小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型
甲基莲心碱对肝缺血再灌注损伤模型小鼠氧化应激和炎症反应的影响
甲基莲心碱对肝缺血再灌注损伤模型小鼠氧化应激和炎症反应的影响目的：考察甲基蓮心碱对小鼠肝缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用及机制。
方法：将40只小鼠随机分为假手术组（生理盐水）、模型组（生理盐水）和甲基莲心碱低、中、高剂量组（10、30、60 mg/kg），每组8只。
每天灌胃给药1次，连续给药7 d。
给药结束后，除假手术组外，其余各组小鼠均采用夹闭肝蒂60 min 后再灌注6 h复制肝I/R损伤模型。
造模结束后，检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平，苏木精-伊红染色后观察肝组织病理学变化并进行炎症评分，检测肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA及核转录因子κB p65（NF-κB p65）蛋白表达情况。
结果：与假手术组比较，模型组小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、IL-6以及肝组织中MDA、SOD、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）；肝组织间质有大量炎症细胞浸润、肝细胞坏死，炎症评分显著升高（P＜0.05）。
与模型组比较，除甲基莲心碱低剂量组小鼠血清中ALT、TNF-α和肝组织中TNF-α mRNA、MDA、NF-κB p65蛋白表达水平以及肝组织炎症评分降低不显著外，其余各组小鼠上述指标水平均显著降低（P＜0.05）；甲基莲心碱中、高剂量组小鼠肝小叶结构完整，肝细胞形态基本正常，病理损伤得到显著改善。
结论：甲基莲心碱对肝I/R损伤模型小鼠具有保护作用，且呈剂量相关性；其作用机制可能与减轻氧化应激、抑制炎症反应和降低肝组织中NF-κB p65蛋白的表达有关。
ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the protective effect and mechanism of neferine on hepatic ischemia/reperfusion （I/R）injury in mice. METHODS：Totally 40 mice were randomly divided into sham operation group （normal saline），model group （normal saline），and neferine low-dose，middle-dose and high-dose groups （10，30，60 mg/kg），with 8 mice in each group. They were given relevant medicine intragastrically once a day for consecutive 7 d. After medication，except for sham operation group，mice in other groups were given occlusion of liver pedicle 60 min and then given perfusion for 6 h to induce hepatic I/R injury model. After modeling，the levels of ALT，AST，TNF-α and IL-6 were detected. The pathological change of hepatic tissue was observed after HE staining and the inflammation was scored. The levels of MDA，SOD，TNF-α mRNA and IL-6 mRNA，and the protein expression level of NF-κB p65 in hepatic tissue were determined. RESULTS：Compared with sham operation group，serum levels of ALT，AST，TNF-α and IL-6，levels of MDA，SOD，TNF-α mRNA and IL-6 mRNA and the protein expression level