马铃薯蛋白质提取及其功能性质的研究

合集下载

马铃薯蛋白及其酶水解物的功能性质

分类号：密级：学校代号： 10538 学号：硕士学位论文马铃薯蛋白及其蛋白酶水解物的功能性质培养学院：食品科学与工程学院学科专业：食品科学与工程研究方向：分子营养学论文提交日期： 2016年5月20日Functional properties of potato protein and its hydrolysatesFood Science and EngineeringinCentral South University of Forestry and Technology 498 Shaoshan South Road，Tianxin DistrictChangsha Hunan 410004，P.R. CHINAMay, 2016摘要随着我国“马铃薯主粮化”战略的实施，开发利用马铃薯蛋白这一曾作为马铃薯加工业废弃物的资源已成为研究热点。

本文对马铃薯蛋白的组成、功能性质及其蛋白酶解产物的性质等方面对马铃薯蛋白的研究进展进行了概述。

关键词：马铃薯蛋白，功能性质，酶解产物ABSTRACTAs the strategy of Potato Staple Food in China was Implemented, exploitation of potato protein, one has been served as a potato processing industry waste, will become a hot topic.In this paper, the composition and functional properties of the potato protein and its hydrolysates will be overview.Key words：Potato protein; Functional properties;hydrolysates1 绪言马铃薯（Solanum tuberosum L.），又称地蛋、土豆、洋山芋等，属茄科多年生草本植物，其块茎可供食用。

蛋白质的功能性质实验报告

蛋白质的功能性质实验报告蛋白质的功能性质实验报告引言：蛋白质是生物体内最重要的有机分子之一，它们在细胞的结构和功能中起着关键的作用。

蛋白质的功能性质对于理解生物体的生命活动和疾病的发生机制具有重要意义。

本实验旨在探究蛋白质的功能性质，并通过实验验证其功能。

实验一：酶的催化作用酶是一类特殊的蛋白质，它能够催化生物体内的化学反应。

本实验以淀粉的降解为例，验证了酶的催化作用。

首先，我们将淀粉溶液分成两份，一份加入唾液酶，另一份不加酶。

然后，在恒温水浴中分别加热两个试管，观察淀粉的降解情况。

结果显示，加入酶的试管中淀粉迅速降解，而不加酶的试管中淀粉几乎没有降解。

这表明酶能够催化淀粉的降解反应，加速化学反应的进行。

实验二：抗体的特异性识别抗体是一种特殊的蛋白质，它能够识别和结合特定的抗原。

本实验以酶联免疫吸附实验（ELISA）为例，验证了抗体的特异性识别。

首先，我们将目标抗原分别涂覆在微孔板上的不同孔中。

然后，加入抗体溶液，并通过酶的催化作用，观察抗体与抗原的结合情况。

结果显示，抗体与对应的抗原结合，而与其他抗原不结合。

这表明抗体具有特异性识别的能力，能够选择性地结合目标抗原。

实验三：结构蛋白的机械强度结构蛋白是一种具有机械强度的蛋白质，它能够维持细胞和组织的结构稳定。

本实验以角蛋白为例，验证了结构蛋白的机械强度。

首先，我们将角蛋白溶液制备成薄膜，并在拉伸机上进行拉伸实验。

结果显示，角蛋白薄膜具有较高的抗拉强度和延展性，能够承受较大的外力。

这表明结构蛋白具有机械强度，能够维持细胞和组织的结构稳定。

实验四：运输蛋白的选择性通透性运输蛋白是一种具有选择性通透性的蛋白质，它能够调节物质的进出细胞。

本实验以细胞膜上的离子通道为例，验证了运输蛋白的选择性通透性。

首先，我们将离子通道蛋白溶液制备成薄膜，并浸泡在含有不同离子的溶液中。

结果显示，离子通道蛋白对特定离子具有通透性，而对其他离子不通透。

这表明运输蛋白具有选择性通透性，能够调节物质的进出细胞。

蛋白质的性质实验报告

蛋白质的性质实验报告蛋白质的性质实验(一)蛋白质的性质实验（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应一、目的1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

