非小细胞肺癌患者EGFR基因检测
非小细胞肺癌患者EGFR基因检测
标本的处理
癌性胸水脱落细胞
尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须>1 毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为 符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇 ，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确 保3天内到达。
55.7% (24/42)
EGFR基因突变检测的一般原则
为使患者尽可能地从最有效的治疗中受 益，所有NSCLC，只要条件许可，都 应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺 癌。
EGFR基因突变检测标本
肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切 除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的 检测。
理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞 （文献报道大于100个即可）
用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法
用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检 出率基本相同
目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测） 数据，故对其敏感度与特异性尚无结论
胸膜转移和胸水的对比研究
本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR 突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶 时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。
关于胸水EGFR突变的检测
国内外胸水标本EGFR检测的研究
作者
Kimura H Soh J
Hung MS Kimura H
Jian G
国家/地区
日本 日本 台湾 日本 中国
病例数 24
EGFR突变率 （%）
33%
61
26%
29
41%
43
25.6%
32
28.1%
Sanger法检测分析非小细胞肺癌患者组织EGFR
【 ｅ ｏ ｓ Ｎ ｎｓ ａ ｌ ｕｇ ａｃｒ ｐ ｅ ａｇ ｗｈ ａ ｏｒ ｅｔ ；Ｇ ｎ ｕ ｉ ； Ｋ ｙ ｒ 】 ｏ—ｍ ｌｅ ｎ ｎｅ；Ｅ ｉ ｒ ｌ ｏ ｔｆ ｔ ｃｐ ｒ ｅｅ ｔ ｏ ｗ ｄ ｌ ｃｌ ｌ ｃ ｄｍ ｒ ｃ ｒｅ ｏ ｍ ￣ ｎ
ＷＡＮＧ Ｊｎ ｊｎ ， Ｌ ａ －ｅ ｇ． ＬＵＯ Ｌ Ｄｅ ｒ ｎ ｏ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｉ—ｏ ｇ Ｉ Ｂ ｏ ｆｎ Ｋａ ｐａｔ ｍｅ ｔ ｆ ａ ｏａｏｙ．Ａｆ￣ ａｅ ｕ ｒＨｏｐ ｔｌ ｔ ｉｔｄＴ ｍｏ ｌ ｓｉ ， ａ
Ｇｕ ｎ ｚ ｏ ａ ｇ ｈ ｕＭｅ ｉ Ｍ Ｃ ｌ ｇ ， Ｇｕ ｎ ｚ ｏ １ ０ ５ Ｃ ｉ ａ ｄｃ ｏｌ ｅ ｅ ａ ｇ ｈ ｕ５ ０ ９ ， ｈ ｎ
１ 资料 与方法
１ 一般资料 ． １ １ 月在广州 医学 院附属肿 瘤 医院住 院病 人 ６ 例 ， １ ３ 均 为手 术切 除病 灶组 织 ，经 病 理诊 断 为非 小 细 胞肺 癌 的患者肿瘤 组织 石蜡 切片 （ ５—１ ， 各 ０张 根据 常规病 理 染 色切 片 选择 蜡 块 ，肿瘤 组 织 至 少 占 ７ ％ 以上 ，肿瘤 内无 出血或坏死 ，且周围组 ０
６ ｎ ａ ６Ｃ １ ，５ ％ ，６ ℃ ｎ 响 。本实验 室以本 院收治 的 ６ 例 Ｎ Ｃ Ｃ患者 的 ９ ℃ １ｒｉ 后 ，９ ｃ ０ｓ ０ ５ｓ ０ ４ｍｉ， ３ ＳＬ
肿瘤 手术组 织石蜡 切 片为材 料 ，提取 Ｄ ＮＡ后进 ２ 次循环 ，４ ５ ℃保 温。 行Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因Ｐ Ｒ扩增 、 Ｃ 扩增产物进行分 子测 序 ， １３７ 测序产 物纯化 ．．
非小细胞肺癌细胞学标本EGFR检测的研究进展
