分子生物学实验
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学是一门在微观层面研究生物大分子结构与功能的科学，而分子生物学实验则是探索生命奥秘的重要手段。
通过一系列精确设计的实验操作，我们能够揭示基因的表达、遗传信息的传递以及生物体内各种分子的相互作用。
在分子生物学实验中，有几个关键的技术和方法常常被运用。
其中之一就是核酸提取技术。
核酸，包括 DNA 和 RNA，是携带遗传信息的重要分子。
要对其进行深入研究，首先就得有效地从细胞或组织中提取出来。
这可不是一件简单的事情，需要小心翼翼地操作，以避免核酸的降解和污染。
比如说，提取 DNA 时，通常会先将细胞破碎，使细胞核内的 DNA 释放出来。
然后，通过加入各种试剂，去除蛋白质、脂质等杂质，最后得到纯净的 DNA 溶液。
这个过程中，每一步所使用的试剂浓度、温度和反应时间都需要严格控制。
RNA 的提取则更为棘手，因为 RNA 很容易被环境中的 RNA 酶降解。
所以，实验过程中要使用无 RNA 酶的试剂和器材，操作也要尽可能迅速。
另一个重要的技术是 PCR 扩增，也就是聚合酶链式反应。
这就像是一个神奇的魔法，能让我们把微量的 DNA 片段大量复制。
想象一下，我们手里只有一点点 DNA 样本，但是通过 PCR 技术，就能够在短时间内获得足够多的相同 DNA 片段，用于后续的分析和研究。
PCR 反应需要特定的引物，这些引物就像是导航仪，告诉聚合酶从哪里开始合成新的 DNA 链。
反应还需要精确控制温度的循环变化，包括高温变性、低温退火和适温延伸这几个步骤。
在分子生物学实验中，还有一项常用的技术是电泳。
这就好比是一场分子的赛跑比赛。
我们把 DNA 或蛋白质样品放入凝胶中，然后通电，由于分子的大小和电荷不同，它们在电场中的移动速度也不一样。
这样，我们就能根据它们移动的距离和位置来分析样品的特性。
比如说，DNA 电泳可以帮助我们判断 DNA 片段的大小，看看有没有我们想要的那个片段。
蛋白质电泳则能让我们了解蛋白质的分子量、纯度等信息。
分子生物学实验方法
分子生物学实验方法1.DNA提取与纯化DNA提取是分子生物学实验中最常用的技术之一，用于从不同种类样本中提取纯化DNA。
常见的提取样本包括细菌、动植物组织以及人体样本。
提取过程通常包括细胞破碎、蛋白质除去、DNA溶解和纯化等步骤。
常用的提取方法包括酚/氯仿提取法、CTAB提取法和商业化提取试剂盒。
2.PCR（聚合酶链反应）PCR是一种高效扩增DNA的技术，可将一小段目标DNA序列扩增成数百万个拷贝。
PCR反应通常包括DNA模板、两个引物、dNTPs（四种核苷酸单元）和DNA聚合酶等成分。
反应的核心步骤是多个高温循环，包括变性（解开DNA的双链）、退火（引物结合到目标序列）和延伸（DNA聚合酶合成新链）等步骤。
PCR广泛应用于分子克隆、基因表达研究、疾病诊断等领域。
3.转染和转化转染和转化是将外源DNA导入宿主细胞中的技术。
转染是指将DNA导入非真核细胞（如细菌）或真核无性细胞中，常用的方法包括电穿孔法、化学法和病毒载体介导等。
转化是指将外源DNA导入真核多细胞直至整个个体范围内，常见的方法包括冷冻转化、冲击转化和基因枪法等。
4.蛋白质表达和纯化蛋白质表达和纯化是研究蛋白质结构和功能的关键步骤。
常见的表达系统包括细菌系统（如大肠杆菌）、酵母系统（如酵母菌）和哺乳动物细胞系统（如CHO细胞）。
表达后，蛋白质需要经过多个步骤进行富集和纯化，如离心、柱层析和亲和层析等。
以上仅是分子生物学实验方法中的一部分，随着技术的发展，分子生物学实验方法也在不断更新和扩展。
这些实验方法在疾病诊断、基因工程、生物学研究等领域发挥了重要作用。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验方法与步骤【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版分子生物学实验方法与步骤表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析一、原理细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。
强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS 结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。
采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。
因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。
二、试剂准备1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，混匀后加ddH2O，37O C溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于室温。
2、1.5M Tris-HCl(pH 8.0：Tris 18.17g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至8.0,定容至100ml。