of NF-κB p65 in hepatic tissue were increased significantly in model group （P＜0.05）. There was a large number of inflammatory cells infiltration and hepatic cells necrosis，and the inflammation score increased significantly （P＜0.05）. Compared with model group，except that serum levels of ALT and TNF-α，levels of TNF-α mRNA and MDA，protein expression level ofNF-κB p65 and inflammation score of hepatic tissue were not significantly reduced in neferine low-dose group，above indexes of other groups were decreased significantly （P＜0.05）. In neferine middle-dose and high-dose groups，the structure of hepatic lobules was complete，the morphology of hepatocytes was normal，and pathological injury had been significantly improved. CONCLUSIONS：Neferine shows protective effect on hepatic I/R injury model mice in dose-dependent manner，the mechanism of which may be associated with reducing oxidative stress，inhibiting inflammatory reaction and reducing the protein expression of NF-κB p65 in hepatic tissue.KEYWORDS Neferine；Hepatic ischemia/reperfusion injury；Mice；Inflammation；Oxidative stress；NF-κB p65肝缺血再灌注损伤[Hepatic ischemia/reperfusion（I/R）injury]是肝移植和肝叶切除手术中不可避免的病理过程，也是诱发术后肝功能恢复延迟、受损甚至是肝衰竭的重要危险因素[1-2]。
小鼠缺血再灌注
小鼠缺血再灌注（实用版）目录1.小鼠缺血再灌注的背景和意义2.小鼠缺血再灌注的实验方法和操作步骤3.小鼠缺血再灌注的实验结果和分析4.小鼠缺血再灌注的结论和展望正文一、小鼠缺血再灌注的背景和意义小鼠缺血再灌注是指在小鼠体内某一部位发生缺血后，再通过灌注使其恢复血流。
这一过程在生物医学研究中具有重要意义，因为它可以模拟人类某些疾病的发生过程，如心肌梗死、脑卒中等。
通过研究小鼠缺血再灌注，可以深入了解缺血后再灌注对组织和器官的影响，为临床治疗提供理论依据。
二、小鼠缺血再灌注的实验方法和操作步骤1.实验动物选择：选用健康成年小鼠，分为实验组和对照组。
2.制备缺血模型：将实验组小鼠放入灌注装置中，通过调整灌注流量和时间，使小鼠某一部位（如心肌、脑组织等）发生缺血。
3.观察缺血程度：通过检测相关生理指标（如心率、血压、血氧饱和度等），评估小鼠缺血程度。
4.再灌注操作：在观察到缺血程度达到预设值后，恢复灌注流量，使缺血部位重新获得血流。
5.观察再灌注效果：通过检测生理指标，评估再灌注对小鼠的影响。
三、小鼠缺血再灌注的实验结果和分析实验结果显示，在缺血发生后，小鼠的心率、血压、血氧饱和度等指标会发生明显变化。
再灌注后，这些指标会逐渐恢复到正常水平。
但不同缺血时间和程度的小鼠，再灌注后的恢复情况有所不同。
通过对实验结果的分析，可以得出以下结论：1.缺血再灌注对小鼠的组织和器官具有一定的保护作用，能够减轻缺血带来的损伤。
2.缺血时间和程度的不同，再灌注的效果有所差异，提示再灌注治疗需要个体化。
四、小鼠缺血再灌注的结论和展望总之，小鼠缺血再灌注实验为研究缺血后再灌注的生物学效应提供了一个有效模型。
通过对这一模型的深入研究，可以为临床治疗缺血性疾病提供理论依据和技术支持。
β-arrestin-2通过抑制自噬减轻小鼠肝脏缺血-再灌注损伤
