SRY基因研究进展及其在动物性别鉴定中的应用_孙伟丽
专论 综述
Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｖｏｌ．１６ Ｎｏ．３ ２００８
Ｓ ＲＹ 基因研究进展及其在动物
性别鉴定中的应用
孙伟丽， 李光玉， 钟 伟， 常忠娟
（ 中国农业科学院特产研究所， 吉林 吉林 １３２１０９）
全称是 Ｙ 染色体性别决定区， 是哺乳动物雄性的性别 决定基因， 是 Ｙ 染色体上决定生物雄性性别的基因片 段。ＳＲＹ 基因是睾丸决定因子（ ｔｅｓｔｉｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ） 的最佳候选基因， 已经得到很多试验的证实。ＳＲＹ 基因 普遍存在于哺乳动物 Ｙ 染色体中， 但位置、大小、结构 等不尽相同。ＳＲＹ 基因的检测可以做到特异而快速地 判 定 性 别 结 果 。 ＳＲＹ 基 因 最 早 于 １９９０ 年 首 先 由 Ｓｉｎｃｌａｉｒ 等 从 人 类 Ｙ 染 色 体 上 分 离 出 来 ， 并 且 经 过 Ｋｏｏｐｍａｎ 等通过转基因小鼠证实。Ｋｏｏｐｍａｎ 等将含有 ＳＲＹ 基因的 ＤＮＡ 片段（１４ ｋｂ）移植给 ＸＸ 鼠体内， 小鼠 发育为雄性， 这一实验结果揭示了动物性别控制的根 本途径。当该基因有突变、缺失和易位等均可导致性反 转或生殖器发育异常。从发现 ＳＲＹ 基因至今不到 ２０ 年的时间里， 生物学研究学者关于该基因开展了多方 面的研究， 取得了很大的进展。 ２ ＳＲＹ 基因克隆研究现状
原理是从早期胚胎取下少量细胞， 将其 ＤＮＡ 与 Ｙ 染色体特异性标记的 ＤＮＡ 序列杂交， 阳性为雄性胚 胎， 阴性为雌性胚胎。用于检测的 ＤＮＡ 探针方法有两 种：荧光原位杂交法（ＦＩＳＨ）和 ＤＮＡ 探针提取物结合法， ＦＩＳＨ 可以直接利用荧光标记的 Ｙ 染色体特异性 ＤＮＡ 序列与待测细胞杂交， 在荧光显微镜下观察， 阳性为雄 性， 阴性为雌性。ＦＩＳＨ 包括荧光素探针制备、探针与靶 ＤＮＡ 的变性及杂交、观察鉴定 ３ 个步骤。ＤＮＡ 探针法 准确率达 ９５％ 以上， 与 其 他 方 法 相 比 ， 具 有 高 效 快 速 和错误率低的优势， 在实践中也取得了较好的效果。 Ｌｅｏｎａｒｄ 等首次鉴定牛囊胚获得成功， 准确率为 ９５％ ， Ｔａｔｓｕｏｋａｗａｒａｓａｋｉ 等报道， 用双探针标记 ＦＩＳＨ 准确鉴 定精子染色体。 ３．２ ＰＣＲ 反应法
自 １９９０ 年 ＳＲＹ 基因首次被分离出来， 随后人们 对于这个与性别决定有关的基因研究热情有增无减。 很多动物 ＳＲＹ 基因相继被克隆、测序： 在国 内 研 究 领 域， 杨其沅等对牦牛 ＳＲＹ 和 ＴＲＯ 基因部分序列进行 克隆与测序分析。赵雪等研究了牛 ＳＲＹ 基因的克隆与 测序， 克隆出长度为 ２ ７１３ ｂｐ 的牛 ＳＲＹ 基因。裴杰等 发表论文“中国荷斯坦牛 ＳＲＹ 基因编码区的克隆与原 核表达”， 结果表明 ＳＲＹ 基因编码区长 ６８７ ｂｐ， 编码 ２２９ 个氨基酸。付强等对水牛 ＳＲＹ 基因进行了克隆及 序列分析， 并且用 ＢＬＡＳＴ 与牛属动物 ＳＲＹ 基因比对， 结果显示同源性为 ９６％ 。帅丽芳等发表论文“１３／１７ 罗
目前， 除了人类很多性别发育异常或性别反转患 者 ＳＲＹ 基因被分离研究外， 很多动物的 ＳＲＹ 基因相继 通 过 ＰＣＲ 扩 增 法 或 从 ＤＮＡ 文 库 中 筛 选 的 方 法 获 得 。 为 利 用 ＳＲＹ 基 因 进 行 性 别 鉴 定 和 性 别 控 制 提 供 理 论 依据。 ３ 利用 ＳＲＹ 基因进行性别鉴定
收稿日期： ２００８－ ０２－ ２５ 作者简介： 孙伟丽（ １９８２－ ） ， 女， 硕士研究生， 助理研究员。