㊃综述㊃D O I :10.3760/c m a .j.i s s n .1673-436X.2013.002.010作者单位:524023湛江,广东医学院非小细胞肺癌细胞学标本E G F R 检测的研究进展陈桂阳 荣福 刘静ʌ摘要ɔ 非小细胞肺癌治疗手段以手术㊁化疗㊁放疗和靶向治疗为主㊂随着靶向治疗研究的进展,发现表皮生长因子受体(E G F R )突变患者接受小分子酪氨酸激酶抑制剂靶向治疗效果佳㊂进行这类药物治疗前的筛选是个体化治疗的前提,目前以组织标本基因检测为金标准㊂但是进展期患者的病理诊断很多时候是根据细胞学标本,部分细胞学标本是惟一的标本来源㊂近年来肺癌细胞学标本行E G F R 检测已经成为一种趋势,主要细胞学标本类型包括外周血㊁胸腔积液及细针穿刺标本㊂本文旨在对目前使用细胞学标本评价非小细胞肺癌E G F R 基因状态方面做一个概述㊂ʌ关键词ɔ 非小细胞肺癌;表皮生长因子受体;外显子19/21;细胞学R e s e a r c ha d v a n c e m e n t o nE G F R m u t a t i o nd e t e c t i o ni nc y t o l o g i c a l s a m p l e so fn o n -s m a l l c e l l l u n g ca n c e r C H E NG u i -y a n g ,R O N GF u ,L I UJ i n g .G u a n g d o n g M e d i c a lC o l l e g e ,Z h a n j i a n g 524023,C h i n a ʌA b s t r a c t ɔ T h em a i n t h e r a p i e s o f n o n -s m a l l c e l l l u n g c a n c e r (N S C L C )a r e s u r g e r y ,c h e m o t h e r a p y ,r a d i o t h e r a p y a n d t a r g e t e d t h e r a p y .W i t hd e v e l o p m e n t o f t a r g e t e d t h e r a p y ,i t i s f o u n dt h a t t yr o s i n ek i n a s e i n h i b i t o r i s e f f e c t i v e f o r p a t i e n t sw i t he p i d e r m a l g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r (E G F R )m u t a t i o n s.S c r e e n i n g o f s u c hd r u g sb e f o r e t r e a t m e n t i s a p r e m i s e o f i n d i v i d u a l i z e d t r e a t m e n t ,a n d g e n e t i c t e s t i n g o f t i s s u e s a m pl e s i sc u r r e n t l y g o l ds t a n d a r d .I n m o s tc a s e s ,t h ed i a g n o s i so fl u n g c a n c e ri s p e r f o r m a e d o nc y t o l o g i c a l s p e c i m e n s ,t h e r e f o r e ,t h e r e i san e e dt oo b t a i nac o m p l e t ea n dr e l i a b l em o l e c u l a rd i a g n o s i so nc y t o l o g i c a l s p e c i m e n s .I nr e c e n t y e a r s ,E G F R m u t a t i o nd e t e c t i o ni nc y t o l o g i c a l s a m p l e so fN S C L C h a sb e c o m ea t r e n d ,a n d m a j o rc y t o g e n e t i cs p e c i m e nt y p e si n c l u d e p e r i p h e r a lb l o o d ,p l e u r a le f f u s i o na n df i n en e e d l e a s p i r a t i o n .T h i sr e v i e wa i m st o p r e s e n ta no v e r v i e w o f t h ec u r r e n tk n o w l e d g eo f t h eu s eo fc y t o l o gi c a l s pe c i m e n sf o r t h e e v a l u a t i o no fE G F Rg e n e s t a t e s i nN S C L C .