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ ｐ ａ ｃ ｔ ｏ ｆ ｐ — ａ ｒ ｒ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ 一 ２ ｏ ｉ ｌ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｃ ａ ｕ ｔ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｙ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ａ —
【 关键词 】 肝移植 ；缺血一 再灌注损伤 ；ｐ — ａ ｒ ｒ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ － ２ ；自噬 【 中图分类号 】Ｒ ６ １ ７ 【 文献标志码 】Ａ 【 文章编号 】１ ６ ７ ４ ． ７ ４ ４ ５（ ２ ０ １ ５ ）０ ３ — ０ ０ ０ ３ — ０ ８
Ｂ ・ ａ ｒ ｒ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ － ２ ａ ｌ ｌ ｅ ｖ ｉ ａ ｔ ｅ ｓ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｃ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ａ － ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ｂ ｙ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｙ Ｗ ａ ｎ ｇ Ｌ ｉ ，
伤 程度 ，用 免 疫 组 织 化 学 （ 免 疫 组 化 ） 染 色 和 蛋 白免 疫 印迹 法 检 测 白噬 关 键 蛋 白 轻 链 ３ （ Ｌ Ｃ ３ ） 的表
达 、透 射电子显微镜 （ 透射电镜 ）观察 肝组织 中 的 自噬体来 分析判 断肝脏 自噬 活动情 况 。结 果
与
Ｓ ｈ ａ ｍ组相 比 ，Ｉ Ｒ组再 灌注后各时间点血清 Ａ Ｌ Ｔ 、Ａ Ｓ Ｔ显著升高 （ 均 为 Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ，Ｋ Ｏ＋Ｉ Ｒ组较 ｗＴ＋ Ｉ Ｒ组升高更明显 （ 均为 Ｐ＜ ０ ． Ｏ １ ） 。肝组 织 Ｈ Ｅ染 色显示 ，ｗＴ＋Ｓ ｈ ａ ｍ组和 Ｋ Ｏ＋Ｓ ｈ ａ ｍ组再灌 注后 各时 间点肝细胞形态 、肝小 叶结构正 常；Ｋ Ｏ＋ Ｉ Ｒ组 和 ｗＴ＋ Ｉ Ｒ组再 灌注后 ６ ｈ肝细胞轻 、中度肿 胀 ，肝窦 稍扩张 ，１ ２ ｈ 肝 细 胞重 度 肿胀 ，炎症 细 胞浸 润 ，片 状损 伤 区域 明显 ，２ ４ ｈ肝 索 排列 趋 于 规则 ；与 ｗＴ＋Ｉ Ｒ 组 比较 ，Ｋ Ｏ＋Ｉ Ｒ组再灌注后各时间点 的损伤程度更严 重和范围更大。免疫组化 染色和蛋 白免 疫 印迹法结果显示再灌注后 ６ 、１ ２ ｈ自噬关 键蛋 白 Ｌ Ｃ ３的表达呈上升趋 势 ，２ ４ ｈ表达 略有下 降 ，其 中
小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立
中华消化外科杂志 ２０１３年 ９月第 １２卷第 ９期 ＣｈｉｎＮｏ．９
·７０３·
·论著·
小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立
麻勇 汪大伟 刘连新 王建奇 王继洲 潘华洋 潘尚哈 姜洪池
【摘要】 目的 建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型并分析损伤评估指标的变化趋势。方法 采 用 ９６只 ７～８周龄的纯系 Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠作为研究对象，建立 ７０％肝脏缺血再灌注损伤模型。按照缺 血时间将小鼠分为假手术组和缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组，每组 ２４只。各组小鼠分别于再灌注后 ６、１２、２４和 ４８ｈ处死。通过检测血清 ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦα、ＩＬ６和巨噬细胞炎性蛋白２（ＭＩＰ２）水平以及病理组织学评 分、细胞凋亡指数等方法评估各组小鼠肝组织的损伤情况。两独立样本比较采用 ｔ检验。