诺氟沙星的含量测定
诺氟沙星
【诺氟沙星】
日文名：ノルフロキサシン英文名：Norfloxacin
结构式：
解离常数（25℃）：pKa1 = 6.34（采用滴定法测定）
pKa2 = 8.75（采用滴定法测定）
在各溶出介质中的溶解度(37℃)：pH1.2：32.0mg/ml pH4.0：13.3mg/ml
pH6.8：0.6mg/ml 水：0.3mg/ml
在各溶出介质中的稳定性：
水：未测定。
在各pH值溶出介质中：未测定。
光：原料药在荧光灯（1000lx）下缓慢着色。
《四条标准溶出曲线》
溶出度试验条件：桨板法/50转、溶出介质中不添加表面活性剂。
< 50mg规格片剂
>
< 100mg规格片剂>
< 200mg规格片剂>
《质量标准》
50mg规格、100mg规格和200mg规格片剂
取本品，照溶出度测定法（桨板法），以磷酸盐缓冲液(pH6.8) 900ml为溶剂，转速为每分钟50转，依法操作，经60分钟时，取溶液适量滤过，弃去至少10ml初滤液，精密量取续滤液适量，加溶出介质稀释制成每1ml中含5.6μg的溶液，作为供试品溶液。
另精密称取预经105℃干燥2小时的诺氟沙星对照品0.028g，置100ml量瓶中，加溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
取上述两种溶液照紫外-可见分光光度法，分别在272nm波长处测定吸光度，计算每片的溶出量，限度分别为标示量的80％、80％和75％，应符合规定。
诺氟沙星(氟哌酸)胶囊含量测定
验证性试验实验十三诺氟沙星(氟哌酸)胶囊含量测定一、目的要求1.掌握非水滴定法的原理及操作。
2.熟悉非水滴定在药物分析中的应用。
二、仪器与试药1.仪器Mettler AL204电子天平酸式滴定管规格：25mL752型紫外可见分光光度仪刻度移液管规格：1mL、2mL 定量滤纸（直径10cm）容量瓶规格：100mL 500mL 漏斗试管2.试药诺氟沙星胶囊规格：0.2g 丙二酸醋酐氢氧化钠高氯酸滴定液(0.1mol/L) 冰醋酸橙黄Ⅳ指示液三、实验原理诺氟沙星原料：以生物碱盐（BH+）的形式存在，滴定过程就是一个置换滴定，即强酸滴定液置换出与游离碱结合较弱的酸。
BH+.A- + HClO4 BH+.ClO4-+ HA诺氟沙星制剂：诺氟沙星以游离生物碱（B）的形式存在，为弱碱，溶于冰醋酸后，其碱强度被均化到溶剂阴离子的强度水平，增加诺氟沙星的碱性，以橙黄Ⅳ指示液为指示剂，可用高氯酸滴定液进行滴定。
BH+ + OH- B + H2OB + HAC BH+ + A C-HClO4 + HA C ClO4 -+ H2A C+H2A C+ + A C- 2HA C四、实验内容C16H18FN3O3 319.24[鉴别](1)取本品内容物适量(约相当于诺氟沙星0.15g)置干燥试管中，加丙二酸0.1g与醋酐2mL，振摇，并在80～90℃水浴中加热10～15min，显红棕色。
(2)取本品内容物适量，加0.4％氢氧化钠溶液适量，振摇使诺氧沙星溶解，稀释成每1mL中含诺氟沙星5μg，滤过，弃去初滤液，取续滤液，在273，325与336nm波长处测定有最大吸收。
[含量测定]精密称取本品内容物适量(约相当于诺氟沙星0.25g)，加冰醋酸30mL，振摇使诺氟沙星溶解，加橙黄Ⅳ指示液10滴，用高氯酸液(0.1mol/L)滴定，至溶液显紫红色，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1mL 0.1mol/L 的高氯酸液相当于31.93mg 的C 16H 18FN 3O 3。
诺氟沙星检验操作规程
诺氟沙星检验操作规程目的：建立诺氟沙星检验操作规程。
范围：适用于诺氟沙星的检验。
职责：QC主任及检验员。
执行标准：《中国药典》2020年版二部规程：1 性状1.1 本品为类白色至淡黄色结晶性粉末；无臭；有引湿性1.2 本品在N,N-二甲基甲酰胺中略溶，在水或乙醇中极微溶解，在醋酸、盐酸或氢氧化钠溶液中易溶。
1.3 熔点：本品的熔点为218～224℃。
2 鉴别2.1取本品与诺氟沙星对照品适量，分别加三氯甲烷-甲醇(1：1)制成每1ml中含2.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液(15：10：3)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品溶液所显主斑点的位置与荧光应与对照品溶液主斑点的位置与荧光相同。
2.2 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
以上2.1 、2.2 两项可选做一项。