ʌK e y w o r d s ɔ N o n -s m a l l c e l l l u n g c a n c e r ;E p i d e r m a l g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r ;E x o n19/21;C y t o l o g y 肺癌是世界上发病率和病死率最高的肿瘤[1],其中非小细胞肺癌(N S C L C )约占80%,70%就诊时已处于肺癌晚期㊂晚期肺癌患者预后较差,采用常规化疗其平均生存期小于1年[2]㊂近年来表皮生长因子受体(E G F R )-酪氨酸激酶抑制剂(T K I)为N S C L C 的治疗带来曙光,但用药前必须检测E G F R的突变状态,根据突变结果选择治疗对象[3]㊂E G F R -T K I 作为分子靶向药物在美国最先批准用于N S C L C [4]㊂根据2011年N C C N 指南建议,对E G F R 突变阳性的患者予E G F R -T K I 作为一线治疗[5]㊂目前的研究表明,肿瘤组织标本直接测序法是E G F R 突变检测的金标准[6]㊂晚期肺癌的病理诊断很多时候是根据细胞学标本,部分细胞学标本是惟一的标本来源㊂所以,近年来肺癌细胞学标本行E G F R 检测已经成为一种趋势,主要细胞学标本类型包括外周血㊁胸腔积液及细针穿刺标本㊂本文旨在对目前使用细胞学标本评价N S C L CE G F R 基因状态方面做一个概述㊂1 概述1.1 E G F R 突变状况 E G F R 家族包括H e r -1/E r b B 1㊁H e r -2/n e u /E r b B 2㊁H e r -3/E r b B 3和H e r -4/E r b B 4[7]㊂表皮生长因子及其位于细胞膜上的受体E GF R 是一种跨膜蛋白质,属于H E R 家族的一员,由细胞外的结合区㊁跨膜区及主要由酪氨酸激酶组成的细胞内区等3个区域组成[3]㊂大分子单克隆抗体与胞外区结合,而小分子T K I 与胞内酪氨酸激酶区域结合,进而抑制了下游的信号转导㊂E G F R 信号转导主要依靠2个信号转导机制:R a s -R a f -M E K -E R K -MA P K 通路和P I 3K -P D K I -A k t 通路[8]㊂E GF R 基因复杂多变,迄今为止发现的突变都位于结构区域,主要发生在外显子18~21,其中外显子19和外显子21的突变率达90%以上[9]㊂外显子19和外显子21的主要突变特征表现为:外显子19㊃611㊃国际呼吸杂志2013年1月第33卷第2期 I n t JR e s p i r ,J a n u a r y 2013,V o l .33,N o .2碱基缺失突变,主要是746-752位碱基缺失,导致编码氨基酸(K E L R E A T)序列丢失,这一缺失改变了A T P结合囊的角度,从而增强了肿瘤分子对T K I 的敏感性㊂外显子21点突变,即858位密码子的亮氨酸转变为精氨酸(L858R),此突变位于D G F序列附近,其作用提高了A-l o o p稳定性,增强了肿瘤细胞对E G F R-T K I的敏感性㊂1.2 E G F R突变的临床特征目前研究表明,E GF R突变在腺癌㊁女性患者㊁非吸烟及东亚人群发生率较高,吉非替尼在东方人群整体生存率和缓解率明显高于西方人群[10-12]㊂1.3 E G F R与E G F R-T K I的疗效吉非替尼是一种苯胺喹唑啉化合物,是强有力的选择性T K I[13]㊂吉非替尼与厄洛替尼即作用于E G F R胞内的酪氨酸激酶区域,竞争性抑制了酪氨酸激酶A T P结合的活化位点,抑制了受体的自体磷酸化,从而改变肿瘤信号转导,抑制肿瘤细胞的增殖㊁侵袭和转移,并促进肿瘤细胞的凋亡㊂研究表明,E G F R-T K I的疗效与E G F R是否突变密切相关,既往大量研究表明,E G F R突变患者对E G F R-T K I治疗敏感[14-16]㊂临床上几乎所有N S C L C患者应用E G F R-T K I12个月后产生耐药问题㊂最近有研究表明,这些耐药的患者有50%存在耐药基因突变,20%为M E T基因的扩增,还有一部分原因未明[17-19]㊂1.4组织学检测E G F R突变目前用于组织标本E GF R突变检测的方法包括:测序法㊁聚合酶链式反应(P C R)-单链构象多态性分析㊁突变体富集P C R㊁探针扩增阻滞突变系统(A R M S)㊁高分辨率溶解曲线分析技术(H R M)㊁高效液相色谱法㊁基因芯片技术[1,20-22],以上方法的检测效率都不同,检测的标本大多要求组织标本,一部分灵敏度较高的技术尝试检测细胞学标本EG F R突变,如应用突变体富集P C R㊁A R M S等技术检测癌性胸腔积液㊁晚期肺癌患者外周血及细针穿刺的细胞学标本㊂相对于组织学标本而言,细胞学标本取材较容易,创伤较小,经常是惟一的标本来源㊂所以,目前细胞学标本检测E G F R突变已成为一种新的趋势㊂2细胞学标本检测E G F R突变2.1用于E G F R突变分析的细胞学标本种类目前N S C L CE G F R突变检测标本种类主要为外周血㊁癌性胸水及细针穿刺标本㊂2.2外周血细胞学标本检测E G F R突变 A b d e l S a l a m等发现在N S C L CⅢ/Ⅳ期患者的血清中E G F R与H e r-2n e u基因水平高于Ⅰ/Ⅱ期患者[23]㊂R o s e l l等[24]在2105例患者的组织中,用直接测序法检测E G F