结果 术后 ８８只小鼠存活，８只死亡，造模成功率为 ９１．７％（８８／９６）。假手术组、缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＡＬＴ水平分别 为（３５±２４）Ｕ／Ｌ、（１７０３±４４２）Ｕ／Ｌ、（５１３３±６８１）Ｕ／Ｌ和（８２３３±８０８）Ｕ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＡＬＴ水平 显著高于假手术组（ｔ＝６．５４，１２．９７，１７．５６，Ｐ＜０．０５）；ＡＳＴ水 平 分 别 为 （８７±２８）Ｕ／Ｌ、（２６６７±４５１）Ｕ／Ｌ、 （６３３３±７７８）Ｕ／Ｌ和（９９６７±１１６８）Ｕ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＡＳＴ水平显著高于假手术组（ｔ＝９．８９，１３．８９， １４．６５，Ｐ＜０．０５）；ＴＮＦα水平分别 为 （１４±５）μｇ／Ｌ、（８３±１４）μｇ／Ｌ、（１３３±１７）μｇ／Ｌ和 （２０２±２１）μｇ／Ｌ， 缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＴＮＦα水平显著高于假手术组（ｔ＝７．７８，１１．８２，１５．３４，Ｐ＜０．０５）；ＩＬ６水平分别为 （３２±９）μｇ／Ｌ、（４９３±１６８）μｇ／Ｌ、（８４４±１６６）μｇ／Ｌ和（１３４５±１９８）μｇ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＩＬ６水平 显著高于假手术组（ｔ＝４．７４，８．４６，１１．４８，Ｐ＜０．０５）；ＭＩＰ２水 平 分 别 为 （３７±１１）μｇ／Ｌ、（１０２±３５）μｇ／Ｌ、 （１７７±３２）μｇ／Ｌ和（２７９±５０）μｇ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＭＩＰ２水平显著高于假手术组（ｔ＝３．０５，７．２８， ８．１９，Ｐ＜０．０５）；细胞凋亡指数分别为 １．７％±２．１％、２２．７％±８．６％、５４．３％±１１．２％和 ７６．３％±１４．８％，缺 血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组细胞凋亡指数显著高于假手术组（ｔ＝４．１０，８．０４，８．６３，Ｐ＜０．０５）。在缺血时间相同的 情况下，随着再灌注时间的延长，各监测指标呈“抛物线”样变化趋势。结论 小鼠肝脏部分缺血再灌注损 伤模型能较好地反映小鼠肝组织的损伤情况。随着缺血时间的延长，小鼠肝脏的缺血再灌注损伤程度逐 渐加重；随着再灌注时间的延长，ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦα、ＩＬ６、ＭＩＰ２以及病理组织学评分和细胞凋亡指数均呈 现“抛物线”样变化趋势。 【关键词】 肝脏； 缺血再灌注损伤； 小鼠； 模型
小鼠缺血再灌注
小鼠缺血再灌注
小鼠缺血再灌注（I/R）是一种实验模型，用于研究组织缺血引起的损伤以及血液再灌注对损伤的影响。
这一模型通常用于心血管疾病、脑卒中、肝脏和肾脏等器官的研究。
操作步骤通常包括以下几个阶段：
1.缺血阶段：通过暂时封闭（结扎）或阻断（通过其他方法）血
管，以模拟组织缺血。
这可以在不同的器官中进行，比如通过
结扎冠状动脉来模拟心肌缺血，或者结扎肾动脉来模拟肾脏缺
血。
2.再灌注阶段：在一定时间后，重新开通或恢复血液供应，模拟
组织再灌注。
这一步骤旨在模拟血流的恢复，但在一些情况下，
再灌注本身也可能导致组织损伤。
3.取样和分析：小鼠通常在不同的时间点被处死，组织样本被取
出以进行各种生化、组织学和分子生物学分析，以评估缺血再
灌注对组织的影响。
小鼠缺血再灌注模型可以用于研究相关疾病的机制、开发治疗策略以及评估药物的疗效。
例如，这个模型可以用于研究心肌梗死、脑卒中、肾功能损伤等疾病。
在进行这种类型的实验时，需要确保符合伦理和动物福利的要求，并遵循实验室和国家的相关规定和指南。
研究人员应该采取适当的措施来减少动物的痛苦和苦恼。
pink1-prkn PARK2通路与线粒体自噬和肝脏急性缺血再灌注损伤的关联研究
