血清中盐酸二甲双胍含量测定方法的建立和考核
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用王长连1,刘亦伟1,黄品芳1关键词: 盐酸二甲双胍;血药浓度;高效液相色谱法中图分类号: R927.11 文献标识码: B 文章编号: 1672 4194(2007)06 0592 02收稿日期:2007 05 16 修回日期:2007 08 29作者单位:福建医科大学附属第一医院药学部,福州 350005作者简介:王长连(1954~),男,主任药师A:标准溶液[盐酸二甲双胍(M et)+尿苷(Uri)];B:空白血浆;C:标准品+空白血浆(含M et 500ng/m L);D:生物样品.图1 二甲双胍和内标尿苷H PL C 色谱图Fig 1 Chromato gr am of metfo rmin and inter nal standard(ur idine)盐酸二甲双胍(metfo rmin hydro chlor ide,M et)是临床常用的口服双胍类降糖药,近年有一些缓、控释制剂上市。
为了探讨其体内过程与临床疗效,笔者参考有关文献并加以改进[1 4],在实验室建立高效液相色谱法测定M et 血药浓度,报道如下。
1 材料和方法1.1 材料 高效液相色谱系统(包括510泵,996二极管阵列检测器,7725i 进样器,Empo wer 数据处理系统,美国Waters 公司);电子天平(A E 240,上海梅特勒 托利多有限公司);旋涡混合器(XW 80,上海医科大学仪器厂);石英亚沸高纯水蒸馏器(SY Z 550,金坛市丹阳门石英玻璃厂);台式高速离心机(T G L 16G ,上海医用分析仪器厂)。
M et 标准品(美国Sigma 公司,批号113K 0931);尿苷(U r i)对照品(上海化学试剂站分装厂,批号950906);IPR B 8离子对色谱试剂(天津化学试剂二厂,批号20070510);甲醇(国药集团上海化学试剂有限公司,批号T 20060930,色谱纯),实验用水为三蒸水。
盐酸二甲双胍片含量测定方法的探讨
２ 方 法 与 结 果
２ １ 样品含 量 测定 ．０
取 ３批银 黄 片 ， 上述方 法制 按
２ １ 对 照品溶 液 的制 备 精 密称取绿 原酸对照 品 １ ． ０ ｎ ， ５ 棕色量 瓶 中， 水 溶解并 稀 释至 刻度 ， ａ 置 ０ｎ ｇ 用 摇 匀， 得浓度为 ２０ｎｇ・ ０ ａ Ｌ 的对照品贮备 液 。精密量取 １ ｎ 置 １ 量瓶 中， ， ０ｎ 加水 至刻度 ， 摇匀 ， 即得 。 ２ ２ 供 试 品溶 液 的制 备 ． 取本品 １ ０片 ， 去 包 衣 ， 除 精密称 定 ， 细 ， ０ ３ ， 密称 定 ， ５ 研 取 ． ２ｇ 精 置 ０ｍＬ棕 色 量瓶 中 ， 水适量 ， 声处 理 ２ ｎ 放 冷 ， 水 至刻 加 超 ０ｍｉ ， 加 度 ， 匀， 摇 滤过 。精 密量取 续滤 液 ２ｍＬ， １ 置 ０ｍＬ棕 色量瓶 中 ， 水至 刻度 ， 匀 ， 加 摇 即得 。 ２ ３ 色谱 条 件 与 系统 适 用 性 色 谱 柱 ： ｉ ｏ ｅｙ ． Ｄ ｓ ｖ ｒ ｃ Ｃ８ （ ５ ｌ 柱 ２ ０ｍｍ×４ ６ｍｍ， ｍ） 流动 相 ： ． ５“ ； 甲醇一 冰 水一 醋酸一 乙胺 （ ５： ５：１： ． ） 检测 波 长 ： ２ ｍ； 三 １ ８ ０３ ； ３４ｎ
１ 仪 器 与试药
别 进样 测 定 ， 算 得 平 均 回收 率 为 １ ０ ４ ， Ｄ 为 计 ０ ． ＲＳ
１ ７ （ 一９ ， 果见 表 １ ． ）结 。
表 １ 绿 原 酸 回收 率 测 定 结果
１ １ 仪 器 Ａｇｌｎ １ ０型 高 效 液 相 色 谱 仪 ， 备 ． ｉ ｔ１ ０ ｅ 配
HPLC法测定人血浆中盐酸二甲双胍的浓度及其在药动学研究中的应用
