无菌检查用菌种的管理
菌种管理制度
菌种管理制度目的：为保证药品生产、检定和科研的质量，加强对检验用菌种的科学管理，特制定本制度。
范围：适用于本厂检验用菌种的管理。
职责：菌种管理人对菌种的申购、保藏、检查、发放和销毁，检验员对菌种的使用和操作安全负责，对本制度的实施监督负责。
定义：检验用菌种适用于无菌检查、微生物限度检查，评价防腐剂和抗菌剂的抑菌效果，确认灭菌工艺效果，检验的方法验证、培养基的促生长能力检查、样品检验时的阳性对照等标准菌株。
一代：将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即成为一代。
程序：1总则检验用菌种应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性相应的等效的商业派生菌株。
2检验用菌种管理由QC部指定人负责。
3根据需要提供所需菌种，并监督其使用。
4负责菌种的申购、保藏、定期传代、使用和销毁。
5负责填写菌种记录2菌种的接收写明菌种的名称、编号、批号、接收日期、来源。
3菌种的保藏与传代标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行。
冻干管开启后可制备菌种甘油管和转种斜面。
斜面菌种1-3个月传代一次，传代代数不能超过5代，传代应及时写记录。
除另有规定外，菌种斜面和菌液应保存于2-8度保存。
冻干菌种一旦解冻制备工作菌种后，不得重新冷冻和再次使用。
保藏的菌种都应有明显的标志：菌种名称、接种日期、传代数。
每个工作日检查一次菌种冰箱的温度，长假期每隔数天检查一次。
菌种检查必要时对工作菌种进行纯度和特性确认。
菌液制备好后，在室温放置应在2小时内使用，在2-8度放置应在24h内使用。
凡是与菌种接触过的用具应在121度，30分钟。
然后清洗。
使用菌种时应在生物安全柜内操作，采取防护措施，避免污染。
未经批准，不得将菌种带离实验室。
菌种的销毁保存的菌种失去活性，变异或超过贮存时间，应进行灭活销毁121度，30分钟。
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无菌检验标准操作规程(SOP)
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》2015年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤200ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
10、试剂及培养基的配制：10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
菌种的使用和管理
在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、 菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期。
菌种保藏
菌种的保藏、传代
微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染， 保持其原有性状基本稳定，以便于研究、交换和使用。
Staphylococcus aureus [CMCC（B）26 003]；[ATCC6538]
生孢梭菌
Clostridium sporogenes [CMCC（B）64 941]；[ATCC19404]
铜绿假单胞菌
Pseudomonas aeruginosa [CMCC（B）10 104]；[ATCC9027]
干燥菌种(安瓿)的开启
菌种的使用、废弃
• 标准菌株复活-细菌类
菌种管外表面消毒（75%酒精）后打开，吸取0.3 ～0.4ml规定的培养液，加至菌种管底部，将冻干菌搅 动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至斜面及普 通肉汤内（肉汤一般5～6ml），厌氧菌需要在厌氧条件 下溶解，并且注意动作迅速，因为好氧条件有可能降低 它的活性，依据说明书的培养条件进行培养。如果生长 的不好，可以延长培养时间。
菌种的使用、废弃
标准菌株的纯度检查 菌落形态 取复活后的培养物，在相应的鉴别平板或非选择 平板上划线分离，培养出单菌落，观察菌落形态是否符合该菌 株要求，同一平板上的单菌落大小，形状、颜色、质地、光泽 是否相似，对于出现两种以上形态的菌株，应再分别挑取单菌 落划线，检测是否出现相同特征。 细胞形态 取划线平板上的单菌落，革兰氏染色反应应符合 要求，且呈现一致性。 生化鉴定 必要时进行生化鉴定
