肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告记录
肝糖原的提取、鉴定与定量-第七实验室

生物化学实验报告姓名:学号:专业年级:组别:生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称Folin—酚试剂法测定蛋白质含量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求:正文请统一用:小四号,宋体,1.5倍行距;数字、英文用Times New Roman;标题用:四号,黑体,加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法;2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法;3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式;4、正确掌握使用离心机的方法步骤;5、熟练运用溶液混匀的各种方法;6、正确掌握溶液转移的操作;7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤二、实验原理实验1肝糖原的提取与鉴定糖原是生物的主要储能物质之一,主要储存与肝细胞中,采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。
肝细胞破碎,细胞内容物流出.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀,糖原则能够稳定地保存在上清液中,从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水,故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
此外,糖原还可以被酸水解成葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可以判定肝组织中糖原的存在。
糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2↓2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O2CuOH = H20 + Cu2O↓ (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO↓ (黑色)实验2肝糖原定量测定糖原在浓碱溶液中非常稳定,故可将肝组织先置于浓碱中加热,以破坏其他成分,保留肝糖原。
079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告

生物化学实验报告姓名:符含敏学号: 3140090079专业年级: 2014级预防医学组别:第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求:正文请统一用:小四号,宋体,1.5倍行距;数字、英文用Times New Roman;标题用:四号,黑体,加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的:提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理:1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,使糖原能很好地保存在上清液中,95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色,糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖,浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物,它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg,溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三.实验材料:1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四.实验步骤:1.肝糖原的提取与鉴定:鸡肝约1.5 g,剪碎+5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状+5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟(4000 r / min)3 ml)+3ml 95%乙醇,混匀,静置10分钟5分钟(4000 r / min)+蒸镏水1 ml沸水浴2分钟,溶解沉淀糖原溶液1ml+浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比+班氏试剂4滴沸水浴2分钟,观察变化2.肝糖原的定量测定:鸡肝0.15 g+30%KOH 1.5ml (用吸量管)沸水浴15分钟冷却,全部转入100 ml容量瓶中加水至标线,仔细混匀,此为糖原提取液取3支试管,按下表操作:试剂(ml)空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5(用吸量管)混匀,沸水浴10分钟,冷却c。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室【参考借鉴】

生物化学实验报告
姓名:
学号:
专业年级: 2015级护理本科
组别:第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作;熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况,采用合适的混匀方法)。
5、了解呈色反应。
二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎,用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶从而使其沉淀,而糖原仍稳定保持在上清液中,从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。
肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定

肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定生物化学实验报告姓名:学号: 3130010071专业年级: xx级临床医学组别:第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期 xx-12-25 合作者评分陈海玲签名实验地点第2实验室指导老师朱利娜批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理●肝糖原的提取糖原储存于细胞内,采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀,再溶于热水中。
●糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO 4 + 2NaOH = Na2SO 4 + Cu(OH)2Cu(OH)2 + C6H 12O 6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2红色) Cu(OH)2 ==== H2黑色) ●肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10—100mg 范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告

生物化学实验报告姓名:学号:专业年级:组别:实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4.熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况,采用合适的混匀方法)。
5.正确掌握溶液转移的操作。
6.正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法:以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法(1)肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g,剪碎COOH 1 ml+5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml+5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中,离心3分钟(4000 r / min)沉淀(弃去)上清(取约3 ml)+3ml (等量)95%乙醇,混匀,静置10分钟离心5分钟(4000 r / min)上清(弃去)沉淀+蒸镏水1 ml沸水浴2分钟,溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml+浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟,冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液+班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟,观察变化(2)肝糖原定量实验鸡肝0.15 g+30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却,全部转入100 ml容量瓶中加水至标线,仔细混匀,此为糖原提取液糖原的测定取3支试管,按下表操作。
肝糖原的提取,定性以及定量实验

生物化学实验报告姓名:张子荣学号: 3150901080专业年级: 2015级临床医学组别:第五实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖元的提取,鉴定和定量检测实验日期2016.12.29 实验地点第五实验室合作者张林燕指导老师何肖娟评分教师签名批改日期格式要求:正文请统一用:小四号,宋体,1.5倍行距;数字、英文用Times New Roman;标题用:四号,黑体,加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4.熟练运用溶液混匀的各种方法。
5.正确掌握溶液转移的操作。
6.正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内,采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀,再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页

肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的:1.了解肝糖原的结构与性质;3.熟悉超声波提取技术的应用。
实验原理:肝糖原是一种糖原,在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷(SAM)为原料,经过糖原合成酶的催化作用合成而成。
它是一种高分子多糖,由葡萄糖基通过1-4键连接而成,具有极强的极性,难溶于非极性溶剂。
肝糖原的提取:取新鲜肝组织80g,冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存,取出后立即加入10倍体积的冷盐酸(0.1mol/L),用手柄式破碎器将组织均匀破碎,加入适量的冷盐酸,使其均匀分布,浸泡在冰箱中30min,取出用移液器吸取上清液。
用纱布过滤残渣,滤好的液体置于4℃冰箱中,制备组织液。
取20μL肝糖原组织液,加入20μl的磷酸汞溶液,室温环境反应20min,其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。
反应结束后,加入一定量的氢氧化钠,与水分解反应,生成红褐色的水银,其数量与肝糖原含量成正比例关系。
经过计算,得到肝糖原的含量。
实验步骤:1. 超声波法提取肝糖原:在超声波处理器中,取15g搅拌均匀的肝组织,加入草酸(0.1mol/L)溶液100mL中,混合均匀;2. 将二氧化硫加入混合液中,浸泡3分钟;3. 将混合液通过过滤纸过滤,收集上清液,其即肝糖原溶液;4. 测定肝糖原浓度:取30μL的肝糖原溶液,加入1.5mL的琼脂糖溶液,室温下反应2小时,以紫外分光光度法(UV-6500)在260nm处测定吸光度,计算肝糖原浓度。
实验结果:1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L;2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。
结论:1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取,可显著提高提取效率;2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定,该方法操作简单,结果准确。
实验中还发现,肝糖原含量随年龄增长趋势下降,这与肝脏代谢功能的下降有关。
参考文献:1.老师名字,丁丁等。
生物化学实验教程[M]。
实验五、肝糖原的提取与鉴定