3 检查3.1溶液的澄清度：取本品5份，各0.5g，分别加氢氧化钠试液10ml溶解后，溶液应澄清；如显浑浊，与2号浊度标准液(通则0902)比较，均不得更浓。
3.23.3 3.3.13.3.2 有关物质照高效液相色谱法（通则0512) 测定。
供试品溶液取本品适量，精密称定，加0 . lmol/L 盐酸溶液适量（每12.5mg 诺氟沙星加0.lmol/L 盐酸溶液1ml) 使溶解，用流动相A 定量稀释制成每1ml 中约含0. 15mg 的溶液。
对照溶液精密储取供试品溶液适量，用流动相A 定量稀释制成每1ml 中含0 .75μg 的溶液。
杂质A 对照品溶液取杂质A 对照品约15mg, 精密称定，置200ml 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用流动相A 定量稀释制成每1ml 中约含0.3μg 的溶液。
系统适用性溶液称取诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品和依诺沙星对照品各适量，加入0.lmol/L 盐酸溶液适量使溶解，用流动相A 稀释制成每1ml 中含诺氟沙星0.15mg 、环丙沙星和依诺沙星各3μg 的混合溶液。
诺氟沙星的含量测定
诺氟沙星的含量测定本组采用高效液相色谱法进行试验。
诺氟沙星NuofushaxingNorfloxacinF本品为1-乙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧代-7-（1-哌嗪基）-3-喹啉羧酸。
按干燥品计算，含C16H18FN3O3应为%~%。
【性状】本品为类白色至淡黄色结晶性粉末；无臭，味微苦；有引湿性。
本品在二甲基甲酰胺中略溶，在水或乙醇中极微溶解；在醋酸、盐酸或氢氧化钠溶液中易溶。
熔点本品的熔点为218~224℃（附录Ⅵ C）。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录V D）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至±）-乙腈（87：13）为流动相；检测波长为278nm。
称取诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品、依诺沙星对照品和杂质B对照品各适量，加L盐酸溶液适量使溶解，用流动相A稀释制成每1ml中含诺氟沙星25μg、环丙沙星和依诺沙星各5μg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，诺氟沙星峰与与环丙沙星峰和依诺沙星峰的分离度均应不小于。
测定法取本品约25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加L盐酸溶液2ml 使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取诺氟沙星对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中F的含量。
【方法学考察】线性关系考察：精密量取对照品溶液（L）,,及对照品贮备液（L）,,,,,置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，依法测定，以峰面积对相应质量浓度作回归处理，回归方程为A=*10^4+*10^5C，r=（n=）。
结果表明，诺氟沙星质量浓度在~910g/ml范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验：精密吸取对照品溶液10L，重复进样6次。
结果峰面积的RSD 为%（n=6）稳定性试验：取同一供试品溶液，按拟订的方法分别于0,2,4,6,8,10h时进样测定。
17.实验十七 诺氟沙星(氟哌酸)胶囊含量测定
实验十七诺氟沙星(氟哌酸)胶囊含量测定
一、实验目的
1. 掌握非水滴定法的原理及操作;
2. 熟悉非水滴定在药物分析中的应用。
二、实验原理
ChP1995版规定本品含诺氟沙星应为标示量的90.0—110.0％,滴定时，每1ml0.1mol/L 的高氯酸液相当于31.93mg的C16H18FN3O3。
C H FN O 319.24
161833
三、实验仪器和试剂
1. 仪器：容量瓶、移液管、锥形瓶、碱式滴定管、烧杯、分析天平、永停滴定仪
2. 试剂：冰醋酸、橙黄Ⅳ指示液、高氯酸液
四、实验内容
精密称取本品内容物适量(约相当于诺氟沙星0.25g)，加冰醋酸30ml，振摇使诺氟沙星溶解，加橙黄Ⅳ指示液10滴，用高氯酸液(0.1mol/L)滴定，至溶液显紫红色，并将滴定的结果用空白试验校正。
五、实验结果与讨论
六、思考题
1. 非水滴定应用于药物分析有何特点?