R突变发现有350例突变阳性㊂其中有164例患者获取配对的血清标本,其中64例患者(39%)为D e l突变,33例(20%)为L858R突变,血清与组织标本阳性的一致性为59%㊂H e等[25]用突变体富集P C R技术对134例患者的血浆进行E G F R外显子19和外显子21突变检测,阳性率达到49.3%(66/134)㊂与配对的组织标本比较,得出组织标本与血浆标本的突变阳性一致性达到94.9%(17/18)㊂何臣等[26]应用酶切富集P C R及非酶切富集P C R法分析N S C L C患者E G F R基因突变状况㊂50份肿瘤组织㊁55份血浆㊁15份血清标本中,酶切富集P C R法分别检出E G F R基因突变22例(44.0%)㊁29例(52.7%)㊁9例(60.0%),而非酶切P C R法则仅能检出E G F R基因突变16例(32.0%)㊁7例(12.7%)㊁2例(13.3%)(P值分别为0.216㊁<0.001和0.008)㊂应用酶切富集P C R法检测15例配对血浆㊁组织标本和15例配对血浆㊁血清标本E G F R基因突变,其检出率无明显差异㊂肺癌患者外周血检测E G F R存在提取肿瘤细胞较少㊁需要明确的采血时间窗及需要更敏感的检测方法等问题[27]㊂目前只是在探索阶段,需要大样本㊁前瞻性的研究建立循证学证据㊂2.3胸腔积液细胞学标本检测E G F R突变大约50%晚期N S C L C患者会出现胸腔积液的并发症㊂行胸腔穿刺引流术可以缓解患者胸闷气促等症状,部分可以获得病理标本㊂目前研究表明,在恶性胸腔积液中可以检测出E G F R突变[28]㊂直接测序是目前的金标准,但该方法敏感性较低,对于作为非组织标本的癌性胸腔积液检测E G F R突变存在一定的障碍㊂所以研究者尝试应用更敏感的技术检测癌性胸腔积液E G F R突变㊂何臣等[28]应用酶切富集P C R法对30例N S C L C患者胸腔积液游离核酸E G F R基因外显子19缺失和外显子21L858R突变进行分析,30例N S C L C患者中,酶切富集P C R法分别检出E G F R 基因外显子19缺失10例(33.3%),外显子21 L858R突变5例(16.7%),非酶切富集P C R法则仅能分别检出6例(20.0%)和1例(3.3%);2种方法检出率差异有统计学意义(P=0.032),酶切富集P C R法可以有效地检测N S C L C患者胸腔积液游离核酸E G F R基因突变㊂S o h等[29]收集61例N S C L C患者恶性胸腔积液标本,分别用直接测序法㊁非酶切富集P C R㊁酶切㊃711㊃国际呼吸杂志2013年1月第33卷第2期I n t JR e s p i r,J a n u a r y2013,V o l.33,N o.2富集P C R及P N A-L N A P C R检测胸水游离核酸E G F R基因突变㊂结果显示,使用酶切富集P C R显著高于其他如直接测序法等检测胸水游离核酸E G F R基因突变㊂K i m u r a等[30]研究者收集了24例N S C L C患者恶性胸腔积液标本,分别用直接测序法和A R M S检测胸水游离核酸E G F R基因突变㊂他们的研究结果显示,一共检测出8例E G F R基因突变,其中3例用2种方法都可以检测出E G F R基因突变,另外的5例用A R M S检测出E G F R基因突变,A R M S 法比直接测序法更敏感㊂丁丽等[31]收集23例晚期N S C L C患者恶性胸腔积液,经反复离心后取沉淀细胞行石蜡包埋,巢式P C R法扩增外显子19㊁20㊁21,取扩增片段行D N A 测序分析㊂结果显示23例中检测出8例E G F R突变㊂4例是外显子19突变,2例是外显子21突变,2例是复合突变㊂其中7例突变患者服用吉非替尼治疗,中位无进展生存时间达到9.5个月㊂胸腔积液是晚期N S C L C容易获得的细胞标本,近年来也有不少的研究从晚期N S C L C胸腔积液提取肿瘤细胞行E G F R突变检测㊂一般都要收集尽量多的胸腔积液,反复离心后收集胸腔积液中的肿瘤细胞制作成蜡块,切片后采用敏感的检测方法行E G F R基因突变检测确保检测结果的可信性㊂2.4细针穿刺细胞学标本检测E G F R突变在临床中细针穿刺细胞学常规用于诊断肺癌㊂细针穿刺主要包括经支气管针吸活检术(T B N A)㊁超声内镜引导下经支气管针吸活检术(E B U S-T B N A)和经皮细针肺穿刺㊂T B N A及E B U S-T B N A不但可以确定病理类型,还可以行T NM分期㊂这是T B N A及E B U S-T B N A的优势所在㊂目前有国外报道用T B N A及E B U S-T B N A检测E G F R突变,国内暂时未见相关文献报道㊂在单一用T B N A或者E B U S-T B N A检查就可以行病理诊断㊁T NM分期及分子标志物分析,避免了更多的有创侵入检查,降低了医疗费用及医疗风险,具有良好的临床应用价值㊂关于用T B N A细胞学标本检测N S C L C患者E G E R突变的报道最早是H o r i i k e等[32]发表于2007年‘C h e s t“杂志上㊂该研究收集了经T B