肺癌患者p16基因检测的研究进展
Bmi-1、p16基因与实体瘤关系的研究进展
ｓｉｇｎａｌ。ＮＬＳ）一ＮＬＳｌ和ＮＬＳ２。
其中ＮＬＳ２是Ｂｍｉ．１蛋白定位于细胞核 所必需的。（４）Ｂｍｉ．１的Ｃ２末端部分是富 含脯氨酸、谷氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基 的区域．与Ｂｍｉ．１蛋白在细胞内快速降 解有关。
２ ２．１
Ｂｍｉ．１基因与肿瘤的关系 乳腺癌 冯艳等…检测５８例乳腺
癌中Ｂｍｉ．１的表达，发现Ｂｍｉ．１的强阳性 率为８２．８％．阳性表达主要集中在癌细胞 核中。Ｂｍｉ．１的强阳性表达与乳腺癌的淋 巴结转移及临床分期密切相关。而与肿 瘤大小、ＥＲ、ＰＲ、ｃ．ｅｒｂＢ．２、ＶＥＧＦ等临床 病理特征无显著性相关。国外亦有文献 报道Ｂｍｉ．１能诱导乳腺上皮永生化，在 有淋巴结转移的乳腺癌组织中Ｂｍｉ．１的
ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ
复合体的活性，阻止视网膜母细胞瘤蛋 白（ｐＲｂ）磷酸化和转录因子Ｅ２Ｆ的释放． 导致细胞周期停滞于Ｇ期，对细胞增殖 周期起负调节作用。ｐ１６基因是目前发现 的第一个直接控制细胞增殖周期的抑癌 基因．不同来源的肿瘤有不同的失活方 式，主要方式是其在肿瘤中出现高频率 的缺失和突变。近年来的研究结果表明 ＤＮＡ甲基化可能是ｐ１６基因失活的另一 重要机制．ｐ１６基因外显子一启动子富含 ＣｐＧ结构。且常见该部位甲基化，这一启 动子部位的甲基化可能抑制了启动子的 活化，导致ｐ１６基因转录失活。ｐ１６基因 甲基化而致的基因表达异常是可逆性 的．Ｓａｔｏ等［９］用５．Ａｚａ—ＣｄＲ处理７例膀 胱癌细胞系，其中３例因甲基化而失活 的ｐ１６基因重新表达。
ＩＮＫ４Ａ－
ＡＲＦ ｌｏｃｕｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｒｉｔｉｓｈ
Ｊｏｕｒｎａｌ
Ｃａｎｃｅｒ。２００ｌ，８４（１０），１３７２－１３７６．
［８］Ｂｒｅｕｅｒ
ａｔ
肺癌组织中p16基因的异常甲基化分析
聚合 酶 １ 模 板 Ｄ Ａ ５ ｎ ，￣ ｏ Ｌ ｐ ６基 因 甲基 化 引 物对 Ｕ， Ｎ ０ ｇ ｌ ｍ ｌ １ ／
或 非 甲基 化 引 物 对 。 Ｐ Ｒ反 应 条 件 如 下 ：４ Ｃ ９ ℃热 启 动 ｌｍｉ， Ｏ ｎ
９ ℃ ４ Ｓ６ ℃ ４ Ｓ ７ ℃ ４ Ｓ 共 ３ ４ ５ ，０ ５ ，２ ５ ， ５个 循 环 ， 后 ７ ℃ 延 伸 最 ２
碳 原子 上 加入 一 甲基 基 团 ， Ｎ 甲基 化 是 最 常见 的复 制 后 调 Ｄ Ａ 节 方式 之 一 ． 基 因表 达 、 胎 发 育 、 因组 印迹 等 方 面 发 挥 在 胚 基 重 要 作 用 【 与 某 些 肿瘤 和 遗 传 病 的 发 生 密切 相关 ［ 表 观 遗 ｌ １ ， ２ １ 。 传 学 的 研究 表 明 ， 瘤 的形 成往 往 伴 随 着 多种 抑 癌 基 因 的启 肿 动 子 区域 Ｃ Ｇ 岛 的 异 常 甲基 化 修 饰 ｌ １ ｐ 引 。Ｐ ６基 因 是一 种 重 要
２ 结 果
Ｄ ６甲基 化 ２ １ ８例 肺 癌 组 织 Ｄ Ａ 经 过 亚 硫 酸 氢 盐 修 饰 Ｎ 后 ， 测出 １ 检 ５例 甲基 化 （３５ ％）癌 组 织 检 测 出 ７例 甲基 化 ５． ７ ，
（ ５ ０ ） 两 者之 间的 差异 具 有 显 著性 意义 （ 表 １ 。由 图 １ ２．％ ， ０ 见 ）