HPLC法测定人血浆中盐酸二甲双胍的浓度及其在药动学研究中的应用曲斌;杭太俊;江丽【期刊名称】《中国新药杂志》【年(卷),期】2004(13)7【摘要】目的:建立了人血浆中盐酸二甲双胍浓度的反相离子对高效液相色谱测定法,研究复方盐酸二甲双胍片在中国男性健康志愿者体内盐酸二甲双胍的药动学行为,评价其生物利用度和生物等效性.方法:血浆样品经高氯酸沉淀蛋白,二氯甲烷脱脂后直接进样.流动相为甲醇-0.015mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.001mol·L-1十二烷基磺酸钠,0.02mol·L-1氢氧化钾调节pH 5.2)(40:60),检测波长232nm,流速1mL·min-1.采用双交叉随机实验设计,20例受试者交叉口服复方盐酸二甲双胍试验片2片(每片含盐酸二甲双胍250mg和格列本脲1.25mg)或对照制剂盐酸二甲双胍片(每片含盐酸二甲双胍500mg)与格列本脲片(每片含格列本脲2.5mg)各1片,服药后0.5～24h内间隔取血.结果:HPLC测定盐酸二甲双胍在20～2 000μg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 8),最低定量限20μg·L-1,日内及日间精密度均小于10%.口服试验和对照制剂后,盐酸二甲双胍的t1/2,Tmax,Cmax分别为(3.84±0.61)h和(4.26±0.96)h,(2.0±0.7)h和(2.1±0.9)h,(1402.4±349.2)μg·L-1和(1 329.7±315.4)μg·L-1.以等剂量的盐酸二甲双胍与格列本脲片为对照,由AUC0～24计算,复方盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的相对生物利用度为(101.1±28.5)%.结论:本方法专属性强,灵敏度高.药动学试验结果表明试验复方片与联合使用的对照片盐酸二甲双胍生物等效.【总页数】4页(P637-640)【作者】曲斌;杭太俊;江丽【作者单位】中国药科大学药物分析教研室,南京,210009;中国药科大学药物分析教研室,南京,210009;中国药科大学药物分析教研室,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R977.15【相关文献】1.HPLC法测定人血浆中甲硝唑浓度及其药动学研究 [J], 郭跃龙;梁素娥2.HPLC法测定人血浆中万古霉素浓度及其药动学研究 [J], 刘胜男;王佳庆;梅升辉;赵志刚3.HPLC法测定人血浆中柳氮磺吡啶与磺胺吡啶浓度及其药动学研究 [J], 王红梅;蒋学华;宋林;何毅;王凌4.HPLC-荧光法测定人血浆中卡维地洛浓度及其药动学研究 [J], 顾世芬;肖宙;代宗顺;陈汇5.HPLC法测定人血浆中舒必利浓度及其人体药动学和相对生物利用度研究 [J], 袁洞君;阳利龙;祝文兵;何周康因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
探讨高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍的含量
探讨高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍的含量
耿玉涛
【期刊名称】《糖尿病新世界》
【年(卷),期】2017(020)006
【摘要】目的是为了建立一种新的可以测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量的高效液相非接触电导检测法.方法用非接触电导检测器进行实验操作,采用C18色谱柱(4.6×250 mm),流动相为乙腈(0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调至pH=3.5)(35:75),流速为1.0 mL/min、进样量是10μL、柱温为35℃.结果盐酸二甲双胍进样量在0.10~1.04μg范围内呈现良好线性关系,平均回收率为
101.00%;RSD为0.26%.结论该法方便快捷、灵敏度高,为二甲双胍的含量测定提供依据.
