微生物检验PPT课件
合集下载
《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
临床微生物检验的标准化ppt课件
Interpretation / Reporting 结果解释/报告 Use of Laboratory Data 实验室数据使用
Equipment Maintenance & Calibration设备的维 护和校准 Internal Q.C.室内质控
Proficiency Testing 能力验证
5.1 人员
• 5.1.11 应制定员工能力评审的内容和方法 ，每年评审员工的工作能力；
– 对新进员工在最初2个月内应至少进行2次能 力评审（间隔为30天），保存评审记录。
– 当职责变更时，或离岗6个月以上再上岗时， 或政策、程序、技术有变更时，应对员工进 行再培训和再评审。
– 没有通过评审的人员需经再培训和再评审， 合格后才可继续上岗，并记录。
1:4000系列稀释 – 1ul环取10环 EBD原液至10ml蒸馏水, 吸光
度应与1:1000稀释液相符(10ul环-10 EBD100ml DH2O) – 重复4次,平均误差须≦20%.
5.1 人员
5.1.1 有颜色视觉障碍的人员不应从事涉及到辨色的微 生物学检验。
5.1.4 临床微生物学实验室（以下简称“实验室”）负责 人至少应具有以下资格：中级技术职称，医学、医 学检验专业背景，或相关专业背景经过医学检验培 训，3年临床微生物工作经验。 认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职 称，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3 年。
• Seeded BC studies • Parallel BC studies
Verification of unmodified FDA-Cleared Tests
• Seeded BC studies
– 至少20株代表菌株 – 使用临床病人分离株
Equipment Maintenance & Calibration设备的维 护和校准 Internal Q.C.室内质控
Proficiency Testing 能力验证
5.1 人员
• 5.1.11 应制定员工能力评审的内容和方法 ，每年评审员工的工作能力；
– 对新进员工在最初2个月内应至少进行2次能 力评审（间隔为30天），保存评审记录。
– 当职责变更时，或离岗6个月以上再上岗时， 或政策、程序、技术有变更时，应对员工进 行再培训和再评审。
– 没有通过评审的人员需经再培训和再评审， 合格后才可继续上岗，并记录。
1:4000系列稀释 – 1ul环取10环 EBD原液至10ml蒸馏水, 吸光
度应与1:1000稀释液相符(10ul环-10 EBD100ml DH2O) – 重复4次,平均误差须≦20%.
5.1 人员
5.1.1 有颜色视觉障碍的人员不应从事涉及到辨色的微 生物学检验。
5.1.4 临床微生物学实验室（以下简称“实验室”）负责 人至少应具有以下资格：中级技术职称，医学、医 学检验专业背景，或相关专业背景经过医学检验培 训，3年临床微生物工作经验。 认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职 称，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3 年。
• Seeded BC studies • Parallel BC studies
Verification of unmodified FDA-Cleared Tests
• Seeded BC studies
– 至少20株代表菌株 – 使用临床病人分离株
微生物检验7ppt课件
新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可 初步诊断为淋球菌性结膜炎
4．分离培养与鉴定
选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML） ，或NYC
置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育 每隔24h观察平板
（1）形态和生化学鉴定
可疑菌落
直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴 状凸起的菌落
血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、 透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌
落 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶
3．生化特性
氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合
革兰阴性球菌
奈瑟菌属（Neisseria） 布兰汉菌属（Branhamella）
概述
“伯杰鉴定细菌学手册”第9版
将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉 菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科
奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑 膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。
告为阴性
（二）淋病奈瑟菌
1．检验程序
2．标本采集
阴道和宫颈分泌物
用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处 停留10~15秒时间，蘸取
采集尿道分泌物
弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本
尿液 直肠肛拭标本
废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物
新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物
目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论
第一节 奈瑟菌属
4．分离培养与鉴定
选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML） ，或NYC
置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育 每隔24h观察平板
（1）形态和生化学鉴定
可疑菌落
直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴 状凸起的菌落
血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、 透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌
落 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶
3．生化特性
氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合
革兰阴性球菌
奈瑟菌属（Neisseria） 布兰汉菌属（Branhamella）
概述
“伯杰鉴定细菌学手册”第9版
将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉 菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科
奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑 膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。