3、1M Tris-HCl(pH 6.8：Tris 12.11 g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至6.8,定容至100ml。
4、10% SDS：电泳级SDS 10.0 g加ddH2O 68℃助溶,浓盐酸调至pH 7.2,定容至100ml。
5、10电泳缓冲液(pH 8.3：Tris 3.02 g，甘氨酸18.8 g，10% SDS 10ml加ddH2O溶解, 定容至100ml。
6、10%过硫酸铵（AP）： 1gAP加ddH2O至10ml。
7、2SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl (pH 6.82.5ml，-巯基乙醇1.0ml，SDS 0.6 g，甘油2.0ml，0.1%溴酚兰1.0ml，ddH2O 3.5ml。
8、考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰0.25 g，甲醇225ml，冰醋酸 46ml，ddH2O 225ml。
9、脱色液:甲醇、冰醋酸、ddH2O以3∶1∶6配制而成。
二、操作步骤采用垂直式电泳槽装置（一）聚丙烯酰胺凝胶的配制1、分离胶(10%的配制:ddH2O 4.0ml30%储备胶 3.3ml1.5M Tris-HCl2.5ml10% SDS 0.1ml10% AP 0.1ml取1ml上述混合液,加TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺10μl 封底,余加TEMED4μl ,混匀后灌入玻璃板间，以水封顶，注意使液面平。
常见分子生物学实验方法
常见分子生物学实验方法1.DNA/RNA提取DNA和RNA提取是进行分子生物学实验的第一步。
常见的提取方法包括酚/氯仿法、离心法、基于载体的提取等。
这些方法可以从细胞、组织或血液中提取出高质量的DNA或RNA用于后续实验。
2.PCR扩增聚合酶链反应（PCR）是一种常用的体外DNA扩增技术，用于复制特定DNA片段。
通过PCR，可以从少量的DNA样本中扩增目标序列，并与特异性引物一起进行扩增。
PCR具有高度特异性和灵敏度，广泛应用于基因克隆、基因检测和定量分析等领域。
3.基因克隆基因克隆是指将特定目标基因从一个有机体中分离并插入到另一个有机体中。
常见的基因克隆方法包括限制性内切酶消化、连接、转化、筛选等。
基因克隆可以用于生成重组DNA、构建表达载体、设计并构建突变基因、重组蛋白质等。
4.蛋白质表达和纯化蛋白质表达和纯化是研究蛋白质功能和结构的重要步骤。
常见的表达系统包括细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。
表达后，通过亲和纯化、离子交换层析、凝胶过滤等手段纯化所得蛋白质。
5.基因敲除/敲入基因敲除或敲入是通过改变目标基因的DNA序列来研究基因功能的方法。
基因敲除可以通过CRISPR-Cas9系统、RNA干扰、转座酶介导的基因敲入等方法实现。
6.DNA测序DNA测序是分析DNA序列的方法。
常见的测序技术包括Sanger测序、下一代测序（包括Illumina、Ion Torrent、PacBio等）等。
DNA测序可以应用于基因组学、转录组学、评估其中一区域的突变等领域。
7.西方印迹西方印迹是一种蛋白质检测方法，用于检测和定量特定蛋白质的存在和表达水平。
通过电泳将蛋白质分离，然后转移到膜上，并使用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗的检测。
8.荧光定量PCR荧光定量PCR（qPCR）是一种用于定量分析DNA或RNA浓度的方法。
通过特异性引物、探针与目标序列的结合，实时检测并记录PCR扩增产物的信号，进而测定起始目标序列的数量。
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学实验是一种研究生物体分子结构、功能和交互作用的实验方法。
本文将介绍分子生物学实验的一般步骤和常用技术，并以DNA提取和PCR扩增为例，详细描述了实验的具体步骤和操作。
分子生物学实验一般包括以下几个步骤：实验前的准备、生物样品的采集和处理、核酸提取、酶切和电泳、PCR扩增、蛋白质表达等。
实验前的准备包括实验设计、试剂的准备和设备的调试。
根据实验目的和问题，确定实验设计和具体操作步骤，选择适当的试剂和设备，并对实验条件进行优化。
生物样品的采集和处理是分子生物学实验的基础。
根据研究对象不同，可以采集细胞、组织、血液等生物样品，并进行预处理，如细胞培养、组织切片、离心等。
核酸提取是从生物样品中分离出核酸的步骤。
核酸提取可以使用化学方法或基于特定原理的商业试剂盒。
其中，常用的方法有酚/氯仿法、骨架蛋白法、磁珠法等。
酶切和电泳是分子生物学实验中常用的技术手段。
酶切是通过限制性内切酶对DNA进行特异性切割，生成特定大小的DNA片段。
电泳是利用电场对DNA片段进行分离和检测，可通过琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。
PCR扩增是一种重要的分子生物学实验技术。
PCR通过不断循环的变性、退火和延伸过程，在体外扩增DNA序列。
PCR 需要DNA模板、引物、核苷酸和聚合酶等关键试剂。
PCR扩增过程包括初始变性、循环扩增和最终延伸。
扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行分析和检测。
蛋白质表达是研究蛋白质功能和结构的重要实验手段。
常用的蛋白质表达系统包括原核表达系统和真核表达系统。
表达载体经过构建和转染后，利用细胞的表达机制使蛋白质在体内合成。
总之，分子生物学实验是研究生物体分子结构和功能的重要方法。
通过实验前的准备、生物样品的采集和处理、核酸提取、酶切和电泳、PCR扩增、蛋白质表达等步骤，可以获得关于生物体分子结构和功能的有价值的信息。
分子生物学实验
实验一.质粒提取与琼脂糖电泳一、目的掌握质粒的提取方法及原理；琼脂糖凝胶电泳及观察评判方法。
二、原理1.质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。
质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。
在pH 12.0-12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA 虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。
将pH 调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。
硅基质树脂在高盐状态下，特异性吸附DNA，而在低盐状态下，DNA被洗脱下来。
2.带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。
电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。
琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。
在pH值为8.0~8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。
采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。
核酸分子中嵌入荧光染料（如EB）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。
三、实验材料、仪器、试剂（1）菌种：大肠杆菌DH5α（2）分子生物学试剂10mg/ml溴化乙锭（EB）:按10mg/ml浓度将EB溶于去离子水中，剧烈搅拌，完全溶解后，室温下避光保存。
50×TAE电泳缓冲液:24.2g Tris5.71g 冰乙酸10ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）加去离子水至100ml，室温保存备用，工作液为1×TAE。
6×上样缓冲液:0.25% 溴酚蓝40%（W/V）蔗糖水溶液1% 琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖溶于100ml 1×TAE电泳缓冲液中，溶化后加入5μl 10mg/ml EB贮存液，使凝胶中EB终浓度达到0.5mg/ml。
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学实验是研究生命分子结构和功能的基础。
分子生物学的研究对象是生命体内的DNA、RNA、蛋白质等生物分子，通过实验可深入了解生命分子的结构及其功能，为治疗疾病等产生重要的科研意义。
本文将着重介绍PCR扩增、基因克隆、蛋白质表达和酶联免疫吸附实验等分子生物学实验。
PCR扩增PCR扩增是分子生物学领域中使用最广泛的实验技术之一。
PCR扩增技术是通过不断的复制，使DNA分子增多。
PCR主要操作步骤包括：DNA样品提取、模板DNA扩增、DNA回收纯化和定量检测等。
PCR扩增实验分为两部分：第一部分是制备PCR反应混合物，包括模板DNA、引物（Primer）、反应缓冲液、酶、脱离剂、种子液等。
制备反应混合物的过程中，需要将所有的试剂按照一定比例混合后，将混合液均匀吸入PCR管内。
第二部分是PCR反应实验本身，包括控制PCR反应温度变化、确保每个PCR 反应的时间和温度一致、等等。
PCR反应时间通常在2-6小时之间，取决于所扩增的DNA片段的长度和针对不同目标所使用的引物。
基因克隆基因克隆是利用重组DNA技术将外源DNA和载体DNA组装重组成新的DNA分子，然后通过转化等方式将新的DNA分子转移到感受态宿主细胞中，使得新的DNA分子被细胞所接受并复制，从而达到克隆目的的一种实验方法。
基因克隆实验的主要操作步骤包括：选取适当的载体，将所需要的外源DNA和载体DNA连接起来组成重组DNA分子，将重组DNA分子转化至感受态宿主细胞中，最后从发酵液中提取所需的目标DNA分子。
基因克隆技术在分子生物学实验研究中起到了重要的作用，使得我们能够制备大量目标分子用于进一步的研究。
蛋白质表达蛋白质表达是一种将蛋白质合成出来的实验技术。
蛋白质表达技术的主要目的是利用外源基因的扩增技术，将目标蛋白表达并纯化出来，从而进一步深入了解蛋白质的结构及其功能。
蛋白质表达实验的主要操作步骤是：蛋白质的基因落库、基因克隆到重组基因载体中、启动子、子纯化表达及活性鉴定等。
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分子生物学实验技术
分子生物学研究
植物基因组DNA提取