二、呈色反应（一）双缩脲反应1．原理尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。

双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。

蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。

可用于蛋白质的定性或定量测定。

双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。

含有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

2．试剂3．操作取少量尿素结晶，放在干燥试管中。

用微火加热使尿素熔化。

熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。

冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。

观察出现的粉红颜色。

要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约2 mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。

观察紫玫瑰色的出现。

（二）茚三酮反应1．原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。

尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。

因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。

在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。

该反应十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。

马铃薯蛋白提取方法综述

马铃薯蛋白提取方法综述作者：江洪波徐鑫覃瑞李刚熊海容张丹丹来源：《安徽农业科学》2019年第03期摘要马铃薯是人们喜爱的块茎类蔬菜之一，马铃薯蛋白质含量也很丰富。

阐述了马铃薯蛋白的组成特点，对马铃薯蛋白的各种经典和最新的分离提取方法进行了综述，以期对进一步研究马铃薯蛋白提供理论依据。

关键词马铃薯;蛋白质;提取中图分类号TS201.2+1文献标识码A文章编号0517-6611（2019）03-0009-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.03.003马铃薯（Solanum tuberosum L.）又名土豆、洋芋、荷兰薯等，属于茄科茄属多年生块茎草本植物，在我国大量种植已经有500多年的历史。

2015年我国马铃薯播种面积和产量均居世界第一位，分别达 552.36万hm2和 9 708万t。

然而我国马铃薯主要以鲜食为主，仅约 15% 用于加工业[1-3]。

马铃薯一般作为淀粉生产的主要原料，其蛋白成为副产品。

但马铃薯蛋白由于其功能特性良好，必需氨基酸含量高，营养价值丰富，因此极具开发潜力。

随着食品工业的发展，如何合理开发利用马铃薯蛋白质资源，对于减少环境污染、适应国家马铃薯主粮化战略需求具有重要的指导意义。

笔者对马铃薯蛋白的分离提取方法进行了综述，以期为进一步研究马铃薯蛋白提供理论依据。

1马铃薯蛋白的组成新鲜马铃薯块茎蛋白质含量为1.7%～2.1%，马铃薯蛋白质按分子量大小分为高分子量蛋白质、糖蛋白、蛋白酶抑制剂3部分[4-9] 。

目前后两者研究较多，而前者研究较少。

糖蛋白约占马铃薯块茎总蛋白含量的40%，不仅必需氨基酸含量较高，而且兼具抗氧化活性和酯酰基水解活性，在防御害虫和真菌病原体方面起重要作用，也可作为具有乳酯酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的佐证。

此外马铃薯糖蛋白还具有凝胶性、起泡性、乳化性等其他优良功能特性，同时，糖蛋白具有加工功能特性，比较适用于食品加工业，成为近几十年来植物蛋白研究的热点之一。

马铃薯蛋白组成、性质及其改性应用研究进展

孙莹，周斌，王龙，等. 马铃薯蛋白组成、性质及其改性应用研究进展[J]. 食品工业科技，2024，45（9）：36−44. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2023060277SUN Ying, ZHOU Bin, WANG Long, et al. Research Progress on Composition, Croperties and Modification Application of Potato Protein[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(9): 36−44. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023060277· 未来食品 ·马铃薯蛋白组成、性质及其改性应用研究进展孙　莹1，周　斌1，王　龙1，刘　申1，朱秀清2,*（1.哈尔滨商业大学旅游烹饪学院，黑龙江哈尔滨 150028；2.哈尔滨商业大学食品工程学院，黑龙江哈尔滨 150028）摘　要：我国马铃薯加工业的快速发展可以归因于马铃薯主食工业化战略的实施。