告为阴性
（二）淋病奈瑟菌
1．检验程序
2．标本采集
阴道和宫颈分泌物
用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处 停留10~15秒时间，蘸取
采集尿道分泌物
弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本
尿液 直肠肛拭标本
废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物
新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物
目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论
第一节 奈瑟菌属
《临床微生物检验》课件
临床微生物检验的质量管理
1
质量控制的作用
保证临床微生物实验室的检验结果
质量控制的重要性
2
的准确性、可靠性和重复性。
临床微生物检验的结果直接关系到
病人的治疗和康复，因此是至关重
要的。
3
常用的质量管理措施
实验室管理规范、设施环境维护、 标准质控规程的贯彻落实等措施。
分子生物学检验技术
DNA分离和纯化
它们在人和动物接触的过程中传播，会 引起严重的感染病，甚至导致死亡。
生物化学检验技术
什么是生物化学 检验技术
利用生物化学分析技术来 检测生物样本中的化学物 质的一种检测方法。
应用领域
可用于疾病的诊断和治疗， 并广泛应用于生物技术的 前沿研究中。
常用技术分类
• 酶联免疫法 • 光子计数法 • 随机放大荧光检测法
临床微生物检验PPT课件
本课程将向大家介绍临床微生物检验的定义、作用和意义，以及微生物检验 的常见流程、方法和技术。
常见致病微生物
1 大肠杆菌
2 病毒
在传染病流行病学中，是诊断和预防疾 病的重要指标。
病毒性感染在人类社会中是医学防治一 直要面对的难题。
3 金黄色葡萄球菌
4 弓形体
常见的致病菌之一，对呼吸系统、泌尿 系统、乳腺、皮肤等具有感染性。
利用微生物检测技术及时准确分析身体内存在的微生物病原体，识别出病原体的 种类和数量。
2
诊断和治疗疾病
根据临床微生物检测结果，及时确认病情的诊断，选择最合适的治疗方法。
3
公共卫生防控
通过研究疾病传播规律和控制机制，加强疾病预防和控制措施，保障公共卫生安 全。
感染部位
微生物可感染人体的各 个部位，如呼吸系统、 肠胃道、泌尿系统、生 殖系统等，表现出的症 状和体征也会有很大差 异。
微生物检验(ppt版)
•芽胞抗原：
有免疫原性和血清学诊断价值
14
第十四页，共七十五页。
炭疽(tànjū)毒素：
--保护性抗原〔PA)、致死因子〔LF〕、 水肿
因子〔EF〕三个组分
--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致 病性
--具有抗吞噬和免疫原性
15
第十五页，共七十五页。
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热(ɡàn rè)140℃ 3h才能杀灭
在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中别离出 能引起多种野生动物和家畜感染〔羊、马、狗、猫、
鸟、鱼等〕 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
42
第四十二页，共七十五页。
致病物质： 李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子 内在素——外表(wàibiǎo)蛋白〔侵袭性蛋白〕 磷脂酶C
(yìzhì)
噬菌体裂解(liè jiě)
(shēnɡ huà)
动 响生 串
荚 青毒
力
化珠
观
试
膜 霉力 肿 素试
确定报告
察
验
胀 抑验
试制
反
验
第二十一页，共七十五页。
21
痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
荚膜肿胀试验
直接涂片
荚膜染色 G染色 初步报告
食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性
状正常，应引起注意
30
第三十页，共七十五页。
二、微生物特性(tèxìng)
形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成(xíngchéng)圆形芽胞、
有免疫原性和血清学诊断价值
14
第十四页，共七十五页。
炭疽(tànjū)毒素：
--保护性抗原〔PA)、致死因子〔LF〕、 水肿
因子〔EF〕三个组分
--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致 病性
--具有抗吞噬和免疫原性
15
第十五页，共七十五页。
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热(ɡàn rè)140℃ 3h才能杀灭
在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中别离出 能引起多种野生动物和家畜感染〔羊、马、狗、猫、
鸟、鱼等〕 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
42
第四十二页，共七十五页。
致病物质： 李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子 内在素——外表(wàibiǎo)蛋白〔侵袭性蛋白〕 磷脂酶C
(yìzhì)
噬菌体裂解(liè jiě)
(shēnɡ huà)
动 响生 串
荚 青毒
力
化珠
观
试
膜 霉力 肿 素试
确定报告
察
验
胀 抑验
试制
反
验
第二十一页，共七十五页。
21
痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
荚膜肿胀试验
直接涂片
荚膜染色 G染色 初步报告
食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性
状正常，应引起注意
30
第三十页，共七十五页。
二、微生物特性(tèxìng)
形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成(xíngchéng)圆形芽胞、
微生物检验 PPT课件
技术逐渐推 广应用
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
二、基本原理
抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原
发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻
片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应 抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲掉，在 荧光显微镜下可观察到荧光，否则荧光抗体被缓冲 液冲掉，在荧光显微镜下观察不到荧光。
四乙基罗丹明 (RB200) 570
四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 550
最大发射 光波长
520～530
595～600
620
荧光颜色
黄绿色
橘红色
橙红色
4.荧光抗体的制备
荧光抗体的制备程序： 制备免疫血清或McAb ↓ 抗体纯化 ↓ 抗体标记： 搅拌法、透析法 方法 ↓ 标记物提纯：去除游离荧光素 去除过度标记或未结合抗体 ↓ 标记物鉴定：含量、特异性、效价、F/P 鉴定 ↓ 实际应用
3.荧光色素的要求