酶 Ｋ消 化 ， 氯 仿抽 提法 进行 ， 紫 外 分 光 光 度 计 定 量 ， 酚一 经 然
后一 Ｏ ７ ℃保存 备 用 。 １ ． Ｄ Ａ 的 甲基 化 修 饰 －２ Ｎ ３ 每 个样 品 Ｄ Ａ （ ）按 照 Ｃ Ｇ Ｎ ３ｇ ｐ
图 １ ＭＳ Ｐ检 测 Ｐ ６基 因 甲基 化 电泳 图谱 １ Ａ 为肺 癌 组 织 甲基 化 标 本 （ 甲基 化 引 物 ２出现 １ １ｐ 非 ５ｂ
MCM5、p16蛋白在肺腺癌组织中表达的改变及其在癌发生发展中的作用
探讨MCM5、p16蛋白在肺腺癌组织中表达的改变及其在癌发生发展中的作用摘要：目的：检测微小染色体维持蛋白5（mcm5）、p16蛋白在肺腺癌组织中表达的改变及其在癌发生发展中的作用。
方法：采用免疫组织化学sp法检测60例肺腺癌、30例支肺脓肿等非癌病变旁正常肺组织中mcm5、p16蛋白的表达情况。
结果：60例肺腺癌组织中mcm5蛋白的阳性表达率为100%，与正常对照组的表达差异有高度显著性（p0.05）。
mcm5与p16蛋白的表达与肺腺癌的年龄、肿瘤大小、组织学类型及tnm分期无关（p>0.05）。
mcm5蛋白的阳性表达与p16的表达呈负相关（r=-0.4920，p70%为（+++）。
1.4 统计学方法。
应用spss10.0统计学软件对所得数据行x2检验、秩和检验和spearman等级相关分析。
2 结果2.1 mcm5、p16蛋白在肺组织中的表达情况。
mcm5蛋白在肺腺癌组织中阳性表达呈棕黄色且定位于细胞核，灶状或弥漫性分布；而正常肺组织中仅在各级支气管上皮偶见个别或小灶状细胞核阳性表达，但阳性数0.05）。
mcm5和p16蛋白的表达均与肺腺癌的性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、tnm分期无关（p>0.05）。
2.3 肺腺癌mcm5与p16表达的相互关系。
在p16（-）标本中mcm5（+）者共17例，p16（+）而mcm5（+）者43例。
经统计学处理，mcm5蛋白的阳性表达与p16的表达呈负相关（r=-0.4920，p3 讨论细胞周期调控异常是肿瘤发生的内在原因，在细胞周期中，g1/s的调控点是细胞内外信号经过传递、整合到细胞核，对细胞的增殖进行调控的关键点，它的异常与肿瘤的发生、发展关系密切[3]。
细胞增殖调控异常与肿瘤的发生关系密切，而肿瘤细胞增殖活性与肿瘤生物学行为更是密切相关，是用于反映肿瘤良恶性及恶性程度的重要指征。
mcm蛋白与细胞周期密切相关，是启动真核细胞dna 复制、调控细胞由g1期进入s期的关键蛋白，其本质是一种核蛋白复合物，目前发现mcm2～7等6种，它们是一组在序列上高度同源、功能上密切相关的蛋白，在静止/分化细胞中mcm蛋白不表达，而在增殖/肿瘤细胞中高表达，是近年来发现的一种较好地反映细胞增殖活性的新指标。
端粒、端粒酶及p16、p53基因在肺癌早期诊断中的研究进展
域各方面 ， 步揭 示了肿 瘤形成和发生过程 ， 初 也为早期诊断肺 癌提供 了很多信息 ． 有一定 的 实用 意 义
１ 端 粒 殛 端 粒 酶 端 粒 （ｅ ｍ ｒ） 真 核 生 物 染 色 体 线 性 Ｕ Ａ分 子 末 端 的 ｔｏｅ 是 ｌ ｅ Ｎ 基 本 结构 或 序 列 ． 维 持 染 色 体 的 稳 定 性 和 Ｄ Ａ完 整 复制 具 对 Ｎ
