高效液相色谱样品预处理步骤
高效液相色谱仪流动相及样品的预处理
第２ ３期
Ｓ ＩＮ Ｅ＆Ｔ Ｃ Ｎ Ｌ ＧＹＩ Ｆ ＭＡ Ｉ ＣＥ Ｃ Ｅ Ｈ Ｏ Ｏ ＯＲ ＴＯＮ Ｎ
Ｏ环保论坛０
科技信息
高效液相色谱仪流动相及样品的预处理
武 开 业
（ 林市 环境监 测总 站 榆
陕西
榆林
７９０ ） １ ０ ０
【 摘 要】 液相 色谱法是一种快速有效 的有机化合物分析技术 ， 在分析测定有机化合物方 面， 以其快速 、 灵敏 、 选择性好的特点， 倍受分析 工 作者青睐， 是环境监测、 卫生防疫、 油化工、 石 食品生产等行业作为水质分析的标 准仪器。 是， 但 由于液相 色谱分析技 术涉及 的样品种类繁多、 样 品组 成 及其 浓度 复 杂 ， 品 物理 形 态 多 变 ， 液相 色谱 仪 的 正 常分 析 测 定 造 成 一 些干 扰 因素 ， 果 不 注 意 流动 相 及 样 品 的预 处理 ， 对 日常的 样 对 如 会
３ 固 相 萃取 Ｓ Ｅ 技 术 Ｐ
固相 萃 取 技 术 是 基 于 同 液 相 色 谱 同 样 技 术 开 发 的分 离 复 杂 样 品 高 效 液 相 色谱 法 是 在 经 典 色谱 法 的基 础 上 ． 引用 了气 相 色 谱 的理 ０ ８ ％的成 本 及 工 作 量 在 论 ， 技 术 上 ， 动相 改 为 高 压 输送 （ 高输 送 压 力 可 达 ４９１７ ａ； 在 流 最 ． ０Ｐ ） 色 中 的不 同组 份 的 一 种 方 法 ，一 般 实 验 室 中 ６ — ０ 若 降 谱 柱 是 以 特殊 的方 法 用 小粒 径 的填 料 填 充 而成 ． 而 使 柱 效 大 大 高 于 样 品制 备 上 ． 采 用 固相 萃 取 技 术 可 以 加 速 样 品 的 制备 时 间 ， 低 样 从 经典液相色谱 （ 每米塔板数可达几万或几 十万 ） 同时桂后连有高灵敏 品前 处 理 的 成本 ， 高 分析 的 准确 性 及 回收 率 ， 容 易 自动 化 ， 少样 ： 提 更 减 度的检测器， 可对 流 出物 进 行连 续 检 测 。 品处 理 步 骤 ． 低 对 不 稳定 样 品的 影 响 。 降 高 效 液相 色 谱 仪 主 要 由 色谱 泵 及 控 制 器 、 样 器 、 谱 柱 、 测 器 进 色 检 各 种 固相 萃 取 小柱 可 以分 为 以下 三 类 ：
高效液相色谱操作步骤
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化学键合相
利用化学反应将不同的有机官能团通过共价键键 合到载体硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相。 种类 非极性键合相：
如键合C18、C8、苯基等，其中十八烷（ODS或 C18）键合相是常用的代表，可完成HPLC分析任 务的80%。 中等极性键合相： 如键合醚基，可分离能形成氢键的化合物（如酚 类）
液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
+ 分离效率高
若用塔板理论数来表示色谱柱的效率，每米柱长可达 几千至几十万的塔板数，特别适用于极复杂混合物的 分离，且通常收率、产率、和纯度都较高。
+ 操作模式多样
可通过选择不同的操作模式，以适应不同样品的分离。
+ 灵敏度高
可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
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色谱图相关术语: 峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差(σ)(Standard Error):0.607倍峰高处所对 应峰宽的一半
拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰
前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰
鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰
❖ 化学稳定性好
❖ 低粘度 若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不
利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙
腈等。
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洗脱方式
❖ 等度洗脱 用恒定配比的溶剂系统洗脱
❖ 梯度洗脱 在一个分析周期内，按一定程序不断改 变流动相的浓度配比。
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化学键合相
利用化学反应将不同的有机官能团通过共价键键 合到载体硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相。 种类 非极性键合相：
2020药典关于0512 高效液相色谱法标准 公示稿
2020药典关于0512 高效液相色谱法标准公示稿一、引言本标准规定了采用高效液相色谱法对某物质进行检测的方法。
本标准适用于药品、食品和化妆品等领域的物质分析。
本标准是在2020药典的基础上制定的，旨在提高检测的准确性和可靠性，为相关行业提供更加精确的检测依据。
二、仪器和试剂1. 仪器：高效液相色谱仪，配备有紫外检测器。
2. 试剂：甲醇、乙腈、水等色谱纯度试剂，以及其他所需试剂。
三、实验步骤1. 样品准备：将待测样品进行预处理，使其符合高效液相色谱分析的要求。
2. 流动相制备：根据需要选择合适的流动相，并进行过滤和脱气处理。
3. 色谱柱选择：根据待测物质的性质选择适宜的色谱柱。
4. 检测条件设定：根据待测物质的性质，设定合适的流速、检测波长等参数。
5. 进样：将处理好的样品注入高效液相色谱仪中进行分析。
6. 数据处理：采集色谱图，并使用相关软件进行数据分析和处理。
四、结果计算和表示根据高效液相色谱图，对峰面积进行积分，并计算待测物质的含量。
结果表示应符合相关规定，如单位、有效数字等。
五、精密度和准确度1. 精密度：在同一实验条件下，对标准品进行多次测定，计算其相对标准偏差。
