大鼠左心室肥厚模型研究概况

态，心肌胶原纤维形态、排列，成纤维细胞计数及左室心肌间 质形态学变化。透射电镜观察心肌细胞超微结构的改变： ４．５心肌生化指标 心肌细胞ｍＲＮＡ和蛋白质含量，心肌质膜Ｎａ＋，Ｋ＋一 ＡＴＰ和Ｃａ“，Ｍｇ“一ＡＴＰ酶活力，心肌膜内外Ｃａ“，Ｎａ＋， Ｋ＋，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、胶原含量，及心 肌单细胞内游离Ｃａ２＋测定。 ４．６影响心肌细胞肥厚的相关因子测定及有关基因表达
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蛋白质含量，Ｃａ”浓度、心肌胶原浓度（羟脯氨酸含量）、 ＰＫＣ及ＭＡＰＫ活性、ｃＡＭＰ含量、ＡＮＦ、５一ＨＴ，血浆ＥＴ，ＮＯＳ， ＮＯ，ＳＯＤ，ＭＤＡ，ＲＴ—ＰＣＲ法测定心肌Ｉ型、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 的表达。 原位杂交测定左心室原癌基因ｃ—ｆｏｓｍＲＮＡ表达，及 ＴＧＦ—ｐ基因表达。免疫组化测定心室肌ｃ—ｌｏｓ蛋白的表 达。ＲＴ－－ＰＣＲ法测定心肌ｒａｓ原癌基因及Ｐ。ｍＲＮＡ表达。 ４．７培养心肌细胞观察指标 心肌细胞、成纤维细胞计数及心肌细胞直径面积测定， 搏动率、凋亡率，细胞总蛋白含量，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），ＮＯ， 一氧化氮合酶（ＮＯＳ），抗氧化酶（ＳＯＤ，ＧＳＨ—Ｐｘ，ＧＳＨ）和 ＭＤＡ测定。采用３Ｈ一亮氨酸渗入法测定心肌细胞蛋白质合 成速率。 放射免疫法测定心肌及血浆肾素（ＰＲＡ）、Ａｎｇ Ｉ和Ａｎｇ Ⅱ含量，ＲＴ－－ＰＣＲ法测定ＡＴ。受体ｍＲＮＡ，定量逆转录聚合 酶链反应（ＰＲＴ—ＰＣＲ）测定ＡＴ，ＡｍＲＮＡ、ＡＴ。ＢｍＲＮＡ含量，免 疫组化测定ＡＴ．受体蛋白。
心肌肥厚是心脏对慢性压力或容量超负荷产生的靶器 官反应，见于高血压心脏病、肺动脉高压及慢性充血性心力 衰竭等。心肌肥厚的基本变化不仅是心肌细胞的肥大与增 生，也有非心肌细胞如成纤维细胞、胶原细胞、血管细胞及蛋 白质、酶等的生成、增殖与增生，伴有心室形态与结构的改变 和心肌机械功能的减退等。心肌肥厚中最常见的是高血压 病引起的左室肥厚（ＬＶＨ），为高血压的主要靶器官损害之 一。中医学中虽无心肌肥厚的名词，但有“阳化气，阴成形”， “阳生阴长”等论述。现代研究表明，ＬＶＨ是一种极其重要 的、独立的心血管危险因素，可使心肌缺血、心律失常、心力 衰竭和淬死的几率增加６—１０倍¨。３１。所以有关左室肥厚的 动物模型研究有助于了解本病的病因，病机，对探讨其诊治 办法，开发有效的防治药物有重要意义。现就近几年有关左 心室肥厚的动物模型研究进行简单总结，以供大家参考。
ｐｍａｘ）。测定结束后，可观察心肌肥厚情况，并观察心肌胶原
网络重构或分离心肌细胞，测定心肌细胞ｃａ“浓度等Ｍ，”ｊ。 ３．２离体心肌细胞肥厚模型… 无菌条件下取出生后２～４天ｓＤ大鼠心脏，将心室肌放 人Ｈａｎｋ’Ｓ液中冲洗３次后，剪成小块（约１，ｎｍ２），用０．６％的 胰酶在磁力搅拌器的搅拌下分散细胞，控制温度在３７℃，每 １０分钟收集一次细胞，离心二次后将全部细胞置于含有