N A细胞学确诊为N S C L C患者94例,其中腺癌58例,鳞癌24例,未分型的肺癌12例,分别用直接测序法和A R M S检测E G F R突变㊂结果发现31例发生了突变(33%,女性17例,男性14例)㊂突变类型中,腺癌23例,鳞癌4例,其他类型4例㊂用直接测序法检测出13例突变(突变率14%),用A R M S检测出27例突变(突变率29%)㊂研究结论表明A R M S比直接测序法更敏感,更适合应用于T B N A细胞学标本检测N S C L C患者E G E R突变㊂S m i t h等[33]报道11例晚期N S C L C细针穿刺细胞学涂片标本应用实时P C R及H R M检测E G F R突变,结果显示所有的细胞学标本都可以D N A扩增后行P C R及H R M检测E G F R突变,3例肺腺癌患者外显子19(L747-P753i n s S)发生了突变,细针穿刺细胞学涂片标本可以行E G F R突变检测㊂F a s s i n a等[34]研究者收集了77例经皮细针肺穿刺N S C L C细胞学标本检测EG F R及K R A S突变情况,他们采用的是H R M㊂结果9例(11.7%) K R A S外显子2发生了突变,2例E G F R外显子21发生了突变㊂H R M是一种快速的㊁相对便宜的㊁可靠的可以用来检测小标本甚至是细胞学标本分子生物标志物的技术㊂B r u n o等[35]报道了经纤维支气管镜取细胞学标本检测N SC L CE G F R突变情况,包括T B N A㊁毛刷及肺泡灌洗㊂他们一共收集了50例N S C L C患者的细胞学标本及手术组织标本,用直接测序法检测E G F R突变情况,比较其突变率㊂结果显示5例患者的细胞学标本及组织学标本都发生了突变,各自的突变率为10%,组织学标本及细胞学标本检测E G F R突变无差异㊂近年来E B U S-T B N A应用越来越广,关于这项技术取标本检测E G F R的报道也逐渐增多㊂这种技术可以取得组织学标本,部分是细胞学标本㊂根据2007年N a k a j i m a等[36]发表在‘C h e s t“的文献报道,他们用E B U S-T B N A一共收集了48例N S C L C 患者的肿大纵隔淋巴结及肺门肿物穿刺组织标本,部分为组织学标本,部分为细胞学标本,用直接测序法检测E G F R突变,发现有43例可以进行突变分析,其中11例(25.6%)发生了E G F R突变㊂1例是外显子19突变,10例是外显子21突变,1例外显子19和21都发生了突变㊂G a r c i a-O l i vé等[37]发表了E B U S-T B N A取材检测N S C L C患者E G F R基因突变的类似报道㊂3展望分子靶向药物治疗显得越来越重要,是继手术㊁放疗㊁化疗后又一重要的治疗肺癌手段㊂2011年N C C N指南建议对E G F R突变的N S C L C患者一线予E G F R-T K I治疗㊂治疗前行E G F R突变检测,可以避免盲目治疗带来的不良反应和昂贵费用㊂所以㊃811㊃国际呼吸杂志2013年1月第33卷第2期I n t JR e s p i r,J a n u a r y2013,V o l.33,N o.2治疗肺癌前检测患者E G F R突变状态很有必要㊂在不能取得组织学标本的肺癌患者中可以考虑用细胞学标本(外周血㊁胸腔积液㊁细针穿刺标本)检测E G F R突变㊂用细胞学标本检测E G F R突变要注意以下几个问题:①获得更多的肿瘤细胞,提取更多的D N A;②选用更敏感的检测方法,如H R M㊁A R M S㊁突变体富集P C R㊁实时P C R㊁基因芯片技术等都可以检测微量的E G F R突变基因㊂在这几种方法中,基于微球的液相芯片技术作为一个新的高通量检测平台,能够在一个反应中同时检测样本中多个样本指标,所需要的样本量少,能够定性和定量诊断,具有较高的敏感性和特异性㊂但因其检测成本较昂贵等问题,目前尚未广泛应用[38-39]㊂参考文献[1]S a s a k iH,E n d oK,K o n i s h iA,e t a l.E G F R M u t a t i o ns t a t u si nJ a p a n e s el u n g c a n c e r p a t i e n t s:g e n o t y p i n g a n a l y s i su s i n gL i g h t C y c l e r.C l i nC a n c e rR e s,2005,11:2924-2929.[2]S c h i l l e r J H,H a r r i n g t o nD,B e l a n iC P,e ta l.C o m p a r i s o no ff o u r c h 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非小细胞肺癌治疗靶向基因检测及质控-张杰 03.25
FISH
患者2： IHC显示无ALK表达 ，FISH显示无重排
Mino-Kenudson et al., Clin Cancer Res 2010;16:1561–1571.