2. 准确度：采用已知纯度的对照品进行加标回收实验，计算回收率。
六、溶液稳定性考察待测物质在一定时间内的稳定性，以确保检测结果的可靠性。
可对放置不同时间的样品进行测定，观察其含量变化情况。
七、对照品纯度要求用于本方法检测的对照品应符合一定的纯度要求，以确保结果的准确性。
建议使用高纯度对照品进行测试和分析。
八、测试数据及图谱1. 测试数据：记录每次测定的峰面积、浓度等数据，以便后续数据处理和分析。
2. 图谱：记录色谱图，并注明各峰对应的物质。
九、检验规则1. 检验批次：同一批次样品应作为一个检验批次，按照相同的检测方法进行检测。
2. 异常值的处理：对于异常值，应进行复核或重新测定，以确保结果的准确性。
3. 检验报告：检验报告应包括样品信息、检测方法、结果数据等内容，并由检验人员签字或盖章。
液相色谱分析纯化样品前处理
液相色谱分析纯化样品前处理液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种广泛应用的分离与分析技术，已成为现代分析化学中必不可少的手段之一、液相色谱的样品前处理是指在样品进入液相色谱仪进行分析之前，为了提高分析结果的准确性和灵敏度，需要对样品进行一系列的处理步骤。
1.样品预处理样品预处理是指将样品转化为液相色谱合适的形式，消除样品中的固体颗粒、胶体颗粒和大分子物质。
常用的样品预处理方法包括离心、过滤、稀释等。
离心是将样品置于离心管中，以离心力使它们沉淀到离心管底部，从而分离固体颗粒和胶体颗粒。
过滤是将样品通过滤膜或滤纸，去除固体颗粒和胶体颗粒。
稀释是将样品中的高浓度物质通过加入适量的溶剂进行稀释，以减少样品中物质的浓度。
2.样品的萃取和浓缩样品的萃取和浓缩是将样品中目标物质与其他物质分离的重要步骤。
常用的方法有固相萃取、液液萃取和微量浓缩等。
固相萃取是利用固相吸附剂将目标物质从样品中吸附出来，然后用溶剂洗取目标物质，最后将溶液注入液相色谱进行分析。
液液萃取是利用两种互不溶的溶剂相，将目标物质从一个相中转移到另一个相中。
微量浓缩是将大体积的样品溶液经过一系列的萃取和浓缩步骤，将目标物质的浓度提高到适合液相色谱分析的范围。
3.样品的净化和纯化样品的净化和纯化是去除样品中的干扰物质，提高色谱分析结果的准确性和灵敏度的关键步骤。
常用的方法有凝胶过滤、离子交换、分子筛等。
凝胶过滤是将样品溶液通过特定孔径大小的凝胶，去除分子量较大的物质。
离子交换是利用离子交换树脂将样品中的离子物质与树脂上的离子交换，从而去除样品中的离子物质。
分子筛是利用有机聚合物、硅胶等材料对样品进行分子大小的筛选，去除样品中的大分子物质。
总之，液相色谱分析纯化样品前处理是提高分析结果准确性和灵敏度的重要步骤，其中包括样品预处理、样品的萃取和浓缩、样品的净化和纯化等步骤。
通过合理选择和组合上述处理方法，可以有效地去除样品中的杂质，减少色谱柱的堵塞和磨损，提高液相色谱的分离效果和分析结果的准确性。
高效液相色谱制样
高效液相色谱制样高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，缩写为HPLC）制样是指在对分离物质进行谱图检测前，将样品中的目标物质通过一系列方法进行富集、精制处理，以达到更好的分离效果。
HPLC是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术，在生产和科研中被广泛使用。
HPLC制样的基本流程主要包括样品的预处理和HPLC分离之前的样品富集处理。
样品预处理是指将样品中可能存在的干扰物质去除，以便于后续的分离和检测。
而HPLC分离前的样品富集处理，则是指将目标物质从复杂的样品基质中富集纯化，以提高检测的灵敏度。
样品预处理主要包括：1. 样品的前处理：如样品的粉碎、研磨、混匀等步骤，以确保样品中的目标物质均匀分布。
2. 样品的净化：如样品的过滤、离心等步骤，以去除杂质物质，确保样品的纯度。
3. 样品的化学转化：如样品的酸碱调节、氧化还原、酶解、蒸馏等步骤，以使目标物质得到更好的稳定性和纯度。
HPLC分离前的样品富集处理主要包括：1. 固相萃取（solid-phase extraction，简称SPE）：将样品溶液通过固相柱，以富集目标物质，去除干扰物质。
2. 液-液萃取（liquid-liquid extraction，简称LLE）：利用样品中组分的亲疏水性差异，采用萃取剂与样品进行混合萃取分离。
3. 气相萃取（gas chromatography，简称GC）：将样品挥发成气态，通过气相柱，以分离目标物质。
4. 薄层色谱（thin-layer chromatography，简称TLC）：利用样品在薄层分离柱中的迁移差异，以分离目标物质。
总之，HPLC制样是HPLC分析中非常关键的步骤，通过对样品的预处理和富集处理，可以最大限度地提高分离和检测的效果，使得检测结果更加准确、可靠。
沃特斯高效液相色谱仪数据处理流程
沃特斯高效液相色谱仪数据处理流程一、数据采集数据采集是沃特斯高效液相色谱仪数据处理的首要步骤。
色谱图中，每个色谱峰都代表某种特定的化合物。
为了获得这些数据，我们需要对色谱图进行数字化处理。
通常，沃特斯高效液相色谱仪配备自动进样器，能够连续不断地将样品引入色谱柱，并在设定的时间间隔内进行数据采集。
二、数据预处理数据预处理是对原始数据进行整理、编辑和初步筛选的过程，以便于后续的基线校正、峰识别与分割等步骤。
数据预处理可能包括以下操作：去除噪声、平滑处理、填充缺失值、归一化处理等。
通过这些处理，可以使得数据更易于分析和理解。
三、基线校正基线校正是色谱数据处理中重要的一步，它可以消除仪器背景信号的影响，提高峰识别的准确性。
基线校正通常采用以下几种方法：多项式拟合、样条插值、迭代算法等。
在校正过程中，需要注意避免过度校正导致基线漂移的问题。
四、峰识别与分割峰识别与分割的目的是确定每个色谱峰的起始和结束位置，以便于定量和定性分析。
沃特斯高效液相色谱仪通常采用自动峰识别和分割算法。
这些算法基于色谱峰的形状和大小来识别峰的位置，如基于梯度变化的分割算法、基于阈值的分割算法等。
在峰识别与分割过程中，可能需要手动调整，以确保准确性。
五、定量与定性分析定量和定性分析是在确定色谱峰的位置后进行的。
定量分析是通过对每个色谱峰的面积进行积分，然后根据标准品的浓度和响应因子计算待测物的浓度。
定性分析则是通过比较已知标准品的保留时间和光谱信息来确定未知样品的成分。
