利用石蜡切片对小鼠肝脏组织器官细微结构的观察
实验动物肝组织石蜡切片制作中易发问题探讨
实验动物肝组织石蜡切片制作中易发问题探讨
柏美玲 宋昱 林群凡 邓爽 胡少青 伍义行
【摘要】 实验动物肝组织石蜡切片在肝病研究、抗肝炎药物药效评价、新药毒理学评价和组织病 理教学中具有十分重要的作用，但石蜡切片制作流程影响因素复杂，且肝组织具有质地较脆导致蜡块 切片容易碎裂等特点，难以制作高质量切片。故本文结合肝组织的特点，重点对常见实验动物肝组织 石蜡切片制作中常见的问题进行了分析总结，并提出了相应的改进措施。
透明剂可替换出组织内的乙醇，使石蜡顺利地渗入组织 中，增强组织的折光系数从而出现透明状态。常用的透明剂 有二甲苯、苯、氯 仿、正 丁 醇、香 柏 油 等。动 物 肝 组 织 常 选 用 二甲苯作透明剂，因二甲苯对神经的麻醉作用及粘膜的刺激 性，使用时应尽量在通风橱内进行，也可用硬脂酸石蜡混合 液代替二甲苯透明［8］。由于二甲苯对组织的收缩性强，作用 迅速，故组织在二甲苯中时间不宜过长，否则组织容易变脆 变硬。透明剂的浸渍时间要根据组织材料块大小及性质而 定。如果透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织; 透明时间过长，则 组 织 硬 化 变 脆，不 易 切 出 完 整 切 片。动 物 肝组织若选用二甲苯为透明剂，可分为三阶段( 二甲苯Ⅰ20 min，二甲苯Ⅱ 10 min，二甲苯Ⅲ 10 min) 进行。二甲苯应定
作高质量的切片需要长期的摸索和改进。由于肝组织固有 的特点，肝组织蜡块在切片时较脆易碎，染色后镜下结构常 呈现断裂现象，影 响 了 肝 组 织 原 始 结 构 的 观 察。因 此，不 断 地分析总结肝组织石蜡切片制作的特点，探索肝组织制片的 新技术和新方法，提高肝组织切片制作水平，对教学科研和 临床诊断工作具有重要意义。
病理标本观察实验报告总结
病理标本观察实验报告总结一、实验目的本次实验的目的是通过对病理标本的观察，了解病理学基本概念和常见疾病的病理变化，以及掌握常用病理标本处理技术。
二、实验过程1. 病理标本制备：将小鼠肝脏、心脏、肾脏等器官取出，用生理盐水清洗后固定在10%中性缓冲福尔马林溶液中。
2. 石蜡包埋：将固定好的组织标本经过甲醇梯度脱水后，用乙醇和苯并加入适量的石蜡进行包埋处理。
3. 切片染色：将包埋好的标本切成5μm厚度的切片，然后进行染色处理。
其中常用的染色方法有HE染色、Masson染色等。
三、实验结果1. 小鼠肝脏切片观察：肝细胞排列紧密，中央静脉周围有明显血窦。
HE染色显示肝细胞核大而圆，胞浆呈深粉红色。
Masson染色显示纤维化程度较轻。
2. 小鼠心脏切片观察：心肌细胞排列整齐，有明显的纵横交错的纤维。
HE染色显示心肌细胞核圆形，胞浆呈深粉红色。
Masson染色显示心肌纤维化程度较轻。
3. 小鼠肾脏切片观察：肾小球内有明显毛细血管丛，肾小管排列整齐。
HE染色显示肾小球内有明显的Bowman囊和肾小管，核呈圆形或椭圆形。
Masson染色显示肾小球内无明显纤维化。
四、实验分析通过对病理标本的观察，我们可以发现不同器官在组织结构上存在差异。
例如，肝脏中央静脉周围有血窦，而心脏和肾脏则不存在这种结构。
同时，在不同染色方法下，我们也可以观察到不同的病理变化。
例如，在Masson染色下，我们可以看到组织中是否存在明显的纤维化。
五、实验总结通过本次实验，我们了解了病理学基本概念和常见疾病的病理变化，掌握了常用病理标本处理技术。
同时，我们也发现了不同器官在组织结构上的差异以及不同染色方法下观察到的病理变化。
这对于我们进一步深入学习病理学知识具有重要意义。
慢性有机磷中毒小鼠的脏器病理学变化
组 完整 ； 组基 本无 变化 ， 符合 慢性 有 机磷 中毒 ３号 很
对 心脏 的影 响 。张海燕 发现 有机磷 中毒可使 血清 心 肌 酶呈 不 同程度升 高 ，心肌 酶谱各 值 比较具有 显著 性 差异 （ ＜ ．１ ， 中毒 越 重 ， 肌酶 谱 活性升 高越 Ｐ ００ ）且 心 显 著 ［ 从 而说 明 了心脏 组 织 的损伤 ， ４ １ ， 在有 机磷 中毒 后 心肌纤 维 变粗凝 固断裂 ， 致细 胞结 构破坏 ， 血 导 使
叶结 构破 坏严 重 ， 细胞 索崩 解 ， 的肝 细胞 发生 了 肝 有 脂 肪 变性 ； 组肝 细胞 水 肿伴 脂肪 变性 ， ２号 可见 周 围 肝 细胞索 紊乱 ， 出现 灶状 坏死 ， 窦 内可见 多个坏 死 肝 细胞 碎片 ， 细胞 胞浆 呈深 红色 ， 细胞 核浓 缩 、 崩解 ， 少 量 肝小 叶结 构 破 坏 ； 组 肝 细胞 损 伤 程 度 较 其 他 ３号 模 型 组 明显减 轻 ， 细胞 轻度 肿胀 ， 肝 肝窦 内皮 细胞 增