菌种管理规范
菌种管理规范引言概述：菌种管理规范是生物实验室中非常重要的一项工作，它涉及到实验室的卫生安全、实验结果的准确性和实验人员的健康。
因此，建立健全的菌种管理规范对于实验室的正常运作至关重要。
一、菌种的采购与存储1.1 选择可靠的供应商：在采购菌种时，应选择有资质、信誉良好的供应商，确保所购买的菌种质量可靠。
1.2 存储条件：菌种存储在恒温冰箱或者液氮罐中，避免温度波动过大，保持菌种的活性。
1.3 记录管理：建立菌种存储记录，包括菌种名称、来源、存储时间等信息，方便管理和追溯。
二、菌种传代与传递2.1 传代频率：根据菌株的生长速度和实验需求，合理确定传代频率，避免菌株变异或者老化。
2.2 传递方式：传递菌种时要采取无菌技术，避免外源污染，确保菌株的纯度。
2.3 传递记录：建立菌株传递记录，包括传递日期、传递人员等信息，确保传递的准确性和追溯性。
三、菌种检测与鉴定3.1 检测方法：对菌种进行定期检测，包括菌落形态观察、生长速度检测等，确保菌株的稳定性。
3.2 鉴定技术：采用生物学鉴定、生化鉴定等方法对菌株进行鉴定，确保菌株的正确性。
3.3 鉴定记录：建立菌株鉴定记录，包括鉴定结果、鉴定方法等信息，方便管理和追溯。
四、菌种废弃与处理4.1 废弃标准：对于失活或者变异的菌株应及时废弃，避免对实验结果产生影响。
4.2 处理方式：采用高温高压灭菌或者化学消毒等方式对废弃菌株进行处理，确保安全。
4.3 废弃记录：建立菌株废弃记录，包括废弃日期、处理方式等信息，确保废弃的规范性和可追溯性。
五、菌种管理的培训与监督5.1 培训计划：对实验人员进行菌种管理的培训，包括菌株的采购、存储、传递、检测等方面。
5.2 监督机制：建立菌种管理的监督机制，定期检查实验室的菌种管理情况，及时发现和处理问题。
5.3 教育宣传：加强对实验人员的菌种管理意识教育，提高他们对菌种管理规范的重视和执行力度。
结语：菌种管理规范是实验室管理中的重要环节，惟独建立科学规范的菌种管理制度，才干确保实验室的正常运作和实验结果的准确性。
菌种管理规程
菌种管理规程1、目的：规范菌种管理与使用程序，确保实验结果可靠与实验室安全。
2、范围：本规程适用于本公司检验用标准菌种的管理。
3、责任：QC微生物限度检验员、QC负责人对此规程的实施负责。
4、内容：4.1标准菌种由受过专业培训，有足够的菌种保管经验的微生物限度检查员保管。
4.2检定用标准菌种，由质量部门负责人批准后，报采购部购买。
4.3收到菌种后，应核对品名，菌号数量，检查菌种管有无破损，填写《检定菌种接收记录》。
在保存菌种容器外加贴标签，注明编号、名称、购买日期。
标准菌种的保存条件：应在2～5℃保存，一般可保存3个月，藏菌种的冰箱不得存放食物和易挥发性药品。
4.4标准菌株的使用4.4.1取用时，必须登记使用时间、数量及使用人。
4.4.2启用时，必须在专用净化台内严格按无菌操作进行菌种的传代。
4.4.3传代后的标准菌株应不少于6支，4支专用于菌种传代。
另2支为工作用菌种。
传代工作应予记录。
4.4.4保存用菌株，应一个月接种传代于新鲜的营养琼脂斜面上，检定是否属纯种，发现变异或染菌应及时报质检部负责人并记录。
4.5工作用标准菌株，应在用前将菌种接种于新鲜的营养琼脂斜面上培养后，再接种于新鲜营养肉汤培养基中，保存在2～5℃冰箱内，该液体一般使用三天。
4.6标准菌种的定期检查4.6.1 定期检查菌种外观及干燥状态。
4.7项4.7 接种菌株必须在净化工作台内进行。
在接种不同菌株时，要特别注意防止菌种之间的交叉污染。
4.7.2取菌液，吸取菌液的吸管，用后必须放在5%苯酚液中，至少浸泡24小时后方可清洗。
4.7.3弃菌种管、染菌器具，菌种培养基的双碟等，应经121℃、45分钟蒸汽灭菌后，方可清洗，严防污染。
4.7.4 接种菌株时，若不慎污染桌面、地面等，应及时用有效消毒方法处理，以防污染环境及工作人员。
4.7.5 控制传代次数，传代次数越多，突变的机率越大，因此要尽量少传代，应根据菌种保存情况规定最多传代次数，超过此限度或经鉴定检查不合格的，原则上应销毁灭活(加热失活)，有灭活记录。
化验菌种管理制度
化验菌种管理制度一、目的为了规范化验菌种的管理，确保实验室的安全和质量控制，制定本制度。
二、范围本制度适用于所有进入实验室的菌种，包括但不限于细菌、真菌、病毒等各类菌种。