属 晚 期 ， 中 ５ ％ 上 患 者 已 不 能 手 术 。 而 且 ， 大 部 分 非 其 ０ 绝 小细胞肺癌 【ＳＬ ） 者（ ＮＣＣ患 占肺 癌 的 ７ ％ 一８ ％ ） 化 疗 及 放 ５ ０ 对 疗 卫不 够 敏 感 因 此 ． 癌 的 早 期 诊 断 显 得 尤 为 重 要 。 近 肺 年来 ， 随着 分 子 生 物 学研 究 的 蓬 勃 发 展 ． 已将 其 应 用 于 医 学 领
（ 南 省 昆 明 市 延 安 医 院 ． 南 昆 明 ６￣ ５） 云 云 ５ １ 美键词 ： ． 癌 非小 细 胞 肺 ； 肿 瘤 ； 粒 ； 因 ； 断 肺 端 基 谚 中 圈 分 娄 号 ：Ｒ ３ ． ： ３３ １ ７４ ２ Ｑ ４
文 赫 标 识 码 ：Ａ 文 章 螬 பைடு நூலகம் ：１０ ．０４ ２０ ） 【 ０４０ ０ ６２８ （０２ ０． ０ ．２ Ｏ
和正常组织 阳性 率分另 为 １ ％和４ ２ 。说 明端牲 酶活 ｑ ２１ ％
性 与 恶 性 肿 瘤 问有 较 高 的 相关 性 。 因此 提 出 了恶 性 肿 瘤 发 生 的端 粒 酶 学 说 ， 为端 粒 酶 的 徼 括 是 细 胞 获 得 无 限增 殖 能 力 认 （ 生性） 永 的共 同途 径 。故 检 测 到 端 粒 酶 活 性 的 细 胞 就 是 具 有 无 限增 殖 永 生化 的细 胞 （ 细 胞 ） 癌
肺癌KRAS突变基因检测手段及其重要性
肺癌KRAS突变基因检测手段及其重要性肺癌在我国的发病率和死亡率均呈不断上升趋势的恶性肿瘤之一，大约有15%的患者在首次就诊时伴有恶性胸腔积液即胸水，一些肺部良性疾病如肺结核、肺炎等也可伴有胸水，所以区分胸水的性质具有十分重要的意义。
胸水癌细胞学检查是临床上鉴别良恶性胸水最可靠的方法，具有很高的特异性，但阳性率较低，所以临床上良恶性胸水的鉴别诊断仍存在一些困难。
近年研究表明p16基因和KRAS基因突变均与肺癌有关。
Ras基因是常见的癌基因，包括三种：KRAS，HRAS和NRAS，大约30%的人类肿瘤细胞中出现RAS基因突变，其中KRAS基因对人类癌症影响最大。
KRAS基因与一些肿瘤的发病机理和预后相关，主要以结直肠癌、肺癌和胰腺癌的突变率比较高。
KRAS基因突变发生在肿瘤恶变的早期，并且原发灶和转移灶的KRAS基因高度保持一致。
其中与肺癌关系最为密切的是KRAS。
KRAS基因位于12号染色体上，其主要功能是编码P21蛋白，P21蛋白与GTP结合时细胞内信号转导系统开放，P21蛋白具有GTP酶活性，可水解GTP为GDP，P21转而与GDP结合而失活，细胞内信号转导系统关闭。
当ras基因突变后，GTP酶减弱，水解GTP为GDP的作用受抑制，P21持续与GTP结合，细胞内信号转导系统持续开放，细胞无休止地分裂和增殖，导致细胞转化和恶变。
KRAS基因突变的热点位于第1外显子的12、13位密码子和第二外显子的61位密码子，其中以12位密码子突变率最高。
目前全球唯一在研的直接抑制RAS基因的小分子靶向药物安卓健已进入FDA二期临床试验。
探讨p16和KRAS基因在良恶性胸水细胞中的突变情况及对肺癌的诊断作用。
方法：研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者，对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他炎性胸膜炎患者。
常规抽取胸水，提取胸水细胞DNA，采用PCR-SSCP方法，分别对p16基因和KRAS基因第1、2外显子进行突变分析。
RASSF1A、p16基因甲基化与肺癌关系及据此诊疗研究进展