通过动物实验等方法检测肝糖原的生物活性。例如,给实验动物注射一定量的肝糖原后,观察其血糖水 平的变化情况,以判断肝糖原的生物活性。
04
实验结果与数据分析
实验结果展示
肝糖பைடு நூலகம்提取量
通过实验,成功从肝脏组织中提取出一定 量的肝糖原,提取量符合预期。
肝糖原纯度
经过纯化步骤,所得肝糖原的纯度较高, 杂质含量较低。
生物学活性验证
将提取的肝糖原与标准品进行生物学活性比较,如血糖调节活 性等。结果显示,提取的肝糖原具有良好的生物学活性,与标 准品相似。
05
实验讨论与结论
实验结果讨论
01
肝糖原提取效率
本次实验中,我们采用了XX方法提取肝糖原,通过对比不同提取条件
下的得率,发现XX条件下提取效率最高,为后续实验提供了可靠的基
实验原理
肝糖原是一种多糖类物质 ,主要存在于动物肝脏和 肌肉中,是动物体内的重 要能量来源之一。
肝糖原在肝脏中合成并储 存,当机体需要能量时, 肝糖原可分解为葡萄糖并 释放到血液中,以维持血 糖水平的稳定。
本实验通过提取肝脏中的 肝糖原,并利用其理化性 质进行鉴定,以深入了解 其在动物体内的功能和作 用。
肝糖原的鉴定
物理性质鉴定
通过观察肝糖原的颜色、气味、溶解性等物理性质进行初步鉴定。肝糖原应为白色或类白色粉末,无臭、无味,易溶 于水。
化学性质鉴定
利用肝糖原的还原性进行化学鉴定。可采用斐林试剂等还原糖试剂与肝糖原反应,观察颜色变化判断其还原性。同时 ,可利用肝糖原与碘的反应呈现蓝紫色等特性进行鉴定。
鉴定试剂
用于鉴定提取的肝糖原,如碘液等。
仪器与设备
匀浆器
用于将肝脏样本匀浆化,以便于提取肝糖 原。
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肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告记录
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生物化学实验报告
姓名:
学号:
专业年级:
组别:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期实验地点
合作者指导老师
评分XX 教师签名李某某批改日期2013-06-03
格式要求:正文请统一用:小四号,宋体,1.5倍行距;数字、英文用Times New Roman;标题用:四号,黑体,加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的
1、掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理
1、肝糖原的提取与鉴定
糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,
依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓
2Cu(OH)2十C6H12O6 = 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O
2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2O
Cu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O
2、肝糖原定量测定
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法:以流程图示意
1、材料:
(1)样品:鸡肝
(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂
(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板
2、方法:
(1)肝糖原的提取与鉴定
(2)肝糖原定量测定
鸡肝约
+5%CCl 3CO 研磨
+5%CCl3CO 研磨成全部转入离心管中,上清液
离心5min
+2ml 95%乙醇,
沉上清液
白瓷板
糖原溶糖原水
+班氏沸
水浴
沉淀
沸
水
浴加碘试
加碘试
呈色
+浓
沸水浴
+50%NaO
糖原混
取鸡肝
+30%KOH 1.5ml
沸水浴
冷却,全部转入
加水至标线,仔细混
取3支试管,分别标记为
往空白管中加入蒸馏水
往三支试管中分别加入
沸水浴
在分光光度计620mm波长处,用空白管溶液
四、结果与讨论:①结果:实验数据、现象、图谱;②讨论:以结果为基础的逻辑推论,并得出结论。
1、结果:
(1)实验现象:
1)肝糖原的提取与鉴定
第一次离心后,肝匀浆分为2层,上层为上清液,不完全澄清,下层为淡褐色沉淀。
图1 肝匀浆 图2 肝匀浆第一次离心后
②加入乙醇混匀并静置后,溶液分层,上层为上清液,下层有白色絮状沉淀。
③第二次离心后,溶液分为2层,上层为上清液,试管底部有少量白色沉淀。
图3 第二次离心后的白色沉淀 ④加入蒸馏水并沸水浴后,白色沉淀溶解。
⑤白瓷板上,糖原溶液加碘试剂后呈红棕色,与碘自身的黄色有明显区别。
图4 呈色对比结果(左为糖原溶液加碘试剂,右为碘试剂)
碘试剂2滴
碘试
⑥往糖原水解液中加入班氏试剂后,溶液呈蓝色(班氏试剂本身为蓝色)。
沸水浴后,
溶液变为砖红色(生成砖红色沉淀)。
砖红图5 糖原水解液图6 沸水浴前图7 沸水浴后
2)肝糖原定量测定
①往鸡肝中加入KOH并沸水浴后,溶液变为红棕色。
图8 沸水浴后,溶液变为红棕色
②水浴前,空白管呈黄色,标准管呈绿色,样品管呈黄色(颜色比空白管浅)。
水浴后,
空白管无明显变化,标准管颜色略变深,样品管由黄色变为深绿色(颜色比标准管深)。
图9 水浴前图10 水浴后(2)实验数据:
测定次数标准管样品管
1 0.593 0.401
2 0.59
3 0.397
3 0.59
4 0.396
平均值0.593 0.398 表1 标准管和样品管测得的吸光度(A620)及平均值按下式计算样品中肝糖原的含量:
肝糖原(g/100g肝组织)= A样品
* 0.05 *
100
*
100
* 1.11 A标准肝组织重(g)1000
由于样品稀释了一倍,因此计算结果需乘二。
结果:肝糖原的含量为4.966g/100g肝组织。
故本次实验结论为:该鸡肝样品含有肝组织,且肝糖原含量为4.966g/100g肝组织。
2、讨论:
(1)实验数据分析:本次实验测得肝糖原含量为4.966g/100g肝组织。
查书得饱食鸡肝肝糖原含量为2~3g/100g肝组织。
本次实验结果偏大,说明肝组织中含有过多肝糖原,试验所用鸡肝为脂肪肝。
空白管标准管样品管空白管标准管样品管
(2)呈色对比结果分析:糖原溶液与碘试剂反应呈红棕色,与碘试剂本身的黄色区别明显,说明糖原含量较大。
(3)糖原水解液与班氏试剂反应结果分析:该反应主要是通过检测葡萄糖与班氏试剂的还原性糖反应间接鉴定溶液中糖原的存在。
糖原溶液被浓盐酸水解为葡萄糖,葡萄糖中的醛基可被Cu(OH)2氧化为羧基,即把葡萄糖氧化为葡萄糖酸,Cu2+则被还原生成Cu2O砖红色沉淀。
因此水浴后,溶液由蓝色变为砖红色,实验现象明显。
(4)注意事项:
1)蒽酮试剂为浓硫酸所配制,使用时应小心谨慎。
若不慎沾到皮肤上,应立即用大量清水冲洗。
2)离心后,用移液枪吸取上清液时应避免枪头触及沉淀,否则会使沉淀物上浮,导致上清液浑浊。
避免将枪头伸到液面下再按按钮,否则枪头喷出的气泡也会激起沉淀物。
3)打开室温-100℃恒温水浴箱盖子时要小心水蒸气,以免烫伤。
4)使用离心机时要注意配平,否则会损坏离心机。
5)使用分光光度计时不得在仪器界面上转移试剂,以免腐蚀分光光度计。
6)肝糖原提取中,往上清液加入95%乙醇时要充分混匀。
溶液总量较大,混匀操作不易,可用倾倒混匀或用玻璃棒搅拌混匀。
7)肝组织必须在沸水浴中全部溶解,否则影响比色。
8)蒽酮试剂必须2倍于被测液。
11。