三、制度内容1. 转运、储存和处理菌种的基本原则（1）菌种转运应遵循无菌操作的规程，采取严格的消毒措施；（2）菌种储存在指定的制冷设施中，根据菌种的特性、要求和实验室情况，选择适当的储存条件；（3）处理菌种时，应严格遵守实验室安全操作规程，避免对实验室环境和工作人员造成危害。
2. 菌种采购和管理（1）菌种采购应经过实验室主管人员的审核，保证菌种来源的合法合规；（2）菌种接收时，应检查菌种的标签、容器、温度和其他相关信息，确保菌种的真实性和完整性；（3）菌种管理应建立菌种登记簿，记录每一批次菌种的来源、存放位置、使用情况等信息，做到有据可查。
3. 菌种使用和处理（1）菌种使用前，应对菌种进行鉴定和验证，确保菌种的正确性和稳定性；（2）菌种使用过程中，严格遵循菌种实验操作规程，做好相关实验记录；（3）菌种使用完毕后，应按照规定的程序进行处理，避免菌种泄漏和环境污染。
4. 菌种安全和突发事件处理（1）实验室人员应了解各类菌种的危害性和传播途径，做好相关安全防护措施；（2）一旦发生菌种泄漏、失窃或其他突发事件，应立即启动应急预案，采取相应的处理措施，并及时上报主管部门。
5. 菌种管理的监督和评估（1）实验室主管人员应负责对菌种管理制度的执行情况进行监督和检查；（2）定期对实验室的菌种管理进行评估，发现问题及时整改并提出改进建议，不断完善菌种管理制度。
四、责任制定1.实验室主管负责监督和管理实验室的菌种管理工作。
2.实验室操作人员必须严格按照菌种管理制度执行，做好相关记录和报告工作。
3.菌种采购人员负责对采购的菌种进行检查和确认，确保菌种的质量和真实性。
五、附则1.菌种管理制度应根据实验室的实际情况进行适当调整和补充。
2.菌种管理制度应与相关法律法规相一致，确保合法合规。
生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程
生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程1 总则1.1 本规程所称之菌、毒种系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、立克次体或病毒，以下简称菌、毒种。
菌、毒种按《中国医学微生物菌种保藏管理办法》第二条分类。
菌、毒种的管理由中国药品生物制品检定所(以下简称检定所)负责。
1.2 各生产单位按规程生产或检定生物制品所用之菌、毒种由检定所或卫生部委托的单位保存、检定及分发。
各生产单位自行分离或收集的菌、毒种，凡拟用于生产或检定者，均须经检定所审查认可。
新生物制品所用的菌、毒种按卫生部《新生物制品审批办法》办理。
1.3 生物制品生产应采用种子批系统。
原始种子库应验明其记录、历史、来源和生物学特性。
从原始种子库传出、扩增后冻干保存的为生产用种子库。
生产用种子批的生物学特征应与原始种子批一致。
每批生产用种子批均应按规程要求保管、检定和使用。
1.4 各生产单位应指定专业部门对本单位的菌、毒种施行统一管理，每年向单位领导书面报告管理情况，并抄报检定所。
1.5 凡增加、减少或变更生产及检定用菌、毒种须经检定所审查认可。
2 菌、毒种登记程序2.1 菌、毒种由检定所统一进行国家菌、毒种编号，各单位不得更改。
各生产单位自行分离、收集的菌、毒种，凡正式用于生产和检定者，经检定所审查同意后给予正式国家编号。
2.2 保管菌、毒种应有严格的登记制度，建立详细的总帐及分类帐。
收到菌、毒种后应立即进行编号登记，详细记录菌、毒种的学名、株名、历史、来源、特性、用途、批号、传代冻干日期、数量。
在保管过程中，凡传代、冻干及分发，均应及时登记，并定期核对库存数量。
2.3 收到菌、毒种后一般应于3个月内进行检定。
用培养基保存的菌种应及时检定。
3 菌、毒种的检定3.1 生产用菌、毒种应按各项制品规程要求定期进行检定。
3.2 所有菌、毒种检定结果应及时记入菌、毒种检定专用记录内。
3.3 不同属或同属菌、毒种的强毒及弱毒株不得同时在同一或未经严格消毒的无菌室内操作。
无菌室的使用与管理制度
安徽华恒生物工程有限公司无菌室管理制度二零一三年无菌室的使用与管理制度一、无菌室的使用1、无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的实验用具如酒精灯、酒精棉、打火机、镊子、接种针、接种环、记号笔等。
不要放与检测无关的物品。
2、用75%酒精擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用75%酒精喷雾消毒空气，最后臭氧杀菌1小时。