肺 癌 是 目前 全 世 界 发 病率 和死 亡率 最 高 的 恶
性肿瘤之一 ， 其形成是一个多步骤过程 ， 涉 及 多种
Ｄ Ａ ： 、 Ｅ ２ 、
２ 、 Ｐ Ａ Ｘ６ 、 Ｒ Ａ耶 和 Ｔ Ｉ ＭＰ ３ ，实 验
采用 定 量一 特 异性 聚 合 酶链 反应 （ Ｑ — ＭＳ Ｐ ） 描 述基 因 Ｄ Ｎ Ａ 甲基化 的现象 。其 中 Ｒ Ａ Ｓ Ｓ ， ｐ １ ６基 因是 目 前 研 究较 热 、较 为 集 中的 与肺 癌相 关 的抑 癌 基 因 。 如何 利 用 简 单 、 可靠 、 非 侵 袭 性 的 检 查 手段 有 效 地 进 行 肺 癌 的筛查 、 早 期 诊断 ． 提高肺 癌 的 治疗 效果 ， 是 临床 面 临的迫 切需要 解决 的 问题之一
研 究 显 示 与肺 癌 相关 的异 常 甲基 化 的 抑 癌 基 因有 很 多种 ， 目前 已经发 现 一 系列 与肺 癌 相关 的抑 癌基因 ， 由于 发 生异 常 甲基化 而导 致 转 录失活 。Ｊ ｉ ｔ ２ ］ 等 研 究 了 临床 上 具 有 代 表 性 的非 小 细 胞 肺 癌样 本 中 的 ９个 基 因 ， 包 括 Ｒ ＡＳ Ｓ Ｆ １ Ａ、 Ｃ ＡＬ Ｃ ４、 Ｃ Ｄ Ｈ１ 、
２ Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ基 因与肺癌
尺 相关 区域 家族 １ Ａ（ Ｒ ａ ｓ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｏ ｍ ａ ｉ ｎ
ｆ ａ ｍ ｉ ｌ ｙ ｌ Ａ， Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ １ Ａ）是 ２ ０ ０ ０年 发 现 的新 型抑 癌 基
啶第 五位碳原 子上 。大多数 Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化 发 生 在
肺癌 细 胞 Ａ ５ ４ ９的生 长 ，证 明 了 Ｓ Ａ Ｒ Ａ Ｈ 结 构域 在
老年肺癌诊断水平研究进展
老年肺癌诊断水平研究进展摘要】在流行病学中老年人肺癌是指在年龄65岁以上的人群中发生的肺癌，在肿瘤学中通常是指70岁以上的老年人发生的肺癌。
其发病率和死亡率较青年人群高，由于老年人生理的特殊性，肺癌的症状表现不明显，误诊和漏诊的情况也时有发生，延误了患者最佳的治疗时机。
本文对肺癌的常用诊断方法进行总结分析，以期找到最适宜的检查手段以减少老年人肺癌误诊漏诊的发生。
【关键词】老年肺癌诊断方法【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）02-0158-03随着社会人口老年化，老年肺癌的发病率逐年增加。
75.0%的老年肺癌患者吸烟指数＞400，吸烟时间越长肺癌发病率和死亡率越高。
老年肺癌中晚期肺癌患者约占80.0%，其中多数伴有免疫功能缺陷。
有文献报道, 患者从首次出现症状到就诊的平均时间为26.4 d, 而就诊到明确诊断的时间平均达71. 8 d, 这是指所有肺癌而言[1]。
老年肺癌患者，由于这一人群的年龄较大，具有特殊的生理，如临床表现不典型，多种疾病同时并存，容易发生并发症，病程进展快，药物不良反应多，不良生活习惯影响病情，病史采集困难而且参考价值较小，病程长恢复慢。
肺癌的发病率与年龄呈正相关，受到年龄的影响使疾病在早期不能轻易发现而被忽视，错过最佳治疗时机，对老年人的生存质量产生很大影响。
