规范标准的PCR实验室说明介绍
PCR实验检测标准操作规范

PCR检测实验室操作规范一、PCR 实验室的设置及管理1.目的:建立实验室的合理设置和科学管理,防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2.适用范围:本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3.负责人:4.细则:4.1流感实验室为急传所的专业实验室,从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。
4.2 本实验室采用实时荧光定量(定性)PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段,实验室分为三个区:试剂准备区(第一区)、标本处理区(第二区)、扩增分析区(第三区)。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4.3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用。
4.4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。
4.5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4.6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内;进修、实习或其他科室人员因科研活动需要,进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增分析区)需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。
4.7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
二、PCR 实验室工作制度1.目的:保持良好的工作环境,以确保检测结果的可靠性,防止交叉污染,防止差错、事故及纠纷的发生。
2.适用范围:所有本实验室人员。
3.负责人:4.细则:4.1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。
4.2 各区的用品不得混用。
4.3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子,严格按照操作规程。
4.4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作(见相关SOP 文件)。
4.5 标本处理区只能进行临床标本的保存,核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成(见相关SOP 文件)。
pcr实验室设计标准

pcr实验室设计标准
PCR实验室设计的标准通常包括以下几个方面:
1. 空间分配:实验室空间应考虑到PCR反应的敏感性,避免
受到外界环境的干扰。
实验室应划分为不同的区域,如样品处理区、试剂准备区、PCR反应区、电泳分析区等,以避免交
叉污染。
2. 生物安全:PCR实验室需要具备生物安全级别,按照不同
的实验需求,可分为不同的生物安全级别实验室,如BSL-1、BSL-2等。
必要时需要采取措施,如为实验室设置生物安全柜、密封门、气流控制等,以确保实验人员和环境的安全。
3. 温度控制:PCR反应对温度的控制要求较高,因此实验室
应具备稳定的温度控制设备,如恒温干燥箱、恒温水浴等,能够提供所需的温度范围,并能保持温度的稳定性。
4. 洁净度要求:PCR实验中需要避免DNA污染,因此实验室
应具备洁净的条件,并保持无尘、无菌的环境。
实验室内的工作台、仪器、耗材等应经过适当的消毒处理。
5. 通风系统:PCR实验室应具备良好的通风系统,以保持空
气的流动和新鲜,减少实验室内可能存在的污染风险。
6. 实验室设备:PCR实验室应具备必要的设备,如PCR仪、
电泳装置、显微镜、离心机等,并根据实验需求选择合适的设备型号和规格。
7. 安全措施:为了保护实验人员和实验室环境的安全,需要设置相应的安全措施,如个人防护用品、紧急处理设施、紧急灭火装置等。
总之,PCR实验室的设计应考虑实验的特殊要求,如温度控制、生物安全和洁净度要求,并采取相应的措施保障实验质量和人员安全。
同时,根据实验规模和需求,适当选择合适的设备和器材,提高实验效率和可靠性。
规范标准的PCR实验室说明介绍

标准的PCR实验室简介1、主体结构:主体为彩钢板、铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50 内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节:将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。
整个区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、消毒:在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、机械连锁不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。
便于进行清扫,耐腐蚀。
没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm× 800mm)接缝需要小于2mm。
6、照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
标准的PCR实验室在建设的过程中应注意:•规范的安装流程和全面的服务流程。
•严格按照规范科学设计的安装流程。
•安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。
1.1.1PCR 实验室基本要求2.1PCR 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。
只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室,有上述前面三个区域即可。
各区域应完全独立分隔,不应有任何的空气直通。
PCR实验室要求

PCR实验室要求PCR(聚合酶链式反应)是一种广泛应用于分子生物学研究中的技术,它能够扩增目标DNA序列。
为了确保实验室的安全性、准确性和效率,PCR实验室需要满足一系列的要求。
本文将从实验室环境、仪器设备、操作规范和个人防护等方面进行论述。
一、实验室环境要求PCR实验室应设置在一个静止无风的环境中,避免任何可能带入外部污染源的因素。
实验室内部应维持适当的温度和湿度,通风良好,并定期消毒以保持实验室的清洁。
此外,实验室应与其他实验室区隔开来,以减少交叉污染的风险。
二、仪器设备要求PCR实验室应配备一台高质量、可靠的PCR仪,确保温度控制和样品循环的准确性。
仪器应进行定期校准和维护,以保持其正常运行。
此外,实验室还应配备有紫外线可视化系统,用于检测PCR扩增产物。
所有使用的试剂和耗材必须符合实验要求,并保持干燥和密封。
三、操作规范要求1. 试剂准备与储存:所有试剂应按照使用说明书准备,并储存在适当的温度和湿度下。
首次使用前,试剂应进行质量控制,以确保其可靠性和准确性。
2. 样品处理与提取:在进行PCR反应前,样品应经过适当的处理和提取步骤,以获得可靠的DNA模板。
对于不同来源的样品,应采用相应的提取方法,并确保样品纯度和完整性。
3. PCR反应设置:根据实验需求和扩增模板的特征,合理选择PCR 反应体系和条件。
正确计算和配制反应体系中的各种试剂和成分,确保反应的准确性和一致性。
同时,应根据目标模板的大小和复杂性,确定适当的扩增循环数目。
4. PCR反应操作:严格控制PCR反应的各项操作条件,包括温度、时间和缓冲液的浓度。
操作前,应彻底清洁和消毒操作台、仪器和耗材,避免任何可能的外源性污染。
在操作中,仪器的盖子应保持关闭,以避免样品蒸发和污染。
四、个人防护要求进行PCR实验时,实验人员应提前完成相关的个人防护培训,并穿戴适当的实验室防护用品。
穿戴实验室大衣、手套、口罩和安全镜等,以保护个人安全和减少实验操作对身体的影响。
pcr实验室标准