伯逊易位猪 ＳＲＹ 基因的克隆及其序列分析”。杨弘等 发表论文“奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼 ＳＲＹ 基因同源 克隆和序列分析”， 并根据这些结果构建了罗非鱼系统 分类树， 表明奥利亚罗非鱼与尼罗罗非鱼具有很近的 亲缘关系。张亮等在对林麝及马麝 ＳＲＹ 基因片段克隆 及其在系统进化分析中的应用得出， 克隆的林麝及马 麝 ＳＲＹ 基因片段经测序， 其长度为 ６８４ｂｐ。从父亲遗传 角度出发， 利用 ＧｅｎＢａｎｋ 中收录的 １８ 种偶蹄目 ＳＲＹ 基因， 用邻位相接法（ＮＪ）和最大简约法（ＭＰ）分别构建了 鹿科、牛科和麝科的系统进化树。聚类树显示麝形成一 个单系， 支持麝作为独立一科的观点。鲁晓萱进行小麂 ＳＲＹ 基因的克隆和测序， 张悦等进行了染色体显微切 割与 ＤＯＰ－ ＰＣＲ 结合对赤麂 ＳＲＹ 基因克隆、测序及初 步定位的研究。
方向， 以期为将来能有效利用该基因达到性别控制提供思路。
关键词： ＳＲＹ 基因； 性别鉴定； 性别控制
中图分类号： Ｓ８１４．４
文献标识码： Ｂ
文章编号： １００５－ ２７３９（２００８）０３－ ０００１－ ０３
１ ＳＲＹ 基因概述 ＳＲＹ 基因（ ｓｅｘ－ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｙ－ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）
聚合酶链 式 反 应（ＰＣＲ）是 ２０ 世 纪 ８０ 年 代 发 展 起 来的一项 ＤＮＡ 体外扩增技术。其原理是通过合成 ＳＲＹ 基因或其他 Ｙ 染色体上特异性片段的部分序列作为引 物， 在一定条件下进行 ＰＣＲ 扩增反应， 能 扩 增 出 目 标 片段的胚胎为雄性， 否则为雌性。其操作程序主要分为 ４ 步： 第 １ 步， 胚胎的获取， 第 ２ 步， 引物的设计， 根据 ＳＲＹ 基 因 或 Ｙ 染 色 体 上 特 异 性 片 段 设 计 引 物 ， 第 ３ 步， ＰＣＲ 扩增， 第 ４ 步， 电泳检测。能同时检测出目标基 因或目标特异性片段的为雄性胚胎， 否则为雌性胚胎。 该方法具有特异性强、灵敏度高、快速、准确、简便等优 点。自 Ｈｅｒｒ 等建立早期胚胎性别鉴定 ＰＣＲ 方法以来， 在奶牛胚胎鉴定中取得了显著的实践效果， 曾溢涛等 通过对奶牛 ＳＲＹ 基因的直接测序， 设计引物用 ＰＣＲ 扩 增 ＳＲＹ 基因检测奶牛胚胎的性别。杨建明等通过扩增 奶牛 Ｙ 染色体特异 ＤＮＡ 序列鉴定奶牛早期胚胎性别。 该方法存在的最大问题是容易污染， 因而在操作过程 中必须严格操作规程， 以避免外源 ＤＮＡ 的污染。
家畜胚胎的性别鉴定和后代性比例的控制， 是现 代畜牧科学研究和生产的重大课题之一， 它对提高畜
－２－
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牧生产的经济效益有着十分重要的意义。由于性别不 同， 某些家畜的生产性能和特点也不相同， 性别之间的 经济价值也相差悬殊。以牛为例， 对奶牛来说， 产奶母 牛的经济效益较高， 因此人们都希望它多产母犊。以鹿 为例， 鹿茸是营养价值很高的一类保健品， 公鹿能够生 鹿茸而母鹿则不能， 如能有计划地控制雄性的出生率， 就可以按照人们的意愿获得最大的经济效益。以经济 动物林蛙为例， 如果能够在林蛙胚胎发育的适当时期， 用适宜的化学、物理、激素刺激等方法诱导雌性产生 ， 增加雌性的比例， 将能够大大增加经济收益。带动林蛙 养殖行业发展。
利用 ＳＲＹ 基因对 早 期 胚 胎 进 行 性 别 鉴 定 的 主 要 报道有， 吕文发进行了扩增 ＳＲＹ 基因鉴定 牛 、羊 胚 胎