一、老年肺癌误诊漏诊的数据资料根据从CNKI数据库里搜集1991年至2009年的与老年肺癌误诊漏诊相关的文献，包括短篇报道、病例分析和误诊分析等类型的文献共152篇，见表1：表1经统计，在剩余的118篇文献中有报道的老年肺癌误诊病例有5051例，其中肺癌与肺结核并存而导致肺癌误诊漏诊的病例有879例，2004年至2009年的文献中报道的误诊病例就有1167例。
见表2：表2此外，文献中对于误诊时间的记录也缺乏规范，51篇文献缺少误诊时间的记载，其余文献中显示误诊时间几日至几年不等，最长时间可达3年以上。
P16基因甲基化检测在肺癌早期诊断中的应用研究
P16基因甲基化检测在肺癌早期诊断中的应用研究发表时间：2014-05-22T15:57:09.750Z 来源：《中外健康文摘》2013年第46期供稿作者：张继华李晓张毅蔡远玲高明周云春[导读] 随着分子技术的发展，利用外周血血清、痰、支气管肺泡灌洗液、组织等标本检测肺癌的早期分子事件已经成为研究热点[14]。
张继华李晓张毅蔡远玲高明周云春 (云南省玉溪市人民医院 653100)【摘要】目的采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测NSCLC患者p16基因的甲基化状态，探讨p16基因甲基化与肺癌发病的关系以及其对肺癌的早期诊断价值。
方法实验分两阶段进行。
结果 A组患者四种标本中P16基因甲基化率分别为50%，46.43%，51.79%，53.57%；B组2例COPD合并吸烟患者支气管肺泡灌洗液，1例痰标本中检测到P16基因甲基化；C组健康对照者标本中均未检测到P16基因甲基化。
D组患者四种标本中P16基因甲基化率分别为48.27%， 50.00%，56.89%(33/58) ，58.60%。
结论肺癌患者四种标本中P16基因甲基化率明显高于非肺癌患者及健康人，而非肺癌患者（包括慢阻肺病人）和健康人甲基化率无明显差别，检测p16基因甲基化可用于肺癌的早期诊断及筛查。
【关键词】DNA甲基化肺泡灌洗液血清肺癌【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）46-0067-02肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，与30年前相比，我国肺癌死亡率上升了465%[1]，肺癌的早期诊断对改善预后至关重要，因此，在我国积极探索发展肺癌的早期诊断研究具有非常重要的现实意义，DNA甲基化水平变化的检测对肿瘤的早期诊断、疗效观察及预后判断提供非常有价值的信息[2]。
DNA甲基化与肿瘤的发生密切相关,甲基化可导致抑癌基因、生长调节基因启动子区域的高甲基化，是癌症发生的重要机制[3]。
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万方数据
ＤＮＡ的合成，抑制细胞由Ｇ，期进入Ｓ期［３ｊ，这种 抑癌机理称为ｐ１６ＩＮＫ４，＿－ｐＲＢ途径。ｐ１６蛋白除抑制 ＣＤＫ４活性外，同样对ＣＤＫ６也有抑制作用。ｐ１６ 蛋白是目前为止发现的第１个直接控制细胞增殖周 期的细胞固有蛋白Ｅ４］，ｐ１６的抑制作用缺失，将使细 胞异常增生［５］。 肿瘤细胞的细胞增殖失控，很大程度上是因为 细胞周期调控机制存在缺陷，推动因素Ｃｙｃｌｉｎ—ＣＤＫ 作用过度，而阻遏因素作用不足或缺失。由于细胞 进程加速，没有足够的细胞停顿来维护基因组的完 整性，肿瘤细胞基因组的缺陷越来越多，最终形成肉 眼可见的肿瘤，并发生侵袭和转移。此外，细胞周期 调控蛋白也是很多肿瘤治疗选择的作用靶点，可引 起肿瘤细胞分裂的停顿，导致细胞凋亡的发生，抑制 肿瘤的生长。