pcr实验室标准PCR实验室标准。
PCR(聚合酶链式反应)是一种常用的分子生物学技术,广泛应用于基因克隆、基因表达分析、疾病诊断等领域。
在PCR实验室中,严格遵循一系列标准操作程序对实验室环境、试剂、设备和操作人员进行管理,对PCR实验的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍PCR实验室的标准操作流程,帮助实验室工作人员规范实验操作,提高实验效率和结果可靠性。
实验室环境管理。
PCR实验室应具备良好的实验环境,包括洁净、无菌、无尘、无霉、无细菌等特点。
实验室内空气应保持流通,避免气味、异物等对实验产生干扰。
实验室内的工作台面、仪器设备、试剂瓶等应定期进行清洁消毒,保持干净整洁。
试剂管理。
PCR实验室应建立完善的试剂管理制度,对试剂的储存、使用、保管和报废进行严格管理。
试剂的储存温度和有效期应进行标注,避免使用过期试剂进行实验。
在使用试剂时,应按照操作规程准确称量、混合和稀释,避免试剂误用或交叉污染。
设备管理。
PCR实验室的设备应定期进行检测和维护,确保设备的正常运行和准确性。
在使用设备前,应进行预热、平衡和校准,避免设备误差对实验结果产生影响。
实验室应建立设备使用记录,及时发现设备故障并进行维修或更换。
操作人员管理。
PCR实验室的操作人员应接受相关的培训和考核,熟悉实验操作流程和安全注意事项。
在进行实验操作时,应严格按照操作规程进行,避免个人操作失误对实验结果产生影响。
操作人员应穿戴实验服、手套、口罩等个人防护用品,避免人为污染对实验产生影响。
实验操作流程。
PCR实验操作流程包括样品处理、反应体系配置、PCR扩增、扩增产物分析等步骤。
在进行实验操作时,应按照标准操作程序进行,避免操作失误对实验结果产生影响。
在每一步操作后,应及时记录实验数据和结果,以备后续分析和验证。
实验结果分析。
PCR实验结果的分析应准确、可靠、重复性好。
在进行实验结果分析时,应对实验数据进行统计和比对,排除实验误差和干扰因素,确保实验结果的准确性和可靠性。
pcr实验室设计标准及规范

pcr实验室设计标准及规范PCR实验室设计标准及规范。
PCR实验室是进行聚合酶链式反应(PCR)实验的重要场所,其设计标准和规范对实验室工作的顺利进行具有重要意义。
本文将就PCR实验室的设计标准及规范进行详细介绍,以期为相关工作提供参考和指导。
首先,PCR实验室的设计应符合相关的安全规范和实验室设计标准。
实验室内部应设置有足够的通风设施,以确保实验室内空气的流通和清洁。
此外,实验室内应设置紫外线消毒设备,以对实验室进行定期消毒和清洁,保证实验室内部的卫生安全。
其次,PCR实验室的设计应考虑实验室的使用需求和实验流程。
实验室内部应设置有充足的实验台和工作区域,以满足实验操作的需要。
实验室内部的设施和设备应按照实验流程进行合理布局,以提高实验的效率和准确性。
此外,实验室内应设置有充足的储存设施,以存放实验所需的试剂和材料。
另外,PCR实验室的设计应考虑实验室的安全性和实验操作的规范性。
实验室内部应设置有相关的安全警示标识,以提醒实验人员注意实验操作的安全性。
实验室内部应设置有相关的实验操作规范,以规范实验人员的操作行为,确保实验操作的规范性和准确性。
最后,PCR实验室的设计应考虑实验室的管理和维护。
实验室内部应设置有相关的管理制度和管理人员,以确保实验室的管理和维护工作得到有效的开展。
实验室内部的设施和设备应定期进行检查和维护,以确保实验室设施和设备的正常使用和安全性。
综上所述,PCR实验室的设计标准及规范对实验室工作的顺利进行具有重要意义。
实验室的设计应符合相关的安全规范和实验室设计标准,考虑实验室的使用需求和实验流程,确保实验室的安全性和实验操作的规范性,以及管理和维护实验室。
希望本文对PCR实验室的设计提供了一定的参考和指导,为相关工作的开展提供了有益的帮助。
pcr实验室建设指南

