蔗糖合成酶、酸性转化酶、碱性转化酶活力活力的测定
蔗糖酶的制备和活力测定
冰浴和离心的同时， 可以开始做级分I和级分II的
蛋白质含量测定，
酶活测定
葡萄糖标准曲线的制备
管号
试剂 ml
标准糖溶液 5mM 0.1M醋酸缓冲液
0 0 2.0
1 0.6 1.4
2 0.8 1.2
3 1.0 1.0
4 1.2 0.8
5 1.4 0.6
0.1M NaOH溶液
二硝基水杨酸溶液
2.5
0.5
2 0.4 0.2
3 0.6 0.2
4 0.8 0.2
5 1.0 0.2
H2O
0.1M NaOH溶液 二硝基水杨酸溶液
1.8
2.5 0.5
1.6
2.5 0.5
1.4
2.5 0.5
1.2
2.5 0.5
1.0
2.5 0.5
0.8
2.5 0.5
混匀，沸水浴 5min，流水冷却3min 以零号管调零，测520nm光密度。以葡萄糖含量为横坐标， 以光密度为纵坐标绘制葡萄糖标准曲线
3. 级分I （1:50）
4. 级分I （1:100）
6. 级分II （1:50）
7. 级分II （1:100）
参照蛋白质浓度标准曲线(预制)，计算出各级分蛋白质含量。 y=0.0035x
X代表溶液的浓度（mg/ml），Y代表595nm下的吸收值
实 验 结 果
1、葡萄糖浓度的标准曲线
2、级分I和级分II中的蔗糖酶的活力 （每 1ml蔗糖酶溶液产生的还原糖量） 3、级分I和级分II中蛋白质的含量（每1ml 所含的mg） 4、计算级分I和级分II蔗糖酶的比活力： 比活力=
OD(595nm)
20 40 60 Protein Con.(mg/ml)
最新植物体内转化酶活性的测定
植物体内转化酶活性的测定转化酶又称蔗糖酶(β—D—呋喃型果糖苷一果糖水解酶)，是一种水解酶。
植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶。
它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆地水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量。
所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用，植物细胞代谢及生长强度的指标。
【原理】转化酶可将非还原性糖的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。
将从植物组织中提取的酶液与蔗糖溶液保温作用一定时间后，测定产生的还原糖的量来表示转化酶活性的大小。
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。
通常，在测定过程中，溶液的pH对酶活性影响很大。
不同的酶及不同材料中同一种酶都有其最适的pH值。
转化酶有两个影响水解蔗糖能力的解离基团，一个PKa约为7，另一个PKa约为3。
不同植物材料的转化酶中这两个基团的含量不同，它们的最适pH也不同(最适pH在7.0左右的为中性转化酶，最适pH在7.0以下的为酸性转化酶)。
所以，在测定材料中转化酶的活性之前，首先要选择适宜的PH值。
【材料、仪器与试剂】1．材料：植物组织2．试剂：（1）提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl (PH7.0) 缓冲液，内含5 mmol/L MgCl2,2 mmol/L EDTA-Na2,2% 乙二醇，0.2%牛血清蛋白（BSA），2%PVP，5 mmol/LDTT 。
（2）透析缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl (PH7.0) 缓冲液，内含2.5 mmol/L MgCl2,1 mmol/L EDTA-Na2,1% 乙二醇，1 mmol/L DTT。
蔗糖酶活力实验报告
一、实验目的通过本实验，了解蔗糖酶的活力及其影响因素，探究温度、pH值、抑制剂和激活剂对蔗糖酶活力的影响，为后续研究蔗糖酶的应用提供基础。
二、实验原理蔗糖酶（Invertase）是一种水解酶，能够将蔗糖分解为葡萄糖和果糖。
