不同产地骨碎补的柚皮苷含量考察_图文(精)
广西骨碎补种质资源调查研究
广西骨碎补种质资源调查研究作者：黄宝优，黄雪彦，彭玉德，等来源：《湖北农业科学》 2014年第16期黄宝优，黄雪彦，彭玉德，韦莹，潘春柳，张占江（广西药用植物园/广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，南宁５３００２３）摘要：采用走访和实地调查相结合的方法对广西优势药材骨碎补（ＤａｖａｌｌｉａｍａｒｉｅｓｉｉＭｏｏｒｅｅｘＢａｋ．）种质资源种类与分布、生物生态学特性、资源及开发利用状况、有效成分含量等进行调查研究。
结果表明，广西骨碎补种质资源丰富，基源植物共３科５属７种。
骨碎补原植物喜温暖湿润的气候环境，多附生于林中岩石或树干上，偶生于墙上，土生较少。
广西骨碎补药材品质佳，质量好，有较好的利用和开发价值。
骨碎补生境受到一定程度破坏，资源逐渐减少，建议加强对骨碎补种质资源收集和原生境保护，开展种苗繁育和人工栽培技术研究，建立较大规模的人工种植与繁育基地，为资源可持续利用提供保障。
关键词：骨碎补（ＤａｖａｌｌｉａｍａｒｉｅｓｉｉＭｏｏｒｅｅｘＢａｋ．）；种质资源；调查；广西中图分类号：Ｑ９４８．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０14）16－3832-03收稿日期：２０１３－１０－１４基金项目：广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻１０９９０６３－１５）作者简介：黄宝优（１９７８－），男（壮族），广西都安人，助理研究员，主要从事药用植物保育技术研究工作，（电话）０７７１－５６０３８２４（电子信箱）ｈｕａｎｇｂａｏｙｏｕ９４８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ；通讯作者，彭玉德，广西临桂人，助理研究员，主要从事药用植物资源保育研究工作，（电子信箱）ｐｅｎｇｙｕｄｅ＠１２６．ｃｏｍ。
骨碎补（ＤａｖａｌｌｉａｍａｒｉｅｓｉｉＭｏｏｒｅｅｘＢａｋ．）为槲蕨科（Drynariaceae）植物槲蕨（ＤｒｙｎａｒｉａｒｏｏｓｉｉＮａｋａｉｋｅ）干燥根茎。
味苦，温，归肝、肾经。
具有疗伤止痛，补肾强骨及外用消风祛斑的功能。
HPLC-UV法测定烫骨碎补中柚皮苷的含量
HPLC-UV法测定烫骨碎补中柚皮苷的含量王清华【摘要】目的:建立测定烫骨碎补中柚皮苷含量的高效液相色谱(HPLC-UV)法.方法:采用Hypersil C 18(250 mm×4.6 mm,5μn)为色谱柱;以乙腈-水(23:77,v/v)为流动相进行等度洗脱,柱温为30℃;流速为1.0 mL/min,检测波长为283 nm,进样量20 μL.结果:方法学考察表明,柚皮苷在9.80～196.00 μg/mL范围内具有良好的线性关系(R2=0.9995)日内精密度RSD为1.58％,日间精密度RSD为2.39％,平均加样回收率为97.49％,RSD为3.27％(n=6).结论:该法操作简便易行,适用于作为中药材烫骨碎补的质量控制和评价.【期刊名称】《宜春学院学报》【年(卷),期】2017(039)009【总页数】3页(P20-22)【关键词】骨碎补;柚皮苷;含量测定;HPLC-UV【作者】王清华【作者单位】第三军医大学新桥医院药学部,重庆400037【正文语种】中文【中图分类】R917骨碎补是水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，为常用中药。
其性味苦，温，归肾，肝经。
具有补肾强骨，续伤止痛之功能。
用于肾虚腰痛，耳鸣耳聋，牙齿松动，跌扑闪挫，筋骨折伤，外治斑秃，白癜风。
骨碎补中主要含柚皮苷、新北美圣草苷、山奈酚及木犀草素等黄酮类化合物[1-2]，羊齿-9(11)-烯、里白醇等三萜类化合物[3]，苯丙环素类[4]及挥发油成分[5]，其中柚皮苷和新北美圣草苷的含量较高，为骨碎补中的主要活性成分[2,6]。