【总页数】2页(P85-86)
【作者】耿玉涛
【作者单位】大庆市中医医院药剂科,黑龙江大庆 163311
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.微流控芯片非接触电导法测定药品中的精氨酸布洛芬含量 [J], ALAA ALHAKIMI;陈缵光
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光
3.高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍 [J], 肖羽;尹玮璐;陈安丽;陈缵光
4.高效液相法测定清瘟解毒口服液中连翘苷的含量 [J], 杨修镇;张呈军;陈玲
5.高效液相色谱非接触电导检测法测定头孢噻肟钠的含量 [J], 刁富城;周勰;陈缵光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量
ＨＰＬＣ法测定盐酸二甲双胍片的含量目的：用HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量。
方法：采用Diamond C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液含0.015 mol/L高氯酸（pH3.0）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：218 nm，以峰面积计算。
结果：在0.1~0.3 mg/ml范围内盐酸二甲双胍片的峰面积和浓度呈良好的线性关系，r=0.999 4。
结论：本法简便、快捷、灵敏，可作为盐酸二甲双胍片质量控制的有效方法。
[Abstract]Objective:To establish an HPLC method for the content determination of Metformin Hydrochloride Tables. Methods:Analytical column was Diamond C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid, the flow rate was 1.0 ml/min,UV detection was set at 218 nm and the peak area was calculated.Results:The linear range of metformin hydrochloride was 0.1~0.3 mg/ml,r=0.999 4.Conclusion:The method is simple，rapid and accurate.It can be used for the quality control of Metformin Hydrochloride Tablets.[Key words]HPLC;Metformin hydrochloride;Content determination盐酸二甲双胍是一种双胍类口服降糖药，用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗。
HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片的含量
HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片的含量
陈秀琳
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2013(25)12
【摘要】目的建立盐酸二甲双胍缓释片[1]含量测定的方法.方法色谱柱为Welch Materials C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为含0.1%庚烷磺酸钠和0.4%三乙胺的0.1mol·L-1 磷酸二氢钾缓冲溶液(用磷酸调pH至3.6)-甲醇(85:15);流速:1.0mL·min-1;检测波长为233nm.结果在4.104μg·mL-1～41.04μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.3%,RSD为1.2%(n=9).结论该方法操作简便、准确可靠.
【总页数】2页(P108-109)
【作者】陈秀琳
【作者单位】福建省药品检验所,福州,350001
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片的含量 [J], 洪志慧;刘毓文
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HPLC法测定减肥中成药中盐酸二甲双胍的含量
本实验 以高效液相色谱法初步建立减肥中成药中盐酸二甲
