琼脂糖凝胶电泳注意事项
请简述琼脂糖凝胶电泳的实验流程及注意事项
请简述琼脂糖凝胶电泳的实验流程及注
意事项
嘿，大家好啊！今天咱就来唠唠琼脂糖凝胶电泳那点事儿。
这实验流程嘛，第一步，得先把那琼脂糖搞成胶。
嘿，就跟煮果冻似的，把琼脂糖放那水里一顿煮，等它化得稀里糊涂的。
然后，把这胶倒在那模子里，等它凉了凝固，就成了咱要用的凝胶啦。
接着，就是上样啦。
把咱要检测的那些个DNA 啊啥的样品，小心翼翼地加到那凝胶的孔里。
这可得小心着点，别手抖给弄洒咯，那些可都是宝贝呀！
然后呢，通上电，就让那些小片段们在电场里开始赛跑啦！跑得慢的在后面，跑得快的就往前冲。
就像咱小时候比赛跑步似的，各显神通。
最后呢，等跑完了，拿个染色剂给它们染上颜色，就能看见那些小条条啦。
嘿，这可就大功告成咯！
不过啊，这里面可有不少注意事项呢！首先，煮琼脂糖的时候，可别煮过头了，不然那胶就跟稀泥一样，根本没法用。
其次，上样的时候一定得稳住，要是不小心把孔给弄破了，那就得重来咯。
还有啊，通电的时候
可得注意电压，别搞太大把那些小片段给烤焦咯。
我记得有一次做实验，我那琼脂糖就煮得不对劲，结果倒出来的胶软趴趴的，根本站不起来。
还有一次，上样的时候手一抖，哎呀妈呀，样品全洒外面了，心疼得我哟。
所以啊，做这个实验可得小心再小心，谨慎再谨慎。
总之呢，琼脂糖凝胶电泳这玩意儿，说难也不难，说简单也不简单。
只要咱按照流程，小心翼翼地操作，注意那些个注意事项，就能做出漂亮的实验结果来。
大家可别嫌我啰嗦，这些可都是我的亲身经验呐，希望能帮到你们哟！好了，今天就讲到这里，祝大家实验都顺顺利利的哈！。
琼脂糖凝胶电泳注意事项
2.5 DNA样品的纯度和状态
2.6 DNA的上样
2.7 Marker的选择
2.8 凝胶的染色和观察
3 琼脂糖中回收DNA琼脂糖凝胶电泳 - 原理
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。
凝胶的染色和观察
实验室常用的核酸染色剂是溴化乙啶（EB），染色效果好，操作方便，但是稳定性差，具有毒性。而其他系列例如SYBR Green，gelred，虽然毒性小，但价格昂贵。TIANGEN公司的GeneGreen相比则是性价比高的低毒替代染料，其灵敏度比传统EB染料高10倍以上。注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长，如果激发波长不对，条带则不易观察，出现条带模糊的现象。
要尽量减少DNA在紫外下的照射时间以减少对DNA的损伤；
熔胶要完全。[2]
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳注意事项
琼脂糖凝胶电泳常见错误及注意事项琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学实验技术。
在实验过程中，为避免常见错误和提高实验效果，需要注意以下几点：1. 样品制备：在样品制备过程中，需要严格控制样品的来源、处理和质量。
避免污染和杂质的污染，以免影响实验结果。
2. 凝胶制备：在凝胶制备过程中，需要严格按照实验方案的要求制备凝胶。
应避免在制备过程中产生气泡和缺陷，保证凝胶质量的均一性和完整性。
3. 负载样品：样品的负载量也是影响实验结果的一个重要因素。
负载量过多或者过少，都会影响实验结果的准确性。
因此，需要根据实验要求和样品特点调整合适的负载量。
4. 配置电解液：电解液是凝胶电泳实验中的重要组成部分。
配置电解液应按照实验方案的要求进行，不能进行随意变更。