性别的初步研究， 利用自行设计的 ＳＲＹ 基因 ３ 对常规 ＰＣＲ 引物扩增牛 ＳＲＹ 基因和羊的 ＳＲＹ 基因。结果表 明： 第 ２ 对引物扩增出公牛和公羊基因组的 ＤＮＡ７５０ ｂｐ 左右清晰条带， 而母牛、母羊基因组 ＤＮＡ 无此扩增 条带， 说明第 ２ 对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎 性别鉴定。张秀华等利用 ＳＲＹ 基因和微卫星标记鉴定 反刍动物性别， 以反刍动物为研究对象， 应用多重 ＰＣＲ 技术扩增绵羊基因组中 Ｘ、Ｙ 染 色 体 上 的 ４ 个 微 卫 星 标记和 ＳＲＹ 基因。根据基因型进行性别鉴定， 试图通 过一次 ＤＮＡ 扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信 息。结果表明， 所设计 ＳＲＹ 基因的引物具有高度特异 性， 是性别鉴定的主要依据， 得出结论在被检个体中， 能 同 时 扩 增 出 ＳＲＹ 基 因 、ＭＣＭ１５８、ＭＡＦ４５， Ｘ 染 色 体 上 ＭＩＬＶＥＴ０９ 和 ＡＥ２５， 且 Ｘ 染色体上的 ＭＩＬＶＥＴ０９、 ＡＥ２５ 基因型为纯合子的个体为正常的雄性；被检个体 中 只 有 Ｙ 染 色 体 上 ＭＣＭ１５８、ＭＡＦ４５ 和 Ｘ 染 色 体 上 ＭＩＬＶＥＴ０９、ＡＥ２５ 的扩增产物， 而没有 ＳＲＹ 基因的扩 增产物， 则被检个体为雌性， 且 ＭＩＬＶＥＴ０９、ＡＥ２５ 的基 因型对雌性个体的性别判断无影响。杨宝田等应用 ＳＲＹ－ ＰＣＲ 扩 增 鉴 定 狍（Ｃａｐｒｅｏｌｕｓ ｃａｐｒｅｏｌｕｓ）的 性 别 ， 对 ＳＲＹ－ ＰＣＲ 产物克隆测序， 得到 １８５ｂｐ 的 ＳＲＹ 基因部 分核苷酸序列。试验为狍种群性别比率及其种群动态 变化机制研究提供了资料。王加连等开展了 ＰＣＲ 扩增 ＳＲＹ 基因进行鲸类动物性别的鉴定的研究， 用 ＰＣＲ 扩 增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的 ＳＲＹ 基因片断， 并 对其进行凝胶电泳分析来鉴定鲸类动物的性别。通过 此方法对 ８７ 个已知性别鲸类动物标本的检验， 结果完 全正确， 并进一步应用此方法成功地完成了另外 ３３ 个 未知性别鲸类标本的性别鉴定。由此建立了一套简单、 快速、可靠的鲸类动物的性别鉴定方法。侯建等利用 ＳＲＹ－ ＰＣＲ 法快速鉴定体外培养兔胎儿成纤 维 细 胞 系 的性别， 他们从怀孕 １７ｄ 母兔取得 ３ 个胎儿， 分离培 养 得 到 ３ 个 胎 儿 成 纤 维 细 胞 系 ＲＦＦ１ 、ＲＦＦ２ 和 ＲＦＦ３ 。通过扩增兔 ＳＲＹ 基因核心序列片段对 ３ 个细 胞系的性别进行鉴定（ ＳＲＹ－ ＰＣＲ） 。结果表明： ＲＦＦ１ 和 ＲＦＦ３ 为雄性， ＲＦＦ２ 为雌性。进一步利用染色体 核型分析法鉴定 ３ 个细胞系的性别， 与 ＳＲＹ－ ＰＣＲ 法 的结果完全一致。因此表明实验所用的 ＳＲＹ－ ＰＣＲ 的 引物、细胞基因组 ＤＮＡ 的提取方法、ＰＣＲ 反应条件是 合适的， 可以快速准确地鉴定体外培养的兔胎儿成纤 维细胞的性别。 ４ 利用 ＳＲＹ 基因进行胚胎性别控制 ４．１ 通过 Ｘ、Ｙ 精子分离进行性别控制
反刍动物性控基因SRY最新研究进展
doi：10.3969/j.issn.2095-3887.2018.01.013反刍动物性控基因最新研究进展崔子龙s常卫华 '王娟红u(1.塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔843300;2.塔里木兵团畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔843300)摘要:基因主导哺乳动物雄性性别决定和睾丸起始发育，在性别决定方面起着主要的调控作用。
文章对反刍动物性控基因紐}"的功能、与其相关的SOX基因以及其在反刍动物性别控制方面的最新研究进展进行了综述，以期为反刍动物的性别控制提供一定参考。