马铃薯蛋白以其高营养价值和功能而闻名，具有特殊的溶解度，并含有大量在其他植物蛋白中缺乏的酪氨酸。

因此，马铃薯蛋白在各种市场应用上具有巨大的潜力。

本文对马铃薯蛋白的组成、功能性质、改性方法和改性应用进行了全面的综述。

马铃薯蛋白具有良好的溶解性、发泡化和乳化特性、凝胶性和抗氧化活性。

目前，酶法和微生物发酵是马铃薯蛋白改性研究的重点。

此外，本文还概述了马铃薯蛋白中普遍存在的主要问题，并根据目前的研究进展提出了未来的发展前景。

未来，应深入研究马铃薯蛋白分子结构与其功能活性的联系；马铃薯蛋白与其他植物蛋白的综合利用；酶法和微生物发酵可作为未来改性方向，利用微生物资源降低改性成本。

蛋白质性质实验报告

蛋白质性质实验报告《蛋白质性质实验报告》摘要：本实验旨在通过对蛋白质的性质进行实验研究，探讨其溶解性、凝固性和变性等特性。

通过实验结果的分析，我们可以更加深入地了解蛋白质的结构和功能，为进一步研究蛋白质在生物学和食品工业中的应用提供参考。

引言：蛋白质是生命体内最基本的组成部分之一，它不仅参与了生命体内的代谢过程，还具有结构支持、运输、免疫、调节等多种功能。

蛋白质的性质对其功能起着至关重要的作用，因此对蛋白质性质的研究具有重要的意义。

实验方法：1. 蛋白质的溶解性实验：取一定量的蛋白质样品，分别用水、盐水、酒精等不同溶剂进行溶解实验，观察其溶解情况。

2. 蛋白质的凝固性实验：将蛋白质样品加热至一定温度，观察其凝固情况。

3. 蛋白质的变性实验：在不同的酸碱条件下，观察蛋白质的变性情况。

实验结果：1. 蛋白质在水中能够充分溶解，而在盐水和酒精中溶解性较差。

2. 当蛋白质样品被加热至一定温度时，会发生凝固现象。

3. 在酸性或碱性条件下，蛋白质会发生变性，失去原有的结构和功能。

讨论：通过本实验的研究，我们可以得出如下结论：1. 蛋白质在不同溶剂中的溶解性与其化学结构有关，不同的溶剂对蛋白质的溶解能力不同。

2. 蛋白质的凝固性是由于其分子结构在高温条件下发生变化，从而失去了溶解性。

3. 蛋白质的变性是由于其分子结构受到酸碱条件的影响，导致其原有的结构和功能发生改变。

结论：本实验通过对蛋白质性质的研究，揭示了蛋白质在不同条件下的性质变化规律，为我们进一步理解蛋白质的结构和功能提供了重要的实验数据和参考依据。

同时，对蛋白质性质的深入研究也为其在生物学、医学和食品工业等领域的应用提供了理论基础。

食品中蛋白质的功能特性综述

1.4 蛋白质的感官性质
涉及蛋白质在食品体系中的感官性质有颜色、气味、口味、适口性、咀嚼度、爽滑感和混浊度等。 1.4.1 风味物质结合食品中存在着醛、酮、酸、酚和氧化脂肪的分解产物，可以产生相应的异味，这些物质与蛋白质或其他物质产生结合，在加工过程中或食用时释放出来，被食用者所察觉，从而影响食品的感官质量。蛋白质与风味物质的结合包括物理吸附和化学吸附。物理吸附抓哟是通过范德华力和毛细血管作用吸附；化学吸附主要是静电吸附、氢键的结合和共价键的结合等。蛋白质结合风味物的性质也有非常有利的一面，
2010年第5期总第135期