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肌重量即开始增加，３～４个月血压即已稳定升高，心肌肥厚 亦加重。ＳＨＲ心肌肥厚以ＬＶＨ为主，但亦可能伴发肺动脉 高压及右心室肥厚。ＳＨＲ心肌肥厚心脏超微结构改变，ｊ三要 为心肌细胞线粒体肿胀，形态大小不一，肌原纤维排列紊乱， 细胞膜增大，染色体增多等。如果研究药物的预防作用，则 需在ＳＨＲ出生４周开始给药，如果研究药物逆转肥厚的效 果，则需在ＳＨＲ出生后１０～１４周龄给药，可以持续给药９— １２周。本模型与临床高血压的病理生理过程最接近，是研究 人类高血压心肌肥厚的重要动物模型。但是ＳＨＲ需要长期 饲养，约４０周。饲养条件要求较高，饲料配比有特殊要求。 ２．４容量负荷性心肌肥厚模型坤川
４观察指标的选择范围∞１ 在建立ＬＶＨ动物模型的基础上，可根据实验目的要求及 仪器设备条件，选择适合的观测指标∞１：
４．１
心脏血流动力学的指标 主动脉血压（ＡＰ）、ＬＶＳＰ，±ｄｏ／ｄｔ，ＬＶＥＤＰ，并根据公式推
算出舒张期内压下降时间常数（ｔ值），左心功能参数；采用 ＱＸＧ—ＩＶＢ型左右心功能同步检测分析仪测定左心排血指数 （ＬＣＩ）。 ４．２心指数及左心室肥厚指数 心脏重量（ＨＷ）、心指数（心脏重量／体重，ＨＷ／ＢＷ），左 心室重量（ＬＶｗ）、左心室肥厚指数（左心室重量／体重， ＬＶＷ／ＢＷ）、芹心窜肇相对厚度（ＬＶＷＴ）。 ４．３电生理学指标
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・综述・
大鼠左心室肥厚模型研究概况
赵剑华，胡春阳，陈林庆（综述）
（甘肃中医学院，甘肃兰州７３００００）
摘要：对近几年有关左心室肥厚的动物模型研究资料整理、总结，主要有压力负荷型、容量负荷型、肾性高血压型等大鼠心肌 肥厚模型，同时也归纳了离体心肌细胞肥厚模型研究方法，以期为左心室肥厚的病因病机研究、临床诊疗方法及开发有效的防 治药物提供理论参考。 关键词：大鼠；左心室肥厚；模型
体重２００９左右ｓＤ大鼠，雌雄兼用，实验室饲养２周后，
用２．５％氯胺酮２０ｍｇ／ｋｇ腹腔注射麻醉，背位固定，手术野剪
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毛，消毒皮肤，腹部正中线切口，切除左。肾，不触及右肾，术后 ｌ周给大鼠皮下注射去氧皮质酮５ｒａｇ／ｋｇ体重（溶于吐温一 ８０，羟甲基纤维素钠和１％氯化钠中），每周７次，共９周。常 规饲料饲养，并给１％氯化钠溶液自由饮用，每周测一次空腹 体重及清醒状态下尾动脉血压。术后５周，大鼠血压达 １６０ｍｍＨｇ以上为高血压。术后８周，大鼠左心室已肥厚。如 为预防ＬＶＨ，则于ＬＶＨ已稳定后的第９周给药，给药持续 ９周。 大鼠给予去氧皮质酮加盐水，形成容量过负荷高血压心 肌肥厚模型，属内分泌型（低肾素型）高血压肥厚型，以心脏 容积增大为特征，属离心性肥厚状态。该模型建立所需时间 较长，费用较大；为使大鼠血压升高，实验过程中给予１％氯 化钠。 ２．５大鼠动静脉造瘘致容量超负荷模型１９’”’ 大鼠麻醉后开腹，分离腹主动脉和下腔静脉用血管夹阻 断血流。用９号针头斜向上穿刺静脉壁，继续进针刺静一动 脉联合壁。退出针头，９／０线缝合静脉壁的创口。松开血管 夹，下腔静脉变红则证实造瘘成功。动静脉造瘘后，动脉血 流入下腔静脉，回心血量增加，增加心脏容量负荷，最终导致 心肌肥厚的发生。 ２．６异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚模型。１１’”’ 异丙肾上腺素０．０２ｒａｇ／ｋｇ，皮下注射每日２次，连续６周 可引起左心室肥厚，这一作用与其激活肾上腺素受体，增加 心肌细胞合成代谢以及Ｃａ２＋超负荷有关。 ２．７甲状腺激素诱导大鼠左心室肥厚模型¨４’”１ 大量甲状腺素能提高人体基础代谢率，增强交感神经活 动，增加心脏的负荷。机体高甲状腺素状态，可促进心肌细 胞ｍＲＮＡ和蛋白质的合成，从而使心肌肥厚。给大鼠每天 ｉｐ．Ｌ一甲状腺素１ｍｇ／ｋｇ，连续７天。