5. 进行电泳实验：在进行电泳实验时需要注意以下几点：（1）电泳时间：电泳时间应根据实验要求和实验人员的经验来调整，以保证样品可以在凝胶中分离出来。
（2）使用电源：电源是电泳实验中的重要设备，需要使用与实验要求相符的电源，避免因电源不适应或使用不当引起实验故障。
（3）电极夹：电极夹应牢固可靠，避免在实验过程中出现松动或断电等情况。
6. 结果解读：琼脂糖凝胶电泳实验结果的解读需要根据实验要求和实验人员的经验进行。
在进行实验结果的解读时需要注意以下几点：（1）确定分离带：分离带越清晰越好，可以通过显微镜来观察分离带是否正常。
（2）确定目标DNA：确定目标DNA时需要考虑实验目的和分离带的特点来确定是否符合要求。
（3）保留样品：需要在实验结果出来后保留样品，以备后续实验需要。
总之，在进行琼脂糖凝胶电泳实验时需要注意以上几点，以达到实验目的并减少实验错误的发生。
琼脂糖凝胶电泳实验注意事项
琼脂糖凝胶电泳实验注意事项以琼脂糖凝胶电泳实验注意事项为标题，写一篇文章。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子（如核酸和蛋白质）的技术。
在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，需要注意以下几个方面：一、琼脂糖凝胶的制备1. 选择适当的琼脂糖浓度：根据需要分离的目标生物大分子的大小，选择合适的琼脂糖浓度。
一般来说，较大分子需要较低浓度的琼脂糖。
2. 充分溶解琼脂糖：将琼脂糖加入缓冲液中，充分搅拌或加热至完全溶解。
避免出现结块或沉淀现象。
3. 均匀注入琼脂糖凝胶模板：将溶解的琼脂糖缓冲液均匀注入琼脂糖凝胶模板中，避免产生气泡或不均匀的凝胶层厚度。
二、样品处理1. 样品预处理：根据需要，进行样品的提取、纯化和浓缩等处理，以获得较纯净的样品。
2. 样品加载量：根据样品的浓度和凝胶孔径的大小，确定合适的样品加载量。
过多的样品会导致分离效果不佳，过少的样品则可能无法检测到目标分子。
3. 加载缓冲液：为了保持样品的稳定性，在加载样品时，可以加入适量的加载缓冲液。
缓冲液的选择应根据实验需要来确定，常用的缓冲液包括TAE缓冲液和TBE缓冲液等。
三、电泳条件1. 电泳缓冲液的选择：根据实验需要，选择适当的电泳缓冲液。
常用的电泳缓冲液包括TAE缓冲液和TBE缓冲液。
缓冲液的选择应考虑到其离子浓度和pH值的影响。
2. 电泳时间和电压：根据样品的大小和需要分离的目标，确定合适的电泳时间和电压。
较小的分子需要较长时间的电泳，较大的分子则需要较高的电压。
3. 温度控制：在进行琼脂糖凝胶电泳时，应控制好实验温度，避免温度过高引起样品的变性或凝胶的溶解。
四、染色和可视化1. 染色剂的选择：根据需要染色的生物大分子，选择合适的染色剂。
DNA常用的染色剂包括溴化乙锭和SYBR Green等，蛋白质常用的染色剂包括银染剂和共染剂等。
2. 染色时间和浓度：根据染色剂的特性，确定合适的染色时间和浓度。
过长的染色时间可能导致背景信号过强，过高的染色浓度则可能掩盖目标信号。
琼脂糖凝胶电泳步骤
琼脂糖凝胶电泳步骤实验前准备及注意事项：将所要用到的制胶锥形瓶、胶槽、梳齿等物品清理干净，如有残胶，需将残胶尽量去除。
注意：所有用来跑核酸胶的物品，只要接触过核酸染料，一定要专门放置，专物专用，不要再将污染过的物品随意放置，以免污染其他物品。
接触过核酸染料的手套不要再碰非污染区的物品。
制胶和拿取核酸胶时佩戴一次性PE手套，再操作其他地方时将一次性手套丢弃。
实验步骤：1.按每100ml 1×TAE/TBE缓冲液中加入1g琼脂糖（1%的胶，根据核酸大小选择制胶的浓度，一般情况用1%-2%的胶）的比例，称取琼脂糖，加入专门制琼脂糖凝胶的250ml-500ml的锥形瓶中。