3、定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。
4、无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用。
5、进入无菌室前，必须于缓冲间更换工作服、工作鞋。
6、操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话不喧哗，以保持环境的无菌状态。
7、火焰灭菌：接种针、接种环等可直接火焰灭菌。
8、一般消毒:无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用75%酒精擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。
二、无菌室的准备工作及要求1、实验用的有关器材，搬入无菌室前必须分别进行灭菌消毒。
2、操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好白大褂和鞋，才能进入无菌室。
4、进入无菌室后再一次消毒手部，戴上口罩然后才进行实验操作。
三、无菌室操作过程注意事项1、玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。
2、操作应在近火焰区进行，以免染菌。
3、接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。
4、使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。
5、观察平板时不好开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能大开，而是上下盖适当开缝。
6、工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，不要的废品带出无菌室，最后用消毒液擦拭工作台。
四、无菌室管理规定1、无菌室地面、台面、其它表面每3日擦拭1次。
操作台每日用75%酒精擦拭消毒，每次使用前准备好物品紫外灭菌30分钟后方可使用。
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无菌检查用菌种的管理
1. 标准菌的来源
标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心（China Medical culture collection ,CMCC）提供的冷冻干燥菌种（0代）或由上级药检部门已接种好的菌种斜面（3代）。
黑曲霉的0代菌种为保存于含15%甘油的0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。
中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签CMCC（B）代表细菌（bacteria）,CMCC(F)代表真菌（fungi）每种菌具有固定的代号。
2. 标准菌的验收
从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。
接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。
在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。
在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。
新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。
从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。
储存于2～8 ℃，有效期为3个月。
3. 标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备
3.1物品及试剂
接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球
3.2培养基
改良马丁琼脂培养基:用于黑曲霉复苏、复壮.
液体硫乙醇酸盐培养基:用于生孢梭菌复苏、复壮.
营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。
改良马丁培养基:用于白色念珠菌复苏、复壮.