pink1-prkn PARK2通路与线粒体自噬和肝脏急性缺血再灌注损伤的关联研究刘树雄;何建【摘要】目的探讨pink1-prkn PARK2通路与线粒体自噬和肝脏急性缺血再灌注损伤的关联.方法选择C57BL/6小鼠,将Pink1-KO小鼠与Park2-KO小鼠杂交以产生Pink1Park2 double-KO小鼠,制作肝脏急性缺血再灌注损伤模型.取肝脏组织行SP3的免疫组织化学染色.用质粒DNA或RNAi瞬时转染HK-2细胞;HK-2细胞在含20 mM CCCP的无糖RKRB缓冲液诱导ATP耗竭,模拟再灌注;进行细胞凋亡分析;分离线粒体,测量线粒体DNA(mtDNA)的相对含量;测量HK-2细胞中的线粒体ROS;免疫印迹测定蛋白质浓度.结果缺血性急性肝脏损伤体外和体内模型的肝脏近端肝脏细胞中可诱导线粒体自噬.Pink1和Park2的缺失可消除这种条件下的线粒体自噬,证明PINK1-PARK2途径在肝脏细胞线粒体自噬中的关键作用.pink1和park2单基因或双基因敲除的小鼠中,缺血性急性肝脏损伤均加剧.Pink1和Park2缺失会增加线粒体损伤,活性氧产生和炎症反应.结论 PINK1-PARK2介导的线粒体自噬对急性肝脏损伤期间的线粒体质量控制,肝脏细胞存活和肝脏功能起重要作用.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2018(022)009【总页数】5页(P1614-1618)【关键词】线粒体;自噬;PARK2;PINK1;肝脏缺血再灌注【作者】刘树雄;何建【作者单位】上海东方肝胆外科医院急诊科,上海200438;上海东方肝胆外科医院急诊科,上海200438【正文语种】中文【中图分类】R333.4急性肝脏损伤的发病机制有很多种[1]，包括多种细胞类型，细胞过程，分子介质和调节因子[2-5]。
线粒体损伤和功能障碍在急性肝脏损伤的发病机制中起决定性因素，尤其是肝脏小管上皮细胞的损伤和死亡[6,7]。
小鼠肝缺血
小鼠肝缺血
摘要：
一、小鼠肝缺血的定义及意义
二、小鼠肝缺血的实验方法
三、小鼠肝缺血模型的应用领域
四、小鼠肝缺血的研究进展
五、未来研究方向和挑战
正文：
一、小鼠肝缺血的定义及意义
小鼠肝缺血是指在实验过程中，通过手术或其他方法暂时切断小鼠肝脏的血流供应，从而导致肝脏组织缺氧和代谢紊乱。
这一模型在研究肝脏生理、病理生理以及药物筛选等方面具有重要意义。
二、小鼠肝缺血的实验方法
1.手术法：将小鼠麻醉后，暴露肝脏，采用无损伤血管夹或缝合线暂时阻塞肝动脉和门静脉，从而实现肝缺血。
2.非手术法：通过导管技术或血管夹闭技术，在无需开腹手术的情况下实现肝缺血。
三、小鼠肝缺血模型的应用领域
1.肝脏缺血再灌注损伤研究
2.肝脏疾病药物筛选和评价
3.肝脏移植研究
4.肝脏生理学研究
四、小鼠肝缺血的研究进展
1.发现了一系列保护肝脏的治疗策略，如药物、基因治疗等。
2.深入探讨了肝缺血再灌注损伤的分子机制。
3.建立了多种小鼠肝缺血模型，提高了实验的可重复性和可靠性。
五、未来研究方向和挑战
1.进一步揭示肝缺血再灌注损伤的病理生理机制。
2.开发更有效的治疗策略，以减轻肝缺血导致的损伤。
3.优化实验模型，提高实验效率和准确性。
4.探讨肝缺血在不同疾病背景下的作用及治疗策略。
综上所述，小鼠肝缺血模型在科学研究中具有重要地位，有望为肝脏疾病的治疗提供新思路。
干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤
实验研究干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤刘钰1，2，王朝阳3，李世朋4，胡莎莎1，2，杨爽3，蔡金贞2，张国梁2△摘要：目的探讨小鼠肝脏缺血再灌注损伤（LIRI）过程中干扰素调节因子-1（IRF-1）对焦亡的影响。
方法（1）24只C57BL/6正常雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术（Sham）组与缺血再灌注（IR）2h、6h和12h组，每组6只。
Sham组不进行IR处理，其他3组采用血管夹夹闭肝中叶、左叶脉管（门静脉、动脉与胆道）60min后分别再灌注2、6、12h建立LIRI模型。
全自动生化仪检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）；酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）水平；HE染色观察肝脏病理改变；免疫组织化学染色检测IRF-1表达情况；TUNEL染色检测肝脏细胞凋亡和焦亡情况；Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、Cleaved-Caspase-1及gasdermin D（GSDMD）蛋白水平；透射电镜检测肝组织细胞形态变化。
（2）将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和沉默IRF-1表达后进行模拟IR处理，分为过表达IRF-1+IR组、空载体+IR组、IRF-1 siRNA+IR组及其对照组（NC+IR组）。