2.按比例量取适量的1×TAE/TBE缓冲液，加入到锥形瓶中的琼脂糖一起，适当摇晃锥形瓶初步混匀。
3.将混合液放入微波炉中，用中高火加热，加热总时间可根据制胶总量调整，一般40ml左右的胶量加热90s左右。
如果制胶量大，记得每加热1min左右将瓶从微波炉中取出，轻轻晃匀后，再继续加热，以免局部过热导致胶溢出。
注意：取出加热后的瓶时，记得垫上纸，防止烫手！4.待胶加热好，完全溶解后，稍晾凉至45-55℃左右（以基本不太烫手为宜）按照1:10000的比例加入核酸染料（如100ml胶加10ul染料），迅速摇匀。
5.将胶槽和梳齿准备好，梳齿可以预先插好，将上一步摇匀的胶倒入胶槽中，一般厚度以60mm左右为宜，具体要根据梳齿的厚度以及样品量来定。
6.待胶变白，基本表示胶已凝好，此时可以将梳齿拔出，一定要竖着往上拔梳齿，不要摇晃，以免样品孔被破坏。
7.在电泳槽中倒入1×TAE/TBE缓冲液，将制好的胶放入缓冲液，以缓冲液没过样品孔为宜。
8.点样：根据样品孔的大小决定上样量，每一排样品孔至少有一个孔用来点DNA Marker。
（上样前确定每个样品和Marker里都已经加了Loading buffer，Loading buffer 的终浓度为1×）9.确定样品孔的方向，核酸带负电，样品孔要在负极，通电后在胶孔中向正极移动。
琼脂糖凝胶电泳部分注意事项
目的检测是不是，纯度，质粒DNA构型（共价闭环双链质粒）分子量
电：分离的物质得带电，必须有电场
泳：有方向
碱性环境下DNA带负电，朝正极移动
电泳的速度与形线性，无序，球型不同状分子大小，越小越快电场给予推理阻力载体给予浓度低孔隙大重力作用不大
分子大小不同以不同速度移动
溴化乙锭嵌入DNA分子在紫外光显色
琼脂糖DNA标准品都是线段，Marker已知碱基对的种片段
通过比较确定分子量
电泳缓冲液TAE=Tris-EDTA 导电
上样缓冲液有色彩蓝紫色为主，溴酚蓝，两种还有二甲苯氢，提升比重蔗糖或甘油
容易辨别清晰指示情况，
溴化乙锭定性不能定量，纯度
实验材料仪器电泳仪电泳槽电源凝胶成像系统（紫外光激发荧光）离心机也可观察蛋白
明示正负极
封胶槽橡皮膏液面下孔隙内加样前面是溴酚蓝670，二甲苯酚4000多，样品在之间，可以指示时间小分子量的指示剂到三分之二的位置
电泳方向紫外透射分析仪蛋白也会污染。
环状、线性、开环只开了一个势必影响大小。
琼脂糖电泳电压和电流设置
琼脂糖电泳是一种常用的核酸和蛋白质分离和纯化方法。
通过利用琼脂糖的凝胶特性，将待测样品分子按照大小和电荷进行分离。
在琼脂糖电泳实验中，电压和电流的设置对实验结果有着重要的影响。
下面我将详细介绍琼脂糖电泳电压和电流的设置方法和注意事项。
一、电压的设置1. 琼脂糖电泳实验中，电压的设置应根据待测分子的大小来确定。
较小的DNA片段通常需要较高的电压，而较大的DNA片段则需要较低的电压。
2. 选择合适的电压可以提高分离速度和分辨率。
但是过高的电压会导致琼脂糖凝胶发热、溶胶蒸发和样品失去活性等问题，因此需要谨慎设置。
3. 一般情况下，琼脂糖电泳实验的电压范围为50-150V。
如果待测分子较小，可以选择较高的电压，最大不超过150V。
大片段DNA则应选择较低的电压，最小不低于50V。
二、电流的设置1. 电流是根据电压和电阻来计算得到的，它与琼脂糖凝胶中的离子浓度和凝胶孔隙大小有关。
凝胶浓度越高，孔隙越小，电流就越小。
2. 电流的设置应根据实验室所使用的琼脂糖凝胶和电泳槽的尺寸来确定。
一般情况下，电流范围为10-30mA。