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１０％胎牛血清和９０％ＤＥＭＥ培养基的ｌＯＯｍｌ培养瓶中，送入 二氧化碳培养箱（５％ＣＯ：和９５％空气）中培养６０～９０分钟， 根据差率贴壁法区别心肌细胞和非心肌细胞，并加入Ｂｒｏ— ｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｎｅ以防残留非心肌细胞的生长。将生长于培养板 上静止了４８小时的心肌细胞的培养液倒掉，加入不同浓度 的刺激剂如ＥＴ，Ａｎ９１Ｉ，Ｌ—ＮＡＭＥ（ＮＯ合酶抑制剂），ＮＥ，Ｌ一 甲状腺素，内皮生长因子及胰岛素等，模拟各种致肥厚因子 在体体液因素的状态以形成心肌细胞肥厚，同时加入［３Ｈ］ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ和［３Ｈ］Ｌｅｕｃｉｎｅ，用液闪仪测量，以分析ＤＮＡ和蛋白 的合成，同时可运用成像系统和计算机处理，测定心肌细胞 体积的大小，以判断心肌细胞肥厚的程度。 该技术要注意防止污染和非心肌细胞的混杂，每孔心肌 细胞数约为５×１０４个。该模型可排除机体其它因素的干扰， 可观察药物对心肌细胞的直接作用。但分析药物作用的机 制时，应考虑到离体心肌细胞肥厚与在体心肌细胞肥厚有一 定差异。
２．３
ＳＨＲ心肌肥厚模型１６ ＳＨＲ出生后血压随鼠龄的增长而不断升高，４周龄时心
２动物模型 ２．１压力负荷性心肌肥厚模型”。１ 体重２００９左右的大鼠，雄雌兼用，戊巴比妥钠（３０ｍｇ／ｋｇ 体重）腹腔注射麻醉，背位固定于手术台，手术野剪毛，皮肤 消毒，腹正中切口，打开腹腔。在左肾动脉分叉处上方分离 腹主动脉，将腹主动脉与７号或９号注射器针头（磨去针尖） 共同结扎（３一。号丝线），然后抽出注射器针头，使该部位动 脉形成狭窄（狭窄程度６５％～７０％），然后逐层缝合腹部切 口、关腹。假手术组除不用丝线结扎腹主动脉外，其余操作 步骤相同。术后每天用青霉素５万ｕ／只肌内注射一周。一 般术后３～４天大鼠心肌开始肥厚，２～３周达稳定高峰。 该模型通过缩窄部分腹主动脉，造成心脏后负荷增加而
导致心肌肥厚，此外，由于肾血流量相对减少，血管紧张素Ⅱ 等体液因素也参与心肌肥厚形成。 该模型形成心肌肥厚时间较短，操作方便，重复性好，应 用较多。但是术后早期动物死亡率较高（约２０％～３０％），可 能与急性心功能不全有关。
２．２
肾型高血压大鼠心肌肥厚模型拍一１ 体重２００９左右的大鼠，雄雌兼用，戊巴比妥钠（３０ｍｇ／ｋｇ
肥厚的作用［Ｊ］．中ｌｑｆ｛Ｉ药杂忠，２０００，２５（ｔ０）：６２２． ［６］徐叔云，卞如濂，陈修主编．药胖’擎：实验方法学［Ｍ］．第ｉ版．北 京：人民¨生Ｈ｛版社，２００２，ｔ０２６一１０３０ ［７］ＯｈｋｕｓａＴ，ＨｉｓａｍａｔｓｕＹ，ＹａｎｏＭ，ｃｔａｌ．Ａｈｅｒｅｄｃａｒｄｉａｃ
ｓａｒｃｏｐｌａｓｍｉ ａｃｈｙ ｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｖｅｒｌｏａｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
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