Western blot检测4组细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD蛋白水平；透射电镜检测细胞形态变化；流式细胞术检测细胞焦亡情况；酶标仪检测细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）释放量。
结果（1）体内实验结果显示，与Sham组比较，IR6h组和12h组血清ALT、AST和IL-1β水平均有明显升高（P＜0.05），IRF-1、Caspase-1和GSDMD蛋白表达升高（P＜0.05）；同时肝细胞出现肿胀、排列紊乱、空泡、片状坏死和红细胞淤积并伴有核膜损伤和线粒体肿胀。
小鼠肠缺血再灌注诱发多器官功能障碍的动物模型研究
病理 学检查 。结 ４ ０ ｍ ｉ ｎ 小 鼠７ ｄ内生存率为 ６ ０ ％， 选 择
第４ ０卷 第 ４期
２ ０ １ ５ 年４ 月
贵
阳 医 学 院 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ０Ｆ ＧＵＩ ＹＡＮＧ ＭＥ ＤＩ ＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ
Ｖｏ １ ． ４ ０ Ｎｏ． ４ ２ ０１ ５． ４
小 鼠肠 缺 血 再 灌 注 诱 发 多 器 官 功 能 障 碍 的 动 物 模 型 研 究 冰
（ ＭＯ Ｄ Ｓ ）ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ａ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ａ／ ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ（ Ｉ Ｉ ／ Ｒ）ｉ ｎ ｍｉ ｃ ｅ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：Ｃ ５ ７ Ｂ Ｌ ／ ６ ｍ ｉ ｃ ｅ
ＸＩ ＡＯ Ｘｉ ａ ｎ ｇ ｙ ａ ｎ ｇ，ＣＨＥＮＧ Ｄａ ｉ ｗｅ ｉ ，Ｌ Ｉ Ｚｉ ｌ ｉ Ｚ ＨＥＮ Ｇ Ｄｅ ｙ ｉ ，Ｗ Ａ ＮＧ Ｙ ｉ ，ＤＵ Ｊ ｉ ａ ｏ ，Ｌ Ｉ Ｐ ｉ ｎ ｇ ｙ ａ ｎ ｇ ，
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｂ ｕ ｒ ｎ ａ ｎ ｄ Ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ Ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ， Ｇ ｕ ｉ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｇ ｕ ｉ ｙ ａ ｎ ｇ ５ ５ ０ ０ ０ ２， Ｇ ｕ ｉ ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
小鼠肝缺血再灌注损伤
小鼠肝缺血再灌注损伤是一种常见的实验模型，用于研究肝脏在缺血和再灌注条件下的损伤和修复机制。
下面是制备小鼠肝缺血再灌注损伤模型的一般步骤：
1. 术前准备:将小鼠禁食12小时，但保持饮水。
确保手术操作室的温度适宜，并准备好所需的手术器械和药物。
2. 麻醉与固定:使用适当的麻醉剂对小鼠进行麻醉，并将其固定在手术台上。
3. 手术操作:
- 进行腹部切口，暴露肝脏。
- 通过夹闭肝门(包括肝动脉、门静脉和肝管)来实现肝脏的缺血。
- 在预定的时间内(例如30分钟)对肝脏进行缺血处理。
- 随后，移除夹子以实现再灌注。
再灌注期间，可以持续监测小鼠的生命体征。
4. 术后护理:再灌注后，观察小鼠的恢复情况，并确保其稳定。
检查肝脏的外观和功能，以评估损伤程度。
5. 组织取样:在预定的时间点(如再灌注后的1小时、24小时等)取样肝脏组织，用于进一步的组织学分析或生化指标检测。
6. 数据分析:分析收集到的数据，评估缺血再灌注对肝脏的影响，包括组织学改变、炎症反应、氧化应激等。
注意，在进行此项实验时，必须遵循动物伦理原则，尽量减少对小鼠的痛苦和压力，并确保实验过程的科学性和可靠性。
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小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型
缺血再灌注损伤，即缺血器官、组织重新获得血液供应，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重了功能代谢障碍及结构破坏。