38
Ventana IHC 试剂设计
ALK融合蛋白:
• 无ALK重排的NSCLC不表达ALK融合蛋 白 • 部分ALK融合蛋白表达较低
G719A/S
Deletions
Exon 17
D761Y D770_N771 insNPG
19 18 20
Exons 18–24
T790M
L858R
Exons 25–28
L861X
21
Riely, et al. Clin Cancer Res 2006; Murray, et al. J Thorac Oncol 2008
EGFR 66.35%
T790M/ EGFR Mut = 5
开展项目
EGFR突变检测： EGFR 19-21外显子序列突变检测 EGFR拷贝数量改变检测 K-ras 12-13外显子序列突变检测 ALK-EML4融合基因检测
免疫组化法 FISH方法 RT-PCR方法
B-raf突变检测 ROS1突变检测
如何获取优质的标本：标本类型
尽可能取得大标本进行检测 临床常用的取样方法取得标本量通常较少
内镜活检、穿刺活检、细胞学标本(支气管刷检,
细针穿刺)
小标本检测失败率 53–66% (内镜活检与穿刺活 检) ，而切除活检标本的失败率仅24% 标本中肿瘤细胞的含量也十分重要
组织标本富集
Eberhard DA, et al. J Clin Oncol 2008; 26:983-984.源自分子检测与靶向治疗的关键步骤
非小细胞肺癌患者EGFR基因检测PPT培训课件
03
非小细胞肺癌患者EGFR基因 突变检测
突变类型与发生率
突变类型
EGFR基因突变主要涉及18-21外显子，包括L858R、G719X、T790M等常见 突变。
发生率
EGFR基因突变在非小细胞肺癌中发生率较高，约15-20%的肺腺癌患者存在 EGFR基因突变。
突变检测方法与流程
检测方法
目前常用的EGFR基因突变检测方法包括直接测序法、实时荧光定量PCR、液相 芯片法和组织芯片法等。
政策支持与资金投入
政府和社会各界应加大对EGFR基因检测的投入，提高检测的可及 性和可负担性。
感谢您的观看
THANKS
05
非小细胞肺癌患者EGFR基因 检测的临床实践
检测前的准备与注意事项
01
02
03
患者教育
向患者解释EGFR基因检 测的目的、方法及意义， 消除患者的疑虑和恐惧。
样本采集
确保采集的样本质量，如 肺部组织或血液，避免污 染和降解。
注意事项
告知患者检测前需避免使 用某些药物或停止使用某 些药物，以免影响检测结 果。
数字PCR技术
数字PCR技术具有高灵敏度、高特 异性的特点，未来可能会成为 EGFR基因突变检测的重要手段。
液态活检技术
基于循环肿瘤细胞的检测和基于循 环肿瘤DNA的检测等液态活检技术， 为肺癌患者的早期诊断和实时监测 提供了新的可能性。
个性化治疗与精准医学的结合
个性化治疗
根据患者的基因突变类型和个体特征，制定 个性化的治疗方案，以提高治疗效果和患者 的生存率。
检测过程中的沟通与护理
沟通
与患者保持良好沟通，了 解患者的病情和需求，解 答患者的问题。
护理
《奥希替尼在首次和重复再活检检测到EGFRT790M突变的晚期非小细胞肺癌患者的疗效和安全性》
《奥希替尼在首次和重复再活检检测到EGFR T790M突变的晚期非小细胞肺癌患者的疗效和安全性》一、引言肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，而非小细胞肺癌（NSCLC）约占所有肺癌的85%。
其中，EGFR突变是亚洲人群NSCLC的主要驱动因素之一。
作为第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂的奥希替尼，对T790M突变的NSCLC患者展现出显著的治疗效果。
本文将就奥希替尼在首次和重复再活检检测到EGFR T790M突变的晚期非小细胞肺癌患者的疗效和安全性进行详细分析。
二、方法本研究选取了首次和重复再活检检测到EGFR T790M突变的晚期非小细胞肺癌患者，采用奥希替尼治疗。
患者接受奥希替尼的剂量和疗程根据患者的具体情况和医生的建议进行。
同时，我们通过严格的设计和实施，收集了患者的临床数据，包括治疗效果、安全性、生活质量等方面的信息。
三、结果1. 疗效分析奥希替尼在治疗首次和重复再活检检测到EGFR T790M突变的晚期非小细胞肺癌患者中表现出显著的效果。
经过一段时间的治疗，大部分患者的肿瘤出现明显的缩小或稳定，总体有效率（ORR）和疾病控制率（DCR）均达到较高水平。
此外，奥希替尼的疗效在首次和重复再活检患者中无明显差异。
2. 安全性分析奥希替尼在治疗过程中表现出良好的安全性。
大部分患者仅出现轻度或中度的不良反应，如腹泻、皮疹等。
经过适当的处理，这些不良反应大多可以缓解或消失。