生， 可见少 量 散在肝 细胞 点灶 坏死 。
２．． 脾 脏 变 化 １３
清 心肌 酶水平 增 高 ；血 清心 肌酶 与有机 磷 Nhomakorabea中毒 程度
呈 正相关 。我们所 做 的病理 切 片为心 肌酶活 力升 高 提 供 了研 究 依据 。
３１２ 慢性 有机磷 中毒 对肝 脏 的影响 ．．
肝脏 是 有机磷 代谢 的主 要部位 ，有 机磷 中毒 常
组 肾小 球毛 细血 管 内上皮 细胞数 量减 少 ，肾小球 囊
腔扩张 ， 肾小 管 扩 张上 皮 细 胞 脱 落 、 缩 消失 ； 萎 ２号 组 肾小球 比 １ 号组 变化 轻微 ， 肾小 管上 皮细胞 脱落 ； ３号 组 肾小球较 完整 ， 肾小管损 伤不 严重 。
肝肾肺穿刺组织及实验用小白鼠组织石蜡制片的处理及改进方法
越引起人们的高度重视，因此，胺碘酮在临床上得到了广泛的应用。
在该药的临床的应用过程中，临床医生已非常熟悉其主要毒副作用：肺毒性、心脏毒性、甲状腺毒性以及肝功能损害，但临床医生对胺碘酮的其他少见的心外不良反应如过敏性休克、感光性皮炎、神经毒性等，却知之甚少。
本文综述了胺碘酮罕见的10例心外不良反应，以提醒广大临床医生在应用该药过程中，严密观察，注意其少见的心外不良反应。
一旦发现，应立即停药，积极处理，避免导致严重的药物不良事件的发生。
参考文献[4]杜万红．胺碘酮致紫癜l例[J]．中华老年心脑血管病杂志，2003，5(4)：223．[5]卫丽，李学奇，刘宗宏，等．胺碘酮引起肌病1例[J]．中华心血管病杂志，2007，35(1)：93．[6]刘雪青，张光芳，邢旭东．胺碘酮致视神经炎l例分析[J]．中国误诊学杂志，2008，8(30)：7541-7542．[7][8][1]张伟强，姜丽萍，张秋兰．胺碘酮致固定药疹1例[J]．中国误诊学『9]杂志，2009，9(1)：251．[2]王萍．胺碘酮致皮肤反应1例临床护理[J]．齐鲁护理杂志，2009，15(5)：17．[3]高历男，赵迎，王欣越，等．胺碘酮静脉滴注引起休克2例[J]．药物不良反应杂志，2009，11(1)：67-68．范仲凯，杨波．胺碘酮致嗅觉味觉功能障碍1例[J]．中国综合临床，2003，19(6)：487．韩荣旗．盐酸胺碘酮致感光性皮炎1例[J]．中国药物与临床，2003，3(6)：460．D a nie l G，K r a us er M da，A l an Z，e t a1．S e ve re a t ax i a c a use d b y am i—odar one[J]．T he A m er i can J o ur n a l o f C ar diol ogy，2005，96(10)：1463—1464．(收稿日期：2010—06—05)(本文编辑：马文娟)肝肾肺穿刺组织及实验用小白鼠组织石蜡制片的处理及改进方法王晓鸿肖佐环张丽娟郑燕璇曹婉维随着医学科技的进步及科研方法的需要，在C T、B超引导下行肺、肝、肾穿刺、提取活体组织进行病理检查，以明确疾病性质以及做科研时动物试验的组织标本进行病理分析，这些都需要应用病理技术来处理‘以上各种组织进行石蜡制片，石蜡切片的质量，直接影响到对病人诊断的判断及科研工作的成败。
肝脂肪变实验报告
肝脂肪变实验报告摘要肝脂肪变是一种常见的肝脏疾病，严重影响人们的健康。
本实验旨在模拟肝脂肪变的发展过程，并探讨其病理机制。
通过对小鼠进行高脂饮食处理，观察其肝脏组织化学成分和结构的变化，以及相关代谢指标的改变。
实验结果表明高脂饮食可以引发肝脂肪变，并导致脂肪在肝脏中沉积、细胞结构破坏、炎症反应的发生等。
引言肝脂肪变，又称脂肪肝，是指肝脏内脂肪的堆积超过正常值，导致肝内脂肪含量过高的一种疾病。
肝脂肪变的发生与多种因素有关，其中高脂饮食是主要的诱发因素之一。
高脂饮食可以使人体摄入大量的脂肪，导致肝脏无法及时代谢和清除脂肪，从而引发肝脂肪变。
肝脂肪变的发展程度与肝脏组织的结构和功能受损程度密切相关，因此研究肝脂肪变的病理变化对了解其发生机制具有重要意义。
材料与方法材料•实验动物：8只雄性C57BL/6小鼠•试剂：高脂饮食、生理盐水、苏木精、酒精、乙醚等方法1.实验组与对照组的分组：将8只小鼠随机分为实验组和对照组，每组4只。
2.高脂饮食处理：实验组小鼠饲喂高脂饮食，对照组小鼠饲喂常规饮食，持续4周。
