管阻塞：样品过滤不好，更换定量管。
·管路阻塞：缓冲液中的盐遇到甲醇结晶，高压反冲，加热或更换管路。
·保护柱阻塞：缓冲液中的盐遇到甲醇结晶，系统用20%甲醇/水彻底置换后,接上色谱柱小流量反冲。
·压力传感器不准确。
·泵流量偏大。
·色谱柱的问题：主要有微粒堵塞；流动相改变造成粘度变化；柱床膨胀；样品在色谱柱上不可逆吸附；
细菌滋生。
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⑶重复性差
·色谱柱被污染。
·流动相pH值及组成不合适造成键合相流失，如通常的硅胶基质色谱柱在碱性条件下使用。
·样品溶剂不同或样品本身不稳定。
·进样技术问题。
⑷柱效降低
·官能团坍塌
·色谱柱内的死体积
①流动相pH值及组成不合适造成固定相流失。
②流速急剧变化造成固定相物理损坏。
③机械震动造成固定相产生裂缝。
④柱床收缩或干涸。
⑸选择性变化
·应用色谱柱是否正确?
·固定相表面是否有未洗脱样品?
·流动相pH、组成、温度等
·键合功能团流失?
·在评价条件下重新检测
⑹柱外效应
·用小于3mm内径的色谱柱。
·进样阀和色谱柱、色谱柱和检测器之间用短的细内径的连接管。
·用无死体积接头。
·用较小体积的检测池。
·进样体积减小。
⑺色谱峰分裂
·柱外死体积。
·柱头填料污染。
·部分阻塞。
·进样阀密封问题。
·化合物一起洗脱。
⑻色谱峰展宽
①所有的色谱峰展宽
·柱效降低。
·进样体积太大。
②部分色谱峰展宽
·上次进样洗脱的色谱峰。
·蛋白或聚合物等高分子量化合物。
⑼色谱峰拖尾
①所有色谱峰拖尾
·柱头污染。
·重金属离子。
·色谱柱填充不理想。
②部分色谱峰拖尾
·次级保留效应–残留硅醇基的作用。
·在大峰的尾部有小峰。
⑽峰前伸
·色谱柱没有充分平衡。
·在主峰前有小色谱峰。
·流动相的溶剂强度低于溶解样品的溶剂。
2、色谱柱的保存：
·短期不用必须冲洗干净后保存.。
·长期不用每隔2~3个月冲洗一次。
·防止强烈振动。
·防止细菌生长。
·注意存放温度。
3、色谱柱的寿命
·色谱柱筛板问题。
·强保留的样品组分影响。
·色谱柱填充不良。
·压力影响。
·化学影响。
以上内容如有错误的地方，请大家批评指正！。