此外，奥希替尼对患者的肝肾功能、血常规等指标无明显影响。
四、讨论奥希替尼在治疗EGFR T790M突变的晚期非小细胞肺癌患者中表现出显著的疗效和良好的安全性。
对于首次和重复再活检患者，奥希替尼的治疗效果无明显差异。
这表明，无论患者是初次确诊还是疾病复发，奥希替尼均能发挥其疗效。
此外，奥希替尼的不良反应大多为轻度或中度，且易于处理，对患者的肝肾功能、血常规等指标无明显影响。
然而，本研究仍存在一定局限性。
首先，样本量相对较小，可能影响结果的普遍性。
非小细胞肺癌EGFR基因检测的临床意义
非小细胞肺癌EGFR基因检测的临床意义作者：高艳郭婵娟张银倪兵朱顺辉来源：《中外医学研究》2017年第14期【摘要】目的：研究和探讨EGFR基因检测在非小细胞肺癌临床诊疗中的价值和意义。
方法：抽选2015年11月-2016年11月，在笔者所在医院病理科进行检查的86例非小细胞肺癌患者。
收集他们的组织样本和血清进行EGFR基因检测，观察和分析其基因突变情况，并根据结果分为突变组和非突变组，均给予EGFR-TKI靶向治疗，统计、分析和对比两组患者的临床治疗情况和结果。
结果：经过试验检测得出，86例患者中共有40例出现EGFR基因突变（占46.5%），其中19-Del外显子缺失突变22例（占25.6%），21号外显子L858R点突变9例（占10.4%），20号外显子T790M插入突变3例（占3.5%），20号外显子T20 S768I为点突变3例（占3.5%），19号外显子缺失突变及20号外显子T790M插入突变1例（占1.2%），19号外显子缺失突变及20号外显子20-Ins点突变1例（占1.2%），20号外显子T790M点突变及20-Ins插入突变1例（占1.2%）。
经过临床治疗，突变组患者的临床总有效率（87.50%）显著高于非突变组患者的临床总有效率（60.87%），差异有统计学意义（P【关键词】非小细胞肺癌； EGFR基因；临床意义doi：10.14033/ki.cfmr.2017.14.009 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）14-0017-02非小细胞肺癌的病症类型主要分为腺癌、鳞状细胞癌及大细胞癌，其发病原因多与“二手烟”、生活环境、电离辐射、遗传因素等有关[1-2]。
非小细胞肺癌的诊断发现的时间较晚，扩散转移慢，死亡率高，且目前临床上常用的标准治疗方案（含铂两药）已经达到了临床有效率的平台期[3]，如何提高非小细胞肺癌患者的临床有效率成为当前治疗过程中亟待解决的主要难题之一。
13 非小细胞肺癌EGFR基因突变检测病理质量控制-13
肿瘤组织内炎症组织所占的百分比（%）
肿瘤组织内坏死组织的百分比（%） 非必须 非必须 如组织固定欠佳或其他中肯的描述
标本的质量控制
• 福尔马林固定的标本
–固定要及时，离体后即时处理 –固定液：10%中性缓冲福尔马林（终浓度4%）； –固定时间：小组织6-12h，大标本6-48h.
当细胞数较少时,可以适当增加切片数,以满足检测需求.
• 肿瘤比例：标识肿瘤丰富的区域，提高肿瘤细胞比例用于 检测。
尽量去除非肿瘤组织及细胞，提高检测的敏感性。：〉10% ARMs法：〉1%
病理质量控制的标准
病理参数 病理诊断 描述 病理组织学亚型 （选择性） 具体描述 参照WHO标准病理诊断和分型 参照WHO 标准分级，提示肿瘤的分化程度 组织学分级 1 = 高分化（低级别) 1, 2, 3 2 = 中分化 3 = 差分化（高级别）
组织大小
肿瘤大小 肿瘤比例
毫米
显微镜上Vernier scale测量到的组织切片的 最大径 (x mm x y mm) 显微镜上Vernier scale测量到的肿瘤组织的 最大径 (x mm x y mm) 标识区域内的肿瘤细胞百分比（%）
毫米
0-100%
炎症
坏死 核分裂像 凋亡 病理描述
0-100%
4 例肺肿块切除标本EGFR突变检测呈阴性
肺转移性肝细胞性肝癌
小细胞性肺癌
肿瘤细胞太少
未检测到肿瘤组织
Rubbish In; Rubbish Out
病理评估的必要性
EGFR突变检测
EGFR突变阳性
EGFR突变阴性
真阳性
假阳性
假阴性
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EGFR基因突变检测标本
肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切 除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的 检测。
理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞 （文献报道大于100个即可）
.