pcr实验室建设指南PCR实验室建设指南PCR(聚合酶链式反应)是现代生物学中一项重要的实验技术,广泛应用于基因检测、基因工程、疾病诊断等领域。
为了保证PCR实验的准确性和可靠性,建设一套完善的PCR实验室是非常重要的。
本文将为您介绍PCR实验室建设的指南,帮助您打造一间高效、安全、符合质控要求的PCR实验室。
一、实验室位置选择PCR实验室应选择在相对安静、无污染源的环境中,避免阳光直射和强光照射。
实验室应位于干燥、通风良好的地方,远离易燃易爆物品。
同时,实验室内应安装紫外线灯,用于消毒工作台和实验器械。
二、实验室布局设计PCR实验室的布局设计应合理,能够满足实验操作流程的要求。
通常可将实验室分为样品处理区、试剂制备区、PCR反应区和结果分析区。
样品处理区应与试剂制备区隔离开,避免交叉污染。
PCR反应区应具备防止扩散污染的设施,例如风机、负压防护罩等。
结果分析区应设有放射性物质废弃物容器和分类垃圾桶,方便废弃物的处理。
三、实验室设备选购PCR实验室的设备选购应根据实验需求和经费预算进行。
常见的PCR 实验室设备包括:PCR仪、离心机、电泳仪、超净工作台等。
在选购设备时,应选择质量可靠、性能稳定的品牌,确保实验结果的准确性。
四、实验室试剂准备PCR实验所需的试剂应按照实验需求准备充足,并储存在干燥、阴凉的地方。
试剂的配制应严格按照配方比例进行,避免误差。
同时,试剂的标签应清晰明了,包括试剂名称、配制日期、有效期等信息。
五、实验操作规范PCR实验操作应遵循一定的规范和标准操作程序,以确保实验结果的准确性和可重复性。
实验操作时,要注意手部卫生,穿戴实验服、手套和口罩,避免引入外源性污染。
同时,实验器械应进行彻底的消毒和清洁,避免交叉污染。
六、实验室质控PCR实验室建设过程中,质控是非常重要的环节。
实验室应建立完善的质量管理体系,包括试剂质量控制、实验操作规范、实验记录和结果分析等方面。
实验过程中要进行质量控制样品的并行实验,以验证实验结果的准确性。
pcr实验室规章制度