63
大学论坛
液相或半固体的分散体系。许多加工食品是泡沫型产品，如搅打奶油、蛋糕、蛋白甜饼、面包、蛋奶酥、冰激淋、啤酒等。蛋白质能作为起泡剂主要取决于蛋白质的表面活性和成膜性，例如鸡蛋清中的水溶性蛋白质在鸡蛋液搅打时可被吸附到气泡表面来降低表面张力，又因为搅打过程中的变性，逐渐凝固在气液界面间形成有一定刚性和弹性的薄膜，从而使泡沫稳定。形成泡沫通常采用的方法有：一是将气体通过一个多孔分配器鼓入低浓度的蛋白质溶液中产生泡沫；二是在有大量气体存在的条件下，通过打擦或振荡蛋白质溶液而产生泡沫；三是将一个预先被加压的气体溶于要生成泡沫的蛋白质溶液中，突然减压，系统中的气体则会膨胀而形成泡沫。蛋白质起泡性的评价指标主要有：泡沫的密度、泡沫强度、气泡的平均直径和直径分布、蛋白质气泡能力和泡沫的稳定性，最常使用的蛋白质起泡力合泡沫的稳定性。形成面包的基础。面筋蛋白主要是由麦谷蛋白和麦醇溶蛋白组成，在面粉中占总蛋白量的80%，面团的特性与它们的性质直接有关。首先，这些蛋白质的可以离解氨基酸含量低，在中性水中不溶解；其次，面筋蛋白含有大量的谷氨酸酰胺和羟基氨基酸，所以易形成分子间氢键，使面筋具有强吸水能力和黏聚性质；最后，面筋蛋白含有巯基，能形成双硫键，增强疏水作用，使面筋蛋白转化形成立体结构、形成网状结构。焙烤不会再引起面筋蛋白的变形，因为面筋蛋白在面粉中已经部分伸展，在揉搓面团时进一步伸展，在正常温度下焙烤面包时面筋蛋白不会再伸展。当焙烤温度高于80℃时，面筋蛋白释放出来的水分能被部分糊化的淀粉粒吸收，因此即使在焙烤时，面筋蛋白质也能使面包柔软和保持水分，但是焙烤能使面粉中可溶性蛋白质变形和凝集，这种部分胶凝作用有利于面包心的形成。 1.3.3 蛋白质的胶凝作用变性的蛋白质分子聚集并形成有序的蛋白质网络结构过程称为胶凝作用。胶凝作用是蛋白质非常重要的功能性质，在食品制备中起着重要的作用，主要包括各种乳品、果冻、凝结蛋白、明胶凝胶、各种加热的碎肉或鱼制品、大豆蛋白质凝胶、膨化或膨丝的组织化植物蛋白和面包面团的制作、豆腐的制作等。食品蛋白凝胶大致可以分为：加热后再冷却形成的凝胶；在加热下形成的凝胶；与金属盐形成的凝胶；不加热而经部分水解或pH调整形成的凝胶等。食品蛋白质胶凝作用不仅可以形成固态弹性凝胶，而且还能增稠，提高吸水性、颗粒粘结、乳浊液或者泡沫的稳定性。迄今为止，对蛋白质凝胶的形成机制和相互作用还不十分清楚，但一般认为，蛋白质网络的形成是由于蛋白质—蛋白质和蛋白质—溶剂的相互作用以及邻近肽链之间的吸引力和排斥力达到平衡的结果。

马铃薯生全粉物化性质与应用特性研究

马铃薯生全粉物化性质与应用特性研究作者：***来源：《食品安全导刊·下》2023年第09期摘要：本文针对马铃薯生全粉的理化成分、淀粉形态、糊化性质、热力学性质、吸水性和溶解度等方面的特性进行研究，并与马铃薯雪花全粉进行比较。

结果表明，马铃薯的生全粉营养物质含量略低于雪花全粉，其淀粉颗粒受加工工艺破坏影响较小，从马铃薯全粉的糊化性质与热力学性质方面的数据分析得出，生全粉糊化温度、持油性、析水率以及吸水性均低于雪花粉，并保持完整的淀粉结晶结构。