检测标本
冰冻组织 外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤 DNA，取得可靠检测结果---广泛使用
穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质 量仍好，获得较可靠检测结果---使用受限
近50% NSCLC驱动基因已经被发现 双基因同时突变罕见 对已知的靶点，已有很多上市或在研
的药物 驱动基因突变状态与人种、性别、病
理类型、吸烟状况等有关，不同类型 用药不同。
.
NSCLC基因检测的意义
基因检测决定了分子靶向治疗 2011年我国制定了: 中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子
受体基因突变检测专家共识
男 44.4% (8/18) 女 68% (17/25) 男 33.33% (1/3) 女 100 % （1/1） 男 14.3% (1/7) 女 50 % (1/2)
55.7% (24/42)
EGFR基因突变检测的一般原则
为使患者尽可能地从最有效的治疗中受 益，所有NSCLC，只要条件许可，都 应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺 癌。
4%
NA
6%
1%
5%
33%
29%
Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010
.
日本
50% 15% 5% 1% 3% NA NA 4% 22%
97%的基因突变互相排斥
单个突变 数
ALK (38) AKT (1) BRAF (9) EGFR (89) HER2 (3)
.
EGFR突变率
55份有结果的标本中，29份EGFR突变 阳性，突变率55.7%
.
EGFR突变类型
n
L858R
14
19-del
11
L858R+ 19-del
3
G719X
1
合计
29
.
检出率
48.3%
37.9% 10.3% 4.2% 3.5%
EGFR突变与病理类型
突变率
腺癌 腺鳞癌 鳞癌 合计
.
KRAS (114)
MEK1 (2) MET AMP (3) NRAS (2) PIK3CA (6)
ALK X
AKT
BRAF EGFR HER2 KRAS MEK1 MET
NRA S
PIK3 CA
1
2
1
1
X
X
1
X
1
3
X
X
1
1
X
1
1
X
X
Kris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA75X06.
外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究 也有阳性结果
外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化 很大（10~1200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp）， 可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA 中的含量不稳定（3%~93%）
胸水可以做——前景很好
.
标本的处理
新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等） 含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小
，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗 干净。 取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.5cm以下 ，浸没于75～100%的乙醇中60分钟以上；可在4℃冰 箱暂时保存。 送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试 管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。
.
EGFR基因突变检测的临床意义
EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国 内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI 一线治疗
优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或 少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、 腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。
NSCLC患者EGFR基因突变检测
.
腺癌的驱动基因
EGFR KRAS ELM4-ALK
BRAF HER2 PIK3CA PTEN MET扩增 Nil
LCMC (美国)
17% 22% 7%
2% 1% 1% NA 1% 46%
MSN (法国)
13% 28% 2%
中国
40% 7% 7%
2%
2%
1%
NA
1%
.
国内EGFR基因突变率
.
铜陵检测结果（ARMS法）
送检66份标本, 11份无结果，55份有结果， 检出率83.33%，不同标本检出率
n 有结果 检出率
手术
30
30
100%
淋巴结活检
6
6
100%
气管镜
13
5
38.5%
肺穿
11
8
72.7%
胸腔镜
1
1
100%
胸水
5
5Leabharlann 100 %合计66
55
83.33%
.
EGFR基因突变检测的临床意义
EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del 较L858R疗效好,检测的必要性
.
EGFR基因突变检测的临床意义
化疗能改变EGFR突变状态 264例一线化疗的Шb~IV期NSCLC患者的血
DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低 （23.1%对34.5%，P<0.001） 提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时 机
.
百分比
cMot 5%
EGFR 10%
EML4-ALK 5%
未知 51%
KRAS 25%
BRAF、P13K 4%
高加索人腺癌各基因构成比图
4
.
百分比
cMot 5%
未知 23%
EGFR 44%
BRAF、P13K 5%
KRAS 7%
EML4-ALK 16%
中国人肺腺癌各基因构成比图
5
.
关于“驱动基因”
.
检测标本
固定包埋组织 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片 段化，但仍获得可靠检测结果---使用受限
支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且 片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。 ---极度受限
.
检测标本
淋巴结标本也可——淋巴结标本中EGFR突变能否 反映原发灶中EGFR状态？
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全国检测情况(基康+迪安)
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国内EGFR基因突变率
在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺 癌突变约42.5%，非腺癌约9.5%。
2012年基康公司共收到1500名患者样品，全部完 成检测，其中108名患者的样品因DNA质量不合格 而终止检测，因此共有1392名患者已出检测结果， 其中660名患者突变阳性（47%），其中腺癌、腺 鳞癌、BAC为52%，鳞癌为14%。