（1）应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基因 （2） 荧光效率高 （3）荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明 （4）与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质 （5）标记方法简单，安全无毒 （6）与蛋白质的结合物稳定，易于保存
异硫氰酸荧光素 ( FITC) 最大吸收 光波长 490～495
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
经典的免疫分析技术
凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验 特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实 现自动化。
现代的免疫分析技术
荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系 （稀土）元素免疫标记、临床化学免疫分析技术、发光免 疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。 特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。
微生物检验技术 PPT课件
菌种保藏的目的： 防止优良性状菌种的退化或变异。 注意：在实际工作中菌种的退化或变异是 难以避免的。微生物的遗传与变异是正常 的生物进化规律，变异是绝对的，稳定性 是相对的。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
实验四、环境中微生物的检测PPT课件
谢谢观看
03
实验步骤
样品采集
采集环境中的水样、 土壤样、空气样等， 确保采集的样品具有 代表性。
记录采集时间、地点、 环境条件等信息，以 便后续分析。
使用无菌容器或薄膜 采集样品，避免交叉 污染。
样品处理
将采集的样品进行稀释，使微生物分 散。
对样品进行富集培养，提高微生物的 数量。
对样品进行过滤或离心，使微生物与 杂质分离。
结果应用
环境监测
实验结果可以为环境监测提供依 据，了解环境中微生物的分布和
数量，评估环境质量。
公共卫生
实验结果可以为公共卫生领域提 供参考，了解环境中微生物的种 类和数量，评估其对人类健康的
风险。
科学研究
实验结果可以为科学研究提供数 据支持，深入探究环境中微生物
的生态学和生物学特性。
05
实验总结
实验不足与改进
实验不足
在实验过程中，我发现自己在操作显微镜时还不够熟练，有 时会出现观察不准确的情况。此外，我在实验数据处理方面 也存在一些问题，如数据记录不准确、分析不全面等。
改进方法
为了提高实验的准确性和可靠性，我计划在课后多加练习使 用显微镜，提高自己的操作技能。同时，我也要加强学习数 据处理和分析方面的知识，掌握更多的统计方法和软件应用 技巧。
实验四、环境中微生物的检测ppt 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01
实验目的
掌握微生物检测的基本原理
01
微生物检测是利用特定的方法和 技术对环境中的微生物进行检测 和计数，以评估环境卫生状况和 潜在的健康风险。
02
基本原理包括微生物培养法、免 疫学方法、分子生物学方法等， 这些方法基于不同原理，能够对 不同类型的微生物进行检测。
临床常见标本的微生物检验ppt课件
• 唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～ 109/ml。
• 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。
（一）采集指征
• 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。
同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
为什么要求多次采血？
• （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可 提高阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相 同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
• 直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。
•
经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
• 较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。
•
经气管穿刺吸引物
• 采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。
中，剧烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底 的脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将同 样的方法反复2次。
• 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。
（一）采集指征
• 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。
同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
为什么要求多次采血？
• （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可 提高阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相 同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
• 直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。
•
经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
• 较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。
•
经气管穿刺吸引物
• 采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。
中，剧烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底 的脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将同 样的方法反复2次。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 培养基46±1ºC水浴 保温。
• 倾注前先加TTC于营 养琼脂中,加入量比 例为1ml/1L。
• 小心旋转培养皿勿将 培养基溢出。
菌落总数测定
• 琼脂凝固后，翻转 平板，置36 ±1ºC 温箱内培养48 ±2h.
• 若有太多水珠在皿盖 上，应先倒置打开， 以免湿度大使菌成片 状生长。
菌落总数测定ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h -----不产气------大肠菌群阴性------报 告
大肠菌群测定
• 革兰氏染色------呈现阴性 • 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h ------
产气------大肠菌群阳性------报告
沙门氏菌检验
• 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性，最适生 长温度37 ºC，对营养要求不高,能在普通 培养基上生长.