关键词:反刍动物;基因；S0Z基因功能；性别鉴定中图分类号:Q341 文献标志码:A 文章编号:2095-3887(2018:)01-0053-04Current Advances in Sex Control SRY Gene of R uminantCuiZilong1, C h a n g W e i h u a1,2, W a n g J u a n h o n g1,2(1. College of A n i m a l Science,Tarim University,Alar,Xinjiang 843300,C h i n a;2. K e y Laboratory of T a r i m A n i m a l H u s b a n d r y Science a n d Technology, Alar, Xinjiang 843300,China)Abstract :5i?F gene leads m ale sex determination a n d testicular development of m a m m a l i a n, a n d plays a major regulatory role in sex determination. This article summa r i z e d the function of sex control gene SR Y of ruminant a n d the relevant SOX genes, a n d the current advances in the sex control of ruminants.Keywords:ruminant;Si? F g e n e;S O X gene function;sex determination性别决定基因（sex region of Y c h r o m o s o m e，S R Y)和性控技术的研究进展及研究成果是最近几年来学者们在 性别发育和分化、性别控制等研究领域中取得的最大突 破性成果,。
SRY基因研究进展
SRY基因研究进展Sry基因的研究进展摘要性别决定基因(Sex region of Y chromosome,人类以SRY、小鼠以Sry表示)的研究进展是近几年来人类在性别决定、性别分化研究中获得的最大的突破性成果.对于两性来说,性别决定和分化是种族得以繁衍延续的物质基础,也是个体正常发育和生存不可缺少的一部分。
性别的决定,依赖于生物体内的性染色体的完整性,在性器官发育过程中,还要有基因和激素的共同作用,最终决定形成睾丸(雄性)或形成卵巢(雌性)。
SRY在哺乳动物性别决定中起关键作用,它是睾丸决定因子,启动睾丸的分化,是睾丸发育负调节的抑制因子。
如果SRY突变将导致XY性逆转等性别异常形成和发育,所以阐明其基因信号通路成为研究者的主要目标。
本文主要综述性别决定因素中SRY基因的最新研究进展。
关键词：性别决定基因;基因;进展Research Development for Sry GeneAbstractSeveral breakthroughs have been made in the field of sex determination and sex differentiation in past few years. For both sexes, it is race and differentiation sex determination to reproduce a continuation of the material base, is also the normal development and individual is an indispensable part of survival. The sex of the decision, dependent on biological integrity of sex chromosomes, organ in the development process, must have the common function of genes and hormone, and finally decided to form testicular (male) or form ovarian (females). SRY in mammalian sex decision