3. 在设置电流时，需要根据具体实验条件进行调整。
如果电流过高，可能会导致凝胶加热、样品失活等问题；而电流过低，则可能导致分离速度缓慢、分辨率下降等。
三、注意事项1. 在进行琼脂糖电泳实验前，要仔细检查电泳槽、电极和电源等设备是否正常工作，以确保实验的顺利进行。
2. 在设置电压和电流之前，需要根据待测样品的大小、琼脂糖凝胶的浓度和孔隙大小等因素进行综合考虑，并进行初步的试验和优化。
3. 在实验过程中，要定期检查电泳槽内的温度和电压情况，确保实验的稳定性和可靠性。
4. 对于不同的琼脂糖电泳实验，根据实际需要可以进行不同的电压和电流设置，以获得最佳的分离效果。
总结起来，琼脂糖电泳电压和电流的设置应根据待测分子的大小、琼脂糖凝胶的浓度和孔隙大小等因素进行综合考虑。
合理的电压和电流设置可以提高实验的分离速度和分辨率，同时还需要注意避免电泳槽发热、溶胶蒸发和样品失活等问题。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验⼀、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA ⽚段的常⽤技术。
把DNA样品加⼊到⼀块包含电解质的多孔⽀持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分⼦的双螺旋⾻架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应。
具有不同的相对分⼦质量的DNA⽚段泳动速度不⼀样，因⽽可依据DNA分⼦的⼤⼩来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分⼦质量的DNA，也可以分离相对分⼦质量相同，⽽构型不同的DNA分⼦。
在电泳过程中可以通过⽰踪染料或相对分⼦质量标准参照物和样品⼀起进⾏电泳⽽得到检测。
相对分⼦质量标准参照物相对可以提供⼀个⽤于确定DNA⽚段⼤⼩的标准。
在凝胶中加⼊少量溴化⼄锭(ethidium bromide, EB)或者ＥＢ类似物，其分⼦可插⼊DNA的碱基之间，形成⼀种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红⾊荧光，因此也可对分离的DNA进⾏检测。
⼀般琼脂糖凝胶电泳适⽤于⼤⼩在0.2kb～50kb范围内的DNA⽚段。
三种不同构型分⼦进⾏电泳时的迁移速度⼤⼩顺序为：超螺旋DNA>线性DNA>开环DNA正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的⽤来进⾏⼤⽚段核酸的电泳，⾼浓度的⽤来进⾏⼩⽚段分析。
低浓度胶易碎，⼩⼼操作和使⽤质量好的琼脂糖是解决办法。
注意⾼浓度的胶可能使分⼦⼤⼩相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常⽤的缓冲液有TAE和TBE，⽽TBE⽐TAE有着更好的缓冲能⼒。
电泳时使⽤新制的缓冲液可以明显提⾼电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使⽤后，离⼦强度降低，PH 值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产⽣条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳⼀定要使⽤DNA Marker或已知⼤⼩的正对照DNA来估计DNA⽚段⼤⼩。