现行标准主要以柚皮苷为指标成分对烫骨碎补进行定性鉴别和含量测定[7]，但分析方法(前处理耗费时间及进样分析时间较长)存在着缺陷。
因此，为确定中药材烫骨碎补的有效性，本文建立并优化了HPLC-UV法对烫骨碎补中的柚皮苷含量进行测定。
Agilent 1100系列高效液相色谱仪(包括1100泵，在线真空脱气机)；sartorius BT224s型电子分析天平；金腾隔膜真空泵；Heal Force超纯水系统；AS5150A Ultrasonic Cleaner；恒温水浴锅；超声仪(SK7200H型，上海科导超声仪器有限公司)。
骨碎补中柚皮苷含量测定方法的优化研究
醇-醋酸-水（40∶3∶60）为流动相；流速 1.0 mL/min；柱温 25 ℃；检测波长 283 nm。 结果 柚皮苷在 0.15~1.22 μg 范围
线性关系良好（r=0.999 6），加样回收率为 98.5%，RSD=1.8%（n=6）；5 种 不同制备方法所得供试液中柚 皮 苷 的 含 量 分
动，跌扑闪挫，筋骨折伤；外治斑秃，白癜风。 骨碎补主含 柚皮 苷 （naringin）、新北 美 圣草 苷 等 多 种 黄 酮 类 成 分[1]，其 内 在质 量 评 价 多 以 柚 皮 苷 为 指 标 ， [2]179 其 含 量 测 定 方 法 多
〔收 稿 日 期 〕2009－11－10 〔基 金 项 目 〕湖 南 省 中 医 管 理 局 科 研 基 金 资 助 项 目 （2006-084 ） 。 〔作 者 简 介 〕伍 奕 （1972－）， 男 ， 湖 南 张 家 界 人 ， 硕 士 研 究 生 ， 主 管 药 师 ， 主 要 从 事 中 药 制 剂 与 炮 制 研 究 。 〔通讯作者〕* 蒋孟良，男，教授，硕士研究生导师，Tel：0731-85381527。
1 实验材料
1.1 仪器 1525 型高效液相色谱仪（美国 Waters 公司,包括 1525
泵， 在线真空脱气机，2487 检测器，HP-A.09.01 工作站）； UV-2450 型紫外分光光度计（日本岛津）；DK-S22 型电热 恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；AR1140 型电 子分 析 天平 （，奥 豪 斯国 际 贸 易 (上 海)有 限 公 司 ）；FZ102 型微型植物粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。 1.2 试剂
A 柚皮苷对照品
t/min
B 骨碎补样品
t/min 图 1 骨碎补 HPLC 图
HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量
132科技创新导报 Science and Technology Innovation Herald骨碎补配方颗粒，为深圳三九医药股份有限公司生产的其中一种配方颗粒剂，在国内医院广泛应用。
骨碎补，为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，疗伤止痛，补肾强骨，外用消风祛斑，该药材及其饮片的质量标准收载于《中国药典》2010年版一部[1]。
然而，骨碎补配方颗粒剂却缺乏质量标准。
因此，为有效地控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）对骨碎补配方颗粒中的柚皮苷进行含量测定。
该方法操作简便、重现性好、专属性强，灵敏度高，结果科学准确，适合作为该品种的含量测定方法。
具体研究如下。
1 仪器与试药高效液相色谱仪，电子天平，超声波清洗器；骨碎补配方颗粒；柚皮苷对照品；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1色谱条件色谱柱大连依利特C18反相柱（5m×250mm×4.6mm ）；流动相为甲醇-醋酸-水（35：4：65）；流速为1.0min/min；柱温为35℃；检测波长为283nm；进样量为10μL。