3.动物处理：实验结束后，对所有小鼠进行麻醉，采集血液样品。
4.组织制备：将小鼠取出，迅速切除肝脏组织，其中一部分固定于10%的酒精中，一部分进行石蜡包埋处理，制备石蜡切片。
5.组织染色：将石蜡切片进行苏木精-伊红染色处理。
6.影像分析：使用光学显微镜观察和拍摄肝脏切片的结构和染色情况。
7.生化指标检测：使用ELISA方法检测血清中的甘油三酯（TG）含量。
8.统计分析：使用SPSS软件进行统计学分析。
结果肝脏组织结构观察对照组小鼠肝脏组织呈现正常结构，肝细胞排列整齐，肝小叶结构清晰。
而实验组小鼠肝脏组织中可见大量脂滴的积聚，肝细胞排列紊乱，肝小叶结构模糊。
这表明高脂饮食可以引发肝脂肪变，导致肝脏组织结构的破坏。
组织染色结果对照组小鼠肝脏组织染色结果显示，细胞核染色呈蓝色，胞质染色呈红色。
而实验组小鼠肝脏组织中的肝细胞胞质中可见大量红色染色的脂滴。
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良作者：陈思怀李德龙高继业来源：《安徽农业科学》2021年第11期摘要為了克服小鼠组织器官传统石蜡切片制作方法存在组织易碎、结构不完整的缺点，对传统石蜡切片制作进行了改良。
将浸蜡前的透明步骤改为异硬脂醇与石蜡混合液处理，替代苯类透明剂制作空肠、脾脏2种器官的石蜡切片，并以切片机切片时蜡带质量和HE染色后镜下质量为切片制作效果的评定指标。
结果表明，2种器官在切片机上均能切出完整、较长的蜡带，组织块无硬化、不碎裂，展片平整;HE染色过程中不掉片，染色后光镜下细胞质与细胞核染色对比清晰，器官组织结构完整。
就脾脏和空肠而言，应用异硬脂醇与石蜡混合液替代苯类透明剂能制作出优良的石蜡切片。
关键词石蜡切片;异硬脂醇;透明剂;小鼠中图分类号 R-361.2 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）11-0094-02doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.025开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Improvement of Preparation Method of Paraffin Sections of Some Tissues and Organs in MiceCHEN Si-huai，LI De-long，GAO Ji-ye（College of Veterinary Medicine，Southwest University， Chongqing 402460）Abstract In order to overcome the defects of fragile tissue and incomplete structure in the traditional paraffin section preparation method of mice tissues and organs， the traditional preparation method of paraffin section was improved.Paraffin sections about jejunum and spleen were made with the mixed solution of isostearin and paraffin instead of benzene transparent agents.The quality of ribbon and microscopic observation after HE staining were selected as judgment indices .The results showed that two kinds of representative organs could be cut into long and complete wax bandes on the microtome， and flatten out with no hardening or non-fragmentation.After HE staining， the cytoplasm and nucleus were stained clearly， and the structures of organs and tissues were intact.As for jejunum and spleen，the mixture of isostearic alcohol and paraffin could be used to treat the tissues instead of benzene transparent agents to make good paraffin sections.Key words Paraffin section;Isostearic alcohol;Transparent agent;Mice小鼠作为实验动物，其组织器官在大小、质地等方面不同于成年畜禽，如小肠壁薄、肝细胞脂类丰富、脾脏小等。