关键词：马铃薯生全粉；物化性质；应用特征Study on the Physicochemical Properties and Application Characteristics of Potato Raw Whole PowderDENG Feng（Shenzhen Yuxin School， Shenzhen 518107， China）Abstract： This paper mainly studied the physicochemical composition， starch morphology，gelatinization properties， thermodynamic properties， water absorption and solubility of raw potato whole powder， and compared it with potato snowflake whole powder. The results showed that the nutrient content of raw potato whole powder was slightly lower than that of snowflake whole powder， and its starch particles were less affected by processing technology damage. According to the data analysis of gelatinization and thermodynamic properties of potato whole powder， the pasting temperature， oil retention， water extraction rate and water absorption of potato whole powder are lower than snowflake powder， and the complete starch crystal structure is maintained.Keywords： potato raw whole powder; physicochemical property; application characteristics马铃薯（Solanum tuberosum L.），又名土豆、洋芋，原产地位于南美洲的安第斯山脉，因此具有较强的抗逆性和增产潜力，迅速被全世界各个国家种植推广，当前已经成为世界范围内继小麦、玉米和水稻之后的第四大粮食作物。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

马铃薯蛋白质提取及其功能性质的研究河北科技师范学院食品科技学院食品科学与工程井卫0611090109综述一、马铃薯蛋白研究概况1）马铃薯概述马铃薯(Solanum tuberosum)是茄科茄属一年生草本植物。

又名土豆、山药、洋芋、洋番薯等，其营养价值十分丰富，具有多种食疗保健作用。

马铃薯于17世纪传入中国，它在各地有着不同的名称，诸如洋芋、洋山芋、洋番薯、阳芋、土豆、山药蛋等，国人对马铃薯的利用，主要是作为一种主食并兼作副食品。

中国是世界马铃薯生产大国，年产量约6000万吨，居世界前列。

现在主要产区在东北的中北部、华北西部、内蒙和西北及西南各省山区。

四川、黑龙江、云南、山西、甘肃、贵州、湖北、内蒙等地产量较高。

2）马铃薯的营养价值马铃薯营养十分丰富，几乎是全营养食品。

营养学家指出，每天吃马铃薯可减少脂肪的摄入量，能使多余的脂肪代谢掉，是世界性减肥食品。

马铃薯蛋白质氨基酸含量也比较丰富，如用35%的鸡蛋清与65%的马铃薯蛋白混合，可获得最佳蛋白质。

欧美专家指出，每餐只吃全脂牛奶和土豆，就可以得到身体所需的全部营养元素。

20世纪80年代以来，有中医文献记述:食用煮熟的马铃薯，能健脾、和胃、润肺，兼有解毒、消炎的作用。

在古代也有相关记载:如《本草拾遗》:“功能稀痘，小儿熟食，大解痘毒。

”，《湖南药物志》:“补气，健脾，消炎。

”，《食物中药与便方》:“和胃，调中，健脾，益气。

”。

马铃薯还可以预防治疗胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、习惯性便秘和皮肤湿疹等疾病，并有解毒、消炎之功效。

专家指出:每人每日吃一个马铃薯，能大大减少中风机会。

印度医学院教授戈克哈尔博士认为，马铃薯含钾，每周吃5, 6个可使中风机会下降到40%。

马铃薯蛋白粉是马铃薯制作淀粉过程中的副产物。

不仅含有丰富的蛋白质，而且其氨基酸组成也是相当均衡的，可与脱脂奶粉和鱼粉媲美。

据科学工作者测定，在马铃薯内含有18种人体所需的氨基酸和多种微量元素。

马铃薯还能供给人体大量粘体蛋白质，粘体蛋白质是一种多糖蛋白的混合物，能预防心血管系统的脂肪沉积，保持动脉血管的弹性，防止动脉粥样硬化过早发生，并可预防肝脏、肾脏中结缔组织的萎缩，保持呼吸道、消化道的润滑。