在此条件下，理论塔板数按柚皮苷峰计算不得低于3000，柚皮苷峰与相邻的其他峰的分离度应大于1.5。
柚皮苷对照品、骨碎补配方颗粒和阴性对照色谱图见图1。
2.2对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备取适量本品，研细，取约0.02g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入甲醇30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）45min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4精密度试验取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，测定，计算柚皮苷峰面积的RSD为0.31％。
2.5专属性试验取按处方比例及制法制备的缺骨碎补的阴性样品，按供试品溶液的制备及测定方法进行处理和测定。
骨碎补的研究概况
骨碎补的研究概况马洪娜;魏升华;檀龙颜【摘要】骨碎补为临床常用中药,具有疗伤止痛,补肾强骨等功效.骨碎补资源分布是影响其开发利用的关键因素.生药学特性是药材的质量评价及其与混伪品的鉴别的依据.骨碎补炮制工艺的优化能够提高饮片的质量.提取工艺的优化能为药材有效成分的工业化生产提供可靠的技术支持.此外,药物代谢动力学和代谢组学的研究能为药材的临床应用提供良好的参考依据.文章从骨碎补在资源调查、生药学鉴定、炮制工艺、提取工艺、药物代谢动力学和代谢组学等方面的研究进展情况进行概述.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2017(026)009【总页数】8页(P59-65,71)【关键词】骨碎补;资源;质量;临床应用;研究概况【作者】马洪娜;魏升华;檀龙颜【作者单位】贵阳中医学院药学院,贵州贵阳550025;贵阳中医学院药学院,贵州贵阳550025;贵阳中医学院药学院,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】R282骨碎补为蕨类植物槲蕨Drynaria fortunei (Kunze) J. sm.(槲蕨科Drynariaceae 槲蕨属Drynaria植物)的干燥根茎[1]。
其味苦温，归肝、肾经，具有疗伤止痛，补肾强骨，消风祛斑的功效[1]。
临床用于跌扑闪挫、筋骨折伤、肾虚腰痛、筋骨痿软、耳鸣耳聋、牙齿松动等症，外治斑秃和白癜风[1]。
近年来，由于骨碎补良好的药用价值，在资源调查、生药学鉴定、炮制工艺、提取工艺、药代动力学和代谢组学等方面的研究取得了明显的成效。
笔者在系统查阅和整理相关文献资料的基础上，对骨碎补涉及以上领域的最新研究结果进行系统的总结，并对该领域存在的问题和前景进行探讨，旨在为骨碎补资源的保护、合理开发和可持续利用提供参考。
骨碎补原植物喜温暖湿润气候，多附生于树干或林中岩石上。
虽然分布较广，但生长环境特殊，且生长缓慢。
黄宝优等[2]采用走访和实地调查相结合的方法，对广西骨碎补种质资源分布和生物生态学特性进行了调查研究。
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定-精选文档
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。
骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。
1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。
（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。
砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。
酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。