双胍 的分 析 方法 ，得 到 以 下结 论 ：盐 酸 二 甲双 胍浓 度 在 １ ０ ５ ． ６ — １ ０ ５ ６ ｔ ￣ ｇ ， ／ ｍ ｌ 范围内线性关系良好， ｒ ＝ ｏ ． ９ ９ ９ ９ ， 平均回收率 ｌ Ｏ １ ． ６ ２ ％， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ Ｉ ． １ ８ ％（ ｎ ＝ ６ ） 。 本法简便 、 快捷 、 准确； 由于市场上同类产品较 多， 无法逐一进行试验， 本法有待进一步验证。 所购买的某品牌减 肥 中成药 未检 出盐 酸二 甲双 胍 。
内蒙古中医药
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 测定 减 肥 中成 药 中盐酸 二 甲双 胍 的含量
彭 冉
摘 要： 目的 ： 通 过 高效液 相 色谱 法 建立 减肥 中成 药中盐 酸二 甲双 胍 的分析 方法 。 方法： 采 用 色谱 柱Ｃ 。 柱， 流 动相Ｏ ． Ｏ ５ 珊 Ｄ ｌ ， 瞵 酸二 氢钾 溶 液（ 用磷 酸调ｐ Ｈ ＆３ ． Ｏ ） 一 乙腈（ ７ ５ ： ２ ５ ） ； 流速 １ ． ０ ｍ Ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ； 检 测 波长 为２ １ ８ ｎ ｍ。柱温 ： ２ ５ ℃； 进 样 量２ Ｏ 。结果 ： 盐 酸二 甲双 胍 浓度 在 ｌ ０ ５ ． ６ — １ ０ ５ ６ ． ｇ ， ｎ １ ｌ 范围 内线性 关 系良好 ， ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ， 平 均 回收 率 １ ０ １ ． ６ ２ ％， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ Ｉ ． １ ８ ％（ ｎ ＝ ６ ） 。结 论 ： 本 法 简便 、 快捷 、 准确 ， 可用 于 中成 药复 杂化 学环境 中盐 酸二 甲双胍 的定 性及 定量 分析 。 关 键词 ： 减肥 中成 药 ； 高效液 相 色谱 法 ； 盐 酸二 甲双胍 中 图分类 号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献 标识 码 ： Ｂ
探讨高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍的含量
探讨高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍的含量目的是为了建立一种新的可以测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量的高效液相非接触电导检测法。
方法用非接触电导检测器进行实验操作，采用C18色谱柱（4.6×250 mm），流动相为乙腈（0.01 mol / L 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（35∶75），流速为1.0 mL/min、进样量是10 μL、柱温为35℃。
结果盐酸二甲双胍进样量在0.10～1.04 μg范围内呈现良好线性关系，平均回收率为101.00%；RSD为0.26%。
结论该法方便快捷、灵敏度高，为二甲双胍的含量测定提供依据。
标签：高效液相；非接触电导法；盐酸二甲双胍[Abstract] Objective To establish a new method of high performance liquid chromatography in measuring the content of metformin hydrochloride. Methods Contactless conductivity detector was used for experimental operation and the C18 chromatographic column （4.6×250 mm），the mobile phase was acetonitrile （0.01 mol / L buffer stock solution）（orthophosphoric acid pH=3.5）（35∶75），flow rate 1.0ml/min，injection volume 10 μL，column temperature 35℃. Results The injection volume of metformin hydrochloride had a good liner relationship between 0.10 and 1.04 μg，the average recycle rate was 101.00% and RSD was 0.26%. Conclusion The method is simple and rapid with high sensitivity，which can provide reference for the measurement of content of metformin.[Key words] High-performance liquid；Contactless conductivity detector；Metformin hydrochloride盐酸二甲双胍片是治疗单纯因饮食没有得到良好的控制而引起的2型糖尿病的降糖良药，对于治疗肥胖2型糖尿病有显著的功效，尤其是一些糖尿患者在患有糖尿病的同时还伴有肥胖、高胰岛素血症等问题，都可以通过盐酸二甲双胍得到有效的治疗。