基因组DNA的琼脂糖电泳检测
分子实验的Primer设计 PCR扩增反应 PCR产物的电泳检测
DNA的提取和纯化
1 2 3
实验目的
实验仪器及药品
实验步骤
实验目的
了解CTAB法抽提植物基因组DNA的原理； 熟悉分子生物学常用仪器设备的使用及常用试 剂的配制方法； 掌握植物基因组DNA的提取方法； 掌握真核生物基因组DNA分离和纯化方法； 了解不同染色体倍性生物基因组DNA的含量差 异。
实验仪器及药品
仪器：1.5mL离心管、水浴锅、研钵、研棒、离心 机、超净工作台、冰箱、移液枪、枪头、液氮 罐、高压灭菌锅等。 试剂：EasyPure Plant Genomic DNA Kit
实验步骤
Step 1 Step 2
Step 3
Step 4
细胞的 破碎
核酸的 纯化
核酸的 浓缩和 沉淀
核酸的 贮存
用primer5.0进行设计
6、点击1发现Hairpin、Dimer、False Priming和Cross Dimer 都没有找到，说明这个符合要求。
用primer5.0进行设计
6、点击2发现Hairpin、Dimer出现了Found说明这个不符合要求， 我们要符合要求的。
用primer5.0进行设计
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适 的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA 序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特 异性与成功与否。要设计引物首先要找到 DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的 片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链 能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能 形成二级结构，那就可以在这一区域设计引物。 现在可以在这一保守区域里设计一对引物。一 般引物长度为15~30碱基，扩增片段长度为 100~600碱基对。
试剂盒提取的主要步骤
基因组DNA的琼脂糖电泳检测 实验原理 实验设备及药品 实验内容
实验原理
DNA在琼脂糖凝胶中的电泳，涉及电荷效应 和分子筛效应。
1、电荷效应
在微碱性的电泳缓冲液中，DNA分子中的磷 酸基因发生解离，带有电量的负电荷，能在电
场中向正极迁NA的PCR扩增
PCR技术的原理：聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction），简称PCR， 由Mullis于1985年创立，1987年获得专利， 1989年被美国著名《science》杂志列为十 项重大科技发明之首，1993年获诺贝尔化 学奖。如今，PCR技术已成为分子克隆工作 中必备的基本技术之一，并广泛渗透到医学 分子基因诊断、法医、考古学等诸多领域。 可以说PCR技术的发明给整个生命科学都带 来了一场革命，同时也为目的基因的快速克 隆提供了一种非常有效的手段。PCR的基本 原理如图所示。
琼脂糖凝胶的染色与观察
琼脂糖凝胶的染色与观察
琼脂糖凝胶的染色与观察
根据电泳后DNA条带的相对位置，可以估计出DNA的大小。 我们可以在DNA样品电泳的同时，在相邻泳道加入DNA分子 量标准物，即所谓的“DNA Marker”。DNA Marker在凝胶中 电泳后呈现出多个DNA条带，每个DNA条带有着固定的长度， 这样根据目的DNA条带与Marker中DNA条带的相对位置，就 可以方便地估计出目的DNA的大小
【操作步骤】
1、从NCBI中获取目的片段 2、用primer5.0进行设计
从NCBI中获取目的片段
1：登陆美国国立生物技术公信息中心（NCBI National center for biotechnology information ）网站， /。点击搜索框，输入你需要 查找的种名。点击search。
CTAB法的原理
CTAB(cetyltrimethylammonium bromide)十六烷基 三甲基溴化铵是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜， 它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(≥0.7mol／L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3mol ／L NaCl)时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将 CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙 醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇随之被除去。
实验设备及药品
移液器，枪头，水 平凝胶电泳槽，稳 压电泳仪，微波炉， 250ml三角瓶 琼脂糖，0.5×TBE （0.025mol/L Tris-硼 酸 0.001mol/L EDTA 采用无菌水溶解混 匀，溶液体积为1L）， 6×DNA Loading Buffer。
实验内容