• 同一来源的链状菌落 作为一个菌落。
霉菌、酵母菌计数
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭 菌培养基内------每皿内加入适量培养基----- 25~28ºC下培养5d ------菌落计数-----报告
菌落总数PK霉菌、酵母菌
• 营养琼脂
• 报告表示：100mg（ml）检样内大肠菌 群最可能数（MPN)
大肠菌群测定
• 检样------稀释------乳糖胆盐发酵管9支 36 ±1ºC下培养24 ±2h ------不产气-----大肠菌群阴性
产气------分离培养
大肠菌群测定
• 以无菌操作将检样25g（ml）加入225ml 灭菌生理盐水中，充分振摇或使用匀浆 机制成1：10的均匀稀释液。吸取1ml该 稀释液沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理 盐水中，混合均匀，制成1：100的稀释 液。
中，每个稀释级做 两个平行样，
• 如果需要乳化剂,样品与 乳化剂先混匀后,再加入 稀释剂。
• 吸取前先用刻度吸管反 复吸取供试液1-2次,每做 一个稀释级都要换用1支 1ml灭菌刻度吸管。
菌落总数测定
• 用1ml灭菌刻度吸 管吸取空白稀释液 1ml于培养皿中， 作空白对照。
菌落总数测定
• 将凉至46ºC的营 养琼脂培养基注 入培养皿，每个 约15ml，轻轻转 动培养皿使混合 均匀。
• 培养温度36±1ºC • 培养时间48±2h • 菌落数选择30~300/
皿
• 马铃薯-葡萄糖琼脂 培养基附加抗菌素或 孟加拉红培养基或高 盐察氏培养基
• 25ºC~28ºC • 3d后开始观察，培养
5d • 10~150 /皿
大肠菌群测定
• 大肠菌群是一群在37ºC能发酵乳糖、在 24h内产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。
• 选择菌落数在 30~300之间的平板 进行计数，两个平 板的平均数乘以稀 释倍数报告。
• 平板菌落均数在15以 下:0~4,1~7,2~9,3~10,4~1 2,5~14,6~15,7~17,8~18,9 ~19,10~20.
• 有较大片状菌落生长 的平板不宜采用
• 片状菌落不到平板的 一半而其余一半中菌 落分布均匀，计算半 个平板后乘以2计数。
菌落总数测定
• 在一定条件（如培养成分、培养温度和 时间、PH、需氧性质等）下培养后，所 得1ml（g）检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群在营养琼脂上生长发 育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数测定
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择2个或3个适宜稀释度,各取1ml分别加 入灭菌培养基内------每皿内加入适量营 养琼脂培养基------ 36 ±1ºC下培养48 ±2h ------菌落计数------报告
沙门氏菌检验
• 取增菌液1环,划线接种于一个亚硫酸铋琼 脂平板和一个DHL琼脂平板（或HE琼脂 平板、WS或SS琼脂平板）。两种增菌液 可同时划线接种在同一平板上。于36 ±1ºC培养18-24h。
沙门氏菌检验
• 观察各个平板上有 无菌落生长，若无 则未检出沙门菌；
• 若有，观察菌落特 征,做进一步生化 试验。
沙门氏菌检验
• 以无菌操作将检样25g（ml）加入225ml 灭菌缓冲蛋白胨水中,充分混合供试液,于 36 ±1ºC培养4h,
沙门氏菌检验
• 移取10ml,转种于100ml氯化镁孔雀绿增 菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内,于42ºC培 养18h~24h,同时,另取10ml,转种亚硒酸胱 氨酸增菌液内,于36 ±1ºC培养18h~24h.
大肠菌群测定
• 取6支单料乳糖胆 盐培养基，3支接 种1：10稀释液，3 支接种1：100稀释 液，每支1ml。
• 取3支双料乳糖胆 盐培养基，每支分 别接种1：10稀释 液10ml。
大肠菌群测定
• 接种后置36 ±1ºC温箱中培养24 ±2h。
• 所有乳糖胆盐发酵管都不产气，报告为 大肠菌群阴性。若有产气者，需进行分 离培养。
大肠菌群测定
• 将产气的发酵管转种于伊红美兰琼脂培 养基平板上, 36 ±1ºC温箱中培养24 ±2h, 若无菌落生长,则判断大肠菌群阴性,若有 菌落生长,观察其形态,并挑起可疑菌落进 行革兰氏染色和证实试验.
•
划板的格式
大肠菌群测定
• 革兰氏染色------呈现阳性------大肠 菌群阴性------报告
菌落总数测定
• 以无菌操作将检样 25g（ml）加入225ml 灭菌生理盐水中，充 分振摇或使用匀浆机 制成1：10的均匀稀 释液。然后吸取该稀 释液1ml沿试管壁徐 徐注入含有9ml灭菌 生理盐水的试管中， 混合均匀，制成1： 100的稀释液。
菌落总数测定
• 用1ml刻度吸管分 别吸取 1：10稀释 液1ml，1:100稀释 液1ml注于培养皿
志贺氏菌检验
• 兼性厌氧的革兰氏阴性，最适生长温度 37 ºC，对营养要求不高,能在普通培养基 上生长.
食品卫生微生物限度检验
GB/T 4789--2003
微生物限度检验
• 试验中所有涉及到的用具,试剂,培养基,都 必须经过灭菌.
• 干热灭菌:160°C,2h • 湿热灭菌:视灭菌物品而定
食品卫生微生物限度检验
• 菌落总数测定 • 霉菌和酵母菌计数 • 大肠菌群测定 • 沙门氏菌检验 • 志贺氏菌检验 • 金黄色葡萄球菌检验 • 溶血性链球菌检验