plays a key role, it is testicular decided to factor, start the differentiation of the testicles, is the development of the testicles negative adjust inhibitory factor. If the SRY mutations will lead to sex and gender reversal XYabnormal formation and development, so to elucidate the gene signaling pathways become the researchers's main goal. This article reviews the deciding factor in gender SRY works the latest progress in research.Key words:sex region of Y chromosome; gene; development1 SRY基因的寻找历程[1～8]时代在进步，科技在发展，人们对宇宙的了解越来越多。
Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因及性腺发育的影响的开题报告
Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因及性腺发育的影响的
开题报告
题目：Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因及性腺发育的影响
研究背景:
小鼠的性别决定是由Sry基因控制的。
Sry基因是Y染色体上的单一基因，它的表达是决定小鼠性别的重要因素。
在小鼠的胚胎发育过程中，Sry基因的表达在性别决定和生殖腺的发育中起着至关重要的作用。
在哺乳动物中，雄性和雌性个体的性腺和生殖能力存在明显不同。
因此，对于Sry基因的研究对于理解哺乳动物的性别决定与性腺发育具有重要的意义。
研究目的:
本研究旨在探讨Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因及性腺发育的影响，深入探究Sry基因在小鼠胚胎发育过程中的作用与机制，为后续的研究提供基础支持。
研究内容：
实验将采用RNA干扰技术沉默小鼠Sry基因。
通过对小鼠胚胎和性腺组织的取样、组织切片和染色体分析等手段，运用免疫组织化学等方法，检测小鼠中Sry基因的表达情况以及其对于小鼠胚胎性别决定基因及性腺发育的影响。
通过对实验数据的统计分析，建立Sry基因在小鼠性别决定及性腺发育中的作用模型。
研究意义：
此次研究将深入探究Sry基因在小鼠胚胎发育过程中的作用及其对性别决定基因以及性腺发育的影响，为深入理解哺乳动物生殖系统、解决相关临床问题提供科学依据。
此外，本实验采用RNA干扰技术沉默Sry基因，也为后续相关基因研究提供了新的思路和实验方法。
SRY基因在性别决定中的作用及例题分析
SRY基因在性别决定中的作用及例题分析决定人性别的并非性染色体。
其实，是由染色体上的基因这个发现来自所谓的“性别反转人”：有些人的性染色体明明是XY，却是女性，而一些xX型的人却是男性。
研究发现，一个XY型女性的Y染色体上有些地方缺失，其中缺失的区域含有一个基因，如果这个基因发生了突变，XY型的人也会变成女性。
而如果含有这个基因的Y染色体片段被转移到了X 染色体上，XX型的人就会成为男性。
这些现象说明，这个基因就是决定受精卵是否发育为男性的基因。
Y染色体上含有这个基因的区域叫做Y染色体性别决定区(简称SRY)，这个基因也就叫做SRY基因。
近一步的研究发现，许多哺乳动物(包括有胎盘哺乳动物和有袋类哺乳动物)都有SRY基因，所以SRY 基因是许多哺乳动物的雄性决定基因。
SRY基因不是直接导致雄性特征的发育的，而是通过由多个基因组成的性别控制链起作用。