2. 哪几类药物适合用非水滴定法测定其含量。
实验九 荧光分析法测定肉类食品中诺氟沙星的残留
实验九 荧光分析法测定肉类食品中诺氟沙星的残留一、实验背景：诺氟沙星（Norfloxacin, NFLX ）又名氟哌酸，为第三代喹诺酮类抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强，毒副作用低和临床疗效高的特点，是临床应用最广泛的喹诺酮类药物之一。
诺氟沙星系化学合成药物，合成容易，价格低廉，故也是动物和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，然而由于滥用现象严重，导致药物残留，给食品安全带来严重的威胁。
该类药物的残留除其本身的毒副作用对人体造成直接危害外，更为严重的是人类长期食用含较低浓度药物的动物源性食品，容易诱导人类致病菌产生耐药性，从而影响该类药物的临床疗效。
二、实验目的：使用荧光分析法方法简单、快速、灵敏、准确地测定肉类食品中诺氟沙星含量。
学习荧光分光光度计的使用方法和分析手段。
三、实验原理：Al 3+与诺氟沙星配位增强荧光强度，下图是诺氟沙星的分子结构式。
NO OH O FN HN图1 诺氟沙星的分子结构式四、实验药品和仪器1. 诺氟沙星（中国药品生物制品检定所，99.2%），标准溶液质量浓度为100 g/mL ，Al 3+标准溶液是用Al(NO 3)3（国药集团化学试剂有限公司，分析纯）配成浓度为0.1 mol/L ，实验所需的各种肉类食品为市场上随意购买，其他所用试剂均为分析纯，水为去离子水。
2. Fluoromax-4荧光分光光度计（法国JY 公司）；超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；万分之一电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）；离心机（上海手术器械厂），pHS-3C 酸度计（上海精密科学仪器公司）。
五、实验步骤1. 样品前处理方法取2g 经绞碎的各种肉类食品，每次加入10 mL pH = 4的盐酸溶液超声提取三次，每次10 min ，各离心10 min （3000r/min ），合并三次上清液，加入1mL 的Al 3+标准溶液，定容至50 mL ，待测．2. 测定方法于5 mL 的具塞刻度试管中配制NFLX-Al 3+的最佳体系溶液，使体系溶液中C Al3+ = 2.0mmol/L、pH=4，静置5 min，取试液置于1 cm×1 cm石英液池中，设置激发和发射单色仪狭缝宽度均为5 nm，利用荧光分析法测定。
诺氟沙星的药物分析方法应用范围
诺氟沙星的测定—高效液相色谱法
应用范围：该方法采用高效液相色谱法测定诺氟沙星（C16H18FN3O3）的含量。
该方法适用于诺氟沙星。
方法原理：供试品制成流动相溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长278nm处检测诺氟沙星吸收值，计算出其含量。
试剂：1.0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）2.乙腈3.三乙胺医学教育网搜|索整理
仪器设备：1.仪器1.1高效液相色谱仪1.2色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按环丙沙星峰计算不低于2000，诺氟沙星峰与相邻杂质峰间的分离度应符合要求。
1.3紫外吸收检测器2.色谱条件2.1流动相：0.025mol/L磷酸溶液乙腈=8713.2.2检测波长：278nm2.3柱温：室温
试样制备：1.称取供试品精密称取该品25mg，置100mL量瓶中。
2.对照品溶液的制备精密称取适量，加流动相溶液溶解并制成每1mL含25μg的溶液，摇匀，即得。
3.供试品溶液的制备将供试品加0.1mol/L盐酸溶液2mL使溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，医学教育网.精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
（注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。
“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
）
操作步骤：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长278nm处测定环丙沙星的吸收值，计算出其含量。
参考文献：中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.641.。
浅析HPLC法测定诺氟沙星胶囊有效成分的含量
浅析HPLC法测定诺氟沙星胶囊有效成分的含量目的改进诺氟沙星胶囊含量HPLC测定。
方法HPLC法,色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：0.025mol/l的磷酸溶液（用三乙胺调节PH值至3.0±0.1），乙睛（80：20）；柱温为室温；流速0.800ml/min，检测波长278nm。
结果优化色谱条件后出峰时间提早而且稳定性好，测得的诺氟沙星胶囊的含量符合要求。
结论色谱条件的改变增强了系统适应性，可作为改进后的测定诺氟沙星胶囊的含量的方法。