本实验采用比色法测定蔗糖酶活力，通过测定在一定条件下，酶催化蔗糖水解生成还原糖的速率，从而反映酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）蔗糖酶：市售或实验室自备（2）蔗糖：分析纯（3）葡萄糖标准溶液：0.1 mol/L（4）3,5-二硝基水杨酸（DNS）：分析纯（5）盐酸、氢氧化钠：分析纯2. 实验仪器：（1）电子天平（2）恒温水浴锅（3）紫外可见分光光度计（4）移液器（5）试管四、实验方法1. 葡萄糖标准曲线绘制：（1）配制不同浓度的葡萄糖标准溶液（2）将各浓度葡萄糖溶液分别加入试管中，加入适量DNS试剂，沸水浴5分钟（3）冷却后，在540 nm波长下测定吸光度（4）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线2. 蔗糖酶活力测定：（1）配制酶反应体系：取一定量的蔗糖溶液，加入适量蔗糖酶，置于恒温水浴锅中（2）每隔一定时间取样，加入DNS试剂，沸水浴5分钟（3）冷却后，在540 nm波长下测定吸光度（4）根据标准曲线计算还原糖浓度（5）根据酶反应体系中蔗糖浓度和反应时间，计算酶活力3. 影响蔗糖酶活力的因素：（1）温度对蔗糖酶活力的影响：在不同温度下测定酶活力（2）pH值对蔗糖酶活力的影响：在不同pH值下测定酶活力（3）抑制剂对蔗糖酶活力的影响：加入一定浓度的抑制剂，测定酶活力（4）激活剂对蔗糖酶活力的影响：加入一定浓度的激活剂，测定酶活力五、实验结果与分析1. 葡萄糖标准曲线绘制根据实验结果，绘制葡萄糖标准曲线，相关系数R²为0.998，表明曲线拟合度良好。
2. 蔗糖酶活力测定在不同反应时间下，酶活力随时间延长而增加，说明蔗糖酶具有催化活性。
3. 影响蔗糖酶活力的因素（1）温度对蔗糖酶活力的影响：在40℃时，酶活力最高，随着温度升高或降低，酶活力逐渐下降。
蔗糖酶活力测定
一、目的了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握蔗糖酶活力测定的原理。
二、原理本实验以Nelson 方法测定酶活力，其原理是：蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基，在碱性溶液中将Cu 2+ 还原，还原糖本身被氧化成羟酸；砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物（砷钼蓝），在510nm 波长下有正比于还原糖浓度的光密度，从而确定蔗糖酶的活力，该法测定的范围为25~200μg。
三、主要仪器及试剂四、操作步骤1．标准曲线制作（1）取9 个具塞试管，按表1 加样：（2）向每管中加1mL Nelson 试剂，盖上塞子，置沸水浴中20 min。
冷至室温，向每管中加1 mL 砷钼酸试剂。
（3）5 min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，混匀。
（4）在510 nm 下测定光密度，以还原糖葡萄糖为横坐标，以OD510nm 值为纵坐标，制作标准曲线。
2．酶活力测定取2g 小麦苗，加入2mL 乙酸缓冲液，在冰浴中用研钵研磨成糊状，12 000r/min 离心10min，留取上清液用于酶活测定。
取2 支具塞刻度试管，向每个试管中加入乙酸缓冲液0.8ml，0.5 mmol/L 蔗糖溶液0.2mL，适当稀释的酶液1mL，以同样处理但不加酶液者为空白对照，室温下放置10min。
然后向每管中加1mL Nelson 试剂，置沸水浴中20min。
冷却至室温，向每管中加1mL 砷钼酸试剂，5min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，510 nm 下比色，测定光密度OD510nm。
五、实验结果活力计算：在室温、pH4.5 条件下，每分钟水解产生1μmol 葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1 个活力单位（U）酶活力的影响教师：XXX实验类型：基础学时：10(参考)内容：一、实验目的初步掌握用正交表设计实验方案并用数理统计方法处理实验数据的步骤和注意事项。