石蜡切片HE染色观察
（八）石蜡切片HE染色观察1、实验目的观察热胁迫下中草药添加剂对大鼠的胃、肝、小肠主要的消化腺的变化2、实验材料与设备2.1实验材料热胁迫下的大鼠，然后取其胃、肝、小肠。
2.2实验设备切片机恒温箱温台水浴锅熔蜡炉显微镜2.3其他材料蜡杯切片刀酒精灯蜡铲展片台解剖刀解剖针解剖剪解剖盘培养皿吸管镊子单面刀片台木马克笔洒精灯包埋纸盒烧杯盖玻片载玻片玻片盘树胶树胶瓶温度计瓷杯2、试剂卡诺氏固定液FAA固定液各种浓度的酒精二甲苯2瓶石蜡蜂蜡埃利希苏木精染液1%伊红酒精溶液1%盐酸酒精溶液甘油蛋白粘片剂郝普特氏粘片剂中性树胶1%番红1%固绿1%过碘酸Schiff试剂0.5%偏重亚硫酸钠溶液醋酸酐-吡啶混合液0.5%~1%淀粉糖化酶溶液3、实验步骤苏木精-伊红对染法一、目的要求1、熟悉石蜡切片的制作过程。
2、掌握HE染色的基本原理和染色方法。
二、实验原理石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
三、实验用品（一）器材切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。
（二）试剂卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
试剂配法：1、卡诺氏固定液：100%酒精3份冰醋酸1份或：100%酒精6份氯仿3份冰醋酸1份2、埃利希苏木精染液的配法：苏木精1g 纯酒精50ml 冰醋酸5 ml 甘油50 ml 钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量）蒸馏水50 ml配法：ⅰ、将苏木精溶于约15 ml的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。
石蜡切片的实验报告
一、实验目的1. 掌握石蜡切片的制作过程，包括组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。
2. 了解石蜡切片技术在生物学研究中的应用。
3. 学会使用显微镜观察石蜡切片，识别不同组织结构。
二、实验原理石蜡切片技术是一种重要的生物学制片方法，用于观察组织、细胞等微观结构。
其基本原理是将组织固定后，通过一系列的脱水、透明、浸蜡等步骤，使组织在石蜡中充分浸渍，然后用切片机切成薄片，最后进行染色和观察。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：肝脏、肾脏、心肌、骨骼肌等3. 试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、郝普特氏粘片剂、中性树胶、1%番红、1%固绿、1%过碘酸、Schiff 试剂、0.5%偏重亚硫酸钠溶液、醋酸酐-吡啶混合液、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液等4. 器材：切片刀、切片机、恒温箱、温台、熔蜡炉、蜡杯、酒精灯、蜡铲、展片台、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖盘、培养皿、吸管、镊子、单面刀片、台木、毛笔、洒精灯、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、树胶瓶、显微镜、温度计、脸盆、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取新鲜组织，固定于4%多聚甲醛24小时以上。
2. 脱水：将固定后的组织依次放入75%、85%、90%、95%酒精中浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将组织放入二甲苯I、二甲苯II中浸泡5-10分钟。