肺癌的发生是多因素多步骤渐进演变过程。近 年研究表明细胞周期与细胞癌变密切相关，许多癌 基因，抑癌基因参与了细胞周期的调控，或者本身就 是细胞周期的组成部分，它们的改变导致了细胞周 期的失控，表现为细胞的失控性生长。目前在细胞 周期调控上存在２条重要通路：ｐ１４Ａ盯－ｐ５３通路和 ｐ１６ｌｎＫ４，＿ＲＢ通路，它们在Ｇ。一Ｓ和Ｇ２一Ｍ限制点 中起到关键作用。 近年来，随着对肺癌分子遗传学机制认识的深
ｐ１６基因的功能 ｐ１６基因通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶
隆了ｐ１６基因的ｅＤＮＡ。１９９４年Ｋａｍｂ等应用克 隆技术对４６个人类恶性细胞系进行ｐ１６基因研
ＣＤＫ４活性而发挥调控作用［２］。ｐ１６基因发生突 变，它的编码蛋白表达水平将会下降或消失，失去原
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４３６Ｘ．２０１１．０１８．０１３
３．２
ｐ１６基因突变检测方法
检测方法采用质量
光谱法、差异甲基化杂交。ｐ１６纯合子缺失或突变 的检测包括实时ＰＣＲ的单链构型多态性分析
●簟
矽Ｌ
图ｌ ｐ１６基因抑癌机理示意图
３
万方数据
（ＳＳＣＰ）Ｅ１０］，基于基因微 电泳加上ＰＣＲ及ＰＣＲ一 应用控制模板ＤＮＡ银 突变。
３．３
ｐ１６基因的典型变化ｐ１６基因的异常包括
有的生物学功能，参与肿瘤的发生。ｐ１６ⅢＫ４８蛋白是 细胞周期增殖过程中负调节因子，通过与ＣｙｃｌｉｎＤ 竞争性结合ＣＤＫ４／６，抑制ＣＤＫ４／ＣｙｃｌｉｎＤｌ和 ＣＤＫ６／ＣｙｃｌｉｎＤｌ的活性，使ｐＲＢ处于非磷酸化或 低磷酸化状态而能与转录因子Ｅ２Ｆ结合，从而抑制
基金项目：江苏省。六大人才高峰”资助课题（０６一Ｂ－１８）；南通市 科委社会发展计划项目＜￥２００６０４８） 作者单位：２２６００１南通大学第二附属医院呼吸科 通信作者：陈建荣。Ｅｍａｉｌ：ｄｒｃｈｅｎｊｒ＠１６３．ｅｏｍ
万方数据
・
１４１３・
鳞状化生的支气管组织中，有较为频繁的ｐ１６基因 改变，其具体机制有待于进一步研究。 ４．２肺癌的诊断ｐ１６基因等位基因异常甲基化 是肺癌发生的早期事件，可作为肺癌早期诊断的分 子标志物和用于肺癌预防的监测【９］。包括肺癌在内 的许多肿瘤，抑癌基因ｐ１６功能的失活是由于启动 子区的超甲基化，并且在ＮＳＣＬＣ的进程中发挥了 重要的作用。ＤＮＡ的异常甲基化在人类肿瘤中是 常见现象［１引。表观遗传学上研究最深入的是ＤＮＡ 甲基化机制，它是指一种酶介导的化学修饰过程。 ＤＮＡ甲基化是指在ＤＮＡ甲基化转移酶的作用下， 基因组ＣｐＧ二核苷酸的胞嘧啶５ ７碳原子共价键结 合一个甲基基团。ＤＮＡ甲基化后核苷酸顺序未变， 而基因表达受影响。Ｐａｌｍｉｓａｎｏ等［１７］应用ＭＳＰ方 法检测肺鳞癌患者痰液中ｐ１６的甲基化，检出率为 １００％，重要意义在于早于临床诊断３年。ｐ１６基因 失活在ＮＳＣＬＣ的形成中也起着重要作用，是较早 期事件之一［１ ８１。肺癌５年生存率较低，通过早期诊 断和治疗有可能提高肺癌的生存率。 ４．３肺癌的分型临床上肺癌分为２种亚型：小细 胞肺癌和ＮＳＣＬＣ。小细胞肺癌占总数的ｌＯ％～ １５％，ＮＳＣＬＣ占８５％～９０％。ＮＳＣＩ。