对麻醉动物的肝中叶和肝左叶的门静脉和肝动脉进行阻断和再通，由于肝脏中叶和左叶血流的阻断和再通，引起肝脏中叶和左叶明显的再灌注损伤。
肝脏缺血过程中由于肝细胞内ATP 迅速耗尽，导致乳酸酮体等的堆积，及线粒体氧化磷酸化功能低下，引发代谢性酸中毒，缺血过程中细胞缺氧使ATP含量下降，导致肝细胞内外Ca2 +重新分布，即Ca2 +内流，引起线粒体的损伤。
再灌注过程中由于氧自由基的爆发性增多，中性粒细胞的聚集，kupffer细胞的激活，细胞凋亡及其他多种细胞因子的作用，使得肝细胞膜损伤，内皮细胞损伤及肝脏微循环障碍等导致肝脏功能代谢障碍及结构破坏。
1.实验动物
SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。
2.实验分组：
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期
0h、3h、6h、12h、24h、72h
4.建模方法
1 小鼠术前1
2 h禁食，自由饮水。
2 3%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后将小鼠平躺在手术台上胶带固定四肢，将小鼠腹部术去毛，用碘酒和75％乙醇术区消毒。
3 取腹正中切口1cm，打开腹腔，小心分离出肝脏左、中叶之肝蒂（左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉）。
4 用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉，使约70%的肝脏缺血，以防止发生严重肠系膜静脉淤血。
0.5min后，与非阻断的右叶相比，肉眼可见阻断叶明显变白，说明阻断成功，用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔，同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。
5 完成持续缺血60min后，重新打开腹腔，迅速取出血管夹，恢复缺血肝血流，
0.5min左右可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功，逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔，完成手术。
待小鼠清醒后放回饲养室饲养，密切关注小鼠的状态及生存状况并做好记录。
6 术后分别于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。
采用全自动生化分析仪检测血清中ALT（谷丙转氨酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）的水平。
同时统一取肝左叶组织1．5cm×1cm×0．2cm留作病理标本或分生标本。
5.模型评价
1 分别检测术后0h、3h、6h、12h、24h及72h小鼠血清中ALT（谷丙转氨酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）的水平。
2 统一取肝左叶组织1．5cm×1cm×0．2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24h后脱水，包埋，进行石蜡切片后行HE染色，tunel染色。
作坏死评分。
肝小叶结构严重破坏，网状纤维支架塌陷，肝细胞坏死，空泡变样，肝细胞索、肝窦充血肿胀，边界不清，周围有炎性细胞浸润。
肝脏缺血损伤评分：
0分：无肝细胞损伤
1分：轻度损伤，特点为细胞质空泡化，病灶核固缩
2分：中度损伤，血窦膨胀，细胞溶质空泡化，细胞边界模糊
3分：中度到重度损伤，凝固性坏死，大量血窦膨胀，红细胞渗出到肝锁，嗜伊红细胞增多，中性白细胞着边（附着于血管壁）
4分：严重坏死，失去肝脏结构，肝索崩解，出血，嗜中性粒细胞渗入
3 细胞因子的检测
肝脏损伤后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高，可以用ELISA 法检测。
6 注意事项
6.1 分离肝门时用棉签分离，可避免对肝脏的损伤
6.2术前禁食有利于手术进行
6.3阻断血流要一次成功，否则会造成缺血预处理，减轻损伤程度
6.4取材时镊子不要损伤肝脏
Control
Model
图1 对照组小鼠肝细胞以中央静脉为中心呈放射性排列；肝脏缺血再灌注损伤小鼠自中央静脉周围开始坏死，肝细胞空泡样变性，炎症细胞浸润，少数肝细胞
脂肪变性。
武汉云克隆诊断试剂研究所。