SRY基因的产物先活化SOx9基因，SOx9基因的产物又活化FGF9基因，然后再活化DMRT1基因。
这个性别控制链上的基因会抑制卵巢发育所需要的基因的活性，使得受精卵向雄性方向发展。
如果没有SRY基因（即没有Y染色体），受精卵中其他的一些基因就会活跃起来，其产物促进卵巢的生成。
所以男女性别的分化是两组基因相互斗争的结果。
例题：人类的性别主要由Y染色体上的SRY基因决定，通过男性生殖器官和第二性征表现出来。
（1）男性体细胞中性染色体的同源配对区与特异区示意图如图1所示。
①SRY基因可能位于图1中的特异区。
②请在绘图处的方框内，绘制出X、Y染色体减数第一次分裂联会时的图像。
（2）在某家庭中发现一名性染色体组成为XX的男性，研究人员同时检测了此家庭成员的性染色体组成和红细胞表面Xg抗原（由X染色体上的基因A/a控制）的存在情况，具体如图2.由图2分析，红细胞表面Xg抗原是由性基因控制的，Ⅲ-2父母的基因型是，图中Ⅲ-2的Xg抗原表现型与预期（填“相符”或“不相符”）。
SRY基因的分子机制及其在奶牛性别控制中的应用
Ｍ ｏ ｅ ｕｌ ｒ Ｍ ｅ ｈａ ｓ ｆＳＲＹ ｅ ｎ ｌｃ ａ ｃ ｎｉｍ ｏ Ｇ ｎｅ ａ ｄ
ｉ ｐ ｉａ ｉ ｎ ｉ ｈ ｅ ｎ ｒ ｌｏ ｉ ｗ ｔ Ａｐ ｌ ｔ ｎ ｔ ｅ Ｓ ｘ Ｃｏ ｔ ｏ ｆＭ ｌ Ｃｏ ｓ ｃ ｏ ｋ
ＧＵＯ ｎ — ｈ ｎｇ Ｄｏ ｇ ｓ ｅ
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第３ ５卷 第 ２期
Ｖｏ ． ５ Ｎｏ ２ １３ ．
河 南 科 技 学 院 学 报 （自然科 学版 ）
Ｊ ｕｎ ｌｏ ｎ ｎ Ｉｓｉ ｔ ｆＳ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏ ｒ ａ ｆＨｅ ａ ｎ ｔ ｕｅｏ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｔ
ｃ ｔ ｎ ｏ Ｒ ｉ ｈ ａｒ ａｔ ｅ ｎ ｓ ｘ ｃ ｎ ｒ ｌａ ｄ ｉ ｍｂ ｏ Ｓ ｘ ｉ ｅ ｔ ｙ ｎ ｅ ｈ ｓ ｉ ｇ ｏ ｈ Ｒ ｅ ｌｒ ｅ ｎ ａ ｉ ｆＳ Ｙ ｎ ｔ ｅ ｄ ｉ ｃ ｔ ｅ ｓ ｍｅ ｅ ｏ ｔ ｎ ｎ ｅ ｒ ｅ ｄ ｎ ｉ ｉ ｇ， ｍｐ ａ ｉ ｎ ｎ ｔ ｅ ＰＣ ｎ ａ ｇ ｍｅ ｔ ｏ ｙ ｌ ｏ ｙ ｆ ｚ ｍｅｈ ｄ ａ ｄ ＤＮＡ ｐ ｏ ｅ ｍｅｈ ｄ ｕ ｅ ｎ ｅ ｒ ｏ ｓ ｘ ｉ ｅ ｔ ｙｎ ． ｔｏ ｎ ｒ ｂ ｔ ｏ ｓ ｄ ｉ ｍｂ ｅ ｄ ｎ ｉ ｉ ｇ ｙ ｆ
２０ ０ ７年 ６月
Ｊ ｎ２ ０ ｕ ．０７
Ｓ Ｙ基 因 的分 子 机 制 及 其 在 奶 牛性 别 控 制 中的应 用 Ｒ
郭 东 升
（ 河南 科技 学 院动 物科 学学 院 ， 河南 新 乡 ４ ３ ０ ） ５０３
摘要： 综述了性别决定的生物学机制和性别决定基因（ Ｒ ） ｓ Ｙ 的定位、 结构、 功能、 表达特异性及其作用的分子机
SRY基因调控网络的研究进展
Ｓ ＲＹ ｉ ａ ｔ ｅ ｏ ｏ ｈ ｃ ｓ ａ ｅ ｆ ｇ ｎ ｔ ａ ｔｖｔ ｌａ ｉｇ ｏ ｓ ｔ ｈ ｔｐ ｆ ｔ ｅ ａｃ ｄ ｏ ｅ ｅｉ ｃｉｉ ｃ ｙ ｅ ｄ ｎ ｔ ｍａｅ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ｎ ｌ ｄ ｖ ｌｐ ｎ ｉ ｍａ ｍｍａｓ Ｔｈ ｌ ． ｅ
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Ｋ ｅ ｗｏ ｄｓ Ｓ ｙ ｒ ： ＲＹ Ｒｅ ｕａｉｎ ｅ ｗ ｒ ｇ ｌｔｏ ｎ ｔ ｏ ｋ
１９ ９０年 Ｓ Ｙ基 因的发 现是 生命科 学史 上 的一 大突 Ｒ
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SRY基因在性别鉴定中的应用