Ｃ按照组织学 类型又分为腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌、混合性、神 经内分泌癌。有学者研究１７１例ＮＳＣＬＣ患者，发 现６２例（３６．３％）有ｐ１６蛋白的缺失，ｐ１６蛋白的异 常表达与鳞状细胞癌密切相关．在腺癌中ｐ１６蛋白 异常者较为少见，并且与腺癌的预后无关［１ ９１。Ｙｅ 等Ｅｚ０３应用多重ＰＣＲ的方法对１２５个肺癌组织进行 了检测，ｐ１６的总突变率为１５．２％，ｐ１６的突变率在 ＮＳＣＬＣ（１９．３％）比小细胞肺癌（５．４ ０．４）更频繁。 ４．４预后判断ｐ１６基因第２外显子突变可作为 ＮＳＣＬＣ恶性进展的标志之一，也可作为一种判断预 后的指标。研究发现在鳞状细胞癌中，ｐ１６蛋白的 丢失往往提示预后不良Ｅ１９］。在肺癌中ｐ１６基因的 失活率约占２５％～７０％Ｅ ４｜，这说明ｐ１６基因的改变 与肿瘤密切相关。
ｃａｕｓｅ
ｐ１６ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｐ１６ ｃｏｕｌｄ ｇｒｏｗｔｈ．ｐ１６ ｇｅｎｅ
ｃａｎ
ｃｅｌｌｓ
ｏｕｔ
பைடு நூலகம்
ｏｆ
ｂｅｃｏｍｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ
ｔｒｍｏｒ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
通量悬浮微阵列来检测ｐ５３、ｐ１６、Ｒｂ和表皮生长因 子受体（ＥＧＦＲ）的基因突变，提取６５例肺癌组织和 ２０例癌旁肺组织的基因组ＤＮＡ，结果显示ｐ５３、 ｐ１６、Ｒｂ和ＥＧＦＲ在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的单 基因突变率分别是５３．８％（３５／６５）、２０．０％ （１３／６５）、７．７％（５／６５）和５．４％（２３／６５），癌旁肺组 织分别是５．０％（１／２０）、５．０％（１／２０）、０．０％和
１例检出５６位密码子Ｔ—Ａ突变，亮氨酸变为谷氨 酰胺；１例７９和８１位密码子分别发现１个Ｃ—Ａ的 同义突变；ｌ例８０和７９位密码子检出点突变，分别 为８０位密码子Ｇ—Ａ突变，谷氨酸变为赖氨酸，７９ 位密码子Ｃ—Ａ突变。ｐ１６基因在ＮＳＣＬＣ中的主 要突变形式是点突变，主要集中在ｐ１６基因的１２１、 ６９和７０位密码子，导致原编码氨基酸的改变。 应用ＰＣＲ—ＳＳＣＰ银染技术对标本的ｐ１６基因 突变进行检测，ＳＳＣＰ不仅能分析是否存在突变，而 且能将突变定位于特定的片段，如需了解突变位点 及序列改变情况，只需将ＳＳＣＰ筛出的阳性标本进 行序列分析即可。为提高ＰＣＲ—ＳＳＣＰ的敏感度及 控制假阳性，在设计引物时把扩增片段控制在
０．０
ｏＡ。联合检测４种基因敏感性、特异性、准确率
分别是８１．５％（５３／６５）、９０．Ｏ％（１８／２０）和８３．５％ （７１／８５），Ｉ、ＩＩ和Ⅲ期的突变率分别是７８．３％ （１８／２３）、８０．０％（１６／２０）和８６．４％（１９／２２）。更高 的特异性和灵敏度高通量悬浮芯片的建立，可以用 于同时检测ｐ５３、ｐ１６、Ｒｂ和ＥＧＦＲ在ＮＳＣＩ。Ｃ的基 因突变。悬架微阵列有助于提高ＮＳＣＬＣ分子诊断 的敏感性和引导ＮＳＣＬＣ的分子靶向治疗。应用 ＰＣＲ与双链ＤＮＡ直接测序技术对４０例ＮＳＣＬＣ 患者的ｐ１６基因外显子２的纯合缺失与序列改变进 行研究，发现２例存在ｐ１６基因外显子２的纯合子 缺失。发生ｐ１６基因突变的１４例患者共检出２０个 点突变，突变大部分涉及到了编码氨基酸的变化，其 中８例为１２１位密码子中３８０位碱基改变，２例为 Ａ—Ｔ突变，酪氨酸变为苯丙氨酸，１例为Ａ—Ｇ突 变，酪氨酸变为半胱氨酸，５例为Ａ—Ｃ突变，酪氨