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• 4.点电泳前最好检查待用胶是否合格；点电泳 时要对准胶孔，尽量点完所有的样。
• 5.点完样勿忘点marker并摆正胶位，电泳仪 正负极不要插反，电泳槽的盖子要盖紧。
三、EB染色
1.切胶要准，取胶要稳，泡胶要慎，避免 EB溅起。
2.碰到EB的手套要及时丢弃。 3.EB液要适时跟换，盘子要清洗。 4.抹布要严格区分，不可交叉使用。
☺琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、 鉴定DNA、RNA分子混合物的方法， 以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分 子在泳动时的电荷效应和分子筛效应， 达到分离混合物的目的。
☺琼脂糖凝胶电泳的操作
操作步骤
配胶
点样
电泳
成像拍照
EB染色
胶图分析
、配胶
按所要分离的DNA分子的大小，称取适量的琼 脂糖粉末，放入锥形瓶，加适量1×TAE电泳缓 冲液; 然后置微波炉内加热摇匀至完全溶化呈透明状， 适当冷却后倒入胶托; 胶完全冷凝后放入电泳槽，电泳槽里的缓冲液必 须没过胶面。
电泳槽
4、EB染色
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸 双链的配对碱基之间。在紫外线照射EBDNA复合物时，出现不同的效应。 注意：严格区分污染区和非污染区，不把污 染区的物品拿到非污染区，碰过EB的手套 要及时丢弃！Βιβλιοθήκη EB染胶区5、成像拍照
Tanon-2500数码凝胶图像分析系统把 图像摄录、处理、打印一体化。采用高 分辨率CCD，高质量、高清晰度，保证 摄录凝胶图像在低照度下的灵敏 度、不 掉失条带。
2、点样！
根据样品不同可分两种点样体系： A、样品+6Xloading buffer B、样品可直接点样（如ssp） 最后记得点marker，并摆正胶的位置
点样
3、电泳！
点完样后连接电源，设置好电源的参数， 开始电泳。当溴酚兰的带（蓝色）的移动 至一定长度即可停止电泳。
电压要求：≤20V/CM胶，在样品出孔用 低压（3V/CM，15min），然后调回标准 电压，跑出的条带较好。
Tanon-2500数码凝胶图像分析 系统
6、胶图分析
以SBT-PCR为例，主要做A、B、DR三个 位点，每个位点条带大小不同.
一、配胶
• 1.电子称的使用，要时刻注意保持电子称的 精确性，保持清洁，根据不同的浓度的胶称 琼脂糖。
• 2.加TAE的量要适当，以免配出来的胶太薄 导致胶孔太浅或浓度太低。
欢迎大家一起交流！
☺什么是电泳？
带电颗粒在电场作用下，向着 与其电性相反的电极移动，称 为电泳。 生物大分子如蛋白 质,核酸,多糖等大多都有阳离 子和阴离子基团,称为两性离 子在电场中,带电颗粒向正极 或负极迁移,迁移的方向取决 于它们带电的符号。
☺电泳有几类？
按分离原理的不同，电泳分为4类: 移动界面电泳 区带电泳 等电聚焦电泳 等速电泳
四、Tanon Tanon-2500 数码凝胶图像 分析仪的使用
1.使用前要注意清洁，以免影响胶图的清 晰度。
2.照胶时尽量减少开紫外灯的时间。 3.拍照时先关摄像头再关紫外灯，不可颠
倒，严格按照照胶的流程进行。 4.照好的胶及时丢弃。
• 3.倒胶前胶托一定要洗干净，并擦干；倒胶 时要待胶冷到一定温度摇匀尽量不要产生气 泡。若胶液的温度太高要顶在胶托防止胶托 变形。
二、点样电泳
• 1.96孔塑料板要干净，loading要点均匀，控 制在1~2ul的量，并做好对应标记。
• 2.加样时，枪头要上紧，吸样均一准确，排液 时吸头不要有残留。