磁珠法提取DNA
碱裂解法提取DNA
1.用NaOH作用20分钟 2.加HCI中和，离心后取上清， 含少量DNA。
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• 磁珠法提取DNA试剂盒
• 磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这 种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸 发生吸附反应。 • 快速简捷，一般可在36分钟内完成。 • · 不用多次漂洗磁珠也可确保高纯度，提取出的基 因组DNA OD260/OD280典型的比值达1.7-1.9， • 长度可达2 0 k b - 5 0 k b，可直接用于P C R、 Southern-blot和各种酶切反应。
• 2、PCR反应 • （1）扩增人的SRY基因，所用引物为： • SRY1: 5’-TGG GAC TGG TGA CAA TTG TC-3' • SRY2：5’-GAG TAC AGG TGT GCA GCT CT-3'
• • • • • • • • • • • • •
（2）每个样品反应体系为25μl。 首先将下列成分预混： 10×PCR缓冲液 5μl 25mM MgCl2 4 μl 2.5mmol/L dNTP 4μl 10 umol/L SRY引物 1 2μ l 10 umol/L SRY引物2 2μl 1 U/μl Taq酶溶液 1μl ddH2O 26μl 共44ul。 将上述成分混合均匀； 分装到2只0.2 ml离心管中（22μl/管）； 一管加入3μl男生DNA，另一管加入3μl女生DNA。
• • • • • • • •
（3）PCR反应条件为： 94℃ 3min 94℃ 30s 50℃ 30s 循环35次 72℃ 30s 72℃ 5min 10℃ ∞
• 3、电泳检测 • 制备2%的琼脂糖凝胶，取8μl PCR产物， 加2ul上样缓冲液，混匀，点样，同时点 DNA分子量标记，在5V/cm的电压下电泳， 电泳结束后用EB染色20min，紫外检测观 察并照相。
SRY基因研究进展及其在动物性别鉴定中的应用
Ｓ Ｙ基 因研 究进 展 及 其在光玉 ， 李 钟 伟 ， 忠娟 常
吉林 １２ ０ ） ３ １ ９ （ 中国农业科学院特产研究 所 ， 吉林
摘
要 ：Ｒ Ｓ Ｙ基 因是 哺乳动 物雄 性 的性别 决 定基 因。研 究发现 Ｓ Ｙ基 因的启 动 能够促 进雄 性发 育 ， Ｒ 从
即性 染色 体决 定性 腺 发育 ， 和次级 域 ，杨其 沅 等对 牦牛 Ｓ Ｙ和 Ｔ Ｏ基 因部 分序 列 进 行 包括 初级 性 别决 定 ， Ｒ Ｒ
克隆 与测 序分析 。赵雪 等研 究 了牛 Ｓ Ｙ基 因的克 隆与 性别 决定 ， 随 ｌ腺 分化 ， Ｒ 即 生 由其产 生 的激 素诱 导体 细胞 测序 ， 隆 出长度 为 ２７ ３ ｐ的 牛 Ｓ Ｙ基 因 。裴杰 等 分化 ， 终发育 成雄 性或 雌 Ｉ 克 １ ｂ Ｒ 最 生。 发表论 文 “ 国荷斯 坦 牛 Ｓ Ｙ基 因编 码 区的克 隆 与原 中 Ｒ 家 畜早 期胚 胎 的性别 鉴 定是 家 畜胚 胎移 植 的重要 对 核 表达 ” ，结 果表 明 Ｓ Ｙ基 因编码 区长 ６ ７ｂ ，编码 内容 ， 实 现动物 性别 的人 为控制 具有 重要 意义 。近年 Ｒ ８ ｐ ２９个氨 基酸 。付强 等对 水牛 Ｓ Ｙ基 因进 行 了克 隆及 来 随着 性别 鉴定 技 术 的不断 发展 ，出现 了许 多 鉴定 方 ２ Ｒ 应用 于 哺乳动 物早期 胚 胎性别 鉴定 。 主要 有细胞 遗 序 列分 析 ， 并且 用 Ｂ Ａ Ｔ与 牛属 动 物 Ｓ Ｙ基 因 比对 ， 法 ， ＬＳ Ｒ 免 结果 显示 同源性 为 ９ ％ 。帅丽 芳等 发表 论文 “３１ ６ １／７罗 传 学方 法 、 疫学 方法 和分 子生物 学方 法 。随着 分 子生 物学 的发 展 ，特 别 是 ２ 纪 ９ ０世 ０年 代 Ｓ Ｙ基 因 的发 Ｒ 收稿 日期 ：０ ８ ０ — ５ ２０ — ２ ２