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮ
Ｊｉａｎ—ｒｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｄｒｃｈｅｎｊ国１６３．ｃｏｒｎ
ｉｓ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ
ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｎｅｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｕｍｏｒ－ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ
２
入，寻找和利用有效的分子生物学标记对肺癌进行
分子诊断具有良好的前景。ｐ１６基因是一种抑癌基 因，ｐ１６基因变异是肺癌等多种恶性肿瘤发生、发展 过程中的一个重要事件。ｐ１６基因突变的检测有助 于肺癌的诊断、发生机制研究及预后判断。
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ｐ１６基因的结构 １９９３年Ｓｅｒｒａｎｏ等首次发现了ｐ１６基因，并克
．综述．
肺癌患者ｐ１ ６基因检测的研究进展
蔡淑娟 陈建荣
【摘要】细胞周期与细胞癌变密切相关，抑癌基因ｐ１６参与细胞周期调控。ｐ１６的改变可导致细胞
的失控性生长，所以ｐ１６基因可成为肿瘤选择作用的治疗靶点。ｐ１６基因检测对肺癌的发病机制研究、
早期诊断、预后评估和分子靶向治疗有一定帮助。 【关键词】ｐ１６基因；肺癌；基因突变；细胞周期
理论上将细胞周期分为４个时期：Ｇ。／Ｇ。期、Ｓ 期、Ｇ：期、Ｍ期。细胞周期调控的关键就在于，准 确评价细胞状态，控制２个细胞周期转位点（Ｇ。／ Ｇ。一Ｓ转位点，Ｇｚ－Ｍ转位点）∽］，使细胞有足够的时 间来维护基因组的完整性。见图１。
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ｐ１６基因的检测 ｐ１６基因突变的标本来源于肺癌
３．１标本来源
组织标本、血液、良恶性胸水、纤维支气管镜吸出物、 肺泡灌洗液和呼出气冷凝液［７］。肿瘤组织的检出率 高于血浆。检测ｐ１６纯合子缺失的标本来源于肺癌 组织标本∞］、经纤维支气管镜刷检的脱落细胞、血 清∽Ｊ和胸水。
ｐ１６ ｇｅｎｅ
ｉｓ
ｈｅｌｐｆｕｌ ｆｏｒ ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ｅａｒｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ—ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｐ１ ６
ｇｅｎｅ；Ｌｕｎｇ
ｃａｎｃｅｒ；Ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ
４
ｂｐ以内，据文献报道ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对
ｐ１６基因检测的临床意义 Ｗａｎｇ等［１妇通过构建高
１７６～３４５ ｂｐ片段的突变敏感度最高，并且每个肿