德国专家指出，马铃薯是低热量、高蛋白、多种维生素和矿物元素食品。

由于马铃薯的营养平衡，所以宜做减肥食品，不必担心食用后肥胖。

3）立题背景及意义马铃薯蛋白是纯净的蛋白浓缩物，具有多种均衡的氨基酸组分，有极高的营养价值。

其蛋白质氨基酸含量的多样性和较高的生物价已经得到社会的认可，随着社会的高速发展和人们生活水平的提高，人们对摄入的蛋白质的需求量和品种要求不断提高，特别是对有保健功效的植物性蛋白的需求更是尤为显著。

马铃薯蛋白粉采用的原料是薯类加工厂排放的淀粉废液，将淀粉废水中的蛋白成份进行高度浓缩，并去除蛋白废水中的农药、重金属及糖普生物碱等有害成份，使蛋白成份达到食用等级，高度浓缩的蛋白经喷雾干燥设备，喷成蛋白粉进而包装成成品。

故原材料取材方便，成本低廉。

并解决了马铃薯加工厂淀粉废液直接排放的污染问题，保护水资源环境，同时回收了保健蛋白，促进企业的经济效益。

因此，马铃薯蛋白是一种极具潜力的保健食品。

4）研究意义目前对于马铃薯蛋白的研究报道较少，且研究结果不尽相同，缺乏科学数据，也很少有人进行深入而全面的研究。

主要集中于其淀粉的开发利用及产前品质的改良和生理疾病的研究。

马铃薯蛋白也主要用于动物饲料，很少作为优质蛋白添加到人类食品中。

所以，对它的开发利用对于增加产品附加值、提高环保性能、发展可循环经济具有十分重要的作用。

本课题的研究意义在于采用科学合理的方法系统的分析马铃薯蛋白的营养品质，为马铃薯蛋白的开发利用提供科学合理的理论依据。

二、研究内容：马铃薯分离蛋白的提取及其功能性质的研究。

三、蛋白质提取技术路线为：四、该项目的技术指标：1）定性指标：风味，色泽2）定量指标：稳定性，等电点，溶出率，溶解度，持水力，乳化性，起泡性及泡沫稳定性，粘度。

五、实验仪器：调温加热套，微波炉，分析天平，分光光度计，冰箱，离心机，电热鼓风干燥箱，超声波清洗器，全自动蛋白质测定仪，消化炉。

六、主要试剂：无水乙醇，盐酸，氢氧化钠，冰醋酸，丙酮，甲醇，无水乙醚，次甲基蓝，酒石酸钾钠，亚铁氰化钾，牛血清清蛋白，植物油，等。

七、实验材料：马铃薯八、实验方案：分别配制0.4%的分离蛋白质悬浊液60ml共12份，加入10ml植物油，按照下表所示调节NaCl浓度，PH值和温度，并随机设计重复进行如下的四次操作：在高速组织剪切机中均质( 10000 r/min)1 min，制成乳状液。

分别检测蛋白质的各项指标。

L16(45)正交表九、结论分析：根据实验结果所测的的数据进行分析：1）定性指标：当试验指标为风味时，对于多个样品的比较，则利用多个样本比较秩和检验进行评定。

则共有K=3个样本，每个样本含量为n=4，共有N=12。

（1）建立假设。

（2）编秩次，将各组数据从小到大同统一编秩次。

（3）求秩和，分别计算各组秩和Tj,并用关系式∑Tj=N(N+1)/2，检验Tj的计算是否正确。

（4）计算统计量。

（5）进行显著性检验。

由于每个样本容量K=4都小于5，所以不能用卡平方检验，采用查表方法来判断是否有极显著差异，从而判断A、B、C、D整体水平那个更高。

（6）进行重复试验（多于4次），以得出更为准确的实验结果。

当试验指标为色泽时，对于多个样品的比较，则利用多个样本比较秩和检验进行评定。