SRY基因在性别鉴定中的应用
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理想的遗传学材料应具备以下几个特征
• 所选物种最好是二倍体，染色体基数少。 所选物种最好是二倍体，染色体基数少。 • 具有较多可观察、测定的变异性状，相对性状 具有较多可观察、测定的变异性状， 之间差异明显。 之间差异明显。 • 交配可以控制，按实验目的自由选择亲本进行 交配可以控制， 交配。 对研究遗传规律有利。 交配。——对研究遗传规律有利。 对研究遗传规律有利 • 世代周期短。——获得实验结果的周期也短。 世代周期短。 获得实验结果的周期也短。 获得实验结果的周期也短 • 一次交配产生的子代个体多。——突变性状产 一次交配产生的子代个体多。 突变性状产 生的频率通常较低， 生的频率通常较低，子代群体大则增加了获得 这些突变性状的机会。 这些突变性状的机会。从一个大群体中获得的 结果更准确、可靠。 结果更准确、可靠。 • 6.易于管理。 6.易于管理 易于管理。
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SRY基因（sexY） SRY基因（sex-related Y） 基因
• SRY基因（sex-related Y）是人类性别决定基因，定位于 SRY基因（sexY）是人类性别决定基因， 基因 只含有一个外显子，没有内含子， Yp11.3. 只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约 1.1kb，编码一个204氨基酸的蛋白质。 204氨基酸的蛋白质 1.1kb，编码一个204氨基酸的蛋白质。 • 该蛋白的功能是与DNA结合激活抗中肾旁管物质（MIS苗氏 该蛋白的功能是与DNA结合激活抗中肾旁管物质（MIS苗氏 DNA结合激活抗中肾旁管物质 管抑制物质）调节途径，导致MIS表达， MIS表达 管抑制物质）调节途径，导致MIS表达，使前身苗氏管退 女性生殖系统不能生成，生成睾酮， 化，女性生殖系统不能生成，生成睾酮，通过双氢睾酮作 使胚胎体內的男性的前身沃氏管（ ducts） 用，使胚胎体內的男性的前身沃氏管（Wolffian ducts） 发育，生成男性生殖系统。 发育，生成男性生殖系统。
哺乳动物性别决定机理与SRY基因调控性腺分化的研究进展
哺乳动物性别决定机理与SRY基因调控性腺分化的研究进展杨宇;马恒东
【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》
【年(卷),期】2007(000)003
【摘要】众所周知，X染色体与Y染色体在动物的性别决定中具有同等的作用。
但随着分子遗传学、发育生物学及其他相关学科的发展，认为不能将它们二者看作在性别决定中具有同等的作用。
实际上性别决定的关键只在于Y染色体，Y染色体的有无分别决定雄性或雌性。
其核心是Y染色体将未分化的性腺导向睾丸的分化，缺少Y染色体则向卵巢发育，两者之间的其他差异都是第二位的，
【总页数】3页(P11-13)
【作者】杨宇;马恒东
【作者单位】四川农业大学动物科技学院,雅安,625014;四川农业大学动物科技学院,雅安,625014
【正文语种】中文
【中图分类】S8
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1.哺乳动物性别决定机理研究进展 [J], 周林燕;焦保卫;王德寿
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5.哺乳动物性别决定基因（SRY／Sry）及性别决定机理的研究进展 [J], 陈乃清
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