在进行定量和定性分析时，需要注意以下几点：1.必须使用标准品进行准确校准，以确保结果的准确性；2.应选择响应因子已知的标准品进行定量分析，以减小误差；3.对于定性分析，应尽量获取多种类型的标准品以确定未知样品的成分；4.考虑到不同批次间的差异，应该采用内控样以增加结果的可靠性。
六、数据存储与备份在数据处理完成后，应该将原始数据和分析结果存储并进行备份。
备份的数据可以用于以后的分析和复查，避免数据的丢失。
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。
下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。
其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。
最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。
二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。
首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。
其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。
最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。
三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。
常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。
在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。
此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。
四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。
根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。
在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。
此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。
五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。
首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。
其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。
最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。
注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
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高效液相色谱样品预处理步骤
1. 样品准备
在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。
因此，在样品准备过程中需要注意以下几点：
（1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化；
（2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡；
（3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。
2. 样品过滤
在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。
通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。
3. 样品衍生化
在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。
衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合
物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。
4. 样品稀释
在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。
过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。
通常使用的的是溶剂或水进行稀释。
5. 样品进样
在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。
在进行进样时，需要注意以下几点：
（1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载；
（2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。
6. 样品分离
在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。
通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。
在进行分离时，需要注意以下几点：
（1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离；
（2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。
7. 检测器检测
在分离后的各个化合物通过色谱柱流出时，需要使用检测器进行检测。
常见的检测器有紫外可见光检测器、电导检测器、荧光检测器等。
检测器可以提供样品的信号，并记录下各个化合物的在色谱图中的保留时间。
8. 数据处理
在检测器检测完成后，需要对数据进行处理。
通常使用的是色谱工作站对数据进行收集、处理和分析。
色谱工作站可以将色谱图上的信号转化为数字信号，并通过软件对数据进行定性和定量分析。