3.3操作步骤：
a.打开洁净工作台。
b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。
c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开（开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂）。
d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取0.5～0.8 ml到安瓿中。
e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。
f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。
g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30～35℃，培养18～24小时；真菌培养温度23～28℃，培养3～5天。
观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，灭菌处理。
h.黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液融化后用无菌吸管吸取管内液体1～2滴滴在改良马丁琼脂斜面上，用吸管涂布均匀，置23～28℃培养5～7天，斜面正面为黑褐色厚绒状，色泽均一，不应有杂色，斜面侧面无色，接近菌层培养基略带黄色。
确认后用含有0.05%（ml/ml）的吐温-80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱到无菌试管中。
i.取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至液体培养基中按g项操作对菌种进行复壮。
以无菌技术向复壮后的菌种中加入100ml20%的无菌甘油混匀，1-2ml/管分装于冻存管。
每个菌种制备10支，按顺序进行编号，最后一支做为质控管进行质量控制，即进行相应的确认。
其余作为储备管。
黑曲霉的h项下洗脱液按h项下方法进行复壮，制成复壮后的孢子悬液20ml。
以无菌技术向复壮后的菌种中加入
20ml 、30%的无菌甘油混匀，1-2ml/管封存于冻存管。
制备10支，按顺序进行编号，最后一支做为质控管进行质量控制，即进行相应的确认。
其余作为储备管。
将上述制备好的冻存管逐支粘贴标签。
内容包括：菌种名称、菌种代号、编号、代次、制备日期、制备人、贮存条件、有效期至等。
j．储备菌种管制备成功，储存于－20℃，有效期为三年。
3.4菌种确认
用无菌接种环从质控管中取细菌培养物接种到营养琼脂培养基平板上，或相应的宜于该细菌生长的鉴别平板上，划线分离出单个菌落。
然后在30～35℃下培养2～3天；同样的方法取真菌到玫瑰红钠琼脂培养基平板，并在23～28℃下培养7天；培养后，观察其菌落形态，应符合该菌种形态特征。
3.5污染处理
假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明或操作有污染或菌种不纯。
将此被污染了的培养物灭菌处理。
可寻找原因重新分离挑选纯菌落转接斜面菌种作为第四代。
并重新制备储备菌种管
3.6菌种的传代与保藏
将菌种接种至一新鲜培养基上，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至新培养基内生长，即认为已传代一次，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第0代，冷冻干燥的原始菌种开启后转种后为第1代，直到第3代为工作菌种。
菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代。
3.7菌种的传代保藏过程
3.3项下标准菌的复苏为传第一代，复壮为第二代。
传第三代时取1支冻存管自然解冻，将其转接斜面菌种作为工作用菌种。
此时，工作用菌种为第3代。
工作用菌种，分为两类：一类用于定期传代(W3)，一类用于实验用（S3）。
定期传代用菌的传代其操作步骤如下（斜面接种法）：
（1）从冰箱冷藏室中取出菌种斜面后，应在室温放置约30分钟。
（2）将装有新鲜配制的培养基菌种保藏管管壁上注明菌名及接种日期，和传代菌种一并移入洁净工作台，打开紫外灯照射一小时。
（3）关闭紫外灯。
点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰上方，右手拿接种棒后端，将接种环烧红约30秒，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过三次。
（4）右手用无名指、小指及掌部夹住管塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拔开管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷后再至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒并将菌种管口移至火焰上方。
（5）塞上管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面（或改良马丁琼脂斜面）一支，照上述操作打开管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端，使细菌接种在斜面的表面上。
（6）取出接种环，在火焰上方将培养基管盖上塞子，然后将接种过细菌的接种环在火焰上烧灼灭菌。
（7）将已接种好的细菌管置30～35℃细菌培养箱培养22 ～24h，真菌管置23～28℃真菌培养箱最多培养7天。
当工作用菌种传代代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如：（W3）可直接转接为（W4）。
按上述程序操作，直至（W4）转为（W5）为止，需重新接种，旧的工作菌种进行销毁。
3.8菌种斜面的培养、保藏条件及时间
注：菌种斜面1次/周观察状态是否正常。
3.9菌种的使用及销毁
每次进行菌种复活时，只能复活一个菌种。
如果要复活其他菌时，应对所用物品重新消毒灭菌。
每次操作，都应进行记录。
菌种管上应贴有牢固的标签。
标明菌种名称、菌种代号、代次、传代人、编号和传代日期、贮存条件、有效期至等。
废弃菌种及实验用品废弃物的处理：121℃ 高压蒸汽灭菌30分钟。
并对操作过程进行记录。