pcr实验室规章制度一、实验室概述PCR实验室是一个专门用于进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)的实验室。
为确保实验室操作的安全性和实验结果的准确性,特制定以下规章制度。
二、实验室入口与出口管理1. 进入实验室前,必须穿戴好实验室服,并配戴好实验室必备的个人防护装备,例如手套、口罩和护目镜等。
2. 离开实验室时,必须彻底洗净双手,并更换一次性手套。
三、实验室操作规范1. 所有实验操作必须按照正确的步骤进行,严禁随意改变实验方案或方法。
2. 实验过程中应当保持实验台面整洁,杂物和废弃物必须及时清理。
3. 每次操作使用完的实验器具和试剂必须在实验结束后进行消毒或丢弃处理。
4. 禁止在实验室内饮食、吸烟和储存食品。
5. 实验室内禁止随意移动或调整实验设备和仪器,如需调整需事先征得实验室负责人的批准。
四、PCR反应体系准备1. 每次开始新一轮PCR实验前,必须按照操作指南准确配制PCR 反应体系,确保反应液的准确性与一致性。
2. 所使用的试剂必须检查标签清晰、有效期内,并在使用前进行检验。
3. 反应液配制完毕后,应严密封闭,避免污染和蒸发。
五、实验室垃圾管理1. 实验室内产生的生物垃圾、化学垃圾和一次性塑料制品等废弃物必须正确分类,并放置于相应的垃圾桶中。
2. 实验室内的废弃物应当定期正确清运,确保实验环境的整洁与卫生。
3. 实验室内严禁将废弃物随意堆放于通道或实验台面上,以免影响实验操作和日常工作。
六、设备使用与维护1. 在使用实验设备前,必须仔细阅读设备说明书和操作手册,了解设备的正确使用方法与安全注意事项。
2. 使用完毕后,应按要求对设备进行定期清洁与维护,保持设备状态良好。
3. 发现设备故障或异常情况时,应及时向实验室负责人报告,并采取适当措施进行紧急维修或更换设备。
七、应急措施与安全防护1. 在实验室进行PCR时,应注意防止试剂的沾染和飞溅,做好个人防护。
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标准的PCR实验室简介1、主体结构:主体为彩钢板、铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节:将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。
整个区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和PCR扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、消毒:在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、机械连锁不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。
便于进行清扫,耐腐蚀。
没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需要小于2mm。
6、照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
标准的PCR实验室在建设的过程中应注意:●规范的安装流程和全面的服务流程。
●严格按照规范科学设计的安装流程。
●安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。
1.1.1 PCR实验室基本要求2.1 PCR 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。
只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室,有上述前面三个区域即可。
各区域应完全独立分隔,不应有任何的空气直通。
2.2标准的PCR实验室产物分析区或三个区域的最后一个区域(即扩增及产物分析区),空气流向应由室外向室内,可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。
2.3 PCR实验室各区域仪器设备配备通常如下:2.3.1标准的PCR实验室试剂准备区:仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。
可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。
2.3.2标准的PCR实验室标本制备区仪器设备主要应有生物安全柜(最好为B2, 可避免提取核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉“污染”,出现假阳性结果。
此外还应配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设备(水浴和/或干浴仪)、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。
2.3.3标准的PCR实验室扩增区主要仪器就是核酸扩增热循环仪(PCR仪,实时荧光或普通的)。
热循环仪的电源应专用,并配备一个稳压电源或UPS,以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。
此外,根据工作需要,还可配备加样器、超净台等。
2.3.4标准的PCR实验室产物分析区:本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪(槽)、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、酶标仪和洗板机等。
在理想情况下,PCR实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间。
在缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。
PCR实验室平面布置示意图一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行**卫生部PCR研究员李金明(卫生部临床检验中心临床免疫室主任,研究员)的PCR建设方案再说吧!国外的资料不一定是最好。
个人觉得李金明的实验室区正压(扩增分析区因为没有缓冲,所以为负压),缓冲间负压的作法可以更好的防止气体的外泄及防止试剂准备区、标本制备区、产物扩增区、扩增分析区四区之间的气体相互渗漏。
PCR实验室也可以分为三个区,即第三、四区合为一区,必须设立缓冲间。
有条件建设实验室采用三十万级的标准来建设。
空调系统采用制冷剂各区独立循环,可以防止气流交叉。
**疾病预防控制中心实验室建设之PCR 实验室基本要求:PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。
完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。
对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品。
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。
需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。
**PCR实验区的设置,几个要注意的问题:1、几个区域的大小设置情况,应该是试剂准备区、产物扩增区、扩增分析区,要小一些。
标本制备区应大一些。
因为,标本制备室要放置一个生物安全柜为一个低温冰箱。
2、试剂准备区、标本制备区就设立紧急洗眼器,以备不时之需。
3、PCR实验室的洁净度可以根据用户的实际使用情况和资金的投入来设计。
**临床基因扩增检验实验室基本设置标准根据《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》,制定本标准一、临床基因扩增检验实验室区域设置原则(一)临床基因扩增检验实验室区域设置原则1、试剂储存和准备区2、标本制备区3、扩增反应混合物配制和扩增区4、扩增产物分析区如使用全自动分析仪,区域可适当合并。
(二)各工作区域必须有明确的标记,避免不同工作区域内的设备、物品混用。
(三)进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即试剂储存和准备区—>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。
(四)不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。
工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
二、工作区域仪器设备配置标准(一)试剂储存和准备区1、2-8C和-15C冰箱2、混匀器3、微量加样器(覆盖1-1000ul)4、移动紫外灯(近工作台面)5、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)6、专用工作服和工作鞋7、专用办公用品(二)标本制备区1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2、高速台式冷冻离心机3、混允器4、水浴箱或加热模块5、微量加样器(覆盖1-1000ul)6、可移动紫外灯(近工作台面)7、超净工作台8、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)9、专用工作服和工作鞋10、专用办公用品如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
(三)扩增反应混合物配制和扩增区1、核酸扩增仪2、微量加样器(覆盖1-1000ul)3、可移动紫外灯(近工作台面)4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)5、专用工作服和工作鞋6、专用办公用品(四)扩增产物分析区视检验方法不同而定。
基本仪器设备如下:1、微量加样器(覆盖1-1000ul)2、可移动紫外灯(近工作台面)3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)4、专用工作服和工作鞋5、专用办公用品为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。
2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。
3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。
5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。
6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。
7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。
实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCRRNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。
为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。
在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。
前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR实验室试剂的操作1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm 过滤的,并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前PCR区建立PCR混合物1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。
2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分。
3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。
而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。
4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。