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血清中盐酸二甲双胍含量测定方法的建立和考核
前言
盐酸二甲双胍(metformin hydrochloride)是属于双胍类降血糖药物，该药在临床上使用多年，有很好的安全性和有效性。
临床上主要用于II型糖尿病患者的治疗。
本药可以单独使用或与磺脲类药物联合使用。
本文参考文献报道的方法，并对测定方法进行了改进，改进后的方法样品处理更简单，在保持精密度和准确度的情况下，所建立的方法在灵敏度方面也能够满足药代动力学研究的要求。
材料和方法
1．药品和仪器
1．1药品和试剂
标准品：盐酸二甲双胍，北京德众万全药物技术开发有限公司提供，含量99.7％。
试剂：乙腈为美国Fisher产色谱纯乙腈，所用的其它试剂均为分析纯，试验中各种溶液的配制均使用双蒸馏水。
试验中使用的空白血清为购自北京红十字会血站。
1.2仪器和色谱条件
Agilent 1100液相色谱仪系统，由单元泵、自动进样器、紫外检测器、色谱工作站组成，以上各部分均由美国Agilent公司生产。
色谱条件为：Alltima sillica色谱柱(150mm×4.6mm 5μm)；流动相为乙腈：pH7.0 0.05mol/L磷酸盐缓冲液=40：60；流速为1ml/L；检测波长为233nm；柱温为室温；进样量为40μl。
1.3贮备液的制备
盐酸二甲双胍贮备液：称取适量的盐酸二甲双胍细粉于容量瓶中，用水溶解并稀释成50μg/ml的溶液作为贮备液，于冰箱中保存。
1.4血样处理方法
精密量取0.25ml含有药物的血清，精密加入0.5ml乙腈(1:2)，振摇30秒后，4000r/min离心10min后，取出上清液，于自动进样器小瓶中直接进样分析。
1.5标准曲线和质控样的制备
用贮备液和空白血清以三倍稀释的方式制备2.54, 0.847, 0.282, 0.094, 0.031, 0.011μg/ml的盐酸二甲双胍标准曲线溶液。
按照血样的处理方法进行试验，以盐酸二甲双胍的浓度对其峰面积进行线性回归。
试验中使用的质控样品为 1.01, 0.20, 0.04 μg/ml，其配制通过贮备液和空白血清配制而成。
质控样品按照0.25ml/支的量分装并与试验中取得的血样一同保存。
结果
1.方法的专属性
图1-5分别为空白血清、空白血清＋盐酸二甲双胍，和受试者服药后的图谱。
图1. 空白血清图
图2 空白血清＋盐酸二甲双胍图(Rt=5.0min为盐酸二甲双胍峰)
图3. 受试者给药后的高浓度图
图4 受试者给药后的中浓度图
图5 受试者给药后的低浓度图
2．线性范围和标准曲线
按照标准曲线制备项下的操作，测得盐酸二甲双胍在测定的浓度范围内(2.54~0.011μg/ml)，按照1/y2加权回归，得到很好的线性，r=0.9995, Y= 40.200C
＋0.283。
在本试验中，可以准确测定的药物浓度是0.011μg/ml即11ng/ml。
考虑
到一次口服500mg盐酸二甲双胍后，体内的药物浓度最高可以达到1.2 g/ml，因此11ng/ml的定量低限对进行盐酸二甲双胍的药代动力学研究已经足够。
见表1和图6。
表1 加权线性回归数据
图6 盐酸二甲双胍血药浓度计算时的标准曲线
3回收率
在健康人血清中加入不同体积的盐酸二甲双胍标准溶液，制备高、中、低三种不同浓度的盐酸二甲双胍血样，用标准曲线中的样品处理方法进行处理，测得的峰面积用标准曲线进行浓度计算并与实际浓度比较，得到相对回收率的数据，见表2。
将高、中、低盐酸二甲双胍血清样品按照标准曲线中的样品处理方法进行处理，与盐酸二甲双胍水溶液样品所得到得峰面积进行比较，得到绝对回收率的值，结果见表3。
4. 日内、日间变异系数：将盐酸二甲双胍的血清高、中、低浓度样品按照标准曲线中样品的处理方法进行处理和测定，求得日内和日间精密度的结果，见表4、5，可以看出所建立的分析方法能够满足生物利用度测试要求。
表5 日间精密度
5. 血样标本的稳定性
试验发现盐酸二甲双胍血样标本贮存、融化、提取期间比较稳定。
样品在贮存期间以质控样显示的结果表明样品没有出现降解，血样品冻融3次含量没有下降，血样经过沉淀处理后，其上清液在放置24小时时含量没有变化。
6．血药浓度测定时的质量控制
正式测定前，先进行方法学考察，在方法学考核通过后，并在仪器完全稳定后才开始样品测试。
除测试的样品外，还加入一定数量的质控样品以及线性样品，只有在所加入的质控标准样品的测定结果符合要求时（< 20％），所测定的数据才看作有效，以及进行随后的药代动力学计算。