1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。
2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。
HPLC法测定骨碎补及其习用品中柚皮苷的含量
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 定 骨碎 补 及 其 习用 品 中柚 皮 苷 的 含 量
朱 常成 尹子 丽
１ ．昆药集 团股份有 限公 司 ，云南 昆明 ６ ５ ０ １ ０ ０ ；２ ．云南 中医学院 民族 医药 学院 ，云南 昆明 ６ ５ ０ ５ ０ Ｃ方法 以柚皮 苷力指 标 ，对骨 碎补及 其 习用品进行 柚皮 苷含 量测 定。方 法 ：色谱 柱 Ｃ １ ８
超声 处 理 （ 功率 ２ ５ ０ Ｗ，频 率 ３ ３ ｋ Ｈ ｚ ）３ ０ ｍ ｉ ｎ ，放 冷 ， 再称定重量 ，用 ７ ０ ％ 甲醇补足减 失的重量 ，摇匀 ，过 滤 ，滤 液 水 浴 挥 发 浓 缩 至 约 ｌ ｍ Ｌ ，用 甲 醇 定 容 至 ２ ｍ Ｌ ，摇匀 ，用 ０ ． ４ ５ ｔ ｍａ 微孔滤膜滤过 ，取续 滤液 。 ２ ． ４ 方法 学实 验 ２ ． ４ ． １ 标 准 曲线 的制作 取 柚皮 苷对 照 品适 量 ，精 密称定 ，加 甲醇溶解并定量稀 释制成 每 ｌ ｍ Ｌ含 ０ ． ６ ｍ ｇ 的溶液，作为对照品储备液 ， 分别精密移取对照品储 备液 ２ ． ５ 、４ 、５ 、６ 、７ ． ５ ｍ Ｌ置 １ ０ ｍ Ｌ量瓶 中 ，加溶 剂 稀释至刻度 ，摇匀 ，作为线性 溶液 。精密量 取各线性 溶液 １ ０ ，注入液相色谱仪，记录色谱图。由浓度 ｃ 对峰面积 Ａ 进行 线性 回归 ，结 果 线 性 方 程 为 ：Ｙ＝ １ 仪器 与材 料 ０ ． １ ６ ８ １ ｘ一２ ． ３ ３ ， ：０ ． ９ ９ ９ ３ 。结 果 表 明，柚 皮 苷 在 １ ． １ 仪器 Ｌ Ｃ一 ２ ０ １ ０ Ａ Ｈ Ｔ高效液相色谱仪 （ 日 本 １ ． ５ ３ ｔ ａ ｇ一 ４ ． ５ ９ １ ｘ ｇ内线性 良好 。 岛津 ） ；Ａ Ｌ ２ ０ ４ 电子 天 平 （ 梅 特 勒 一 托 利 多 仪 器 ２ ． ４ ． ２ 稳定 性实验 精 密吸取柚 皮苷对 照 品按上 述 （ 上 海 ） 有 限公 司 ） ；ＷＦ Ｚ—ｕ Ｖ一 ２ ４ ５ ０型紫 外 分光 相 同条件测定 ，分别 在 ０ 、１ 、２ 、４ 、８ 、１ ２ 、２ ４ ｈ进 光度 计 （ 日本 岛津 ） ；超声 仪 （ 上 海 冠 特超 声 仪器 样 １ Ｏ Ｌ ，测定 柚 皮 苷 峰 面 积 ，Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ６ ％ ，表 有 限公 司 ） 。 明柚皮 苷 ２ ４ ｈ内稳 定性 良好 。 １ ． ２ 材 料 甲醇 为 色谱 纯 ，水 为双 重 蒸 馏 ，其 ２ ． ４ ． ３ 精 密度 实 验 取 线性 关 系项 下 柚 皮苷 对 照 他试 剂 均 为 分 析 纯 。柚 皮 苷 对 照 品 购 自北 京 北 纳 品溶 液 ，按上 述 相 同测定 条件 ，连续进 样 ６次 ，进 创联 生 物技术 研 究 院 （ 纯度 ＞ ／９ ８ ％） ；骨 碎 ｝ 及 其 样体 积 为 １ ０ １ ｘ Ｌ ，测 定结 果 Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ７ ％ ，表 明仪 习用 品的 样 品 主 要 采 自云 南 省 各 个 分 布 区 ！材 料 器精 密 度 良好 。 均 由经云南 大学 陆树 刚教 授鉴 定 。 ２ ． ４ ． ４ 重 复性 取 同一 批 骨 碎补 习用 品 圆盖 阴 石 蕨药材 ６ 份 ，按供试 品制备方法制备 ，测定含量 ， ２ 方 法与 结果 测得重复性 ６份 Ｒ Ｓ Ｄ值为 １ ． ３ ４ ％ ，小于 ２ ％ ，表明 ２ １ 色谱条件 色谱柱： Ｋ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ Ｉ ： ４ ． ６ ｍ ｍ 该 方法 重 复性 良好 。 ． ４ ． ５ 中间精密度 另一名 实验人 员 ，在不 同 Ｅ ｔ 期， × ２ ５ ０ ｍ ｍ，５ １ ａ ￣ ｎ ） ；流动相 为乙腈 一 Ｑ ０ ８ ８ ％ 甲酸 水溶 液 ２ 采用不 同仪器及色谱柱对 同一批次骨碎 补进行 含量测 （ ２ ３ ． ３ ： ７ ６ ． ７ ） ；流速 ： Ｑ９ ｍ Ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ；检测波长为最大吸收 定 ，２人 １ ２次 测 定 结 果 的 Ｒ Ｓ Ｄ值 为 １ ． １ ４ ％ ，小 于 波长 ２ ８ ３ ｎ ｍ；温度 ：３ ｏ℃。 ２ ． ２ 对照 品溶 液 的制 备 精 密 称 取柚 皮 苷 照 品适 ２ ％，表明本法精密度良好。 ． ５ 加样 回收 率 精密 称 取 已知含 量 的样 品约 １ ｇ 量 ，加 甲醇溶 解制成 每 ｍＬ含 柚皮 苷 ０ ． ３ ０ １ ｍｇ 对 照 ２ 品溶 液 。 （ 称取 ９份 ） ，分 别 按 柚 皮 苷 含 量 的 ５ ０ ％ 、１ ０ ０ ％、 ５ ０ ％的量加入各柚皮苷对照品 （ 每一浓度平行制 ２ ． ３ 骨碎补类药材供试品的制备 分别取骨 淬补及 １ 其习用品药 材 ，粉碎 ，取 约 ２ ｇ精密 称定 ，置 具塞锥 备 ３份） ，按供试品溶液制备方法制备加样 回收率 形瓶中 ，精密加入 ７ ０ ％ 甲醇 ２ ０ ｍ Ｌ ，密塞 ，称廷 重量 ， 样 品。分 别精 密量 取 １ ０ ｌ ， ｚ Ｌ进 样 ，计算 测 得 量 和 回
HPLC法对不同产地骨碎补习用品柚皮苷的含量测定
膜盖），用粉碎机粉碎 ３次，每次 １０ｓ。称取药材 粗粉约 ０５０ｇ，精密称定，置于三口烧瓶中。根据 文献和实际操作，加入甲醇∶水 ＝２∶１的甲醇水溶 液 １５０ｍＬ，微波协助提取 ７０℃，保温 ８ｍｉｎ（每分 钟暂停搅 拌 一 下 以 保 证 有 效 成 分 充 分 溶 解），取 出，冷却至室温，摇匀，用 ０４５μｍ微孔滤膜滤 过，取续滤液。 ２３２ 提取器提取法一 将骨碎补习用品用粉碎 机粉碎 ３次，每次 １０ｓ。称取药材粗粉约 １０００ｇ， 精密称定，于 小 烧 杯 中 待 用， 精 密 加 入 分 析 纯 甲 醇 （≥９９８％）２Ｌ于提取桶，倒入先前已精密称 定的药材粗粉，开启提取器提取 ２ｍｉｎ，用注射器 取下 层 清 液， 用 ０４５μｍ 微 孔 滤 膜 滤 过， 取 续 滤液。 ２３３ 提取器提取法二 将骨碎补习用品用粉碎 机粉碎 ３次，每次 １０ｓ。取其中一种药材 （鳞轴小 膜盖） 的粗粉约 １０００ｇ，精密称定，于小烧杯中 待用，精密加入甲醇 １４００ｍＬ和蒸馏水 ７００ｍＬ于 提取桶，搅拌 使 两 者 混 合 均 匀， 再 倒 入 先 前 备 用 的药材粗粉，开启机器提取 ２ｍｉｎ，用注射器取下 层清液，用 ０４５μｍ微孔滤膜滤过，取续滤液。
２ 方法与结果
柚皮苷的化学结构式
其质量［１］。本 课 题 通 过 对 比 不 同 文 献 与 药 典 记 载 的提取方法及实验结果，选用微波提取法和具有 创新性的实验型闪式提取器在不同实验条件下对 同一种类骨碎补进行有效成分的提取，并对提取 效率进行对比；同时对五种不同品种的骨碎补通
２１ 色谱条件 与 系 统 适 应 性 试 验［１－２］ 以 十 八 烷 基 硅 烷 键 合 硅 胶 为 填 充 剂； 流 动 相： 乙 腈 － ００８８％甲酸水溶液 （２３３∶７６７）；流速：０９ｍＬ／ ｍｉｎ；温度： 室 温； 检 测 波 长：２８３ｎｍ， 理 论 板 数 按柚皮苷峰计算应不低于 ３０００。 ２２ 对照品溶液的制备 精密称取柚皮苷标准品 ６３ｍｇ，用甲醇溶解并于 １００ｍＬ量瓶中定容，制 成 ６３０μｇ／ｍＬ的柚皮苷溶液，即得。 ２３ 供试品溶液的制备 ２３１ 微波法［４］ 选取一种骨碎补样品 （鳞轴小