二、实验原理酶的催化作用受多种因素的影响。
欲求某因素对酶活力的影响，通常是固定其它因素，测定该因素不同水平下的酶活力。
实验四蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定
实验八蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定一、实验目的掌握蔗糖酶活性的测定方法，进一步熟悉蛋白质含量测定的操作。
二、实验原理为了评价分离纯化出的蔗糖酶，必须测定各极分酶活性和比活。
酸性条件下，蔗糖酶催化蔗糖水解生成一分子葡萄糖和一分子果糖。
用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度。
蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5min，每产生1毫克葡萄糖所需酶量。
蔗糖酶是一种蛋白质，在蛋白质浓度一定时，酶活力是随纯度的提高而升高。
比活力为每毫克蛋白质的活力单位数（活力单位/mg蛋白）。
三、实验器材与试剂1．试剂3，5-二硝基水杨酸试剂、标准葡萄糖溶液、0.2mol/L蔗糖、0.2mol/L，pH4.9乙酸溶液、标准牛血清蛋白溶液、考马斯亮兰G-250试剂。
2．器材分光光度计、水浴锅、试管、保鲜膜、秒表。
四、操作步骤1．各级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活性测定A酶液的稀释用0.2mol/L ，pH4.9乙酸缓冲液稀释各级分酶液，测定酶活合适的稀释倍数：Ⅰ：1000-10000倍Ⅱ：1000-10000倍Ⅲ：100-1000倍以上倍数仅供参考。
B葡萄糖标准曲线的制作：以A520nm为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标，绘制葡萄糖浓度的标准曲线。
C酶活力的测定将10%的蔗糖溶液稀释成pH4.5的6.5%（0.2mol/L）的溶液，取此溶液5ml置试管中（两支），将其放入25℃水浴保温5min，然后在一试管内加蔗糖酶液1.0ml，立即混匀，记时，反应5min，在加入0.1mol/LNaOH溶液终止反应；另一管先加入终止液再加入酶液，作为对照管。
取三支试管，在1，2管中分别加入上述反应液0.5ml二硝基水杨酸溶液，保鲜膜封口，沸水浴煮10min，取出后自来水冷却3min，加蒸馏水4ml，混匀，以第三管调零，于520nm处测定消光值（A520nm），以测定管的消光值减去对照管的消光值，以此值从标准曲线上求得相应的葡萄糖浓度，并乘以11，即为每ml酶溶液的活力。
蔗糖合成酶的测定方法[方案]
![蔗糖合成酶的测定方法[方案]](https://img.taocdn.com/s3/m/a87931ec6529647d272852dc.png)
蔗糖合成酶的测定方法[方案]蔗糖合成酶的测定方法一、仪器设备冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计二、试剂HEPES-NaOH(50mmol/L，pH7.5)缓冲液，包括50mmol/L MgCI;2mmol/LEDTA;20.2%(W/V)BSA;2%PVP;0.1%间苯二酚:称取0.1g溶解并定溶于100ml 95%乙醇中。
30%盐酸、2mol/L NaOH、100mmol/L UDPG、100mmol/L6-磷酸果糖、100mmol/L果糖三、操作方法1、粗酶液制备称取0.5g样品(植物叶片去掉主叶脉)，洗净剪碎，置于预冷的研钵中，加3ml Hepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨，10000×g离心10min。
2、酶活性测定依次加入50μL粗酶液，50μLHepes-NaOH缓冲液pH7.5，20μL 50 mmol/LMgCI， 220μL 100mmol/L UDPG，20μL 100mmol/L6-磷酸果糖(20μL 100mmol/L果糖)， 30?中反应30min后，加入200μL 2mol/L NaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却，加入1.5ml 30%盐酸和0.5ml 0.1% 间苯二酚，摇匀后置于80?水浴保温10min，冷却后置于480nm 处，以提前杀死酶活性为空白比色测定蔗糖含量。