4. 浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中浸泡1小时。
5. 包埋：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，待石蜡凝固后取出并修整蜡块。
6. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。
7. 展片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
8. 染色：将烤干的切片进行染色，如苏木精-伊红染色。
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摘要：本文采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法对经过环磷酰胺处理过的小鼠肝脏的显微结构进行了研究，分析环磷酰胺对小鼠肝脏的显微结构产生的影响。
结果表明，一定剂量的环磷酰胺对肝脏具有损伤作用。
关键词：小鼠肝脏石蜡切片
环磷酰胺( Cyclophosphamide, Cp) 是人工合成的氮芥类烷化剂。
可以抑制细胞增殖，非特异性杀伤抗原敏感性小淋巴细胞，限制其转化为免疫母细胞，可以作为细胞周期非特异性广谱抗肿瘤药，被广泛用于治疗急慢性淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等；但同时可以引起剂量依赖性肝损伤的副作用——原因可能是环磷酰胺主要代谢物丙烯对肝脏有毒副作用，能引起肝细胞坏死，肝小叶中心充血，同时伴有氨基转移酶含量升高的现象。
1 材料与仪器
1.1 实验材料
小白鼠
1.2 实验仪器：
镊子、毛笔、蜡杯、溶蜡箱、酒精灯、切片机、载玻片、盖玻片、染色缸、光学显微镜。
1.3 试剂：
中性福尔马林固定液、各浓度酒精、二甲苯、石蜡、伊红染液、苏木精染液、加拿大树胶
2 实验方法
2.1 取材
用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，即可使颈椎脱臼，小白鼠瞬间死亡。
取肝组织。
2.2 固定
将小鼠肝脏块投入中性福尔马林固定液中固定。
2.3 脱水
将组织经各浓度酒精各1 h，95%、100% 的酒精各两次，每次30 min。
2.4 透明
将组织块置于酒精二甲苯混合液中15 min，再将组织块置于二甲苯中透明两次，每次10 min。
最后将组织块置于二甲苯石蜡混合液中20 min。
2.5 透蜡
将组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，共三次，前两次45 min，第三次 30 min。
2.6 包埋
向纸盒中倒入少许石蜡，将组织块用镊子夹取到纸盒中，放入盛有冷水的盆中使其凝固。
2.7 切片
右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，当切成的蜡带到一定长度时，将蜡带放在纸上。
2.8 贴片、展片
选取蜡带放置在载玻片上。
将载玻片放置在机器上进行展片，待蜡带完全展开时将载玻片拿下，放入盒内。
2.9 脱蜡复水
将石蜡切片经二甲苯Ⅰ脱蜡 20 min，二甲苯Ⅱ脱蜡 10 min，然后放入各级酒精溶液中各2 min，蒸馏水中2 min。
2.10染色
将石蜡切片在苏木精染液中浸40min，然后蒸馏水涮洗几次至发蓝（约2min），镜检。
2.11 脱水Ⅰ、复染、脱水Ⅱ
将镜检合格的石蜡切片依次在各级酒精中浸2min，再在伊红水溶液浸二十至三十秒，再依次在95%、纯酒精Ⅰ、纯酒精Ⅱ中各浸 3 min。
2.12 透明
将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各 3 min。
2.13封藏：中性树胶封存
将载玻片取出，在切片中央滴一滴树胶，用镊子盖上盖玻片。
3 小鼠肝脏石蜡切片观察
见下图：
石蜡切片（4倍）
石蜡切片（10倍）
石蜡切片（40倍）
4 石蜡切片结果分析
在观察到的小鼠肝组织中，细胞核被染为蓝色，细胞质被染为红色，上述图片可以看出本实验较为成功，细胞核细胞质色差明显
5 结论
环磷酰胺进入体内后在肝脏中经微粒体功能氧化酶转化成醛磷酰胺，进而分解成酰胺氮芥及丙烯醛，对肿瘤细胞产生抑制作用，是临床上常用的抗肿瘤药物；但在环磷酰胺转化过程中，由于肝脏的氧化应激作用会导致肝脏损伤。
关于环磷酰胺毒副作用的研究对临床抗肿
瘤治疗提供了更多的参考资料，对医学的发展有着重要的意义。