（1）1%琼脂糖凝胶的制备：称取0.2g琼脂糖 于250mL三角瓶中，加入20mL 0.5×TBE电泳 缓冲液，微波炉加热约1min使之溶解，然后拿 出观察是否有油状物，有则再次加热30s，等其 完全溶解拿出。加入2μLGelStain（10000×） 染色液，倒入制胶板，完全冷却后，拔出梳子， 形成完整的加样孔，置于电泳缓冲液中。 注意：①微波炉加热时防止溶液沸腾溢出；
7、我们将所需要的引物序列记下来，可以发到专门的公司进行 引物制作。
DNA的PCR扩增
PCR技术具有快速、简便、灵敏等特 点，已被广泛地应用于分子生物学等各 个领域。本实验是对提取出的DNA进行 PCR扩增，反应后可以通过电泳检测片段 的扩增结果。通过此实验学习PCR反应的 基本操作步骤和实验原理。
从NCBI中获取目的片段
2：在出现的新的界面中找到Genomes，在这个门类下找到 Nucleotide，进入另一界面。
从NCBI中获取目的片段
3：在出现的新的界面中查找你所需要的基因序列，进入另一界 面。
从NCBI中获取目的片段
4：找一篇点进去即可看到DNA序列。
用primer5.0进行设计
2、分子筛效应 由于一定浓度的琼脂糖凝胶具有一定的孔径大小，不
同分子量大小的DNA分子，在凝胶中迁移时受到的
空间位阻是不同的，分子量小的DNA分子，受到的
空间位阻小，在凝胶中的迁移速度快，而分子量大的
DNA分子，所受到的空间位阻大，在凝胶中的迁移 速度就慢，这样经过一定时间的电泳，不同分子量大 小的DNA分子就得以分离，这就是所谓的“分子筛 效应”。
PCR引物的设计原则
引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异 性。 产物不能形成二级结构。 引物长度一般在15~30碱基之间。 G+C含量在40%~60%之间。 碱基要随机分布。 引物自身不能有连续4个碱基的互补。 引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物5′端可以修饰。 引物3′端不可修饰。 引物3′端要避开密码子的第3位。
实验材料
仪器：PCR仪，EP管，移液器，枪头； 主要试剂：DNA，引物，无菌双蒸水， dNTP，2×Easy Taq SuperMix。
实验内容
1、稀释DNA：取5μL提取的DNA于1.5mlEP管中，加45μL的无菌 双蒸水，做成工作液。 2、选用适当量程的移液器与枪头，在0.2mL离心管中依次加入以下 成分（总体积10μL）： ddH2O 3.0 μL 引物 R 0.5 μL 引物 F 0.5 μL DNA 1.0 μL 2×Easy Taq SuperMix 5.0 μL
琼脂糖凝胶的分辨率
凝胶浓度 0.5%
0.8% 1.0% 1.2% 1.5% 2.0%
分辨率（分离范围） 1,000-30,000 bp
800-12,000 bp 500-10,000 bp 400-7,000 bp 200-3,000 bp 100-1,500 bp
应用 未消化的基因组DNA
消化的基因组 DNA 质粒 DNA PCR产物和质粒 DNA PCR产物和质粒 DNA PCR产物
用primer5.0进行设计
下面复制我们需要的DNA序列到primer软件中。 1、打开primer5.0，点击File，New，DNASequence。
用primer5.0进行设计
2、把我们在NCBI上找的DNA序列粘贴进去（ctrl+v）。选择As Is，点击ok。
用primer5.0进行设计
3、点击primer，出现一个新的窗口，点击search。
用primer5.0进行设计
4、选择PCR Primers，Pairs。PCR product Size尽量选择范围 大一点，Primer Length在20上下浮动就可以。点击ok。
用primer5.0进行设计
5、出现新窗口，点击ok。出现Search Results。Rating有100 最好。然后点击1、2、3、4等进行选择。
琼脂糖凝胶的染色与观察
经过一段时间的电泳之后，不同分子量大小的DNA分子已经 相互分离，但是DNA分子在凝胶中无色无味，要想肉眼观察到， 就必须借助一定的染色技术，即采用EB（溴化乙锭）染色。EB具 有跟DNA中的碱基类似的平面结构，能够镶嵌到碱基对之间（见 图1）。在紫外灯的照射下，DNA所吸收的260nm的紫外光传递给 EB，以及EB本身在300nm、360nm吸收的射线，在可见光谱的红 橙区都将以590nm波长发射出来。这样，就能够在紫外灯下观察 到凝胶中DNA所在区域的条带（见图2）。 本实验用的是GelStain（10000×）染色液，有无毒的特点。
基因克隆特异PCR引物的设计
实验目的： 掌握PCR引物设计的基本原理
学习primer5.0的使用方法
实验原理
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷 酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时 应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这 个区域单链能形成二级结构，就要避开它。不要有聚 嘌呤或聚嘧啶存在。否则引物设计的就不合理。应重 新寻找区域设计引物。引物确定以后，可以对引物进 行必要的修饰，但3′端绝对不能进行任何修饰，因 为引物的延伸是从3′端开始的。