同时取50μL粗酶液，加入200μL 2mol/L NaOH，以下同上操作，测定蔗糖含量。
3、蔗糖标线制作:取0、40、80、120、160、200μg/ml的蔗糖溶液50μL，操作同上，然后以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光值为横坐标，得方程。
4、计算,1,1样品中酶活性(μg?g?h)=式中 C—反应液催化产生的蔗糖总量(μg);V—提取酶液时加入的缓冲液体积(ml); 1V—酶反应时加入的粗酶液体积(ml) 2淀粉酶活性的测定1方法1.1试剂配制淀粉酶提取缓冲液:0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH 5.6);1%的淀粉溶液:用0.1mol/L-1的柠檬酸缓冲液(pH 5.6)配制;标准麦芽糖溶液(1mg/mL-1);3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂):称取6.5 g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000 mL容量瓶中，加入325 mL 2mol?L-1 NaOH溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容到1000 mL。
实验一 蔗糖酶活力测定
实验一蔗糖酶活力测定一、目的要求了解蔗糖酶的性质及3,5–二硝基水杨酸比色法测定蔗糖酶活力的实验原理，熟练掌握其测定方法。
二、实验原理蔗糖酶（sucrase, EC 3.2.1.26）又称转化酶，蔗糖在其作用下，水解为D–葡萄糖与D–果糖。
酵母细胞含丰富的蔗糖酶（胞内酶），细胞破壁后释放出来的蔗糖酶可以从果糖末端切开蔗糖的果糖糖苷键，使蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，葡萄糖和果糖是还原糖，其含量可通过3,5–二硝基水杨酸比色法测定，从而度量酶活力的大小。
蔗糖酶活力定义为：在35℃实验缓冲液条件下，每3min释放1mg还原糖的酶量为1酶活单位。
由于蔗糖酶在碱性条件下极易失活，所以可用碱终止酶解反应。
3,5–二硝基水杨酸定糖法实验原理：利用3,5–二硝基水杨酸溶液和还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在520nm波长处有最大吸收峰，在一定范围内其吸光度与还原糖含量呈线性关系，可用于还原糖含量测定。
三、试剂和仪器（一）试剂1、3,5–二硝基水杨酸试剂（DNS）。
甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2mL 10%NaOH，并用水稀释至69 mL，在此溶液中加6.9 g NaHSO3。
乙液：称取255 g酒石酸钾钠置于300 mL 10%NaOH中，再加入880 mL 1%3,5–二硝基水杨酸溶液。
将甲、乙两溶液混合即得到颜色呈黄色的使用液，贮于棕色瓶中，室温下放置7–10天后使用。
1、葡萄糖标准使用液（1mg/mL）：称取干燥的葡萄糖0.1000 g，溶于水并定溶至100 mL。
2、5%蔗糖溶液：称取5.00 g蔗糖用pH5.5 0.1mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲溶液配置成100mL。
3、1mol/L NaOH。
(二)仪器1、电热恒温水浴锅。
2、721分光光度计。
1、秒表或手表。
四、操作方法1、标准曲线制备使用1cm比色皿，在520nm波长条件下，以试剂空白条零，测定各管吸光值。
用坐标纸绘制标准曲线；或用回归法计算求出以A520nm值为自变量，葡萄糖含量(mg)为因变量的直线方程。
蔗糖酶的提取及活力测定
蔗糖酶的提取及活力测定啤酒酵母里蔗糖酶的提取和活力测定原理1、细胞破壁:就酶在生物体内的分布，可分为胞内酶和胞外酶，蔗糖酶系胞内酶。