标签：HPLC法;诺氟沙星胶囊;含量测定高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品由流动相带入柱内,各成分在柱内被分离并依次进入检测器,有记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。
色谱系统的适应性实验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。
按各品种项下要求对色谱系统进行适用性实验，即用规定的对照品对色谱系统进行实验，应符合要求。
如达不到要求，可对色谱条件适当的调整。
以外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量时，按各品种项下得规定,精密称(量)取对照品和供试品配制成溶液,分别精密取一定量注入仪器并记录色谱图,测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分得峰面积或峰高,按下式计算含量:含量(cx)=cR*AX/AR式中AX为供试品或其杂质峰面积或峰高;cx为供试品或其杂质的浓度;cR为对照品的浓度;AR为对照品的峰面积或峰高。
由于微量进样器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时以定量环或自动进样器进样为好。
1实验部分1．1仪器与试药Agilent1200高效液相色谱仪,含四元梯度泵、自动进样器、VWD检测器、KQ-250DB型数控超声波清洗机及隔膜真空泵，有机聚偏氟乙烯微孔滤膜，酸度计,诺氟沙星胶囊（批号070314070208），诺氟沙星对照品（批号130450-200304），磷酸，三乙胺，乙腈，水为二次蒸馏水及其它试剂均为分析纯。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
诺氟沙星的含量测定
本组采用高效液相色谱法进行试验。
诺氟沙星
Nuofushaxing
Norfloxacin
F
本品为1-乙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧代-7-（1-哌嗪基）-3-喹啉羧酸。
按干燥品计算，含C16H18FN3O3应为%~%。
【性状】本品为类白色至淡黄色结晶性粉末；无臭，味微苦；有引湿性。
本品在二甲基甲酰胺中略溶，在水或乙醇中极微溶解；在醋酸、盐酸或氢氧化钠溶液中易溶。
熔点本品的熔点为218~224℃（附录Ⅵ C）。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录V D）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至±）-乙腈（87：13）为流动相；检测波长为278nm。
称取诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品、依诺沙星对照品和杂质B对照品各适量，加L盐酸溶液适量使溶解，用流动相A稀释制成每1ml中含诺氟沙星25μg、环丙沙星和依诺沙星各5μg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，诺氟沙星峰与与环丙沙星峰和依诺沙星峰的分离度均应不小于。
测定法取本品约25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加L盐酸溶液2ml 使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取诺氟沙
星对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中F的含量。
【方法学考察】
线性关系考察：精密量取对照品溶液（L）,,及对照品贮备液（L）,,,,,置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，依法测定，以峰面积对相应质量浓度作回归处理，回归方程为A=*10^4+*10^5C，r=（n=）。
结果表明，诺氟沙星质
量浓度在~910g/ml范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验：精密吸取对照品溶液10L，重复进样6次。
结果峰面积的RSD 为%（n=6）
稳定性试验：取同一供试品溶液，按拟订的方法分别于0,2,4,6,8,10h时进
样测定。
结果的RSD=%（n=6），表明供试品溶液在10h内稳定。
重复性试验：取同一批样品6份，分别依法处理并测定。
结果的RSD为%（n=6），
表明方法重复性良好。
加样回收试验：取已知含量的样品内容物6份，精密称定，置50ml量瓶中，
分别精密加入对照品溶液，依法测定。
结果见表一。
表一诺氟沙星加样回收试验结果（n=6）
样品含量
加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）（%）RSD（%）（mg）
【讨论】
诺氟沙星的理化性质比较特殊，在二甲基甲酰胺中略溶，在水或乙醇中极微
溶解；在醋酸、盐酸或氢氧化钠溶液中易溶。
曾采用L盐酸酸化的甲醇（pH=）
为流动相，诺氟沙星色谱峰在左右就出峰，结果不理想。
经试验，以L盐酸调
pH至的甲醇-水（32:68）为流动相时，诺氟沙星与杂质的分离较好（R>），且保
留时间适中（约为8min）。
由方法学考察结果可见，诺氟沙星进样量线性范围宽，
回收率较为理想，因此认为本法准确，简便，可用作产品的质量控制。