提取胞内酶时，要破碎组织和细胞，然后用一定的溶液提取，得到的材料称为无细胞抽提液。
材料不同，破壁的方法也不同。
我们用的菌体(微生物)细胞破壁方法是:自溶法，即将菌体放在适当的pH值和温度下，利用组织细胞自身的酶系将细胞壁破坏，使细胞内的物质释放出来。
自溶时需加少量防腐剂，以防外界细菌污染。
自溶法的缺点是时间较长。
，5-二硝基水杨酸比色定糖的原理 2、3(1)DNS试剂+ D-葡萄糖氨基化合物(还原糖) (棕红色)(2)在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度成一定比例关系(可用于比色测定)，所以可用DNS比色法测定还原糖的含量。
(3)该方法是半微量定糖法，操作简便、快速、杂质干扰较少。
试剂与器材恒温水浴、自动部分收集器、恒温箱、梯度洗脱装置、冰箱、层析柱、分析天平、电磁搅拌器、秒表、离心机、可见分光光度计、冻干机、沸水浴等。
3,5二硝基水杨酸试剂(DNS)、5%的蔗糖溶液、1mol/L的 NaOH溶液、乙酸钠、0.2mol/L,pH4.6的醋酸缓冲液 6. 乙酸乙酯操作方法细胞破壁?抽提?两次乙醇分级?透析?装柱?洗涤?洗脱?收集酶活力峰?制冻干粉 ? 制作3，5—二硝基水杨酸比色定糖法的标准曲线并测定三种酶样品的活力 ? 测定三种酶样品的蛋白浓度计算各步酶样的比活力、提纯倍数和收率用双倒数作图法测定蔗糖酶的Km值关键步骤与注意事项乙醇分级时，注意低温、防止乙醇局部过浓，离心后要迅速溶解酶样 ? 装柱均匀，无截面、无气泡，床面平整，柱体垂直分离提纯的全过程中，防止酶失活并用测定酶活力的方法跟踪酶的去向 ? 在测定米氏常数时，将酶样溶解后一定要稀释到合适的浓度。
酶活力测定及作图一定要准确。
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实验四蔗糖合成酶、酸性转化酶、碱性转化酶活力活力的测定
参考
一、实验意义和目的 (2)
二、实验原理 (2)
三、材料、设备与试剂 (3)
四、实验步骤 (3)
1.蔗糖合成酶活性测定实验 (3)
2.转化酶活性测定 (4)
五、实验结果与分析 (4)
1.蔗糖合成酶活性测定.................................................................... 错误!未定义书签。
2.转化酶活性测定............................................................................ 错误!未定义书签。
六、误差分析........................................................................................... 错误!未定义书签。
一、实验意义和目的
蔗糖作为植物体内主要的光合产物和运输物质，其代谢强弱对许多生理活动都会产生显著影响。
蔗糖合成酶(SuSy)是植物进行蔗糖代谢的关键酶之一,与植物细胞组织和骨架的构建、植株的生长发育和果实的成熟以及植物对逆境胁迫的响应等方面密切相关，在植物的生长发育和代谢活动中具有重要作用。
转化酶也是催化蔗糖降解的重要酶类，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量，还是控制淀粉合成的关键酶，测定转化酶活性对了解光合产物的贮存、转运及累积都有重要意义。
通过本实验要掌握三种酶的作用、酶活力测定的原理和方法、学习酶活力的计算方法，了解糖类水解。
二、实验原理
1.蔗糖合成酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖
+UDP 果糖+UDPG。
2.转化酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖+H2O—►葡萄糖+果糖。
根据催化反应所需的最适PH,可将转化酶分为两种：一种称为酸性转化酶，主要分布在液泡和细胞壁中，另一类转化酶称为碱性或中性转化酶，主要分布在细胞质中。
黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身
蔗糖合成酶
被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量,从而计算得到相应酶活性。
三、材料、器材与试剂
材料：红薯叶片
器材：天平、研钵、恒温水浴锅、沸水浴锅、离心机、分光光度计
试剂：
1.蔗糖合成酶活性测定
①提取液（50mMHepes-NaOH,PH7.5、把那几种试剂抄下来）
②反应液（三种试剂抄下来）
③终止试剂（两种试剂）
2.转化酶活性测定
①提取液同上
②反应液酸性Inv:醋酸……；碱性Inv：试剂
③终止试剂 DNS同上
四、实验步骤
1.蔗糖合成酶活性测定实验
①绘制标准曲线
准确称取100mg无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容到100ml,使用时再稀释10倍,得到100μg/mL 葡萄糖溶液，将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中加热10 min ，取出冷却，按照下表加入各试剂，最后在540 nm 波长下，以吸光度为纵坐标，含葡萄糖量（ug）为横坐标绘制标准曲线。
②酶液提取
剪取红薯叶片叶尖部分进行称量得0.3245g，放入研钵中并加入2mL提取液进行研磨，然后用3mL提取液进行洗涤，全部转移进离心管中。
放入离心机中，在转速为15000g下离心20分钟，然后将上清液转入另一个离心管中放入冰块中备用。
③反应
取一支试管，用移液枪加入450uL反应液和200uL酶液，此时开始计时，放入30℃恒温水浴锅中保温30分钟。
④终止反应
30分钟后，向试管中加入250uLTricine-KOH和500uLDNS试剂，放入沸水浴中加热10分钟，然后取出冷却至室温，加入4mL蒸馏水。
⑤吸光度测定
在540nm波长下，测定吸光度，记录数据，计算酶活。
2.转化酶活性测定
①酶液提取同上
②反应
取两支试管，分别加入200uL蔗糖，然后其中一支试管中加入2200uL醋酸-NaOH，另一支加入2200uL醋酸钠-醋酸，再分别加入100uL酶液，计时，放入30℃恒温水浴锅中保温30分钟。
③终止反应
两支试管分别加入1000uLDNS试剂，再放入沸水浴中加热5分钟，然后取出冷却。
④吸光度测定
在540nm波长下，测定吸光度，记录数据，计算酶活。
五、实验结果与分析
酶活性（ug·g−1·ℎ−1）=X×V1
V2×W×t
X:反应液催化产生的葡萄糖总量（ug）
V1:提取酶时加入的缓冲液体积（mL）
V2:酶反应时加入的酶液体积（mL）
W:样品重量（g）
T:反应时间（h）
=53.18ug 根据标准曲线得待测液中葡萄糖量X1=1.5083+0.0711
0.0297
=8194.14（ug·g−1·ℎ−1）则待测液中蔗糖合成酶活性=53.18×5
0.2×0.3245×0.5
酸性条件下：
=4.00ug
根据标准曲线得待测液中葡萄糖量X2=0.1663+0.0711
0.0297×2
=1232.67（ug·g−1·ℎ−1）
待测液中酸性转化酶活性= 4.00×5
0.1×0.3245×0.5
碱性条件下：
=7.95ug
根据标准曲线得待测液中葡萄糖量X3=0.4031+0.0711
0.0297×2
=2449.92（ug·g−1·ℎ−1）
待测液中碱性转化酶活性=7.95×5
0.1×0.3245×0.5
从计算结果可知，蔗糖合成酶活性最高，其次为碱性转化酶和酸性转化酶。
影响本次实验结果准确性的因素主要有以下几点：
1.研磨不充分和研磨液未完全转移进离心管中都会使得最后计算所得到
的酶活性偏低
2.由于人为因素，反应时间并非精确的30min
3.整个实验并非一人完成，因个人习惯不同也会造成实验过程中存在误差
4.待测液较少。
将比色皿润洗后，剩下的待测液量不足，测得的吸光度值
会偏小
5.因比色皿只有一个，用于润洗的待测液有限，比色皿清洗不干净，容易
受到上一组所装溶液的影响
6.仪器因素，入射光不是真正的单色光，单色器内的内反射以及因光源的
波动、检测器灵敏度波动等引起偏离
7.介质不均匀，试管中溶液没有充分振荡混匀，引起光的散射，可能使得
吸光度偏大。